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VANESSA CARLA DINIZ LARA

DESENVOLVIMENTO DE NANOCPSULAS
CONTENDO CIDO RETINICO PARA
TRATAMENTO TPICO DA ACNE

Belo Horizonte
Faculdade de Farmcia da UFMG

2008

VANESSA CARLA DINIZ LARA

DESENVOLVIMENTO DE NANOCPSULAS
CONTENDO CIDO RETINICO PARA
TRATAMENTO TPICO DA ACNE

Dissertao

apresentada

Graduao

em

Cincias

ao

Curso

de Ps-

Farmacuticas

da

Faculdade de Farmcia da Universidade Federal

de Minas Gerais, como requisito parcial obteno
do ttulo de Mestre em Cincias Farmacuticas.
Orientador: Prof. Dr. Lucas Antnio M. Ferreira

Belo Horizonte
Faculdade de Farmcia da UFMG

2008

Deus, pelo dom da vida e amor incondicional, tendo me dado discernimento para
superar todos os momentos difceis e esperana quando quase no havia. Nossa
Senhora, sempre protetora e amvel, ensinando-me a amar verdadeiramente.

Ao amor da minha vida, Chiquinho, pela eterna pacincia, pelo amor verdadeiro e
carinho incessante e por tantos momentos de sacrifcio que compartilhou comigo.

Aos meus pais, que sempre acreditaram em mim, pelo apoio, carinho e amor sempre
presentes, pelos valores de vida que me ensinaram com tanta sabedoria; pela
compreenso em tantos momentos de ausncia.

minha irm, que sempre se disps a me ajudar, pelo carinho e pela linda e
carinhosa afilhada a mim confiada.

Aos amigos da Formular, que me incentivaram e compartilharam comigo das

alegrias, e, principalmente, ao Renato, que conviveu com tanto estresse, e
Rosana, que torceu por mim.
0 dia mais belo? Hoje
A coisa mais fcil? Equivocar-se
O obstculo maior? 0 medo
0 erro maior? Abandonar-se
A raiz de todos os males? 0 egosmo
A distrao mais bela? 0 trabalho
A pior derrota? 0 desalento
Os melhores professores? As crianas
A primeira necessidade? Comunicar-se
0 que mais faz feliz? Ser til aos demais
0 mistrio maior? A morte
0 pior defeito? 0 mau humor
A coisa mais perigosa? A mentira
0 sentimento pior? 0 rancor
0 presente mais belo? 0 perdo,
0 mais imprescindvel? 0 lar
A estrada mais rpida? 0 caminho correto
A sensao mais grata? A paz interior
0 resguardo mais eficaz? 0 sorriso
0 melhor remdio? 0 otimismo
A maior satisfao? 0 dever cumprido
A fora mais potente do mundo? A f
As pessoas mais necessrias? Os pais
A coisa mais bela de todas? 0 amor
Madre Teresa de Calcut

AGRADECIMENTOS
Agradeo a todos que direta ou indiretamente colaboraram para a realizao desse
trabalho, em especial:

Ao Professor Lucas Antnio Miranda Ferreira, pela orientao e pelos ensinamentos

ministrados durante este trabalho.

Margareth Spangler (CETEC-MG) pela disponibilizao dos equipamentos para a

realizao das anlises de Microscopia de Fora Atmica.

Ao Vilela, pela execuo dos ensaios de Microscopia de Fora Atnica, pela

disponibilidade em ajudar e pelo interesse no projeto proposto, pois muito contribuiu
para o desenvolvimento desse trabalho.

Ao Eduardo, do Laboratrio de Tecnologia, pelo auxlio no estudo de permeao

utilizando pele dermatomada.

Aos colegas do curso de Ps-graduao, pela ajuda e convivncia.

Aos meus familiares, principalmente ao meu marido, que souberam me incentivar e

me apoiar com todo carinho durante minha trajetria.

Ao Andr Nascimento, pelos desabafos e pela pacincia em me ouvir, trocando

sempre experincias positivas e incentivos.

s minhas amigas, principalmente Raquel e Paty, que sempre compartilharam

comigo desta caminhada e torceram por mim.

Comunidade

Razes

de

Jess,

pelo

crescimento

pessoal

espiritual

proporcionado atravs da convivncia com pessoas maravilhosas que dedicam suas

vidas ao projeto de Deus.

SUMRIO
LISTA DE TABELAS ...........................................................................................................

LISTA DE FIGURAS ............................................................................................................

LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS .......................................................... 10

RESUMO ............................................................................................................................. 12
ABSTRACT ......................................................................................................................... 13
INTRODUO GERAL ....................................................................................................... 14
REVISO BIBLIOGRFICA ................................................................................................ 17
1a PARTE ACNE .............................................................................................................. 18
1 GENERALIDADES ........................................................................................................... 18
2 ETIOLOGIA E PATOGNESE DA ACNE ........................................................................ 19
3 TRATAMENTO DA ACNE ................................................................................................ 21
3.1 Tratamento sistmico .................................................................................................... 22
3.2 Tratamento tpico .......................................................................................................... 23
2a PARTE PELE ............................................................................................................... 28
1 PELE ................................................................................................................................ 28
1.1 Barreira epidrmica na acne ......................................................................................... 28
2 ABSORO PERCUTNEA ........................................................................................... 29
3a PARTE SISTEMAS POLIMRICOS: NANOCPSULAS ............................................. 32
1 SISTEMAS POLIMRICOS ............................................................................................. 32
1.1 Propriedades fsicas, qumicas e biolgicas do polmero Poli--caprolactona .............. 34
2 NANOCPSULAS POLIMRICAS .................................................................................. 35
3 PREPARAO DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS ................................................ 37
4 CARACTERIZAO DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS ........................................ 39
4.1 Distribuio do tamanho das nanocpsulas polimricas ............................................... 39
4.2 Potencial Zeta ( ) das nanocpsulas polimricas ....................................................... 41
4.3 Teor de Encapsulao .................................................................................................. 42
4.4 Morfologia externa das nanocpsulas polimricas ........................................................ 42
5 ESTUDO DE ESTABILIDADE DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS ......................... 44
6 NANOCPSULAS POLIMERICAS PARA APLICAO TPICA .................................... 45

OBJETIVOS ........................................................................................................................ 48
1 OBJETIVO GERAL ........................................................................................................... 49
2 OBJETIVOS ESPECIFICOS............................................................................................. 49
MATERIAIS E MTODOS ................................................................................................... 50
1 MATERIAIS ...................................................................................................................... 51
2 MTODOS ....................................................................................................................... 51
2.1 Construo da Curva Analtica para o doseamento do cido retinico ........................ 51
2.1.1 Condies cromatogrficas ........................................................................................ 53
2.1.2 Preparo da fase mvel ............................................................................................... 53
2.1.3 Linearidade da Curva Analtica .................................................................................. 53
2.2 Preparao das nanocpsulas polimricas ................................................................... 54
2.2.1 Preparao das nanocpsulas brancas ....................................................................

55

2.2.2 Preparao das nanocpsulas contendo cido retinico a 0,1% p/v ......................... 57
2.2.3

Preparao das nanocpsulas contendo cido retinico a 0,1% p/v e

antioxidantes a 0,01% p/v ........................................................................................ 57

2.3 Caracterizao fsico-qumica das nanocpsulas polimricas .................................... 58

2.3.1

Distribuio do Tamanho e Potencial Zeta .............................................................. 58

2.3.2

Teor de Encapsulao ............................................................................................ 58

2.3.3

Morfologia externa das nanocpsulas polimricas .................................................. 60

2.4 Estudo de Estabilidade das nanocpsulas polimricas ............................................... 61

2.5 Estudos de liberao in vitro ......................................................................................... 61
2.5.1 Estudo da solubilidade do AR no Lquido Receptor ................................................... 61
2.5.2

Obteno das formulaes ...................................................................................... 62

2.5.3

Perfil de liberao in vitro ........................................................................................ 62

2.6 Permeao cutnea in vitro ........................................................................................... 64

2.6.1 Estudo da solubilidade do AR no Lquido Receptor ................................................... 64
2.6.2

Montagem das clulas ............................................................................................. 64

2.6.3

Aplicao das formulaes ...................................................................................... 65

2.6.4

Determinao da difuso ......................................................................................... 65

2.6.5

Validao da remoo do AR no absorvido .......................................................... 66

2.6.6

Validao da extrao do AR retido na fita stripping ............................................... 66

2.6.7

Validao da extrao do AR retido na pele ........................................................... 67

RESULTADOS E DISCUSSO ........................................................................................... 68

1 LINEARIDADE DA CURVA ANALTICA .......................................................................... 69
2 PREPARAO DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS ................................................ 70
3 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS .......... 70
3.1 Caracterizao fsico-qumica das nanocpsulas brancas ........................................... 71
3.2 Caracterizao fsico-qumica das NC contendo AR a 0,1% p/v .................................. 72
3.3 Morfologia externa das nanocpsulas polimricas ........................................................ 74
4 ESTUDO DE ESTABILIDADE DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS ......................... 78
4.1 Estudo de estabilidade das NC brancas ....................................................................... 78
4.2 Estudo de estabilidade das NC contendo AR a 0,1% p/v ............................................. 80
5 ESTUDO DE LIBERAO IN VITRO .............................................................................. 80
5.1 Solubilidade do AR no Lquido Receptor ....................................................................... 80
5.2 Perfil de liberao in vitro .............................................................................................. 81
6

PERMEAO CUTNEA IN VITRO ............................................................................. 84

6.1 Solubilidade do cido retinico no Lquido receptor ...................................................... 84

6.2 Validao da remoo do AR no absorvido ................................................................ 84
6.3 Validao da extrao do AR retido na fita stripping ..................................................... 84
6.4 Validao da extrao do AR retido na pele ................................................................. 84
6.5 Permeao cutnea in vitro ........................................................................................... 85
CONCLUSO ...................................................................................................................... 89
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................................... 92

LISTA DE TABELAS

Tabela 1: Os agentes utilizados na terapia tpica da acne e suas respectivas atividades .. 23

Tabela 2: Composio (%, p/v) das formulaes das nanocpsulas polimricas ................ 57
Tabela 3: Resultados estatsticos obtidos para as solues padres de AR em fase mvel,
para as diferentes concentraes utilizadas na construo da Curva Analtica ................... 70
Tabela 4: Caractersticas fsico-qumicas das nanocpsulas brancas.................................. 71
Tabela 5: Caractersticas fsico-qumicas das nanocpsulas contendo AR a 0,1% p/v ....... 73
Tabela 6: Estudo de estabilidade das nanocpsulas brancas .............................................. 79
Tabela 7: Estudo de estabilidade das NC contendo AR a 0,1% p/v sem antioxidantes (NC 3)
e com antioxidantes (NC 5) .................................................................................................. 80
Tabela 8: Penetrao e permeao cutnea do AR (% dose aplicada e g/cm2) a partir de
nanocpsula e soluo, atravs da pele intacta de orelha de porco, aps 8 horas ..............85
Tabela 9: Permeao cutnea do AR (% dose aplicada e g/cm2) a partir de soluo
etanlicaa, atravs da pele intacta sem estrato crneob (EC) e pele dermatomadac, aps
8h............................................................................................................................................86
Tabela 10: Penetrao e permeao cutnea do AR (% dose aplicada e g/cm2) a partir de
soluo, nanocpsula (NC) e nanoemulso (NE) atravs de pele de orelha de porco
dermatomadab, aps 8h .........................................................................................................87

LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Diagrama esquemtico da comedognese ............................................................19
Figura 2: Representao esquemtica da patognese da acne ...........................................20
Figura 3: Estrutura qumica do cido trans-retinico .............................................................26
Figura 4: Diagrama simplificado do estrato crneo e de duas microrrotas de penetrao de
frmacos (1) via matriz lipdica entre os cornecitos (rota intercelular) e (2) atravs dos
cornecitos e matriz lipdica intercelular (rota transcelular) ...................................................29
Figura 5: Diagrama simplificado da estrutura da pele e rota folicular (UPS) de penetrao de
frmacos ................................................................................................................................30
Figura 6: Estrutura qumica da poli--caprolactona ...............................................................34
Figura 7: Mecanismo de hidrlise da poli--caprolactona ......................................................34
Figura 8: Representao esquemtica de nanocpsulas e nanoesferas polimricas: (a)
frmaco dissolvido no ncleo oleoso das nanocpsulas; (b) frmaco adsorvido parede
polimrica das nanocpsulas; (c) frmaco retido na matriz polimrica das nanoesferas; (d)
frmaco adsorvido ou disperso molecularmente na matriz polimrica das nanoesferas ......35
Figura 9: Mtodo usual, empregado na preparao de nanopartculas polimricas, baseado
na precipitao de polmeros pr-formados ..........................................................................56
Figura 10: Representao esquemtica da metodologia para determinao da concentrao
de cido retinico total, livre solvel e livre precipitado .........................................................60
Figura 11: Representao esquemtica da Clula de difuso de Franz ...............................62
Figura 12: Representao grfica da Curva Analtica do cido retinico, obtida por CLAE..69
Figura 13: Imagens de nanocpsulas brancas obtidas por MFA (vista do topo) (Varredura de
20 x 20 m) ............................................................................................................................75
Figura 14: Imagens de nanocpsulas carregadas com cido retinico obtidas por MFA. Em
(A) vista do topo e em (B) viso tridimensional das partculas (Varredura de 10 x 10 m) ...76
Figura 15: Representao esquemtica da evoluo de: (a) sistema nanomatriz
(nanoesfera) e (b) sistema nanovesicular (nanocpsula) depositados e secos sobre uma
superfcie .............................................................................................................................. 77
Figura 16: Imagem topogrfica e perfil topogrfico de nanocpsulas carregadas com cido
retinico, apresentando a relao dimetro/altura das partculas ........................................78
Figura 17: Perfil de liberao in vitro do AR a partir de nanocpsula, nanoemulso e soluo
etanlica, atravs da membrana de teflon (0,45 m) ............................................................81
Figura 18: Perfil de liberao in vitro do AR a partir de nanocpsula, nanoemulso e soluo
etanlica, atravs da membrana de nylon (0,22 m) ............................................................82
Figura 19: Modelo esquemtico da interface da nanocpsula, mostrando a localizao do
polmero na interface entre o ncleo oleoso e a fase aquosa ...............................................83

10

LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS

AR

cido Retinico

BHT

Butilhidrxitolueno

Graus Celsius

CETEC-MG Fundao Centro Tecnolgico de Minas Gerais

CLAE

Cromatografia a Lquido de Alta Eficincia

Cm2

Centmetro elevado ao quadrado (segunda potncia)

Cm

Centmetro elevado ao cubo (terceira potncia)

CV

Coeficiente de Variao

Da

Dalton

DAD

Diode Array Detector

D/h

Dimetro por Altura

DNA

cido desoxirribonuclico

DP

Desvio Padro

DPR

Desvio Padro Relativo

EC

Estrato crneo

EDTA

cido etilenodiaminotetractico sal dissdico

EHL

Equilbrio Hidrfilo-lipfilo

Et al.

Et alli

g/mol

Grama por mol

Hora

Hz

Hertz

IA

ndice de Acidez

IP

ndice de Polidisperso

kHz

Kilo Hertz

MET

Microscopia de Transmisso Eletrnica

MFA

Microscopia de Fora Atmica

mg/mL

Miligrama por mililitro

mL

Mililitro

mL/min

Mililitro por minuto

mm

Milmetro

mM

Mili Molar

MM

Massa Molar

mV

milivolt

g, mcg

Micrograma

11
g/cm2

Micrograma por centmetro ao quadrado

g/mL

Micrograma por mililitro

Microlitro

Micrmetro

Nmero de repeties

NC

Nanocpsula

nd

No determinado

ND

Abaixo do limite de deteco

NE

Nanoemulso

Nm

Nanmetro

N/m

Newton por metro

NP

Nanopartcula

O/A

Emulso leo em gua

OE

xido de etileno

Coeficiente de partio octanol/gua

PCL

Poli--caprolactona

PGA

cido poligliclico

PLA

cido polilctico

PLGA

cido polilctico e poligliclico

pH

Potencial Hidrogeninico

PP 2

Poliolprepolmero 2

PTFE

Politetrafluoroetileno

Coeficiente de correlao

r2

Coeficiente de determinao

RAR

Receptores nucleares de cido retinico

RP

Reverse Phase

rpm

Rotao por minuto

RXR

Receptores X retinides

TCL

Triglicrides de cadeia longa

TCM

Triglicrides de cadeia mdia

UPS

Unidade pilosebcea

Porcentagem

% p/v

Ttulo em Porcentagem Peso por Volume

% v/v

Ttulo em Porcentagem Volume por Volume

Potencial Zeta

Dimetro

12

RESUMO
Acne vulgaris uma condio que afeta cerca de 80% dos adolescentes no mundo. De acordo
com sua evoluo, acne classificada como mdia, moderada ou severa. cido retinico
(tretinona; AR) a primeira escolha para pacientes com acne mdia a moderada. Contudo,
aplicao tpica de AR seguida por uma elevada incidncia de reaes adversas: irritao
local tais como eritema, peeling e queimao no stio de aplicao e susceptibilidade luz solar
aumentada. Estratgia para novas formulaes modificar a biodisponibilidade local,
controlando a liberao do AR atravs de polmeros, e promover o direcionamento folicular,
resultando num tratamento mais eficiente com efeitos colaterais reduzidos. Nanocpsulas (NC)
representam uma alternativa interessante para liberao controlada, to bem como pela
capacidade de se acumular na unidade pilosebcea. NC tm elevada eficincia de encapsulao
para frmacos lipoflicos, tais como AR (log P = 4,6), baixo contedo polimrico e baixa
toxicidade inerente. O objetivo desse trabalho foi a preparao, a caracterizao e a investigao
do perfil de liberao e permeao cutnea das NC contendo AR. NC contendo AR foram
preparadas pelo mtodo da nanoprecipitao. NC foram caracterizadas por tamanho,
homogeneidade (ndice de polidisperso) e potencial zeta usando um Zetasizer 3000HS. A
morfologia externa foi avaliada por Microscopia de Fora Atmica (MFA). Os estudo de liberao
in vitro foram avaliados atravs da membrana de teflon (0,45 m) e de nylon (0,22 m), usando
clulas de difuso de Franz. Eficincia de encapsulao de AR em NC foi elevada (~90%). O
dimetro mdio, calculado por Espectroscopia de Correlao de Ftons, variou de 218 a 318 nm
(NC brancas) e de 219 a 281 nm (NC contendo AR). O potencial zeta variou de 31,5 a 44,0
mV (NC brancas) e de 26,0 a 50,0 mV (NC contendo AR). NC brancas mantiveram a
estabilidade fsico-qumica aps 30 dias de armazenamento a 25oC, contudo NC no foram
capazes de prevenir a degradao do AR (reduo de 40% na concentrao do frmaco foi
observada aps 30 dias). Liberao do AR a partir da nanocpsula (NC) foi maior que aquela
observada para soluo do frmaco e menor do que para Nanoemulso (NE). A baixa liberao
da soluo foi devido evaporao do etanol e precipitao do AR no compartimento doador. O
polmero presente na interface da NC produziu liberao controlada do AR. Os estudos de
permeao conduzidos em pele dermatomada de orelha de porco foram realizados por 8 horas,
conforme o tempo de aplicao clnica. Ele indicou que o AR no foi encontrado nos canais
receptores para NC e NE. A soluo alcolica contendo AR permeou a pele. Isso pode ser
devido ao efeito significante acelerador de penetrao do etanol e do propilenoglicol. Conclui-se
que a formulao de NC pode evitar a captao sistmica de tretinona em comparao com o
controle e a NC apresenta um potencial de evitar efeitos colaterais sistmicos. Esses resultados
indicam que a NC contendo AR, com alvo para a pele, pode ser um carreador promissor para
aplicao tpica de um sistema de liberao controlada de tretinona e evitar reaes adversas.
Palavras-chave: cido retinico; nanocpsulas polimricas; penetrao na pele; liberao tpica

13

ABSTRACT
Acne vulgaris is a frequent condition affecting about 80 percent of teenagers in the world.
According to the evolution, acne is classified as mild, moderate or severe. Retinoic acid
(tretinoin; RA) is the first choice for patients with mild to moderate acne. Nevertheless, topical
application of RA is followed by a high incidence of adverse affects: local irritation such as
erythema, peeling and burning at the application site and increased susceptibility to sunlight.
Strategy for the new formulations is modifying local bioavailability, controlling RA release
through polymers, and promoting follicular targeting resulting in more efficient treatment with
reduced side effects. Nanocapsules (NC) representing an interesting alternative for
controlled release, as well as for their capacity to target the pilosebaceous unit. NC has high
entrapment efficiency for lipophilic drugs, as RA (log P = 4.6), low polymer content and low
inherent toxicity. The aim of this work was the preparation, characterization and investigation
of the release profile and cutaneous permeation of the RA-loaded NC. NC containing RA
was prepared by nanoprecipitation method. NC were characterized for size, homogeneity
(IP) and zeta potential using a Zetasizer 3000HS. The external morphology was evaluated by
atomic force microscopy (AFM). The in vitro release studies were evaluated through Teflon
(0.45 m) and Nylon (0.22 m) membranes, using Franz diffusion cells. Encapsulation
efficiency of RA in NC was high (~90%). The average diameter, calculated by photon
correlation spectroscopy (PCS), ranged from 218 to 318nm (blank NC) and from 219 to
281nm (RA-loaded NC). The zeta potential ranged from 31.5 to 44.0 mV (blank NC) and
from 26.0 to 50.0 mV (RA-loaded NC). Blank NC maintained the physicochemical stability
after 30 days of storage at 25oC, however RA-loaded NC was not able to prevent RA
degradation (reduction of 40% in drug concentration was observed after 30 days). RA
release from a nanocapsule (NC) was higher than that observed for drug solution and minor
that observed for Nanoemulsion (NE). The low release from solution was due to evaporation
of ethanol and precipitation of RA in donor compartment. The polymer present in the
interface of the NC provided controlled release of the RA. The permeation studies conducted
in dermatomated pig ear skin were performed for 8h according to the clinical application time.
It indicated that RA was not found in receptor chambers from NC and NE. The alcoholic
solution containing RA permeated the skin. This might be due to the significant penetration
enhancement effect of ethanol and propylene glycol. It is concluded that the NC formulation
can avoid the systemic uptake of tretinoin in comparison with the control and NC present a
potential to avoid the systemic adverse side effect. These results indicate that RA-loaded NC
with skin targeting may be a promising carrier for topical application of tretinoin controlling
release system and avoiding adverse effects.
Keywords: Retinoic acid; polymeric nanocapsules; skin penetration; topical delivery

14

INTRODUO GERAL

15

INTRODUO GERAL
Acne vulgaris uma doena de pele comum, que afeta cerca de 70 a 80% de adolescentes
e jovens. A acne representa um desafio devido sua prevalncia, complexidade e faixa de
expresso clnica e, se no tratada, pode ter srias conseqncias fsicas e psicolgicas.
Acne uma doena inflamatria crnica da unidade pilosebcea (UPS). No existe cura
conhecida para a acne. Contudo, a maioria dos casos de acne pode ser controlada com
tratamento, com o objetivo de se conseguir eficcia e tolerabilidade mximas com reaes
adversas mnimas. de extrema importncia se propor intervenes precoces e efetivas no
tratamento da acne, no qual o sucesso est intimamente relacionado ao tratamento das
causas patognicas e dos sintomas clnicos.

Tratamentos sistmicos so indicados para acne nodular ou severa. A maioria dos pacientes
apresenta acne ppulopustular ou comedognica, leve a moderada. Em tais pacientes, a
terapia tpica a primeira linha de tratamento.
Os agentes tpicos mais utilizados no tratamento da acne so os retinides tpicos, tais
como cido retinico (AR), isotretinona e adapaleno, alm de perxido de benzola, cido
azelico, entre outros. AR o agente antiacne tpico mais efetivo.

Aplicao tpica do AR freqentemente acompanhada de uma srie de reaes adversas

locais: irritao, eritema, peeling, queimao e secura da pele. Diante dessas manifestaes
clnicas, novas formulaes de AR, com efetividade similar, mas com menor toxicidade, tm
sido propostas. Lipossomas, microesferas e formulaes contendo poliolprepolmero 2 so
os mais citados. As microesferas, disponveis comercialmente, mostraram efetividade
similar, mas menor incidncia de reaes adversas do que as formulaes convencionais de
AR.
Recentemente, muita nfase tem sido dada aplicao tpica de nanocpsulas. As
nanocpsulas, carreadores nanoparticulados submicrnicos, compostos de um ncleo
oleoso circundado por uma parede polimrica, so excelentes carreadores para frmacos
lipoflicos. A aplicao tpica das nanocpsulas favorece o acmulo, dependente do
tamanho, nos folculos pilosos, mas a penetrao cutnea destes sistemas, em reas no
foliculares, no foi observada.

16
Diante do exposto, o encapsulamento do cido retinico em nanocpsulas seria uma
alternativa interessante para o tratamento tpico da acne vulgaris. O objetivo deste trabalho
, portanto, desenvolver e caracterizar nanocpsulas de AR, avaliar o perfil de liberao in
vitro e avaliar a permeao cutnea in vitro comparada com sistemas convencionais.

17

REVISO BIBLIOGRFICA

18

1a PARTE ACNE

1 GENERALIDADES
Acne vulgaris uma doena de pele comum, que afeta cerca de 70 a 80% de adolescentes
e jovens adultos, entre 11 e 30 anos (KRAUTHEIM & GOLLNICK, 2004; FEDERMAN &
KIRSNER, 2000). Embora a acne acometa adolescentes, 8% dos jovens de 25 a 34 anos e
3% dos adultos de 35 a 44 anos tambm so afetados (FEDERMAN & KIRSNER, 2000).
Acne representa um desafio para dermatologistas, devido sua prevalncia, complexidade
e faixa de expresso clnica. Embora seja superficial e no seja uma ameaa vida do
paciente, acne uma doena que, se no tratada, pode ter srias conseqncias fsicas e
psicolgicas. Alguns fatores psicolgicos implicados na acne severa so fatores de risco
para suicidas, baixa auto-estima e expectativas profissionais, inibio social, depresso e
ansiedade (GOLLNICK, 2003).
Acne vulgaris pode se apresentar sob uma grande variedade de formas clnicas,
dependendo do tipo, nmero e severidade da leso predominante. Acne pode ser
classificada primariamente como comedognica, papular, pustular ou nodular (SHALITA,
1998). Para Ng e colaboradores (2003), a acne pode ser classificada em trs categorias
principais: comedognica, inflamatria e nodulocstica. Cada diferente categoria tem
tratamentos especficos recomendados e pode ser classificada de acordo com o grau da
severidade em leve, moderada ou severa. O grau da severidade pode ser determinado pela
contagem do nmero de leses e pela quantidade de rea superficial envolvida.
Acne uma doena inflamatria crnica da unidade pilosebcea (UPS) (KORECK et al.,
2003). Geralmente, ela est limitada a regies do corpo onde as glndulas sebceas so
mais abundantes: face, pescoo, trax, membros superiores e parte superior das costas.
Leses acnicas no-inflamatrias incluem comedes abertos e fechados. Leses
inflamatrias incluem ppulas, pstulas e ndulos (BROWN & SHALITA, 1998).
No existe cura conhecida para a acne. Contudo, a maioria dos casos de acne pode ser
controlada substancialmente com tratamento. O diagnstico e tratamento da acne so bem
estabelecidos e a pesquisa teraputica da acne continua a expandir. O objetivo na seleo
de um regime teraputico deveria ser conseguir eficcia e tolerabilidade mximas com
efeitos colaterais mnimos (NG et al., 2003).

19
2 ETIOLOGIA E PATOGNESE DA ACNE
Acne uma doena multifatorial e os fatores patogenticos mais significantes da acne so:
queratinizao anormal do ducto (comedognese), aumento da secreo de sebo,
anormalidades da flora microbiana e inflamao (KORECK et al., 2003; CUNLIFFE et al.,
2003; WEBSTER, 2005).
A UPS na pele normal composta por glndulas sebceas multilobulares, plo rudimentar e
canal folicular revestido com epitlio escamoso estratificado. Durante a renovao celular
normal da pele, as clulas provenientes da descamao do epitlio folicular so carreadas
ao canal folicular, atravs do infundbulo (tnel com abertura no topo do folculo), pelo sebo
secretado pelas glndulas

sebceas.

O desenvolvimento normal,

crescimento e

diferenciao da UPS requerem a interao de andrgenos com vrios outros fatores

biolgicos. Se o infundbulo da UPS sofre progressiva ocluso, o sebo retido e as clulas
provenientes da descamao normal da pele promovem a formao do microcomedo, que,
embora clinicamente no visvel, o precursor de todas as leses acnicas, conforme o
diagrama da comedognese (Figura 1) (GOLLNICK, 2003).

Microcomedes
Bloqueio do fluxo de sebo
Enlargamento

Leses
no-inflamatrias

Leses inflamatrias

Comedes abertos
Acumulao de sebo e
material crneo
Comedes fechados

Figura 1: Diagrama esquemtico da comedognese

Fonte: GOLLNICK (2003)
O bloqueio do fluxo de sebo e o crescimento progressivo dos microcomedes originam
comedes clinicamente visveis (leses no-inflamatrias). Os comedes podem ser abertos
ou fechados. Os comedes abertos (blackhead) so ocupados com clulas de queratina
descamadas e sebo e tm um orifcio dilatado. Eles podem apresentar colorao escura

20
devido melanina produzida pelas clulas epiteliais que revestem o infundbulo. Comedes
abertos podem se resolver espontaneamente ou desenvolver, para dentro da pele, leses
acnicas inflamatrias. medida que o sebo e as clulas vo se acumulando na UPS, o
microcomedo aumenta de tamanho e se torna visvel, formando o comedo fechado
(whitehead). Com o contnuo acmulo de sebo, o comedo fechado comea a distender-se,
a cavidade folicular pode romper-se dentro do tecido adjacente, conduzindo produo de
leses inflamatrias. Se o processo superficial, forma-se uma pstula. Ppulas
representam leses inflamatrias drmicas mais profundas e aparecem como eritematosas,
conduzindo a leses slidas. Pequenos ndulos ou pseudocistos representam a forma mais
severa da acne (GOLLNICK, 2003) (Figura 2).

Figura 2: Representao esquemtica da patognese da acne

Fonte: Adaptado de BILLOW (1996)

21
A comedognese ocorre devido ao acmulo de cornecitos no ducto pilosebceo. Isso pode
ser devido hiperproliferao de queratincitos do ducto, separao inadequada dos
cornecitos do ducto ou combinao de ambos os fatores (CUNLIFFE et al., 2003).
Acne freqentemente inicia-se no perodo pr-adolescente, quando os andrgenos adrenais,
liberados pela glndula adrenal em processo de amadurecimento, produzem um aumento
na produo de sebo, uma secreo rica em lipdeos das glndulas sebceas (FEDERMAN
& KIRSNER, 2000). Indivduos acometidos com acne tm maior produo de sebo do que
indivduos no acometidos. Alm disso, a severidade da acne geralmente proporcional
quantidade de produo de sebo (BROWN & SHALITA, 1998).
O folculo ocludo, rico em lpide, um substrato ideal para proliferar a bactria
Propionibacterium acnes, anaerbica, que parte da flora normal da pele, mas est
geralmente ausente na pele antes da puberdade. P. acnes est, geralmente, presente em
maior quantidade em pacientes com acne (FEDERMAN & KIRSNER, 2000). Existe uma
correlao entre a reduo do P. acnes e uma melhora clnica da acne. Esta reduo do P.
acnes est associada a uma diminuio nos mediadores pr-inflamatrios no stio da acne
(GOLLNICK et al., 2003).
A associao da seborria ao crescimento bacteriano propicia um processo inflamatrio
(GOLLNICK, 2003). Microorganismos P. acnes elaboram uma lipase que hidrolisa
triglicrides do sebo em cidos graxos livres e glicerol, que tem propriedades prinflamatrias e comedognicas. P. acnes favorece a inflamao uma vez que ele libera o
fator quimiottico, atraindo neutrfilos, linfcitos e macrfagos, que liberam enzimas
lisossomais causando danos ou ruptura parede folicular. A proliferao desta bactria
conduz ativao do complemento e liberao de proteases e enzimas hidrolticas. A
extenso drmica do processo inflamatrio, causada por ruptura do folculo, produz ppulas,
pstulas, ndulos e cistos (FEDERMAN & KIRSNER, 2000). A permeabilidade alterada na
parede folicular permite a liberao de antgenos bacterianos e de mediadores inflamatrios.
a resposta celular desses antgenos e mediadores que pode direcionar a transio das
leses de no-inflamatrias para inflamatrias (WEBSTER, 2005).

3 TRATAMENTO DA ACNE
A maioria dos especialistas no tratamento da acne concorda que a escolha dos agentes
usados no tratamento envolve a integrao de mltiplos fatores, tais como: severidade das

22
leses presentes, durao da doena, resposta passada e presente terapia e tendncia
cicatrizao e pigmentao ps-inflamatria. Uma grande faixa de tratamentos tpicos e
sistmicos est disponvel, cobrindo todas as variantes da doena (LEYDEN, 2003).
Os objetivos teraputicos so: reduzir a produo de sebo; reverter a hiperproliferao e
normalizar a queratinizao; eliminar os microcomedes e os comedes j existentes;
reduzir a colonizao por Propionibacterium acnes e a inflamao; prevenir o
desenvolvimento de novos microcomedes e leses inflamatrias; eliminar leses acnicas
inflamatrias existentes (GOLLNICK, 2003). Vrios fatores requerem considerao quando
da seleo de um regime teraputico, sendo que o mais relevante deles inclui a severidade
da acne (TANGHETTI, 2005).
3.1 Tratamento sistmico

A terapia sistmica da acne utilizada nas seguintes circunstncias: falta de resposta

terapia tpica, intolerncia s medicaes tpicas, nveis severos da acne, acne
desfigurante, acne com envolvimento do pescoo e tronco, reas onde o tratamento tpico
no efetivo como o sistmico. Os principais agentes farmacolgicos utilizados no
tratamento sistmico da acne so: isotretinona, antibiticos e hormnios (BROWN &
SHALITA, 1998).
Antibiticos orais so altamente efetivos no tratamento da acne inflamatria. Neste grupo
incluem as tetraciclinas (tetraciclina, minociclina, doxiciclina e limeciclina), eritromicina e
clindamicina, tendo como alvo P. acnes. Alguns desses antibiticos parecem modular os
efeitos inflamatrios induzidos por patgenos (WEBSTER, 2005). Devido ao seu baixo
custo, tetraciclina , freqentemente, o antibitico oral de escolha para a terapia inicial. O
potencial desenvolvimento de resistncia bacteriana tambm problemtico (LEYDEN,
2003). Evidncias tm mostrado que ambos antibiticos orais e tpicos esto associados
com resistncia do P. acnes sobre a superfcie da pele e narinas.
A isotretinona oral (cido 13-cis-retinico) tem sido usada no tratamento de acne severa h
mais de 35 anos e indicada como terapia de primeira escolha para acne nodular severa.
Isotretinona oral exibe atividade contra todos os principais fatores etiolgicos envolvendo a
patognese da acne, reduz significantemente a produo de sebo, normaliza a
queratinizao folicular, previne o desenvolvimento de microcomedes e comedes, inibe
indiretamente o crescimento de P. acnes e exerce atividade antiinflamatria direta
(THIELITZ et al., 2006; WEBSTER, 2005).

23
Os antiandrognicos, como acetato de ciproterona, espironolactona, desogestrel e flutamida,
agem por reduzir a produo de sebo induzida por andrognios e, conseqentemente, reduz
o nmero de comedes (WEBSTER, 2005). Um novo conceito promissor sobre a terapia
tpica com antiandrognicos a inibio da 5--redutase. Esta enzima metaboliza
testosterona 5--dihidrotestosterona em tecidos regulados por andrognios. A principal
limitao da terapia antiandrognica o fato bvio de que ela no pode ser utilizada em
pacientes do sexo feminino sob condies normais (KRAUTHEIM & GOLLNICK, 2004).
3.2 Tratamento tpico

A maioria dos pacientes apresenta acne leve a moderada. Em tais pacientes, a terapia
tpica a primeira linha de tratamento. Os agentes tpicos mais utilizados no tratamento da
acne so os retinides tpicos (tretinona, isotretinona, adapaleno, tazaroteno), os
antibiticos tpicos (clindamicina e eritromicina), perxido de benzola, cido azelico e
outras terapias tpicas (antiandrognios, peeling qumico, fototerapia, tratamento fsico e
agentes queratolticos) (KRAUTHEIM & GOLLNICK, 2004). Os agentes tpicos e suas
respectivas atividades so descritos (Tabela 1) (GOLLNICK, 2003).
Tabela 1: Os agentes utilizados na terapia tpica da acne e suas respectivas atividades
Agentes/atividade

Comedoltico

Antimicrobiano

Antiinflamatrio

Antiseborrico

Tretinona

Forte

Fraca

Ausente

Ausente

Isotretinona

Forte

Fraca

Fraca

Ausente

Adapaleno

Forte

Fraca

Moderada

Ausente

Tazaroteno

Forte

Fraca

Ausente

Ausente

Moderada

Moderada

Fraca

Ausente

Perxido de benzola

Fraca

Forte

Ausente

Ausente

Antibiticos

Fraca

Forte

Fraca

Ausente

cido azelico

Fonte: GOLLNICK (2003)

O perxido de benzola um agente seguro e eficaz no tratamento da acne e est
disponvel em concentraes que variam de 1 a 10%. Ele exerce seu efeito bacteriosttico
por suprimir o crescimento de P. acnes. No existe evidncia de resistncia bacteriana
adquirida. A aplicao tpica de perxido de benzola tem mostrado uma melhora no
tratamento de leses inflamatrias e no-inflamatrias. Dermatite, secura e peeling, podem
ser minimizados pela reduo na dosagem ou na freqncia de aplicao (FEDERMAN &
KIRSNER, 2000; WEBSTER, 2005).

24
O cido azelico, um cido dicarboxlico de ocorrncia natural, age inibindo a sntese do
cido desoxirribonuclico - DNA - dos queratincitos (LEYDEN, 2003). Alm de ser
comedoltico, tem propriedade antibacteriana, inibe a proliferao melanoctica (FEDERMAN
& KIRSNER, 2000), modifica a queratinizao epidrmica e exerce atividade antiinflamatria
(KRAUTHEIM & GOLLNICK, 2004). Contudo, a sua ao dose-dependente e queimadura
pode ocorrer a altas concentraes (LEYDEN, 2003).

Agentes antibacterianos podem ser bacteriostticos ou bactericidas contra P. acnes e

muitos demonstram efeitos antiinflamatrios. Alm disso, diminuem a porcentagem de
cidos graxos livres em lpides de superfcie. Clindamicina e eritromicina tpicas so os
agentes mais comumente usados e efetivos em reduzir o nmero de ppulas e pstulas em
pacientes com acne inflamatria. O uso contnuo de antibiticos tpicos pode induzir a
cepas resistentes de P. acnes (FEDERMAN & KIRSNER, 2000).
Agentes queratolticos tm sido substitudos por agentes antiacne mais novos, contudo, eles
esto disponveis, em menor custo, sendo: enxofre, resorcina e cido saliclico. Eles
manifestam seus benefcios por causar esfoliamento das clulas epiteliais no revestimento
do folculo. Uma das desvantagens o odor, algumas vezes associado com sulfeto de
hidrognio. Outras incluem descamao amarronzada devido resorcina e salicilismo
devido ao uso excessivo de salicilatos (FEDERMAN & KIRSNER, 2000).

Retinides

Retinides tpicos tm sido usados na terapia da acne desde 1962 e a primeira substncia
estudada foi a tretinona (THIELITZ et al., 2006), tendo sido a principal terapia tpica de
retinides durante dcadas (LEYDEN, 2003).
O termo retinide foi usado muitos anos atrs para definir uma mistura de ambos
componentes com atividade de Vitamina A (retinol), de ocorrncia natural, e anlogos
sintticos da vitamina A. Esta definio, baseada na estrutura molecular e na atividade
biolgica, contudo, tinha uma limitao clara. Alguns anlogos sintticos do retinol no
possuam atividade de vitamina A, enquanto alguns compostos sintticos com nenhuma
semelhana vitamina A tinham atividades como vitamina A. Desta forma, uma relao
entre a estrutura molecular de um retinide e sua funo no poderia ser harmonizada. Com
a descoberta dos receptores nucleares de cido retinico (RARs) e receptores X retinides
(RXRs), uma definio unificada de retinides poderia ser feita. Baseado no conhecimento

25
atual, retinide pode ser definido como uma molcula que se liga e ativa RARs - por ele
mesmo e atravs da converso metablica por meio disso, obtendo ativao
transcripcional de genes responsivos ao cido retinico. Contudo, frmacos com a
habilidade de se ligarem a um receptor e aqueles com nenhuma similaridade qumica ao
cido retinico podem ser considerados retinides (KANG, 2006).
O mais abundante retinide na pele humana o retinol, um nutriente provido de pigmentos
pr-vitamina de caroteno, presente em frutas e vegetais, ou como steres de retinol,
presentes em alimentos de origem animal. In vivo, retinol convertido nas formas aldedo e
cido, respectivamente, retinaldedo e cido retinico. As principais funes dessas
pequenas molculas hormonais so viso, reproduo e integridade epidrmica. A
importncia da vitamina A na pele normal foi primeiramente reconhecida em 1925, atravs
da verificao da queratinizao anormal em animais com deficincia em vitamina A. O
primeiro estudo da vitamina A oral para tratamento da acne surgiu em 1943. Em 1969, o uso
do cido retinico tpico foi descrito para acne. Aps esta importante descoberta, o cido
retinico tornou-se comercialmente disponvel para tratamento da acne na dcada de 70
(BERSHAD, 2001).
Retinides so importantes reguladores da diferenciao e proliferao epidrmica. Como
molculas lipoflicas, eles difundem atravs das membranas celulares, ligando-se a
receptores nucleares e modulando a expresso de genes responsveis pela diferenciao
celular (SORG et al., 2006), normalizando a queratinizao folicular e sinais prinflamatrios na UPS (JAIN, 2004).
Primeiramente, retinides tpicos foram usados em pacientes com acne comedognica
(leses no-inflamatrias). Contudo, retinides tpicos tambm demonstraram atividade em
acne inflamatria por efeitos imunomodulatrios diretos e por reverter o microcomedo, o
precursor de ambas as leses inflamatrias e no-inflamatrias (LEYDEN, 2003).
O mecanismo de ao dos retinides mediado pela ligao a receptores nucleares
(GOLLNICK, 2003), sendo que dois principais tipos de receptores tm sido caracterizados:
receptores de cido retinico (RARs) e receptores X retinides (RXRs) (WEBSTER, 1998) e
protenas de ligao citoslicas. Cada famlia de receptor inclui trs subtipos (,,) que
induzem a expresso ou a regulao de genes-alvo (THIELITZ et al., 2006).
Os retinides so classificados em no aromticos (retinol, tretinona e isotretinona),
monoaromticos (etretinato e acitretina) e poliaromticos (arotinide, adapaleno e

26
tazaroteno) (MILLIKAN, 2000). Eles so divididos em trs geraes. A primeira gerao
consiste do cido trans-retinico e do ismero cis (isotretinona) e o cido 9-cis-retinico
(alitretinona), usado para Sarcoma de Kaposi. Membros da segunda gerao so ismeros
monoaromticos do cido retinico, que incluem etretinato e acitretina, usados para
psorase. Os retinides da terceira gerao so ismeros poliaromticos do cido retinico,
denominados arotinides, que serviram como modelo para as ltimas molculas, incluindo
os agentes tpicos para acne, adapaleno e tazaroteno (BERSHAD, 2001).

cido trans-retinico (AR; vitamina A cida; tretinona) a principal forma biologicamente

ativa de ocorrncia natural (YAMAGUCHI et al., 2005), sendo a forma ativa do produto
metablico da vitamina A (RIGOPOULOS et al., 2004). AR um p cristalino amarelo a
laranja claro, praticamente insolvel em gua, solvel em cloreto de metileno e acetona,
fracamente solvel em ter e levemente solvel em lcool. sensvel ao ar, calor e luz,
especialmente em soluo e, por isso, deve ser armazenado em recipientes fechados,
protegido da luz e sob atmosfera de nitrognio (BP 2005). AR cido 3,7-dimetil-9-(2,6,6trimetil-1-ciclohexen-1-il)-2,4,6,8-nonatetraenico (Figura 3), que apresenta Massa Molar de
300,4 g/mol (SWEETMAN, 2005).

Figura 3: Estrutura qumica do cido trans-retinico

Fonte: BP 2005
cido retinico o agente comedoltico tpico mais efetivo disponvel (BROWN & SHALITA,
1998). O AR tem demonstrado eficcia em desordens de queratinizao e no tratamento de
outras leses cutneas, quando aplicado topicamente (CONTRERAS et al., 2005). No
existe reao adversa sistmica associada aplicao tpica do AR. Apenas cerca de 1%
do frmaco aplicado topicamente absorvido, o que no suficiente para alterar o nvel de
vitamina A no plasma. Portanto, as reaes adversas da tretinona so limitadas pele
(WEBSTER, 1998). A principal desvantagem da sua aplicao tpica a irritao local,
eritema, peeling, queimao e secura da pele. O AR tambm aumenta a sensibilidade da
pele radiao solar, sendo necessrio o uso de protetores solares. O AR est disponvel
comercialmente em concentraes que variam de 0,025% a 0,1% nas formas farmacuticas
creme, gel e soluo alcolica (BROWN & SHALITA, 1998). Uma vez que os efeitos
colaterais aumentam com a concentrao do frmaco e a freqncia de uso, a terapia tpica

27
deveria ser iniciada com uma dose baixa do AR e aumentada lentamente at a dose
teraputica mxima (NG et al., 2003).
Combinao de agentes pode aumentar a eficcia e diminuir os efeitos colaterais.
Estratgias para aumentar a tolerabilidade aos retinides incluem o uso de anlogos de
retinides, como o adapaleno ou novos sistemas de liberao, tais como microesfera de
tretinona (WEBSTER, 2005). Formulaes lipossomais de tretinona, sistema microesfera
de liberao da droga, alm de outras formulaes contendo poliolprepolmero 2 (PP-2), o
qual auxilia na reteno do frmaco na superfcie e nas camadas superiores da pele, esto
sob investigao.
No

sistema

de

microesfera

disponvel

comercialmente

(Retin-A

Micro;

Ortho

Dermatological, Raritan, NJ, EUA), a tretinona encapsulada gradualmente liberada

dependendo do atrito, temperatura, pH e outros fatores. Esse sistema parece oferecer
proteo contra a fotodegradao da tretinona (KRAUTHEIM & GOLLNICK, 2004), alm de
ter demonstrado ser menos irritante e to efetivo quanto formas disponveis comercialmente
(BROWN & SHALITA, 1998). Uma das vantagens da tretinona microencapsulada que
essas partculas seletivamente se localizam nos folculos, onde a tretinona liberada ao
longo do tempo, reduzindo a concentrao do frmaco sobre a pele e, conseqentemente,
reduzindo a irritao (GOLLNICK et al., 2003). Comparativamente, gel contendo microesfera
de cido retinico a 0,1% demonstrou menor toxicidade local que creme convencional de
cido retinico na mesma concentrao. Sendo assim, a formulao de microesfera pode
ser to efetiva e menos irritante que concentraes equivalentes do frmaco em um veculo
convencional (WEBSTER, 1998).

Uma das mais promissoras inovaes tem sido a incorporao de tretinona em um veculo
contendo poliolprepolmero 2. Esse material retm o frmaco sobre a pele. A incorporao
de tretinona em um veculo contendo poliolprepolmero 2 tem como objetivo prevenir uma
absoro percutnea rpida e excessiva do frmaco, reduzindo irritao provocada pelos
gis e cremes comercialmente disponveis (QUIGLEY & BUCKS, 1998). Estudos recentes
com o complexo cido retinico/ciclodextrina 0,025% demonstraram eficcia e tolerabilidade
aumentadas, quando comparada a uma preparao convencional duas vezes mais
concentrada (THIELITZ et al., 2006). A tolerabilidade aumentada das novas formulaes do
cido retinico permitiu o uso desse agente como terapia de primeira linha em quase todas
as formas da acne.

28

2a PARTE - PELE

1 PELE

A pele humana essencial vida atravs da proteo do corpo entrada de toxinas

estranhas ao organismo e da funo de conservao da gua (ROBERTS, 1997). Alm
disso, a pele humana uma barreira seletiva e efetiva absoro de substncias aplicadas
sobre ela. Em geral, a epiderme, especificamente o estrato crneo, representa o principal
elemento-controle da absoro de substncias atravs da pele (BARRY, 2001; ROBERTS,
1997).
A pele principalmente composta de epiderme (camada externa) e derme (interna). A
derme contm capilares, glndulas sebceas e sudorparas, folculos pilosos e nervos; a
epiderme avascular, alm de ter uma estrutura multilamelar que representa os diferentes
estgios da diferenciao celular. Acima da camada basal, encontram-se os cornecitos,
que so clulas queratinizadas, funcionalmente mortas, circundadas por lpides, constituindo
a camada mais externa da epiderme denominada estrato crneo (MOSER et al., 2001).

A funo barreira da pele principalmente atribuda ao estrato crneo. A camada crnea

formada pelos cornecitos, devido apoptose de queratincitos durante a passagem dessas
clulas da camada basal da epiderme superfcie. Durante esse processo, as clulas
degradam fosfolpides e sintetizam ceramidas que so secretadas dentro do espao
intercelular, onde, juntamente com colesterol, cidos graxos livres de cadeia longa e sulfato
de colesterila, formam camadas lipdicas altamente ordenadas (SHAFER-KORTING et al.,
2007). Desta forma, os lpides do estrato crneo formam bicamadas circundando os
cornecitos, formando uma estrutura rgida e compacta (MOSER et al., 2001). Essa barreira
formada essencialmente lipoflica. Por essa razo, molculas lipoflicas so aceitas mais
facilmente pelo estrato crneo. Idealmente, um frmaco deve possuir ambas solubilidades
em lpides e em gua. Se ele for muito hidroflico no ser capaz de penetrar no estrato
crneo e se for muito lipoflico tender a permanecer no estrato crneo (NAIK et al., 2000).

1.1 Barreira epidrmica na acne

Desordens bsicas e o uso de muitos tratamentos tpicos para a acne so associados com
um prejuzo da barreira epidrmica. Deficincia de cido linolico, que tem sido implicado na

29
patofisiologia da acne, pode prejudicar a funo barreira. Sob circunstncias normais, o
cido linolico incorporado em esfingolipdeos, que participam da formao de unidades
de membranas unicelulares lamelares entre os queratincitos. Em pacientes com pele seca,
medicamentos tpicos usados para acne podem atingir a camada epitelial atravs de
microfissuras na pele, onde eles podem causar irritao e inflamao (DEL ROSSO, 2005).
A escolha do veculo importante quando for estabelecido um regime teraputico.
Formulaes que produzam umedecimento, atravs do uso de umectante e emoliente, so
ideais para o tratamento da acne, porque o prejuzo barreira epidrmica minimizado
(DEL ROSSO, 2005).

2 ABSORO PERCUTNEA

A permeao de frmacos atravs da pele inclui a difuso atravs da epiderme intacta e

atravs dos apndices da pele, que formam desvios na epiderme. Dois caminhos de
permeao atravs da barreira intacta podem ser identificados: a rota intercelular lipdica,
entre os cornecitos, e a rota transcelular, atravs dos cornecitos e lpides intercelulares
(Figura 4) (MOSER et al., 2001).

Figura 4: Diagrama simplificado do estrato crneo e de duas microrrotas de penetrao de

frmacos (1) via matriz lipdica entre os cornecitos (rota intercelular) e (2) atravs dos
cornecitos e matriz lipdica intercelular (rota transcelular)
Fonte: Adaptado de BARRY (2001)

A unidade pilosebcea (folculo piloso, glndula sebcea e infundbulo) proporciona uma

outra rota de permeao que atravessa o estrato crneo intacto, o que representa um alvo

30
para a liberao de frmacos (BARRY, 2001). Essa rota de penetrao folicular est
demonstrada na Figura 5.

Figura 5: Diagrama simplificado da estrutura da pele e rota folicular (UPS) de penetrao de

frmacos
Fonte: Adaptado de BARRY (2001)

A penetrao passiva do frmaco atravs da pele ocorre predominantemente via rota

intercelular e envolve a difuso de molculas atravs da matriz lipdica entre os cornecitos.
A rota via folculos pilosos tambm contribui para a penetrao percutnea. Contudo,
considerando que esses apndices ocupam somente aproximadamente 0,1% do total da
superfcie da pele, sua contribuio para a penetrao de formulaes convencionais
tpicas freqentemente considerada desprezvel. Entretanto, quando consideramos o
transporte cutneo de formulaes particuladas, a rota via apndices pode exercer uma
significante funo (ALVAREZ-ROMN et al., 2004a), uma vez que essa rota denominada
unidade pilosebcea (folculo piloso, glndula sebcea e infundbulo), atravessa o estrato
crneo intacto, representando um alvo para a liberao de frmacos (BARRY, 2001).
A liberao de frmacos na pele necessita reconhecer dois termos paradoxais:
primeiramente, a principal barreira permeao, formada pelo estrato crneo, necessita ser
superada para liberao de frmacos na pele (absoro na pele) e, secundariamente, a
deposio de frmaco dentro da pele poderia ser idealmente acompanhada por uma
absoro percutnea restrita (LBOUTOUNNE et al., 2004).

A baixa penetrao de frmacos na pele e atravs do estrato crneo freqentemente limita a

eficcia das formulaes tpicas. Basicamente, a penetrao na pele pode ser aumentada
pelas seguintes estratgias: (1) aumentando a difusibilidade do frmaco na pele, (2)

31
aumentando a solubilidade do frmaco na pele e (3) aumentando o grau de saturao do
frmaco na formulao (MOSER et al., 2001).
Desde que o uso de aceleradores qumicos, tais como surfactantes e solventes orgnicos
induzem irritao, causam danos e reduzem a funo barreira da pele, desejvel liberar
agentes teraputicos que mantm a funo barreira normal sem o auxlio de aceleradores
qumicos. Micelas, lipossomas, nanoemulses, nanopartculas lipdicas slidas (NLS),
nanoesferas e nanocpsulas so carreadores de liberao que tm sido desenvolvidos para
aumentar a absoro percutnea de agentes teraputicos, assim como para evitar danos
funo barreira da pele (SHIM et al., 2004). Carreadores coloidais de frmacos, incluindo
emulses submicrnicas, nanoesferas, nanocpsulas, lipossomas e complexos lipdicos,
tm sido alvo de grande interesse nos ltimos anos, como veculos para administrao
tpica de frmacos lipoflicos (JIMENEZ et al., 2004; ALVAREZ-ROMN et al., 2001).

32

3a PARTE SISTEMAS POLIMRICOS: NANOCPSULAS

SISTEMAS POLIMRICOS

H vrias dcadas, frmacos utilizados nos mais variados tratamentos so administrados

em sistemas convencionais de liberao. Em sua maioria, os esquemas teraputicos,
empregando os sistemas convencionais, requerem muitas administraes por longo perodo
de tempo, para manter os nveis teraputicos do frmaco no organismo. Algumas vezes, tais
nveis no so alcanados, ou seja, o tratamento no exibe resposta farmacolgica ou
apresenta exacerbao dos efeitos adversos (CHIEN, 1994).
Visando otimizar a resposta farmacolgica, estudos vm sendo realizados no intuito de
controlar a ao de frmacos por meio de modificaes qumicas no frmaco (pr-frmaco)
ou por meio de uma formulao capaz de controlar sua liberao (JAIN et al., 1998).
Nos ltimos 20 anos, nanocarreadores para liberao de frmacos tm sido extensivamente
estudados no campo da nanotecnologia farmacutica. Alguns nanocarreadores promissores
so lipossomas, nanopartculas lipdicas slidas, micelas polimricas e nanopartculas
polimricas (JGER et al., 2007).
Os sistemas coloidais podem ser usados para liberar frmacos em alvos especficos,
aumentar a biodisponibilidade, sustentar o efeito do frmaco no tecido alvo, solubilizar
frmacos e aumentar a estabilidade de agentes teraputicos contra a degradao
enzimtica ou fotodegradao (ABDELWAHED et al., 2006a).
Algumas vantagens dos nanocarreadores incluem: (1) manuteno dos nveis do frmaco
na faixa terapeuticamente desejvel; (2) diminuio dos efeitos colaterais, devido liberao
do frmaco no alvo; (3) reduo da dose necessria ao tratamento; (4) melhora do esquema
posolgico, o que leva a maior colaborao do paciente; (5) facilitao da administrao de
frmacos com meia-vida plasmtica baixa. Essas vantagens devem ser avaliadas contra os
seguintes interesses no desenvolvimento de cada sistema: (1) toxicidade dos materiais, ou
seus produtos de degradao, dos quais o frmaco liberado ou outros parmetros de
segurana, tais como liberao rpida no desejvel do frmaco (dose de ataque); (2)
desconforto causado pelo prprio sistema; (3) custo do sistema devido aos materiais de
encapsulao do frmaco ou processo de obteno (LANGER, 1998).

33
Esses sistemas polimricos possibilitam a incluso ou encapsulao de frmacos, isolandoos por meio de uma barreira fsica, formada por um polmero, que, em contato com fluidos
biolgicos, ir se dissolver, desintegrar ou sofrer o processo de degradao, liberando,
assim, a forma ativa e tornando-a disponvel.
Existem trs mecanismos gerais pelos quais os frmacos so liberados do polmero: (1)
difuso de espcies do frmaco do sistema e atravs dele; (2) uma reao qumica ou
enzimtica, permitindo a degradao do sistema ou clivagem do frmaco do sistema; (3)
ativao do solvente, tambm atravs da osmose ou inchao do sistema. Uma combinao
dos mecanismos possvel (LANGER, 1998).
Embora uma grande variedade de polmeros biodegradveis naturais e sintticos tenha sido
investigada para dirigir um frmaco ao stio de ao e liberar o frmaco de forma controlada,
poucos preenchem os pr-requisitos de biocompatibilidade. Entre os polmeros naturais
esto as albuminas bovina e humana, colgeno, gelatina e hemoglobina. O uso desses
polmeros tem sido limitado por apresentarem pureza questionvel e alto custo. Esta
restrio, por outro lado, favoreceu a expanso da utilizao dos polmeros sintticos, que
no apresentam a maioria dos problemas associados aos polmeros de origem natural. Os
polmeros sintticos podem ser exemplificados pelas poliamidas, poliaminocidos,
polialquilcianoacrilatos, polisteres, poliortosteres, poliuretanos e poliacrilamidas. Entre
esses, tm se destacado os polisteres de cadeia aliftica como poli-ltico (PLA), poligliclico (PGA), os copolmeros do cido ltico e gliclico (PLGA) e poli--caprolactona
(PCL) (JAIN et al., 1998). Os polisteres tm sido os mais utilizados devido s suas
propriedades de biocompatibilidade e biodegradabilidade (ABDELWAHED et al., 2006b).
O polmero empregado na preparao desses sistemas carreadores de frmacos deve
apresentar caractersticas de inocuidade, biocompatibilidade, estabilidade, facilidade de
processamento e cintica de biodegradao adequada, no se acumulando indefinidamente
nos tecidos (LIMA, 1998).
O principal obstculo que limita o uso das nanopartculas a instabilidade fsica (agregao
e fuso da partcula) e ou a instabilidade qumica (hidrlise dos materiais polimricos que
formam as nanopartculas), ligao do frmaco s nanopartculas e reatividade qumica
durante o armazenamento, que so freqentemente relatados quando essas suspenses
aquosas de nanopartculas so armazenadas por longos perodos (ABDELWAHED et al.,
2006b).

34
1.1 Propriedades fsicas, qumicas e biolgicas do polmero Poli--caprolactona

A poli--caprolactona (Figura 6) um polmero semicristalino, apresentando ponto de fuso

entre 59 e 64oC, dependendo do tamanho do cristal, e temperatura de transio vtrea de 70oC a -60oC, a qual pode variar sistematicamente pela copolimerizao. solvel,
temperatura ambiente, em tetrahidrofurano, clorofrmio, cloreto de metileno, tetracloreto de
carbono; pouco solvel em acetona, 2-butanona, acetato de etila, acetonitrila e
dimetilformamida; insolvel em lcoois, ter de petrleo e ter de dietila (PIRES, 1998).
A cristalinidade da caprolactona varia com sua massa molar. Para massas molares
superiores a 100.000, a cristalinidade de cerca de 40%, chegando a 80% quando a massa
molar diminui at 5.000. A cristalinidade um importante fator na determinao da
permeabilidade e da biodegradabilidade, pelo fato da fase cristalina ser inacessvel gua e
a outros solventes. Por isso, uma alta cristalinidade reduz a permeabilidade, tanto por
reduzir a solubilidade do soluto, quanto por aumentar a tortuosidade da rota difusional
(PIRES, 1998).

Figura 6: Estrutura qumica da poli--caprolactona

Fonte: CHANDRA & RUSTGI (1998)
Poli--caprolactona hidrolisa a velocidades muito baixas, podendo ser acelerada pela
copolimerizao com outros monmeros, tais como cido ltico (MERKLI et al., 1998).
A poli--caprolactona preparada pela polimerizao da abertura de anel da lactona
correspondente atravs de um radical livre aninico, catinico ou polimerizao coordenada.
A hidrlise da poli--caprolactona produz cido -hidrxicaprico, pela clivagem das cadeias
polimricas na ligao ster (Figura 7). Esta clivagem randmica das cadeias polimricas
produz uma diminuio inicial da massa molar, sem significante perda de peso. Quando a
massa molar mdia atinge cerca de 5.000, a perda de peso inicia-se devido difuso de
pequenos fragmentos da matriz polimrica (MERKLI et al., 1998).

Figura 7: Mecanismo de hidrlise da poli--caprolactona

Fonte: MERKLI e colaboradores (1998)

35
2

NANOCPSULAS POLIMRICAS

As nanopartculas polimricas so sistemas carreadores de frmacos que apresentam

dimetro inferior a 1 m. O termo nanopartcula inclui as nanocpsulas e as nanoesferas, as
quais diferem entre si segundo a composio e organizao estrutural (SCHAFFAZICK et
al., 2003).

Nanocpsulas so carreadores nanoparticulados submicrnicos compostos de um ncleo

oleoso circundado por uma parede polimrica com surfactantes lipoflicos ou hidroflicos na
interface (Figura 8 a; b) (LEGRAND et al., 1999).
As nanoesferas, que no apresentam leo em sua composio, so formadas por uma
matriz polimrica, onde o frmaco pode ficar retido ou adsorvido (Figura 8 c; d)
(SCHAFFAZICK et al., 2003).

Figura 8: Representao esquemtica de nanocpsulas e nanoesferas polimricas: (a)

frmaco dissolvido no ncleo oleoso das nanocpsulas; (b) frmaco adsorvido parede
polimrica das nanocpsulas; (c) frmaco retido na matriz polimrica das nanoesferas; (d)
frmaco adsorvido ou disperso molecularmente na matriz polimrica das nanoesferas
Fonte: SCHAFFAZICK e colaboradores (2003)

Nanocpsulas apresentam uma caracterstica mpar de ser um sistema slido vesicular. A

parede polimrica confere nanocpsula muito mais estabilidade que nanoemulses e
lipossomas, onde o ncleo interno tem uma grande capacidade carreadora de acordo com a
solubilidade do frmaco no ncleo (COUVREUR et al., 1996). Uma das vantagens das
nanocpsulas sobre as nanoesferas o baixo contedo polimrico e a elevada capacidade
de carregamento de frmacos lipoflicos, como o AR, devido ao ncleo oleoso interno
(BLOUZA et al., 2006).

Outras vantagens de confinar o frmaco dentro de uma cavidade central que um efeito de
exploso pode ser evitado, pois o frmaco no est em contato direto com tecidos e, por

36
essa razo, irritao no stio de administrao ser reduzida, e o frmaco pode ser protegido
de degradao durante o armazenamento e aps administrao (BLOUZA et al., 2006).
O principal obstculo que limita o uso de tais vetores a instabilidade em meio aquoso.
Agregao e fuso das partculas so freqentemente verificadas aps um longo perodo de
armazenamento (ABDELWAHED et al., 2006c). Alm disso, essas suspenses apresentam
outras desvantagens durante o armazenamento, tais como contaminao microbiolgica e
hidrlise polimrica no-enzimtica (TEWA-TAGNE et al., 2007).
Surfactantes lipoflicos e hidroflicos so usados na preparao de nanocpsulas.
Geralmente, o surfactante lipoflico a lecitina de elevada pureza, enquanto o surfactante
hidroflico sinttico: aninico (laurilsulfato), catinico (quaternrio de amnio), ou, mais
comumente, no-inico (polioxietileno-polioxipropilenoglicol) (LEGRAND et al., 1999).
Como fase oleosa da nanocpsula, leos de origem vegetal ou semi-sinttica, como
triglicerdeos de cadeia mdia (TCM) e longa (TCL) tm sido amplamente utilizados. Os
TCM so obtidos da hidrlise do leo de cco e fracionados em cidos graxos livres,
contendo de 6 a 12 tomos de carbono, sendo esses cidos graxos esterificados com o
glicerol. Os TCM apresentam a vantagem de serem at 100 vezes mais solveis em gua
que os TCL (WADE & WELLER, 2000).
Podem ser utilizados antioxidantes de fase oleosa, como butilhidrxitolueno (BHT; log P
4,175,80) e agente quelante, como cido etilenodiaminotetractico sal dissdico (EDTA sal
dissdico), em concentraes de 0,01 a 0,1% p/v (WADE & WELLER, 2000).

Os

polmeros

utilizados

na

encapsulao

consistem,

geralmente,

de

materiais

biocompatveis e biodegradveis, como a poli--caprolactona. Ela tem sido estudada como

matriz em sistemas de liberao controlada de frmacos. Sua degradao in vivo lenta,
sendo adequada para liberao controlada, com tempo de meia vida de 1 a 2 anos
(CHANDRA & RUSTGI, 1998). A biodegradao de nanopartculas essencial para reduzir
o risco de danos ao tecido devido ao sobrecarregamento celular polimrico, resultando em
citotoxicidade. Contudo, biodegradao no deve ser to rpida, seno as nanopartculas
degradaro antes de alcanar o stio de ao desejado (MAGENHEIM & BENITA, 1991).

37
3

PREPARAO DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS

Para a preparao de nanocpsulas, de acordo com Legrand e colaboradores (1999), so

descritas duas principais tcnicas: (1) tcnica de emulsificao e difuso e (2) processo de
deposio interfacial, seguido de deslocamento do solvente. Este ltimo pode se
classificado em duas principais categorias: se requerem a formao de nanopartculas a
partir de uma reao de polimerizao in situ ou se so conseguidos diretamente a partir de
uma macromolcula ou um polmero pr-formado, tais poli--caprolactona (PCL)
(COUVREUR et al., 1996; SCHAFFAZICK et al., 2003).
A tcnica da emulsificao e difuso baseada na formao inicial de uma emulso
leo/gua (O/A) contendo leo, polmero e frmaco no solvente orgnico, em uma soluo
aquosa contendo um agente estabilizante. O solvente orgnico deslocado para dentro da
fase externa pela adio de um excesso de gua. Este mtodo apresenta vantagens, como:
pequena quantidade de solvente, simplicidade, controle do tamanho das nanocpsulas
obtidas (de 80 a 900 nm), controle da espessura da parede polimrica pelo aumento da
concentrao do polmero e a possibilidade de se preparar nanocpsulas com um ncleo
interno aquoso: contudo, uma grande quantidade de gua tem que ser removida por
evaporao se o solvente orgnico for altamente miscvel em gua (LEGRAND et al., 1999;
LBOUTOUNNE et al., 2002, 2004; ALVAREZ-ROMN et al., 2004b).
Os processos de deposio interfacial, seguido de deslocamento do solvente, so baseados
em um polmero pr-formado ou em monmeros que se polimerizam na interface leo /
gua. Em ambos os casos, o processo consiste em misturar uma fase orgnica miscvel em
gua, tais como lcool ou acetona, contendo leo (com ou sem surfactante lipoflico) com
uma fase aquosa contendo um surfactante hidroflico. Aps adio da fase orgnica fase
aquosa, sob agitao moderada, o solvente orgnico difunde para a fase aquosa e o
polmero depositado na interface leo/gua (LETCHFORD & BURT, 2007). No segundo
caso, monmeros de alquilcianoacrilatos so solubilizados em etanol e leo, ento
dispersados em gua acidificada contendo surfactantes. Polimerizao aninica do
cianoacrilato na fase oleosa iniciada na interface por nuclefilos, tais como ons hidroxila
na fase aquosa, levando formao das nanocpsulas (LEGRAND et al., 1999).
O fator mais importante que conduz estrutura das nanocpsulas a difuso do solvente
orgnico, com uma completa miscibilidade da fase orgnica na fase aquosa e uma
insolubilidade do polmero em ambas as fases oleosa e aquosa. A preparao das
nanocpsulas pelo mtodo da deposio interfacial do polmero pr-formado uma tcnica

38
simples, reprodutvel e aplicvel a muitos polmeros (LEGRAND et al., 1999). De fato,
nanopartculas podem ser preparadas facilmente por simples disperso de uma fase
orgnica no-txica em uma fase aquosa sem purificao adicional e com um elevado
rendimento de encapsulao para substncias lipoflicas (MOSQUEIRA et al., 2000).
Quando o mtodo de deslocamento do solvente usado para obter nanocpsulas, gotas de
leo submicrnicas so formadas e estabilizadas por uma camada de polmero, que produz
uma barreira mecnica coalescncia. Durante o processo de fabricao, aps a injeo da
fase orgnica na fase aquosa, uma rpida difuso interfacial observada como resultado da
mtua difuso entre os solventes, que produz energia para a formao da gota oleosa. Esta
instabilidade mecnica causada pelas variaes locais na tenso interfacial que pode
arrancar o leo de dentro da fase aquosa. Uma vez que a difuso do solvente completada,
o polmero agrega ao redor da gota de leo. A velocidade de difuso depende das
propriedades fsicas da fase oleosa, tais como viscosidade e tenso interfacial
(MOSQUEIRA et al., 2000).

Um dos mais importantes problemas na nanoencapsulao de frmacos muito hidrofbicos

a migrao deles durante a precipitao polimrica para o meio aquoso externo, formando
um ncleo de cristalizao. Esses nanocristais sero detectveis somente quando eles
crescerem durante o armazenamento. Este problema pode ser eventualmente solucionado
aumentando a quantidade de polmero ou modificando o meio aquoso (ALONSO, 1996).
Obviamente, parmetros de processo, tais como pH, concentrao do monmero ou do
polmero pr-formado, estabilizantes, fora inica e adio de outros excipientes podem,
profundamente, afetar as propriedades fsico-qumicas das nanopartculas formadas
(MAGENHEIM & BENITA, 1991).
Frmacos lipoflicos, que tem alguma solubilidade na matriz polimrica (nanoesferas) ou no
ncleo oleoso (nanocpsulas), so mais facilmente incorporados que compostos hidroflicos,
embora esses ltimos possam ser adsorvidos na superfcie da partcula (BARRATT, 2003).
Com o objetivo de se verificar a composio qumica da interface partcula/gua das
nanocpsulas a nvel molecular, em um estudo realizado por Jger e colaboradores (2007),
polmeros fluorescentes (corante quimicamente ligado) e corante benzazol (corante
encapsulado, capaz de distinguir o meio ambiente apolar e polar/prtico) foram usados para
preparar novas formulaes. A organizao da nanocpsula a nvel molecular foi proposta:
os estudos de fluorescncia mostraram que os polmeros formam uma parede na interface

39
leo/gua, interagindo com leo e gua a nvel molecular. Estudos de estabilidade
mostraram que a gua interage com o polmero em funo do tempo, porque a hidrlise do
grupo carboxilato polimrico dependente da presena de gua. Esta hidrlise produz
grupos carboxlicos, que so responsveis pela diminuio do pH, devido ionizao e,
conseqente, liberao de prtons no meio externo.

CARACTERIZAO DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS

Em funo de sua natureza coloidal e da complexidade dos constituintes que compem as

formulaes das nanocpsulas, a caracterizao dessas nanoestruturas , tecnicamente,
complexa de ser realizada. Geralmente, aps a preparao, a avaliao fsico-qumica
envolve: distribuio do tamanho das partculas, determinao do potencial zeta () ou carga
superficial das partculas, determinao do pH, determinao da concentrao do frmaco
associado s nanopartculas, cintica de liberao do frmaco a partir das nanocpsulas e
estabilidade em funo do tempo de armazenamento (LEGRAND et al., 1999;
SCHAFFAZICK et al., 2003).
A avaliao do tamanho das nanocpsulas realizada atravs da difrao do raio laser
monocromtico (Nanosizer). O Potencial Zeta, tcnica mais freqentemente utilizada para
caracterizar a superfcie das nanocpsulas, reflete o potencial de superfcie eltrica das
partculas. O Teor de encapsulao est geralmente relacionado solubilidade do frmaco
no ncleo interno oleoso. Tcnicas de Ultrafiltrao/centrifugao ou Ultrafiltrao a presso
reduzida tm sido utilizadas para separar o frmaco encapsulado do no-encapsulado para
se obter o Teor de Encapsulao (LEGRAND et al., 1999).

4.1 Distribuio do tamanho das nanocpsulas polimricas

A distribuio do tamanho (dimetro) das partculas uma das mais importantes

caractersticas fsico-qumicas das suspenses coloidais, uma vez que a tendncia
sedimentao das partculas contendo o frmaco, bem como estudos de sua estabilidade
podem ser monitorados atravs das mudanas no dimetro das partculas (MAGENHEIM &
BENITA, 1991; MLLER-GOYMANN, 2004).
Geralmente, o dimetro das nanocpsulas preparadas pela tcnica da nanoprecipitao,
varia entre 100 e 500 nm, sendo influenciado por diversos fatores tais como: natureza e

40
concentrao do polmero e do frmaco, concentrao de surfactantes, proporo entre
solvente e gua, concentrao do leo, alm da velocidade de difuso da fase orgnica na
fase aquosa (LEGRAND et al., 1999).
Vrios outros estudos tm sido desenvolvidos para a avaliao dos principais fatores que
afetam o dimetro das partculas de sistemas nanoestruturados. A composio qualiquantitativa e o mtodo de preparao das nanopartculas so fatores determinantes do
dimetro mdio e da polidisperso das partculas. No caso das nanocpsulas, um fator
importante, que influencia o dimetro das partculas, a natureza do leo utilizado como
ncleo. Os resultados so atribudos s diferenas de viscosidade, hidrofobicidade ou
tenso interfacial das substncias empregadas (SCHAFFAZICK et al., 2003).
O dimetro das gotas de leo formadas durante a difuso parece ser determinado pelas
mudanas locais na tenso interfacial durante a formao da nanocpsula, como em um
processo de emulsificao. Quanto menor a tenso interfacial do leo, menor o tamanho da
nanocpsula. A viscosidade inicial da fase oleosa outro fator que poderia influenciar o
dimetro mdio das nanocpsulas (MOSQUEIRA et al., 2000).
Outra observao relevante que a adio de monmero emulso (mtodo de
polimerizao interfacial) ou, ainda, a presena do polmero (mtodo de deposio
interfacial de polmero pr-formado) pode conduzir diminuio de tamanho da partcula em
relao emulso, devido, provavelmente, reduo da energia livre interfacial do sistema,
no primeiro caso, ou mediante um efeito estabilizador do polmero ao redor das gotculas, no
segundo (SCHAFFAZICK et al., 2003).

De uma forma geral, as nanopartculas obtidas atravs de diferentes mtodos, aps a

preparao, apresentam uma distribuio unimodal, com um baixo ndice de polidisperso.
Os mtodos usuais para a determinao da distribuio de tamanho das nanopartculas
consistem em Espectroscopia de Correlao de Ftons e Microscopia Eletrnica de
Varredura ou Microscopia Eletrnica de Transmisso. Dependendo da formulao, podem
ser verificadas diferenas de tamanho de partculas, conforme o mtodo empregado na sua
determinao, uma vez que a Microscopia Eletrnica fornece uma imagem da partcula
isolada do meio, enquanto a Espectroscopia de Correlao de Ftons possibilita a
determinao do raio hidrodinmico das partculas em suspenso (SCHAFFAZICK et al.,
2003). O mtodo da Espectroscopia de Correlao de Ftons mede o movimento Browniano
das partculas e constitui um procedimento adequado para a determinao da distribuio
de tamanho das partculas. As principais vantagens desta tcnica no invasiva incluem a

41
eficincia e ausncia de preparo prvio da amostra para anlise, tais como isolamento ou
secagem. necessria somente uma diluio adequada em gua pura. Contudo, uma vez
que as determinaes so baseadas no movimento Browniano, as condies do meio
suspensor, como, por exemplo, surfactantes adsorvidos, podem afetar as determinaes do
tamanho da partcula (ALONSO, 1996).

4.2 Potencial Zeta ( ) das nanocpsulas polimricas

Medida do Potencial Zeta a tcnica mais freqentemente usada para caracterizar a

superfcie das nanocpsulas (LEGRAND et al., 1999).
O Potencial Zeta, que reflete o potencial eltrico da superfcie das partculas, influenciado
pelas mudanas na interface com o meio dispersante, em razo da dissociao de grupos
funcionais na superfcie da partcula ou da adsoro de espcies inicas presentes no meio
aquoso de disperso (SCHAFFAZICK et al., 2003). Uma carga negativa produzida pelos
grupos carboxila do polmero pode ter uma funo na superfcie da nanocpsula. Neste
caso, um polmero de maior massa molar tem uma influncia menor sobre a carga da
superfcie para polmero de menor massa, devido ao menor nmero de grupamentos
terminais (MOSQUEIRA et al., 2000).
A natureza e a intensidade da carga superficial dos carreadores de frmacos
nanoparticulados muito importante, porque ela determina a interao deles com o meio
ambiente biolgico, to bem como as interaes eletrostticas com compostos bioativos
(ALONSO, 1996). Uma carga superficial relativamente alta comumente explica a boa
estabilidade da suspenso coloidal, pois grandes foras repulsivas previnem a agregao e
colises ao acaso de nanopartculas adjacentes (MAGENHEIM & BENITA, 1991).
Os fosfolipdeos (lecitinas) e os polmeros constituintes das nanopartculas so os principais
componentes presentes nas formulaes capazes de influenciar o potencial zeta.
Especialmente os polisteres, como o PLA, e as lecitinas fornecem um potencial negativo
interface. Em mdulo, um valor de potencial zeta relativamente alto importante para uma
boa estabilidade fsico-qumica da suspenso coloidal, pois grandes foras repulsivas
tendem a evitar a agregao em funo das colises ocasionais de nanopartculas
adjacentes (SCHAFFAZICK et al., 2003).

42
4.3 Teor de Encapsulao

O Teor de Encapsulao visa determinar a concentrao do frmaco associado intimamente

nanopartcula em relao ao total de frmaco adicionado preparao. Portanto, esse
teor calculado pela diferena entre a quantidade total de frmaco na suspenso e o
frmaco presente no meio externo aquoso. Segundo Legrand e colaboradores (1999) o Teor
de Encapsulao est relacionado solubilidade do frmaco no ncleo oleoso interno.

A avaliao do contedo do frmaco nas nanopartculas uma tarefa especialmente

complicada, desde que a separao dos frmacos livres dos incorporados difcil pela
natureza coloidal do sistema carreador. A tcnica de separao mais utilizada a
Ultracentrifugao. Invariavelmente, o frmaco livre determinado no sobrenadante. O
frmaco total , geralmente, medido por completa dissoluo da suspenso de
nanopartculas em um solvente apropriado. Em todas as tcnicas de separao descritas,
assumido que o frmaco livre completamente dissolvido. Contudo, esta hiptese no
sempre verificada, uma vez que parte do frmaco livre pode estar na forma de nanocristais.
Contudo, a tcnica de separao por Ultracentrifugao pode induzir a uma interpretao
errnea nos casos onde os nanocristais do frmaco esto presentes no sedimento
juntamente com as nanopartculas (MAGENHEIM & BENITA, 1991).

4.4 Morfologia externa das nanocpsulas polimricas

A Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET) a tcnica mais utilizada para avaliao
morfolgica e estrutural das nanocpsulas (SCHAFFAZICK et al., 2003). A associao
dessa tcnica criofratura tem fornecido informaes teis sobre a estrutura das
nanocpsulas. Estudo recente realizado por Rube e colaboradores (2005) demonstrou que a
tcnica de espalhamento de nutrons a baixo ngulo fornece informaes importantes sobre
a espessura da parede polimrica, cujo valor estimado foi de 17 nm, permitindo elucidar e
comprovar o modelo reservatrio proposto para as nanocpsulas. Entretanto, nos ltimos
anos, a Microscopia de Fora Atmica (MFA) tem sido uma ferramenta muito utilizada na
caracterizao de nanosistemas, principalmente lipossomas e nanoesferas. A MFA fornece
informaes com alta resoluo em trs dimenses, em escala nanomtrica sendo capaz
ainda de resolver detalhes de superfcie a nvel atmico (LEITE, 2006).
A MFA tem, como princpio bsico, a fora de interao entre a sonda utilizada e a amostra,
fornecendo importantes informaes tais como organizao estrutural e distribuio de

43
dimetro. medida que uma sonda extremamente fina, montada sob a extremidade de uma
alavanca, se aproxima da superfcie de uma amostra, foras de interao sonda-amostra
surgem, as quais fazem a alavanca defletir. Essa deflexo detectada por um sistema
laser-fotodetector e todo o sistema monitorado digitalmente, convertendo os dados em um
mapa topogrfico da superfcie da amostra. Foras de interao sonda-amostra, atrativas ou
repulsivas, to pequenas como nano-Newtons podem ser medidas. A longas distncias essa
interao praticamente no existe. medida que a sonda se aproxima da amostra, foras
atrativas de Van der Waals passam a atuar, aumentando com a aproximao da sonda at
que a separao seja de ordem interatmica. Nesse ponto, surgem foras eletrostticas
repulsivas sugerindo contato fsico entre a sonda e a superfcie da amostra. A interao real
entre sonda e amostra tem carter mais complexo; porm, as caractersticas bsicas da
interao so as mesmas: atrao longa distncia e repulso em distncias menores
(LEITE, 2006).
Baseado nessas foras interativas pode-se definir alguns modos de operao na tcnica de
MFA, a saber: 1) contato, onde a interao por foras repulsivas permite obter imagens
com alta resoluo, a nvel atmico. Neste modo, o atrito sonda-amostra pode danificar a
superfcie, produzindo imagem distorcida; 2) no-contato, onde a interao atrativa,
apresenta resoluo limitada, apesar de apresentar a vantagem de no danificar a amostra;
3) contato intermitente, com regime alternando em atrativo e repulsivo; consegue altas
resolues sem deformao da amostra (NEVES et al., 1998).
MFA permite que amostras sejam observadas sem qualquer tratamento, sendo capaz de
obter informaes complementares em situaes reais, sem interferncias ou artefatos.
Desde que a amostra no necessita ser eletricamente condutora, nenhum revestimento
metlico requerido. Do mesmo modo, nenhuma desidratao da amostra necessria e,
ento, o biofilme pode ser observado em seu estado hidratado (ENGLERT et al., 2003).
Alm das grandes ampliaes, algumas vantagens da MFA incluem: a obteno de
informaes nas trs dimenses espaciais, utilizao de amostras condutoras e/ou
isolantes, alm da simplicidade de preparo da amostra, permitindo a anlise na amostra
hidratada, sem necessidade de utilizao de vcuo. Assim, amostras biolgicas podem ser
preparadas, por exemplo, pela deposio de uma gota em uma lmina ou outro substrato,
como, por exemplo, a mica (NEVES et al., 1998). Alm disso, MFA tem como vantagem ser
uma tcnica de baixo custo de operao e de baixo investimento.

44
A grande vantagem da MFA sobre a MET que permite estudar no apenas materiais
condutores, mas tambm todo tipo de material isolante, j que o mtodo no utiliza corrente
de tunelamento para produo de imagens.

5 ESTUDO DE ESTABILIDADE DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS

A avaliao da estabilidade fsico-qumica das nanocpsulas polimricas, sob diferentes

condies de armazenamento, de fundamental importncia. O tamanho da partcula, o
potencial zeta, a concentrao do frmaco e o pH so geralmente os parmetros fsicoqumicos que podem ser utilizados para monitorar a estabilidade das suspenses coloidais
polimricas (SCHAFFAZICK et al., 2003).
A estabilidade qumica dos carreadores polimricos coloidais depende da temperatura, pH
do meio e da exata composio da formulao armazenada. Conseqentemente, para cada
formulao especfica, o estudo de estabilidade correspondente teria que ser realizado para
garantir a qualidade do produto (ABDELWAHED et al., 2006b).
Aps a preparao, as suspenses coloidais normalmente no possuem tendncia
separao de fases, pois o processo de sedimentao lento para partculas
submicromtricas, sendo minimizado pelo movimento Browniano. No entanto, com o tempo,
pode ocorrer a aglomerao das partculas e, conseqentemente, a sedimentao. Vrios
fatores influenciam a estabilidade das suspenses coloidais, como, por exemplo, a adsoro
de molculas ativas superfcie das nanopartculas e a presena de tensoativos adsorvidos.
A tendncia agregao e sedimentao das nanopartculas dispersas, em funo do
tempo, pode ser monitorada pela determinao de mudanas na distribuio de tamanho
das partculas (SCHAFFAZICK et al., 2003). Para impedir o fenmeno de agregao, um
estabilizante adequado pode ser usado na formulao. Contudo, as suspenses de
nanopartculas coloidais podem ser desestabilizadas quando outros componentes da
formulao so adicionados. A adsoro de molculas ativas sobre as nanopartculas pode
induzir este fenmeno (aglomerao de partculas) (ABDELWAHED et al., 2006b).
Informaes relevantes sobre a estabilidade de suspenses nanoparticuladas podem ser
obtidas mediante o monitoramento do pH, em funo do tempo. Por exemplo, a alterao do
pH pode ser indcio de degradao do polmero (SCHAFFAZICK et al., 2003). No entanto, a
diminuio dos valores de pH das suspenses coloidais polimricas, em um curto perodo
de tempo, pode ser atribuda tanto ionizao de grupos carboxlicos presentes no

45
polmero, quanto hidrlise, dependendo da hidrofobicidade do polister. Suspenses de
nanopartculas preparadas com PCL apresentaram reduo nos valores de pH, num perodo
de 3,5 meses. Este fato foi atribudo exposio de maior nmero de grupos cidos
carboxlicos terminais, em funo do tempo, promovida pela relaxao das cadeias
polimricas (SCHAFFAZICK et al., 2003).
Nanopartculas de polmeros hidrolticos degradaro em funo do tempo, embora a uma
baixa velocidade, se a temperatura e o pH estiverem controlados. A estabilidade de
nanopartculas depende do tipo de polmero, sendo crescente na seguinte ordem: PLA:PGA
(25:50) < PLA:PGA (37,5:25) < PLA 50 = PCL (ABDELWAHED et al., 2006b).

A degradao dos polmeros polisteres alifticos pode ser afetada in vitro: (1) pelo mtodo
de preparao do sistema de liberao, (2) pelas propriedades dos polmeros tais como
massa molar inicial e (3) pelos parmetros fsicos e qumicos, tais como temperatura, pH,
fora inica, exposio radiao gama (LEMOINE et al., 1996).
A estabilidade dos carreadores coloidais polimricos durante o armazenamento
dependente no somente das condies de armazenamento, mas tambm da composio
exata das formulaes estocadas.

6 NANOCPSULAS POLIMRICAS PARA APLICAO TPICA

Encapsulao de frmacos uma estratgia farmacutica para modificao das

propriedades fsico-qumicas da molcula encapsulada e oferece um meio de facilitar a
penetrao cutnea (ALVAREZ-ROMN et al., 2004a). Partculas coloidais maiores que 10
m permanecem sobre a superfcie da pele, entre 3 e 10 m concentram-se nos folculos
pilosos e menores que 3 m penetram nos folculos e no estrato crneo (BARRY, 2001).

O controle da liberao de frmacos em stios de ao especficos tem sido uma rea de

intensa pesquisa nos ltimos dez anos. Dentre os vetores estudados, incluem-se as
micropartculas e os sistemas coloidais (lipossomas e nanopartculas). As nanopartculas
tm atrado maior ateno dos pesquisadores em relao aos lipossomas, devido s suas
potencialidades teraputicas e maior estabilidade nos fluidos biolgicos e durante o
armazenamento (SCHAFFAZICK et al., 2003).

46
Embora nas ltimas dcadas, acreditava-se que a penetrao de substncias aplicadas
topicamente, atravs da barreira da pele (estrato crneo), acontecia pela difuso nas
camadas lipdicas, que circundam os cornecitos (LADEMANN et al., 2007), recentes
investigaes tm atribudo aos folculos pilosos significante funo na penetrao de
frmacos na pele (LADEMANN et al., 2001; TOLL et al., 2004).
Segundo Alvarez-Romn e colaboradores (2004b), NP tm sido propostas como veculos
tpicos, para acmulo, dependente do tamanho, nos folculos pilosos, mas penetrao
cutnea das NP, em reas no foliculares no foi observada. O encapsulamento do
metoxicinamato de octila em NP favoreceu a penetrao do ativo no estrato crneo quando
comparado com uma emulso do filtro solar. A elevada superfcie de contato de partculas
nanomtricas facilitou o contato da molcula encapsulada com o estrato crneo.
Micro e nanopartculas direcionaram a deposio de frmacos em camadas externas da
epiderme (ALVAREZ-ROMN et al. 2004b; JENNING et al., 2000), to bem como nos
folculos pilosos (SUMIAN et al. 1999; MORDON et al. 2003; ALVAREZ-ROMN et al.
2004a), sendo capazes de aumentar a atividade do frmaco e minimizar efeitos colaterais
provenientes da penetrao na pele. Os folculos pilosos parecem ser um eficiente
reservatrio para substncias aplicadas topicamente, especialmente partculas tm uma
importante funo na penetrao folicular (LADEMANN et al., 2007). Partculas de 100 nm
contendo dixido de titnio penetraram nos folculos pilosos, mas no passaram dos
folculos para a derme (LADEMANN et al., 1999). Partculas com dimetro de 750 nm
penetraram mais eficientemente nos folculos (TOLL et al., 2004). Lboutonne e
colaboradores (2004) estudaram em detalhe o transporte de NC para dentro da pele,
usando NC marcada com substncia fluorescente. Aps exposio de 8 horas, fluorescncia
foi distribuda principalmente nos folculos: a maior intensidade de fluorescncia nas
camadas mais profundas da pele confirmou o transporte de NC via folculos pilosos. Shim e
colaboradores (2004) mostraram que a distribuio de NC fluorescentes foi mais
concentrada ao longo dos folculos pilosos que em outro stio. Alvarez-Romn e
colaboradores (2004a) utilizaram Microscopia Confocal para visualizar a distribuio de NP
na pele. As imagens revelaram que as NP acumularam-se preferencialmente nas aberturas
foliculares. Lademann e colaboradores (2007) demonstraram a superioridade das NP versus
formulaes

no

particuladas,

no

somente

na

penetrao,

mas

tambm

no

armazenamento: as NP permanecem nos folculos mais tempo que substncias no

encapsuladas. Em princpio, o estrato crneo no adequado como um reservatrio
prolongado para substncias aplicadas topicamente, pois essas substncias so
principalmente localizadas na superfcie da pele ou em camadas superiores de clulas que

47
so arrastadas por descamao; conseqentemente, folculos pilosos so importantes alvos
para liberao de frmacos.
A parede polimrica das NC tem funo predominante na proteo de frmacos (RUBE et
al., 2005), no direcionamento de frmacos e como sistema de liberao controlada. A
incorporao de frmacos lipoflicos nas NC permite a modificao dos parmetros
farmacocinticos e de distribuio do frmaco, aumentando a biodisponibilidade e/ou
reduzindo a toxicidade (TEWA-TAGNE et al., 2007), a utilizao de baixo contedo
polimrico e a habilidade em proteger o frmaco de degradaes (MOSQUEIRA et al.,
2006).
Devido ao pequeno tamanho, NC podem penetrar atravs de barreiras (pele) permitindo
acmulo eficiente do frmaco no alvo. Por isso, a toxicidade e os efeitos colaterais do
frmaco so reduzidos e a eficcia do tratamento aumentada (YIH & AL-FANDI, 2006).
NC tem elevada taxa de encapsulao para frmacos lipoflicos, baixo contedo polimrico
e baixa toxicidade inerente quando comparada a lipossomas e nanoesferas (MOSQUEIRA
et al., 2006; ALVES et al., 2007). O AR um candidato a ser encapsulado em NC, uma vez
que ele altamente lipoflico (log P = 4,6)(ABDULMAJED & HEARD, 2004).
Assim, o desenvolvimento de nanocpsulas contendo cido retinico pode ser uma
alternativa interessante para tratamento tpico da acne, favorecendo a penetrao nos
folculos pilosos e reduzindo a permeao do frmaco na pele.

48

OBJETIVOS

49
OBJETIVOS

1 OBJETIVO GERAL

Desenvolver e caracterizar nanocpsulas contendo cido retinico, para o tratamento tpico

da Acne vulgaris, e avaliar o perfil de liberao in vitro e permeao cutnea in vitro desse
frmaco.

2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Desenvolver e caracterizar (Tamanho de partculas, Potencial Zeta, pH, Teor de

Encapsulao e Microscopia de Fora Atmica) nanocpsulas polimricas
contendo cido retinico;

Adequao de metodologia analtica para doseamento do cido retinico atravs

de Cromatografia a Lquido de Alta Eficincia (CLAE);

Avaliar o perfil de liberao in vitro do cido Retinico atravs de membranas

polimricas sintticas, a partir dos sistemas desenvolvidos;

Avaliar a permeao cutnea in vitro do cido retinico em pele de orelha de

porco, a partir dos sistemas desenvolvidos.

50

MATERIAIS E MTODOS

51

1 MATERIAIS
O cido retinico foi fornecido pela Basf (Alemanha). Os solventes grau CLAE, como
metanol e acetonitrila, foram adquiridos da Fischer Chemicals (EUA); cido ortofosfrico
85% (Synth, Brasil); triglicrides dos cidos cprico e caprlico (Lipoid MCT, Lipoid,
Alemanha); polmero poli--caprolactona, de Massa Molar 65000 Da (Sigma-Aldrich, EUA);
acetona (Quimex-Merck, Alemanha); monooleato de sorbitano (Span 80, Synth, Brasil,
EHL = 4,3); lcool cetlico 2 moles de xido de etileno (Brij 52, Sigma-Aldrich, EUA, EHL =
5,3); lcool cetlico 20 moles de xido de etileno (Brij 58, Sigma-Aldrich, EUA, EHL =
15,7); Polissorbato 80 ou Monooleato de sorbitano 20 moles de xido de etileno (Tween 80,
Synth, Brasil, EHL = 15,0); Copolmero de polioxietileno e polioxipropileno (Poloxamer
188, Basf, Alemanha, EHL = 29,0); lcool olico 20 moles de xido de etileno (Volpo 20,
Croda, Brasil, EHL = 15,3); Butilhidrxitolueno BHT (All Chemistry, Brasil); cido
etilenodiaminotetractico (EDTA) sal dissdico (Synth, Brasil); Etanol 95% (Synth, Brasil);
Etanol absoluto (Synth, Brasil); Propilenoglicol (Synth, Brasil); tampo fosfato salina pH
7,4.
Todos os solventes utilizados no preparo das nanocpsulas foram de grau analtico. Os
solventes utilizados no doseamento por Cromatografia a Lquido de Alta Eficincia (CLAE)
foram de grau CLAE e as demais substncias qumicas disponveis foram de grau reagente
e utilizadas sem purificao adicional. A gua foi purificada por uma seqncia de
deionizao (Deionizador Permution, Brasil) e destilao (Destilador Tecnal TE 178,
Brasil).

2 MTODOS

2.1 Construo da Curva Analtica para o doseamento do cido retinico

Para se avaliar o desempenho da curva construda, utilizou-se o parmetro analtico

denominado Linearidade. A linearidade da Curva Analtica corresponde capacidade do
mtodo em fornecer resultados diretamente proporcionais concentrao da substncia em
exame, dentro de uma determinada faixa de aplicao (RIBANI et al., 2004).
A correlao entre o sinal medido (rea sob o pico, para CLAE) e a concentrao da espcie
a ser quantificada muito raramente conhecida a priori. Na maior parte dos casos, a relao

52
matemtica deve ser determinada, empiricamente, a partir de sinais medidos para
concentraes conhecidas dessa espcie. Essa relao matemtica pode ser expressa
como uma equao de reta chamada de Curva Analtica. Embora somente dois pontos
definem uma reta, na prtica, as linhas devem ser definidas por, no mnimo, cinco pontos
que no incluam o ponto zero na curva, devido aos possveis erros associados (RIBANI et
al., 2004).

Matematicamente, a estimativa dos coeficientes de uma curva analtica, a partir de um

conjunto de medies experimentais, pode ser efetuada usando o mtodo matemtico
conhecido como regresso linear. Alm dos coeficientes de regresso a e b, tambm
possvel calcular, a partir de pontos experimentais, o coeficiente de correlao r. Este
parmetro permite uma estimativa da qualidade da curva obtida, pois quanto mais prximo
de 1,0, menor a disperso do conjunto de pontos experimentais e menor a incerteza dos
coeficientes de regresso estimados. Em qualquer tcnica instrumental, a relao linear
simples, descrita pela equao y = ax + b, s valida em um determinado intervalo de
concentrao da espcie medida. Esse intervalo, no qual se pode construir uma Curva
Analtica linear, a faixa linear dinmica (RIBANI et al., 2004).
Na construo da Curva Analtica, utilizada no doseamento do AR, foram utilizados
Cromatgrafo a Lquido de Alta Eficincia (Waters, Milford, EUA) composto por bomba
isocrtica (modelo 515; Waters), injetor automtico (modelo 717 plus; Waters), detector
Photo Diode Array DAD (modelo 2996; Waters), software Empower 2 (Waters), coluna
cromatogrfica (Lichrospher RP 18 5 m, 150 x 4 mm, Merck, Alemanha), balana
analtica (modelo BP 221S, Sartorius, Alemanha), ultra-som (modelo R-MTH 3210,
Damburcy, EUA), sistema para filtrao a vcuo (Millipore, Frana), membrana de
celulose regenerada (47 mm de dimetro e 0,45 m de porosidade, Sartorius, Alemanha),
dispositivo de filtrao (MINISART SRP 15, 13 mm de dimetro e 0,45 m de porosidade,
Sartorius, Alemanha), pipeta automtica 200 L (Gilson, Frana).

O mtodo de anlise utilizado para a construo da Curva Analtica foi extrado do trabalho
de Jenning e colaboradores (2000) e Manconi e colaboradores (2006) no qual eles definem
as condies cromatogrficas, conforme estabelecido no item abaixo.

53
2.1.1

Condies cromatogrficas

As condies cromatogrficas definidas abaixo foram utilizadas no mtodo para

determinao da concentrao do cido retinico nas formulaes estudadas.
Fase mvel:

Acetonitrila : gua (80 : 20) + 0,1% v/v de cido fosfrico 85%

Fluxo:

1,0 mL/min

Volume de injeo:

20 L

Deteco:

340 nm

Temperatura:

25oC

2.1.2

Preparo da fase mvel

A fase mvel foi preparada misturando-se acetonitrila grau CLAE e gua recentemente
destilada na proporo indicada de 80 partes para 20 partes, respectivamente. Em seguida,
adicionou-se 0,1% v/v de cido fosfrico 85% e homogeneizou-se. A fase mvel preparada
foi filtrada em membrana de celulose regenerada de 0,45 m e desgaseificada durante 20
minutos em banho de ultra-som.

2.1.3

Linearidade da Curva Analtica

Para obteno da Curva Analtica, pesou-se, exatamente, 20,0 mg de cido retinico (Basf;
Alemanha) e transferiu-se quantitativamente para um balo volumtrico de 50 mL. O
frmaco foi solubilizado em acetona e o volume do balo foi completado com o mesmo
solvente. A soluo foi homogeneizada, obtendo-se uma concentrao final de 400 g/mL
de cido retinico (SOLUO ESTOQUE).

Foram preparadas solues padres com as seguintes concentraes: 0,5 g/mL, 1 g/mL,
2 g/mL, 4 g/mL, 8 g/mL e 16 g/mL. Cada diluio foi realizada em triplicata.

Para o preparo da soluo padro de concentrao 0,5 g/mL, foi transferida alquota de
5,0 mL da soluo padro de concentrao 1 g/mL para um balo volumtrico de 10 mL.
Completou-se o volume do balo com fase mvel e homogeneizou-se.

54
Para o preparo da soluo padro de concentrao 1 g/mL, foi transferida alquota de 25,0
mL da soluo padro de concentrao 4 g/mL para um balo volumtrico de 100 mL.
Completou-se o volume do balo com fase mvel e homogeneizou-se.

Para o preparo da soluo padro de concentrao 2 g/mL, foi transferida alquota de 5,0
mL da soluo padro de concentrao 4 g/mL para um balo volumtrico de 10 mL.
Completou-se o volume do balo com fase mvel e homogeneizou-se.

Para o preparo da soluo padro de concentrao 4 g/mL, foi transferida alquota de 1,0
mL da soluo estoque para um balo volumtrico de 100 mL. Completou-se o volume do
balo com fase mvel e homogeneizou-se.

Para o preparo da soluo padro de concentrao 8 g/mL, foi transferida alquota de 1,0
mL da soluo estoque para um balo volumtrico de 50 mL. Completou-se o volume do
balo com fase mvel e homogeneizou-se.

Para o preparo da soluo padro de concentrao 16 g/mL, foi transferida alquota de 1,0
mL da soluo estoque para um balo volumtrico de 25 mL. Completou-se o volume do
balo com fase mvel e homogeneizou-se.
Aps estabilizao da coluna, nas condies do ensaio, as solues padres diludas foram
injetadas no cromatgrafo, em triplicata. As mdias das reas absolutas dos picos
correspondentes a cada concentrao do padro foram plotadas em grfico de rea versus
Concentrao. A equao da reta, para a representao grfica da Curva Analtica, foi
determinada atravs do estudo da regresso linear, pelo mtodo dos mnimos quadrados. A
linearidade da Curva Analtica foi avaliada pela varincia em torno da inclinao da linha de
regresso, por meio do coeficiente de determinao (r2). A faixa de variao corresponde ao
intervalo entre a concentrao inferior e a superior da substncia analisada que atenda aos
requisitos de linearidade. Neste caso, o intervalo linear de concentrao foi de 0,5 a 16
g/mL.

2.2 Preparao das nanocpsulas polimricas

No preparo das nanocpsulas polimricas foram utilizados os seguintes equipamentos:

banho-maria (modelo E-100, Lauda, Alemanha); agitador magntico (modelo HTR 8068,

55
Ika, Alemanha); rotavapor (modelo 802, Fisatom, Brasil); deionizador (Permution, Brasil);
destilador (modelo TE 178, Tecnal, Brasil).

2.2.1 Preparao das nanocpsulas brancas

A preparao das nanocpsulas (NC) foi realizada pelo mtodo de deposio interfacial do
polmero pr-formado, seguido do deslocamento do solvente, mtodo tambm conhecido
como nanoprecipitao, descrito anteriormente por Fessi e colaboradores (1989).
Nanocpsulas brancas (sem o frmaco) foram preparadas com tensoativos hidroflicos e
tambm com mistura de tensoativos lipoflicos e hidroflicos. Os Poloxamers so
tensoativos no-inicos (copolmero de polioxietileno e polioxipropileno) com estrutura geral:
HO(C2H4O)a(C3H6O)b(C2H4O)aH. O segmento polioxietileno hidroflico, enquanto o
segmento polioxipropileno lipoflico (EHL = 29,0). O Span 80, o monooleato de sorbitano,
um tensoativo no-inico que apresenta frmula mnima C24H44O5 e carter lipoflico (EHL
= 4,3). Os polissorbatos (steres de cidos graxos de sorbitano polioxietileno) contendo 20
unidades de xido de etileno so tensoativos no inicos hidroflicos. O Polissorbato 80
(Tween 80; EHL = 15,0) o monooleato de sorbitano 20 moles de xido de etileno. Os
teres alquil polioxietileno so tensoativos no-inicos e apresentam a frmula estrutural:
CH3(CH2)x(OCH2CH2)yOH, onde (x + 1) o nmero de tomos de carbono na cadeia alquila
(16: cetil) e y o nmero de grupos xidos de etileno na cadeia hidroflica. O lcool cetlico
2 moles de xido de etileno e o lcool cetlico 20 moles de xido de etileno fazem parte
dessa classe de tensoativos, sendo que o primeiro tensoativo lipoflico (EHL = 5,3) e o
segundo hidroflico (EHL = 15,7) (WADE & WELLER, 2000).
O LIPOID MCT, triglicerdeo de cadeia mdia dos cidos cprico (C8) e caprlico (C10), foi
utilizado como fase oleosa (ncleo interno) das nanocpsulas. Ele solvel em acetona.
Triglicrides de cadeia mdia apresentam um grande nmero de vantagens em formulaes
farmacuticas: melhor propriedade de espalhamento sobre a pele; propriedades de
penetrao, cosmticas e emolientes aceitveis; formao de um filme invisvel sobre a
pele; compatibilidade adequada; boas propriedades de solvncia e estabilidade contra
oxidao (WADE & WELLER, 2000).

A fase orgnica da preparao foi assim composta: solvente orgnico acetona, polmero
poli--caprolactona (MM 65000 Da), triglicrides dos cidos cprico e caprlico (LIPOID
MCT) e tensoativo lipoflico, quando for o caso (Tabela 2). Inicialmente, o polmero poli--

56
caprolactona foi pesado em um bquer, ao qual foram adicionados 25 mL de acetona. Esta
fase foi aquecida a 60oC, em banho-maria, at completa solubilizao do polmero. Em
seguida, foi pesado o Lipoid MCT e o tensoativo lipoflico, dependendo da formulao da
nanocpsula. Esses componentes foram homogeneizados na fase acetnica utilizando-se
basto de vidro.
A fase aquosa apresentou a seguinte composio: tensoativo hidroflico e gua. Em um
bquer, foi pesado o tensoativo hidroflico, ao qual foram adicionados 50 mL de gua
destilada. A fase aquosa foi submetida agitao magntica moderada. Esta agitao foi
mantida at completa solubilizao do tensoativo temperatura ambiente.
As fases orgnica e aquosa foram aquecidas, separadamente, em banho-maria a 45oC. A
mistura orgnica resultante foi adicionada fase aquosa, sob agitao magntica moderada
(Figura 9). Imediatamente a soluo se tornou turva e leitosa, como resultado da formao
da suspenso de nanocpsulas. A mistura das fases foi feita a 45oC, em banho-maria. A
suspenso de nanocpsulas foi mantida sob agitao magntica moderada durante 10
minutos. Em seguida, a suspenso foi concentrada em rotavapor a um volume final de 10
mL, sob presso reduzida a 40 - 45oC, a fim de se remover todo o solvente orgnico e
grande parte da fase aquosa. A suspenso de nanocpsulas brancas foi acondicionada em
frasco de vidro mbar, envolto em papel alumnio e conservada temperatura de 25 1oC.

Figura 9: Mtodo usual, empregado na preparao de nanopartculas polimricas, baseado

na precipitao de polmeros pr-formados
Fonte: SCHAFFAZICK e colaboradores (2003)

57
Tabela 2: Composio (%, p/va) das formulaes das nanocpsulas polimricas
Componentes

NC 1

NC 2

NC 3

NC 4

NC 5

Poli--caprolactona (65000 Da)

1,25

1,25

1,25

1,25

1,25

0,5

0,5

Poloxamer 188

Polissorbato 80

4,5

lcool cetlico 20 moles OEb

4,5

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

LIPOID MCT
Span 80
b

lcool cetlico 2 moles OE

gua destilada
a

Ttulo (porcentagem) peso/volume

OE = xido de etileno

2.2.2 Preparao das nanocpsulas contendo cido retinico a 0,1% p/v

Nanocpsulas contendo AR a 0,1% p/v foram preparadas, conforme descrito anteriormente,

com adio do frmaco fase oleosa, sob a forma de soluo acetnica concentrada.
Adicionaram-se 10 mL de uma soluo acetnica de AR a 1 mg/mL na fase orgnica,
previamente mistura de fases. Sendo assim, o volume restante de acetona adicionado foi
de 15 mL, mantendo-se os 25 mL da fase orgnica (proporo do volume da fase
orgnica/fase aquosa: 0,5).
A suspenso de nanocpsulas contendo cido retinico foi acondicionada em frasco de
vidro mbar, envolto em papel alumnio, sob atmosfera de nitrognio, e conservada
temperatura de 25 1oC.

2.2.3

Preparao das nanocpsulas contendo cido retinico a 0,1% p/v e

antioxidantes a 0,01% p/v

Nanocpsulas contendo AR a 0,1% p/v e antioxidantes a 0,01% p/v foram preparadas

conforme descrito anteriormente. O antioxidante butilhidrxitolueno (BHT) a 0,01% p/v foi
adicionado fase oleosa, e o antioxidante EDTA dissdico a 0,01% p/v foi adicionado fase
aquosa. A suspenso de nanocpsulas contendo cido retinico e antioxidantes foi
acondicionada em frasco de vidro mbar, envolto em papel alumnio, sob atmosfera de
nitrognio, e conservada temperatura de 25 1oC.

58
2.3 Caracterizao fsico-qumica das nanocpsulas polimricas

2.3.1

Distribuio do Tamanho e Potencial Zeta

A anlise do tamanho das partculas, o ndice de polidisperso das amostras e o potencial

zeta foram determinados por espectroscopia de correlao de ftons e mobilidade
eletrofortica, respectivamente, utilizando um equipamento Zetasizer 3000 HS (Malvern
Instruments, UK).
Para

realizao

das

medidas

do

tamanho

das

partculas

foram

utilizados,

aproximadamente, 10 L das disperses de nanocpsulas, os quais foram diludos em 4990

L de gua recm destilada e filtrada em filtro (0,45 m). As medidas foram efetuadas
temperatura ambiente, utilizando-se um ngulo de incidncia do laser em relao amostra
de 90o. Os valores obtidos correspondem mdia desvio padro de dez medidas de cada
formulao de nanocpsulas. O ndice de polidisperso, calculado pelo equipamento, reflete
o perfil de homogeneidade no dimetro das partculas da amostra. Amostras que
apresentaram ndice de polidisperso inferior a 0,5 foram consideradas satisfatrias.

Para a realizao do Potencial Zeta, 10 L da suspenso coloidal de nanocpsulas foram

diludos em 4990 L de uma soluo de cloreto de sdio 1 mM, previamente filtrado em filtro
(0,45 m), com o objetivo de se obter suspenses com condutividades constantes. As
medidas foram efetuadas temperatura ambiente, utilizando-se um ngulo de incidncia do
laser em relao amostra de 90o. Todas as determinaes foram realizadas em triplicata e
os resultados apresentados foram expressos como a mdia desvio padro.

2.3.2

Teor de Encapsulao

O Teor de Encapsulao do AR na NC foi calculado pela diferena entre a quantidade total

de frmaco presente na suspenso coloidal (AR

total NC)

e o AR livre na fase aquosa externa,

seja sob a forma de precipitado (AR precipitado no-encapsulado) ou solvel (AR solvel no-encapsulado).
O Teor de encapsulao foi calculado atravs do balano de massas, segundo Lboutounne
e colaboradores (2002) e Zili e colaboradores (2005):

59
TE (%) = [AR total NC (AR precipitado no-encapsulado + AR ultrafiltrado (solvel no encapsulado))] x 100
AR total

NC

Determinao da concentrao de AR total na suspenso de NC (AR total NC)

Inicialmente, foram pipetados 200 L (Pipeta automtica 200 L, Gilson, Frana) da

suspenso de nanocpsulas contendo AR e transferidos para um balo volumtrico de 50
mL. Acetonitrila grau CLAE foi adicionada para dissolver as nanocpsulas polimricas e o
volume foi completado com o mesmo solvente. A soluo foi homogeneizada e uma alquota
de 5,0 mL foi pipetada e transferida para um balo volumtrico de 10 mL. O volume foi
completado com Fase Mvel e a soluo foi homogeneizada. As amostras obtidas foram
filtradas em filtro seringa (0,45 m) e injetadas no cromatgrafo. Este procedimento foi
realizado em triplicata. Para verificar se os componentes da formulao interfeririam na
avaliao cromatogrfica (seletividade do mtodo), o mesmo procedimento descrito neste
item foi realizado para as nanocpsulas brancas.

Determinao da concentrao de AR precipitado no-encapsulado

A determinao da concentrao de AR precipitado no-encapsulado corresponde

diferena entre o AR total e o AR no filtrado (nanocpsulas filtradas em membrana de 1,2
m). Retido neste filtro estaro possveis cristais de AR precipitado, presentes no meio
aquoso externo.
AR precipitado no-encapsulado = [AR total NC AR filtrado]
Um volume correspondente a 5 mL da suspenso de nanocpsulas foi filtrado em
membrana de ster de celulose, com porosidade de 1,2 m, atravs de um sistema de
filtrao de seringa, e o filtrado foi dosado. O doseamento do AR no filtrado foi realizado
conforme descrito acima para o doseamento do AR total na suspenso de nanocpsulas.

Determinao da concentrao de AR no ultrafiltrado (AR solvel no-encapsulado)

A determinao da concentrao de AR no ultrafiltrado (membrana MICROCON, MWCO

10.000 Da, Millipore, Frana) corresponde ao AR livre solvel no meio externo aquoso. O
filtrado obtido na fase anterior foi submetido ao processo de ultrafiltrao. No interior do
ultrafiltro foram adicionados 400 L do filtrado e foram centrifugados (Centrfuga Excelsa

60
Baby II modelo 206-R, Fanem, Brasil) por 15 minutos a 14.000 g. O ultrafiltrado foi injetado
diretamente no cromatgrafo, aps filtrao em filtro seringa de 0,45 m.

A metodologia para determinao da concentrao do AR total e livre (solvel e precipitado)

est esquematizada na Figura 10.
Seringa contendo suspenso
de nanocpsulas com AR

Filtro seringa com membrana de 1,2 m

Ultrafiltro
Nanocpsulas retidas
Filtrado
Alquota (400 L do
filtrado)
adicionada ao ultrafiltro e
centrifugada

Ultrafiltrado

Figura 10: Representao esquemtica da metodologia para determinao da concentrao

de cido retinico total, livre solvel e livre precipitado

2.3.3

Morfologia externa das nanocpsulas polimricas

A anlise morfolgica das nanocpsulas foi realizada por Microscopia de Fora Atmica
(MFA), com varredura por sonda mecnica. Para a realizao dessa anlise, foram
utilizados os equipamentos Multimode e Dimension 3000, ambos monitorados por
controlador Nanoscope IIIa (Digital Instruments, EUA) da Fundao Centro Tecnolgico de
Minas Gerais (CETEC-MG).
As imagens foram obtidas no modo de contato intermitente (tapping mode) utilizando sondas
de silcio de comprimento de 228 m, com uma freqncia de ressonncia de 75-98 kHz,
fora constante de 29-61 N/m e raio de curvatura de 5 a 10 nm.

Aproximadamente 5 L da suspenso de nanocpsulas 3 (brancas e contendo AR), aps

serem diludas 1:100 com gua destilada (apenas para NC 3 contendo AR), foram
depositados em placas de mica clivadas no momento do uso. A mica foi utilizada como
suporte para as amostras, uma vez que se trata de um mineral com plano basal e de fcil

61
clivagem, apresentando superfcie atomicamente plana. A superfcie exposta hidroflica e
apresenta cargas negativas. Aps a deposio das amostras na superfcie da mica, essas
foram, imediatamente, secas utilizando-se jato de argnio. A varredura foi efetuada com
velocidade de 1 Hz e resoluo de 512 x 512 pixels. A anlise das amostras foi realizada
utilizando o programa de anlise do sistema (Section Analysis).

2.4 Estudo de Estabilidade das nanocpsulas polimricas

Foram realizados estudos de estabilidade das NC polimricas brancas. As NC foram

acondicionadas em frascos de vidro incolor, envoltos em papel alumnio, armazenados
temperatura ambiente de 25 1oC e protegidos da luz. Foram avaliadas suas caractersticas
fsico-qumicas, como Tamanho, ndice de Polidisperso, Potencial Zeta e pH nos tempos
inicial, 15 e 45 dias aps o preparo das NC.
As NC 3 (Polissorbato 80) contendo AR sem antioxidante e as NC 5 (lcool cetlico 20
moles de xido de etileno) contendo AR e antioxidantes foram acondicionadas em frascos
de vidro incolor envoltos em papel alumnio e armazenadas temperatura ambiente de 25
1oC, protegidos da luz, sob atmosfera de nitrognio. Nos tempo inicial, aps 15 e 30 dias do
preparo foi determinada a concentrao do AR total na suspenso de NC.

2.5 Estudos de liberao in vitro

Os estudos de liberao in vitro visam avaliar a liberao do frmaco a partir dos sistemas
desenvolvidos.
2.5.1 Estudo da solubilidade do AR no Lquido Receptor

Os estudos de liberao devem ser conduzidos em condies sink. Assim sendo, a

solubilidade do AR no lquido receptor, o qual composto por tampo fosfato salina pH 7,4
(89):lcool olico 20 moles de xido de etileno (1):etanol 95% (10), foi previamente avaliada.
A amostra para determinao da solubilidade foi preparada adicionando-se uma quantidade
em excesso do AR a um volume definido do lquido receptor (5 mL). Essa suspenso foi
mantida sob agitao (agitador magntico Ceramag Midi, Ika, Alemanha) durante 24 horas,
temperatura de 37 1oC. Aps esse perodo, a suspenso foi centrifugada (Centrfuga

62
Excelsa Baby II, modelo 206-R; Fanem, Brasil) a 2800 rpm por 10 minutos. Alquota do
sobrenadante foi filtrada (0,45 m) e diluda com fase mvel para uma faixa de concentrao
linear. A concentrao do AR solvel no Lquido receptor foi determinada por CLAE e
calculada atravs da Curva Analtica. Este procedimento foi realizado em triplicata.

2.5.2

Obteno das formulaes

O estudo do perfil de liberao in vitro foi realizado para uma soluo alcolica de AR
(Etanol absoluto : Propilenoglicol 1:1), nanocpsula 3 e nanoemulso, todas contendo AR a
0,1% p/v. A nanoemulso (contendo os mesmos componentes da NC 3, inclusive o sistema
antioxidante) foi preparada conforme Nanocpsula 3 (mtodo da nanoprecipitao),
omitindo-se o polmero. A mistura de fases se deu a 70 1oC. Foi obtida nanoemulso com
tamanho de partcula de 288 35 nm (n = 3).

2.5.3

Perfil de liberao in vitro

Os estudos de liberao in vitro do cido retinico foram realizados em clulas de difuso de

Franz (Figura 11), constituda por um compartimento doador e um receptor, com volume de
10,0 cm3 e rea de superfcie da membrana de 3,14 cm2 (PermeGear, EUA).

Figura 11: Representao esquemtica da Clula de difuso de Franz

63
Este estudo foi conduzido com membranas de Teflon (dimetro de poro de 0,45 m) e
membranas de Nylon (dimetro de poro de 0,22 m), ambas da Millipore (Frana). Estas
membranas so constitudas de politetrafluoroetileno (PTFE), no entanto, no caso da
membrana de Nylon, o PTFE est ligado ao polietileno de alta densidade, conferindo-lhe
hidrofobicidade.
A membrana foi hidratada durante 30 minutos com o lquido receptor antes de ser montada
na clula. A membrana foi colocada horizontalmente, dividindo a clula em dois
compartimentos: o doador e o receptor. Condies sink no compartimento receptor foram
obtidas com uma soluo contendo Tampo fosfato salina pH 7,4 (89), lcool olico 20
moles de xido de etileno (1) e etanol 95% (10). O fluido receptor foi mantido a 37 0,5oC e
agitado continuamente com uma barra magntica, visando assegurar sua homogeneidade.
Os experimentos foram conduzidos em dose finita, que imita as condies normais de
aplicao. Nestes experimentos, o compartimento doador foi mantido aberto, permitindo a
evaporao da fase aquosa voltil das preparaes. As clulas de difuso foram revestidas
com papel alumnio para prevenir a fotodegradao do AR. Amostras de 100 L das
preparaes foram aplicadas sobre as membranas. Estes experimentos foram realizados
em triplicata para cada formulao testada.
As amostras foram coletadas em intervalos de tempo pr-determinados (1, 2, 3, 4 e 5
horas), atravs da remoo total do fluido receptor e preenchimento com nova soluo. As
amostras foram filtradas em filtro seringa de 0,45 m e injetadas no cromatgrafo. A
concentrao do AR no fluido receptor foi determinada atravs da Curva Analtica. O lquido
receptor (branco) foi injetado no cromatgrafo, para se verificar a seletividade do mtodo.
Foi realizada a determinao do tamanho das possveis partculas presentes no lquido
receptor, coletado a partir da clula na qual foi aplicada a nanocpsula, aps 1 hora de
experimento. Este procedimento foi realizado a fim de se garantir que nenhuma partcula
intacta seria capaz de ultrapassar a barreira constituda pela membrana sinttica,
interferindo no resultado do estudo de liberao da formulao proposta. O resultado obtido
comprovou que nenhuma partcula intacta permeou a membrana.
A comparao entre as mdias dos valores dos estudos de liberao in vitro foi realizada
pela anlise de varincia (ANOVA). As diferenas foram consideradas estatisticamente
significativas ao nvel de p < 0,05.

64
2.6 Permeao cutnea in vitro

Os estudos de permeao cutnea in vitro do AR atravs da pele de orelha de porco foram

realizados em clulas de difuso de Franz conforme descrito anteriormente. Procedeu-se da
seguinte maneira para o preparo da pele: aps a retirada das orelhas dos animais elas
foram submetidas limpeza sob gua corrente. As orelhas foram secas com papel toalha e
a regio externa das orelhas foi depilada com auxlio de um depilador eltrico.
Posteriormente, a pele foi removida cuidadosamente da cartilagem, utilizando-se bisturi. Em
seguida, o tecido adiposo subcutneo foi retirado com auxlio de pina e bisturi, as peles
foram inspecionadas visualmente para deteco de possveis danos e montadas
imediatamente nas clulas de Franz ou acondicionadas em sacos plsticos e estocadas a 15oC at o dia do experimento, por um perodo mximo de 4 semanas. Duas horas antes de
serem montadas nas clulas de difuso foram mantidas temperatura ambiente.

2.6.1 Estudo da solubilidade do AR no Lquido Receptor

A solubilidade do AR foi determinada no lquido receptor, o qual composto por tampo

fosfato salina pH 7,4 (86) : lcool olico 20 moles de xido de etileno (4) : etanol 95% (10). A
amostra para determinao da solubilidade foi preparada adicionando-se uma quantidade
em excesso do AR a um volume definido do lquido receptor (5 mL). Essa suspenso foi
mantida sob agitao (Agitador magntico Ceramag Midi, Ika, Alemanha) durante 24 horas,
temperatura de 37 1oC. Aps esse perodo, a suspenso foi centrifugada (Centrfuga
Excelsa Baby II, modelo 206-R; Fanem, Brasil) a 2800 rpm por 10 minutos. Alquota do
sobrenadante foi filtrada (0,45 m) e diluda com fase mvel para uma faixa de concentrao
linear. A concentrao do AR solvel no Lquido Receptor foi determinada por CLAE e
calculada atravs da Curva Analtica. Este procedimento foi realizado em triplicata.

2.6.2

Montagem das clulas

A pele foi colocada horizontalmente na clula de Franz, dividindo-a em dois

compartimentos: o doador, no qual a formulao aplicada, e o receptor. O compartimento
receptor foi preenchido com o Lquido receptor e, durante o experimento, este foi agitado
continuamente com uma barra magntica, visando assegurar a sua homogeneidade, sendo
mantido a 37 0,5oC.

65
2.6.3

Aplicao das formulaes

Os fragmentos de pele foram montados nas clulas de Franz, permanecendo em contato

com o tampo fosfato salina pH 7,4 por 1 hora antes da aplicao das formulaes, com o
objetivo de hidratar a pele. Aps 1 hora, o tampo foi retirado completamente e substitudo
por Lquido Receptor. Amostras de 200 L (Pipetador automtico 200 L, Gilson, Frana)
das formulaes de AR foram aplicadas sobre as peles. Os experimentos foram conduzidos
em dose finita e o compartimento doador foi mantido aberto, permitindo a evaporao da
fase aquosa voltil das formulaes, simulando as condies normais de uso.

2.6.4

Determinao da difuso

Ao final de 8 horas, amostras foram coletadas atravs da remoo total do fluido receptor,
filtradas (0,45 m) e injetadas no cromatgrafo. O lquido receptor (branco) foi injetado no
cromatgrafo, a fim de se verificar a seletividade do mtodo. A quantidade de AR que no
penetrou na pele foi removida com 0,5 mL de lquido receptor, seguido da aplicao de 0,5
mL de gua destilada. Este procedimento foi realizado em duplicata. O chapu da clula de
Franz foi retirado e a superfcie da pele foi lavada com um cotonete umedecido em lquido
receptor e o resduo foi removido com um cotonete seco.
Em seguida, o fragmento de pele foi retirado da clula de Franz e o estrato crneo foi
removido aps 10 strippings. As fitas foram colocadas em um bquer contendo fase mvel e
levadas ao ultra-som por 20 minutos. O lquido extrator foi recolhido em balo volumtrico. A
soluo foi filtrada (0,45 m) e injetada no cromatgrafo para determinao da concentrao
de AR que penetrou no estrato crneo.
O fragmento de pele sem estrato crneo foi cortado com um bisturi na poro externa ao
dimetro do chapu e colocado em um frasco de vidro incolor, envolto em papel alumnio,
ao qual foram adicionados 2 mL de metanol grau CLAE. O frasco foi vortexado (Termolyne,
tipo 37600, Dubuque, EUA) durante 5 minutos e, em seguida, mantido em repouso por 1
hora. Aps este perodo, ele foi submetido a vrtex por mais 5 minutos, levado ao ultra-som
por 2 minutos e mantido em repouso por 1 hora. Ao final deste tempo, o frasco foi agitado
em vrtex por 5 minutos e a amostra foi filtrada (0,45 m) e injetada no cromatgrafo para
determinao da concentrao do AR que penetrou na pele (epiderme + derme). No
doseamento do branco, o lquido extrator no apresentou nenhum pico de absoro no

66
mesmo tempo de reteno do AR, confirmando que os retinides endgenos no se
encontravam em concentrao suficiente para interferir no resultado do experimento.
Experimentos de permeao, utilizando-se pele dermatomada (Dermatmetro 50 mm,
NOUVAG AG TCM 3000, Sua) foram tambm conduzidos (pele com espessura mdia de
500 m).

2.6.5

Validao da remoo do AR no absorvido

O AR no absorvido, que permaneceu na superfcie da pele, no penetrando no tecido

cutneo, foi determinado. A validao consistiu na aplicao de 100 L de nanoemulso
contendo AR a 0,1% p/v sobre a pele de orelha de porco, montada na clula de Franz. Aps
secagem total da formulao com formao de resduo (aproximadamente 2 horas), a
preparao foi removida da superfcie da pele utilizando-se 0,5 mL de lquido receptor,
seguido da aplicao de 0,5 mL de gua destilada. Este procedimento foi realizado em
duplicata. O chapu da clula de Franz foi retirado e a superfcie da pele foi lavada com um
cotonete umedecido em lquido receptor e, em seguida, o resduo foi removido com um
cotonete seco. O lquido de lavagem da pele, o chapu e os cotonetes foram colocados em
um frasco hermeticamente fechado contendo 50 mL de metanol grau CLAE. Aps um
perodo de contato de 1 hora temperatura ambiente e agitao em um vrtex (Termolyne,
tipo 37600, Dubuque, EUA) por 10 minutos, o lquido extrator foi homogeneizado em ultrasom por 2 minutos. Em seguida, a concentrao do AR neste lquido extrator foi
determinada atravs de CLAE. A concentrao do AR na nanoemulso foi tambm avaliada.

2.6.6

Validao da extrao do AR retido na fita stripping

A fita utilizada no stripping (Fita adesiva Scotch 845 Book Tape) foi cortada no dimetro do
chapu ( interno de 20 mm) e foi retirado o estrato crneo de voluntrio in vivo. 10 fitas
foram colocadas sobre um suporte e foram adicionados 5 L de uma soluo acetnica de
AR a 1 mg/mL. Aps secagem da soluo, foi adicionada uma fita em um bquer mbar
envolto em papel alumnio contendo 10 mL de fase mvel. O bquer foi mantido em banho
de ultra-som por 2 minutos. Em seguida, foi adicionada mais uma fita e repetido o processo
de ultra-som. Este procedimento foi realizado at a 5a fita. O lquido extrator foi vertido em
um balo volumtrico de 50 mL e foram adicionados mais 10 mL de fase mvel sobre as

67
cinco fitas. Manteve-se o bquer por mais 2 minutos no banho de ultra-som. O lquido
extrator foi vertido no mesmo balo volumtrico de 50 mL. As cinco primeiras fitas foram
retiradas do bquer e descartadas. A 6a fita foi colocada no bquer contendo 10 mL de fase
mvel. O mesmo procedimento descrito para as cinco primeiras fitas foi repetido. O volume
do balo volumtrico foi completado com fase mvel e a soluo foi filtrada em filtro seringa
de 0,45 m e injetada no cromatgrafo. A concentrao de AR presente na soluo
extratora foi calculada atravs da Curva Analtica. A soluo acetnica de AR foi dosada a
fim de se estabelecer a concentrao de AR como 100%.

2.6.7

Validao da extrao do AR retido na pele

A pele foi submetida retirada do estrato crneo com 10 strippings. Em seguida, foi
montada na clula de Franz contendo lquido receptor. Foram aplicados 20 L de soluo
acetnica de AR a 1 mg/mL. O lquido receptor foi mantido sob agitao por 1 hora.
Posteriormente, a pele foi retirada da clula de Franz e o fragmento de pele foi cortado com
um bisturi ao redor do dimetro externo do chapu. O fragmento foi colocado em um frasco
de vidro incolor, envolto em papel alumnio, ao qual foram adicionados 10 mL de metanol
grau CLAE. O frasco foi submetido a vrtex (Termolyne, tipo 37600, Dubuque, EUA)
durante 5 minutos e mantido em repouso por 1 hora. Aps este perodo, ele foi submetido a
vrtex por mais 5 minutos, levado ao ultra-som por 2 minutos e novamente submetido a
vrtex por 5 minutos. A amostra foi filtrada (0,45 m) e injetada no cromatgrafo. A
concentrao de AR presente na soluo extratora foi calculada atravs da Curva Analtica.
Foi realizado o mesmo experimento de validao para o branco, no qual foram adicionados
sobre a pele 20 L de acetona, a fim de se verificar possveis interferentes decorrentes da
presena de retinides endgenos na pele.
A comparao entre as mdias dos valores dos experimentos de permeao cutnea foi
realizada pela anlise de varincia (ANOVA). As diferenas foram consideradas
estatisticamente significativas ao nvel de p < 0,05.

68

RESULTADOS E DISCUSSO

69

RESULTADOS E DISCUSSO

LINEARIDADE DA CURVA ANALTICA

A Figura 12 apresenta a Curva Analtica obtida para o cido retinico (AR), com a respectiva
equao da reta e o coeficiente de determinao (r2).

Linear Regression for Data1_B:

Y =A +B*X
--------------------------------Param Value sd
--------------------------------A -28452.34826 7302.51441
B 150730.85999 968.30398
--------------------------------R = 0.99992
SD = 12841.44136, N = 6
P = 1.0216E-8

2500

Area sob o pico (x 1000)

2000

1500

Solucao AR

1000

500

0
0

10

15

Concentracao AR (mcg/mL)

Figura 12: Representao grfica da Curva Analtica do cido retinico, obtida por CLAE
Pode-se observar, pela curva construda e pela anlise de regresso, a relao linear entre
as reas sob os picos e as concentraes de AR, no intervalo proposto de 0,5 a 16 g/mL.
Atravs do mtodo dos mnimos quadrados, foi possvel determinar a equao
representativa da linearidade (y = 150730,9 x 28452,4) e pelo estudo da regresso linear,
o coeficiente de correlao (r = 0,99992). O coeficiente de determinao (r2) obtido foi
0,99984, indicando que 99,98% da variao no eixo de y explicada pela variao no eixo
de x, e, conseqentemente, h uma boa correlao ou linearidade na curva dentro da faixa
de concentrao proposta.

70
A Tabela 3 apresenta a mdia dos valores das reas absolutas, o desvio padro das mdias
(mdia DP) e os fatores de resposta (rea/Concentrao) obtidos para cada ponto da
curva. Esses dados foram utilizados para a construo da Curva Analtica e para os clculos
do coeficiente de variao (desvio padro relativo) e do fator de resposta. Nota-se que a
menor concentrao da curva apresentou maior Coeficiente de Variao, fato normal para
concentraes muito baixas.
Tabela 3: Resultados estatsticos obtidos para as solues padres de AR em fase mvel,
para as diferentes concentraes utilizadas na construo da Curva Analtica
Concentrao
(
g/mL)
0,5

Mdia das reas DPa

Fator de Resposta

CVb (%)

53504 1619

107008

3,02

117353 73

117353

0,06

261620 1009

130810

0,39

572146 1785

143037

0,31

1197279 15833

149660

1,32

16

2375406 19340

148463

0,81

Desvio Padro

Coeficiente de Variao

2 PREPARAO DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS

Nanocpsulas brancas e contendo AR foram preparadas pelo mtodo de deposio

interfacial do polmero pr-formado, seguido da evaporao do solvente (FESSI et al.,
1989), um mtodo simples e rpido para obter NC adequadas liberao tpica. Durante o
preparo das formulaes foi utilizado papel alumnio para evitar fotodegradao do AR.
Todas as formulaes de nanocpsulas brancas foram obtidas como suspenses coloidais e
apresentaram aspecto leitoso caracterstico das nanocpsulas; as nanocpsulas contendo
AR tambm foram obtidas como suspenses coloidais, mas apresentaram colorao
levemente amarelada, devido presena de AR na formulao.

3 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS

Embora vrios sistemas coloidais, tais como nanoemulses, lipossomas e nanoesferas

possam ser utilizados como carreadores para o AR, as nanocpsulas foram utilizadas no

71
presente trabalho, com o objetivo de obter alta taxa de encapsulao e proteo do frmaco.
As nanocpsulas so os vetores de escolha para frmacos solveis na fase oleosa interna e
altamente lipoflicos, caracterstica marcante do AR. As NC so tambm interessantes
carreadores em funo de sua biodegradabilidade, da estabilidade em meio biolgico e da
baixa toxicidade dos polmeros, como a poli--caprolactona, utilizada neste estudo. A
escolha de um determinado carreador, bem como dos constituintes de uma formulao,
deve ser bastante criteriosa, pois a reteno de um frmaco na NC amplamente
determinada por sua lipofilicidade e sua capacidade de se difundir entre o sistema e o meio
biolgico.

3.1 Caracterizao fsico-qumica das nanocpsulas brancas

O dimetro mdio, ndice de polidisperso, potencial zeta e pH das NC brancas esto

apresentados na Tabela 4.
Tabela 4: Caractersticas fsico-qumicas das nanocpsulas brancas
Formulaes
NCa
NC 1

Dimetro DPb (nm)

(IP)c
270 3

Potencial Zeta DPb (mV)

pHd DPb

- 44,0 1,4

6,09 0,24

- 37,0 7,1

6,13 0,21

- 31,5 6,4

6,13 0,19

- 41,5 0,7

6,14 0,18

- 41,0 2,8

6,07 0,26

(0,273)

NC 2

278 4
(0,397)

NC 3

218 5
(0,156)

NC 4

316 61
(0,327)

NC 5

318 30
(0,521)

NC: Nanocpsula

Desvio Padro

IP: ndice de Polidisperso

pH: Potencial hidrogeninico

O tamanho mdio das NC brancas variou de 218 a 318 nm. Esses dados esto de acordo
com dados obtidos por outros autores (MOSQUEIRA et al., 2006; ASSIS et al., 2007). Entre
todos os tensoativos testados, o Polissorbato 80 (NC 3) proporcionou o menor tamanho de
partcula. O ndice de polidisperso indicativo da distribuio de tamanho e ele mostrou

72
que as diferentes formulaes de NC preparadas pelo mtodo da nanoprecipitao estavam
homogneas (IP < 0,5).

Os valores do Potencial Zeta exibiram carga negativa com valores na faixa de 31,5 a 44,0
mV, estando em consonncia com dados previamente publicados, os quais mostram valores
prximos a 26,7 mV (LEITE et al., 2007). Esses valores de Potencial Zeta podem ser
atribudos ionizao dos grupos carboxlicos presentes no polmero PCL (LBOUTOUNNE
et al., 2002; LAMPRECHT et al., 2002). No entanto, a variao do Potencial Zeta observada
entre as diferentes formulaes de nanocpsulas pode ser explicada pelo tipo de tensoativo.
A diferena entre os valores de Potencial Zeta obtidos para NC 2 e NC 3 foi estatisticamente
significativa (P < 0,05). O maior valor obtido para a NC 2 pode ser explicado pelo carter
cido do Span 80, que apresenta ndice de acidez (IA 8) superior ao do Polissorbato 80
(IA 2). Desta forma, o grupamento cido carboxlico, ionizado no pH da formulao,
proporciona aumento do Potencial Zeta desta NC. Alm dos tensoativos, a fase oleosa pode
influenciar o Potencial Zeta das nanocpsulas. Schaffazick e colaboradores (2003)
observaram os efeitos da composio das diferentes formulaes sobre os valores do
Potencial Zeta. Estes autores observaram que o Potencial Zeta de nanocpsulas (-41,94
mV) e nanoemulses (-42,32 mV) foi maior do que para nanoesferas (-16,33 mV). A
presena da fase oleosa nas nanocpsulas e nas nanoemulses pode explicar este
aumento do valor absoluto do Potencial Zeta em relao s nanoesferas, as quais no
apresentam fase oleosa em sua constituio. O pH das cinco formulaes se manteve
prximo neutralidade (de 6,0 a 6,2).

3.2 Caracterizao fsico-qumica das NC contendo AR a 0,1% p/v

As NC contendo AR a 0,1% p/v foram caracterizadas quanto ao Tamanho das

nanopartculas, ndice de Polidisperso, Potencial Zeta, pH, concentrao de AR total
(Recuperao) e Teor de Encapsulao (Tabela 5). As determinaes de tamanho, ndice
de polidisperso, potencial zeta e pH foram realizadas aps filtrao das nanocpsulas em
membrana de 1,2 m, para remoo de cristais de AR da fase aquosa da formulao, que
poderiam interferir nas determinaes. O tamanho das partculas de NC carregadas com AR
variou de 219 a 281 nm. Quando comparamos o tamanho das NC brancas com aquelas
carregadas com AR, no se observa diferena significativa (P > 0,05). Assim, a incorporao
do AR no modifica o tamanho das NC. Isso pode ser devido quantidade extremamente

73
baixa do frmaco adicionada s nanocpsulas. NC carregadas com AR foram homogneas
(IP < 0,5).

Os valores do Potencial Zeta variaram de 26,0 a 50,0 mV. Quando comparamos os

valores de Potencial Zeta das NC brancas com aquelas carregadas com AR, observa-se
diferena estatisticamente significativa apenas para NC 1, NC 4 e NC 5 (P < 0,05). No caso
desses tensoativos etoxilados e que apresentam uma estrutura linear, a presena do AR na
formulao, provavelmente, levou uma menor exposio dos grupamentos negativos do
PCL e dos cidos graxos livres residuais presentes na fase oleosa, dessa forma,
caracterizando a localizao do AR tambm na superfcie dessas partculas, alm do ncleo
oleoso. Para NC 2 e NC 3 no se observa diferena significativa (P > 0,05). A incorporao
do AR no modifica o Potencial Zeta dessas NC, indicando que, provavelmente, o AR foi
principalmente associado ao ncleo oleoso das NC, permanecendo encapsulado. No pH das
cinco formulaes, o AR encontra-se em grande parte na forma no ionizada (pKa = 7,85;
SINICO et al., 2005). Assim, possivelmente, o AR adsorvido interface leo/gua da NC
no interferiria significativamente no valor do potencial de superfcie das partculas. O pH
obtido para as NC contendo AR foi de 4,6. Isto pode ser atribudo ao cido fraco (AR)
presente em pequena extenso na fase aquosa da formulao, mas suficiente para reduzir o
valor do pH, quando comparada s NC brancas.
Tabela 5: Caractersticas fsico-qumicas das nanocpsulas contendo AR a 0,1% p/v
Form.

Dimetro DP (nm)

NC

NC 1

(IP )

281 13

Potencial Zeta
b

DP (mV)

pH DP

Recuperao
b

Encapsulao
b

DP (%, p/v)

DP (%, p/v)

- 50,0 1,3

4,65 0,01

80,7 2,5

94,1 3,1

- 32,2 0,3

4,66 0,01

93,2 15,9

87,6 4,5

- 26,0 0,5

4,66 0,01

93,2 0,7

87,8 4,9

- 30,8 0,5

4,67 0,00

80,1 6,2

104,8 2,1

- 33,0 0,5

4,67 0,01

83,6 6,9

107,3 13,9

(0,107)

NC 2

219 5
(0,125)

NC 3

228 5
(0,114)

NC 4

249 1
(0,113)

NC 5

263 4
(0,130)

NC: Nanocpsula

Desvio Padro

IP: ndice de Polidisperso

pH: Potencial hidrogeninico

74
O Teor de Encapsulao do AR nas NC foi elevado e os valores obtidos encontram-se entre
87% e 107%. Esses elevados teores podem ser explicados pelo carter altamente lipoflico
do AR (log P = 4,6). O Teor de Encapsulao est, geralmente, relacionado solubilidade
do frmaco no ncleo interno oleoso da formulao. Lipoid MCT foi usado porque possui
algumas propriedades fsico-qumicas que o tornam adequado preparao de NC, tais
como baixa viscosidade e tenso interfacial que reduz o tamanho e aumenta a estabilidade
da NC, quando comparada com outros leos usados em preparaes farmacuticas
(MOSQUEIRA et al., 2006). Esses resultados obtidos so consistentes com outros estudos,
nos quais teores elevados foram obtidos aps encapsulao de frmacos lipoflicos em NC,
por exemplo: > 98% para metoxicinamato de octila (ALVAREZ-ROMN et al, 2004b), > 96%
para espironolactona (BLOUZA et al., 2006). A encapsulao est relacionada reduo do
contato da funo cida (grupamento COOH) do AR (fator disparador de eventos
eritemticos) com o estrato crneo, desta maneira resultando na reduo dos episdios de
eritema (SHAH et al., 2007).

3.3 Morfologia externa das nanocpsulas polimricas

A morfologia externa das NC brancas e contendo AR (NC 3) foi avaliada por Microscopia de
Fora Atmica (MFA). As imagens produzidas pela tcnica MFA so tridimensionais, com
elevada resoluo em escala nanomtrica. Nesta tcnica, a preparao da amostra muito
simples. Ela depositada em um estado parcialmente seco sobre placas de mica clivadas
recentemente, um fato que permite a caracterizao simultnea do contorno da partcula,
estrutura e organizao entre partculas.
NC brancas apresentaram uma forma esfrica nas imagens de MFA (Figura 13). As NC
brancas foram aplicadas sobre a mica sem serem submetidas diluio prvia. Desta
forma, pode-se atribuir o tamanho elevado das partculas visualizadas a uma possvel
agregao das mesmas na superfcie da mica, quando da desidratao do sistema com jato
de argnio, uma vez que a concentrao de nanopartculas no sistema alta. Na imagem
da Figura 13, podemos observar aglomerados em processo de ruptura, liberando o ncleo
oleoso na superfcie da mica. Em todos os experimentos realizados por MFA, a amostra foi
submetida a um processo de secagem com jato de argnio. Foi observado que, apesar do
processo de secagem manter a amostra recoberta com uma camada de gua, a secagem
levou a uma alterao das partculas, resultando em um possvel fenmeno de agregao
ou ruptura.

75

Figura 13: Imagens de nanocpsulas brancas obtidas por MFA (vista do topo) (Varredura de
20 x 20 m)

Amostras das NC contendo AR foram analisadas aps diluio 1:100 com gua destilada, e
foi observada uma homogeneidade em relao ao formato e estruturas, apresentando
partculas com estruturas esfricas e formato regular, como pode ser visualizado nas figuras
14 A e 14 B.
A

76
B

Figura 14: Imagens de nanocpsulas carregadas com cido retinico obtidas por MFA. Em
(A) vista do topo e em (B) viso tridimensional das partculas (Varredura de 10 x 10 m)

As NC contendo AR apresentaram formato esfrico nas imagens obtidas por MFA (Figura
14 A). As NC apresentaram uma distribuio heterognea no tamanho e altura em imagens
tridimensionais (Figura 14 B). Esta observao pode ser explicada como um possvel
achatamento das NC e um processo de agregao que ocorre aps secagem sobre a
superfcie da mica. De fato, o fenmeno do achatamento era provavelmente relacionado a
variaes na espessura da parede polimrica e sua homogeneidade (LEITE et al., 2005).
Anlises realizadas com NC contendo AR mostraram que a associao do frmaco no
alterou a estrutura arredondada das nanopartculas.
Nanopartculas de poliamida (nanocpsulas e nanoesferas) foram analisadas por MFA e,
atravs dos resultados obtidos, foi possvel postular a natureza estrutural dos nanosistemas.
Se o dimetro fosse aproximadamente igual altura ou razo d/h=4, os objetos poderiam
ser estruturas com nanomatriz slida (nanoesferas). Contudo, se o sistema no fosse
baseado em uma matriz contnua, o colapso do lquido encapsulado pela membrana
polimrica ocorreria e o objeto teria altura de duas vezes a parede polimrica. Ento, seria
possvel definir as estruturas produzidas como nanovesiculares (nanocpsulas) (Figura 15)
(MONTASSER et al., 2002).

77

Figura 15: Representao esquemtica da evoluo de: (a) sistema nanomatriz

(nanoesfera) e (b) sistema nanovesicular (nanocpsula) depositados e secos sobre uma
superfcie
Fonte: MONTASSER e colaboradores (2002)
A razo dimetro/altura foi calculada a partir do perfil topogrfico (Figura 16). Os valores
mostraram uma razo de aproximadamente 12 3 para NC contendo AR. Este resultado
confirma a existncia de formas achatadas que foram tambm sugeridas por Montasser e
colaboradores (2002) que trabalharam com NC preparadas com co-polmero dicloroftaloilco-dietilenotriamina e observaram uma relao dimetro/altura de 12. Similarmente, Leite e
colaboradores (2005) observaram uma razo de aproximadamente 10 para NC de poli-caprolactona. A razo dimetro/altura observada no presente estudo foi muito similar,
confirmando o processo de achatamento da NC durante anlise por MFA.

A partir dos dados obtidos, possvel postular que a capacidade de deformao das
nanocpsulas, propriedade relevante destes sistemas, uma evidncia fsica da presena
de um ncleo oleoso fluido, envolvido por uma membrana polimrica, conforme observado
por Montasser e colaboradores (2002).

78

Figura 16: Imagem topogrfica e perfil topogrfico de nanocpsulas carregadas com cido
retinico, apresentando a relao dimetro/altura das partculas

4 ESTUDO DE ESTABILIDADE DAS NANOCPSULAS POLIMRICAS

4.1 Estudo de estabilidade das NC brancas

As caractersticas fsico-qumicas das NC brancas foram avaliadas, como Tamanho

(dimetro mdio), ndice de Polidisperso, Potencial Zeta e pH nos tempos inicial, 15 e 45
dias aps o preparo das nanocpsulas (Tabela 6).

79
Tabela 6: Estudo de estabilidade das nanocpsulas brancas
Form.

Tempo (dias)

15

45

Dimetro mdio (nm)

274

269

268

ndice Polidisperso

0,301

0,249

0,270

Potencial Zeta (mV)

- 45

nd

- 43

pH

6,26

nd

5,92

Dimetro mdio (nm)

278

275

282

ndice Polidisperso

0,404

0,406

0,381

Potencial Zeta (mV)

- 42

nd

- 32

pH

6,27

nd

5,98

Dimetro mdio (nm)

217

213

223

ndice Polidisperso

0,195

0,128

0,146

Potencial Zeta (mV)

- 36

nd

- 27

pH

6,26

nd

5,99

Dimetro mdio (nm)

286

289

274

ndice Polidisperso

0,285

0,407

0,290

Potencial Zeta (mV)

- 42

nd

- 41

pH

6,26

nd

6,01

Dimetro mdio (nm)

284

331

339

ndice Polidisperso

0,439

0,533

0,593

Potencial Zeta (mV)

- 43

nd

- 39

pH

6,25

nd

5,88

NC 1

NC 2

NC 3

NC 4

NC 5

nd: no determinado

Todas as formulaes estudadas foram obtidas como suspenses coloidais e apresentaram

um aspecto leitoso caracterstico das nanocpsulas. Essas preparaes apresentaram boa
estabilidade fsico-qumica e nenhuma alterao macroscpica foi observada durante o
perodo avaliado, tais como cremagem, sedimentao ou floculao. Os dados obtidos
mostram que o tamanho, IP e Potencial Zeta das NC brancas permaneceram constantes
durante o perodo de avaliao. No entanto, em relao aos valores de pH das cinco
formulaes de nanocpsulas observa-se uma diminuio discreta (aproximadamente 0,2
unidade de pH).
Informaes relevantes sobre a estabilidade das suspenses nanoparticuladas podem ser
obtidas mediante o monitoramento do pH, em funo do tempo. Por exemplo, a alterao do
pH pode ser indcio de degradao do polmero. A diminuio dos valores de pH das
suspenses coloidais polimricas, em um curto perodo de tempo, pode ser atribuda tanto

80
ionizao de grupos carboxlicos presentes no polmero, quanto hidrlise, dependendo da
hidrofobicidade do polister.

Suspenses

de nanocpsulas

de poli--caprolactona

apresentaram reduo nos valores de pH num perodo de 3,5 meses. Esse fato foi atribudo
exposio de maior nmero de grupos cidos carboxlicos terminais, em funo do tempo
(SCHAFFAZICK et al., 2003).

4.2 Estudo de estabilidade das NC contendo AR a 0,1% p/v

Foi avaliada a estabilidade das NC contendo AR quanto concentrao do AR total

(Recuperao) no tempo inicial e aps 15 e 30 dias da preparao das NC (Tabela 7).
Tabela 7: Estudo de estabilidade das NC contendo AR a 0,1% p/v sem antioxidantes (NC 3)
e com antioxidantes (NC 5)
Concentrao do AR total (% p/va) DPb

Nanocpsulas
0 dia

15 dias

30 dias

NC 3

98,4 1,2

39,5 1,9

31,6 1,1

NC 5

90,3 0,8

82,9 2,1

49,1 3,5

Ttulo (porcentagem) peso/volume

DP: Desvio Padro

A concentrao do AR na NC 3 sem antioxidante decresceu, consideravelmente, no perodo

estudado, tendo sido degradado aproximadamente 70% do total do frmaco. A menor taxa
de degradao do frmaco na NC 5 pode ser atribuda presena do sistema antioxidante
na formulao. A concentrao do AR na NC 5 diminuiu, aproximadamente, em 41% no
perodo de 30 dias. Estes dados mostram que, apesar do aumento da estabilidade na
presena dos antioxidantes, as NC contendo AR apresentaram uma baixa estabilidade e isto
deve ser reavaliado em estudos posteriores.

5 ESTUDO DE LIBERAO IN VITRO

5.1 Solubilidade do AR no Lquido Receptor

A solubilidade do AR no lquido receptor (Tampo fosfato salina pH 7,4 (89), lcool olico 20
moles de xido de etileno (1) e etanol 95%(10)) utilizado no estudo de liberao in vitro foi
determinada previamente. A solubilidade do AR foi de 69,4 0,01 g/mL.

81
5.2 Perfil de liberao in vitro
Para obter mais informaes a cerca da estabilidade e atividade termodinmica do AR nas
formulaes de NC, foi estudada a difuso do AR atravs de duas membranas polimricas.
Este estudo foi conduzido com membranas inertes de Teflon (dimetro de poro de 0,45 m)
e de Nylon (dimetro de poro de 0,22 m). A fim de imitar as condies de uso, todas as
formulaes foram aplicadas sem ocluso e a evaporao da gua foi considerada.

O perfil de liberao do AR atravs da membrana de teflon, a partir de trs formulaes,

pode ser observado na Figura 17. A liberao do AR (% dose aplicada) aps 5 horas foi de
73 1%, 76 5% e 60 1% para NC, nanoemulso e soluo alcolica, respectivamente.
Soluo
Nanocpsula
Nanoemulso

Liberao acumulada (% dose aplicada)

80

60

40

20

0
1

Tempo (horas)

Figura 17: Perfil de liberao in vitro do AR a partir de nanocpsula, nanoemulso e soluo

etanlica, atravs da membrana de teflon (0,45 m)

O comportamento de liberao do AR atravs da membrana de Nylon, a partir de trs

formulaes, est mostrado na Figura 18. A liberao do AR (% dose aplicada) aps 5 horas
foi de 34 2%, 41 3% e 21% para a NC, NE e soluo alcolica, respectivamente.

82

Liberao acumulada (% dose aplicada)

Soluo
Nanocpsula
Nanoemulso

40

30

20

10

0
0

Tempo (horas)

Figura 18: Perfil de liberao in vitro do AR a partir de nanocpsula, nanoemulso e soluo

etanlica, atravs da membrana de nylon (0,22 m)

A despeito das diferenas na matriz polimrica e porosidade das membranas, o perfil de

liberao seguiu a mesma ordem: NE > NC > soluo. A soluo foi avaliada neste
experimento a fim de se investigar a resistncia oferecida pela membrana difuso do AR.
Assim, considerando que a soluo representa a forma livre do frmaco, uma liberao
rpida seria esperada se as membranas no fossem capazes de conferir resistncia sua
difuso. No entanto, de forma inesperada, a liberao a partir da soluo foi mais lenta do
que aquela observada para a NE e NC. Isto pode ser atribudo evaporao do etanol e,
conseqentemente, precipitao do AR. A presena de cristais de AR foi claramente
observada no compartimento doador desta preparao. Esses estudos mostraram que a
encapsulao do AR em NC e NE aumentou a difuso do frmaco lipoflico, se comparada
com a soluo alcolica do AR livre. Alvarez-Romn e colaboradores (2004b) encapsularam
corante Nile Red (altamente lipoflico) em NC de PCL e compararam a liberao in vitro do
corante com uma soluo no-saturada do mesmo corante em propilenoglicol. Foi
observada maior liberao do corante a partir da NC do que da soluo em propilenoglicol.
Esta diferena pode ser atribuda a uma combinao de fatores: a liberao do Nile Red a
partir da NC influenciada pelo particionamento do corante entre polmero-gua e gualquido receptor; diferenas na atividade termodinmica do corante, a diferentes graus de
saturao em cada formulao. Segundo esses autores, a atividade termodinmica superior

83
do corante na NC aumenta o particionamento, uma vez que a NC poderia ser considerada
como um sistema saturado.
Comparando-se as duas formulaes (NE e NC), a liberao do AR a partir da NC foi mais
lenta e sustentada do que aquela observada para a NE. A liberao do frmaco a partir da
NC ocorre em duas fases: uma liberao rpida inicial seguida por um perfil de liberao
sustentada. O primeiro estgio de liberao do AR mostrou um efeito de exploso inicial
significante, envolvendo a liberao de 61% e 21% da dose aplicada nas duas primeiras
horas, para as membranas de Teflon e Nylon, respectivamente. Conforme Lamprecht e
colaboradores (2002), esta liberao rpida pode ser descrita como uma dissoluo
imediata do frmaco adsorvido na superfcie da partcula ou baseado no fato da acumulao
do frmaco prximo superfcie da partcula, favorecendo sua liberao.
O polmero presente na interface leo/gua das NC (conforme Figura 19) proporcionou uma
liberao controlada, quando comparada NE. Portanto, a parede polimrica influenciou
significativamente na liberao do frmaco a partir da NC, sugerindo que este o passo
limitante do processo de liberao do frmaco. Neste caso, a partio do AR entre as fases
oleosa e aquosa e o volume relativo destas fases menos determinante. A velocidade de
dissoluo do frmaco a partir de um sistema tambm influenciada pelo tamanho da
partcula, ou seja, a velocidade aumenta quando o tamanho da partcula diminui, devido ao
aumento da rea de superfcie das partculas contendo frmaco (ZILI et al., 2005).

Figura 19: Modelo esquemtico da interface da nanocpsula, mostrando a localizao do

polmero na interface entre o ncleo oleoso e a fase aquosa
Fonte: JGUER e colaboradores (2007)
Est descrito na literatura que frmacos so liberados por vrios processos, tais como:
difuso atravs da matriz da partcula, liberao por degradao polimrica e difuso do

84
frmaco atravs de microcanais que so formados por eroso. Nanocpsulas de poli-caprolactona so afetadas pela degradao polimrica em 10 a 15 semanas, dependendo
da presena e tipo de tensoativo (LAMPRECHT et al., 2002). Contudo, pode-se concluir que
degradao polimrica no influencia a liberao do AR neste caso, uma vez que este
estudo foi realizado com NC recentemente preparadas.

6 PERMEAO CUTNEA IN VITRO

6.1 Solubilidade do cido retinico no Lquido receptor

A solubilidade do AR no lquido receptor (tampo fosfato salina pH 7,4 (86) : lcool olico 20
moles de xido de etileno (4) : etanol 95% (10)) utilizado no estudo de permeao cutnea
foi determinada previamente. A solubilidade do AR foi 379,4 0,2 g/mL.

6.2 Validao da remoo do AR no absorvido

A remoo do AR no absorvido, que no penetrou a pele, foi adequadamente realizada

com a alternncia do lquido receptor e gua destilada, com posterior auxlio de cotonete
umedecido e cotonete seco e extrado com metanol grau CLAE. A recuperao do AR foi
84,0 1,2% (n = 3).

6.3 Validao da extrao do AR retido na fita stripping

A extrao do AR a partir da fita usada para fazer a remoo do estrato crneo (stripping) foi
adequadamente realizada com a fase mvel. A recuperao do AR foi 83,4 1,2% (n = 3).

6.4 Validao da extrao do AR retido na pele

Os resultados obtidos revelam que a metodologia utilizada foi satisfatria para extrair o AR
retido na pele sem estrato crneo. A recuperao foi 97,4 2,9% (n = 3). Foi realizado o
mesmo experimento de validao para o branco, a fim de se eliminar possveis interferentes
decorrentes da presena de retinides endgenos na pele. No doseamento do branco, o
lquido extrator no apresentou nenhum pico de absoro no mesmo tempo de reteno do

85
AR, confirmando que os retinides endgenos no se encontravam em concentrao
suficiente para interferir no resultado do experimento.

6.5 Permeao cutnea in vitro

A habilidade de diferentes formulaes contendo AR em liberar o frmaco dentro da pele foi

investigada em condies no oclusivas, utilizando-se clulas de Franz. Esses estudos
foram realizados com o objetivo de se avaliar a influncia de diferentes nanocarreadores
sobre a penetrao cutnea do AR.
A permeao cutnea do AR no foi detectada para nenhuma das formulaes (soluo e
NC) (Tabela 8). Em contraste, penetrao cutnea do AR foi observada. A penetrao do
AR no estrato crneo e na pele (epiderme + derme) a partir da soluo etanlica foi cerca de
8 vezes maior que aquela observada para NC. Isto pode ser explicado pelo efeito acelerador
de penetrao do etanol. Primeiramente, como solvente, ele pode aumentar a solubilidade
do frmaco no veculo. Alm disso, a permeao do etanol no estrato crneo pode alterar as
propriedades de solubilidade no tecido, com um conseqente aumento da partio do
frmaco dentro da membrana. Ainda, durante os estudos de permeao, a perda de etanol,
atravs de sua rpida permeao ou evaporao do solvente voltil, aumenta a
concentrao do frmaco, conduzindo a um estado supersaturado, modificando a atividade
termodinmica do frmaco na formulao (WILLIAMS & BARRY, 2004). O propilenoglicol
utilizado na soluo de AR tambm atua como acelerador de penetrao.
Tabela 8: Penetrao e permeao cutnea do AR (% dose aplicada e g/cm2) a partir de
nanocpsula e soluo, atravs da pele intacta de orelha de porco, aps 8 horas
Penetrao
a

Formulaes

Permeao

Estrato crneob
% dose aplicada

g/cm

Epiderme + Derme
2

% dose aplicada

g/cm

Soluo

ND

1,8 0,3

1,2 0,2

0,9 0,3

0,6 0,3

Nanocpsula

ND

0,2 0,1

0,12 0,0

0,12 0,1

0,1 0,0

Concentrao do AR foi de 1 e 0,84 mg/mL para Soluo e Nanocpsula, respectivamente; formulaes foram aplicadas
sobre pele intacta de orelha de porco montadas em clulas de Franz;
Estrato crneo foi removido atravs de 10 strippings, utilizando-se fita adesiva (Book Tape no 845, Scoth3M);
Cada valor representa mdia DP (n = 3)
ND: abaixo do limite de deteco
b

Os resultados obtidos neste experimento esto de acordo com outros estudos previamente
realizados. Montenegro e colaboradores (1996) observaram que a quantidade de AR

86
permeada atravs de membrana epidrmica (estrato crneo + epiderme) a partir de
formulaes lipossomais foi significantemente menor em relao soluo hidroalcolica.
Sinico e colaboradores (2005) observaram que a permeao do AR, atravs de pele de
porco recm-nascido, a partir de soluo hidroalcolica foi maior do que aquela observada
para lipossomas contendo AR. O maior transporte do AR atravs da pele foi obtido com a
soluo de etanol/gua (1:1), como conseqncia da propriedade aceleradora de
penetrao do etanol. Liu e colaboradores (2007) obtiveram permeao apenas para a
tintura de isotretinona (ismero cis do AR), sendo que as nanopartculas lipdicas slidas
contendo isotretinona, preparadas com diferentes concentraes de tensoativos, no
permearam atravs da pele abdominal de ratos.
A permeao in vitro de frmacos de carter lipoflico acentuado, que apresentam log do
coeficiente de partio octanol/gua (log P) maiores do que 3, atravs da pele com
espessura normal significantemente diminuda (MOSER et al., 2001). Isto pode ser
atribudo a barreira proporcionada pela camada hidroflica representada pela derme.
Considerando que o AR um frmaco lipoflico (log P = 4,6) (ABDULMAJED & HEARD,
2004), a ausncia de permeao pode ser explicada por este fenmeno. Assim sendo,
novos estudos de permeao foram conduzidos com pele dermatomada. A fim de se
certificar que a barreira permeao no o estrato crneo, estudos com pele de
espessura normal, mas sem estrato crneo (10 strippings), foram tambm conduzidos. Os
dados podem ser observados na Tabela 9 e mostram claramente que a permeao do AR a
partir da soluo etanlica foi observada na pele dermatomada, mas no com a pele com
espessura normal e sem estrato crneo, evidenciando a derme como barreira permeao
do AR.
Tabela 9: Permeao cutnea do AR (% dose aplicada e g/cm2) a partir de soluo
etanlicaa, atravs da pele intacta sem estrato crneob (EC) e pele dermatomadac, aps 8h
Pele

Permeao
% dose aplicada

g/cm2

Pele intacta sem EC

ND

ND

Pele dermatomada

3,4

2,2

Concentrao do AR foi de 1 mg/mL para soluo; Soluo foi aplicada sobre pele de orelha de porco espessura normal sem
estrato crneo e pele dermatomada, montadas em clulas de Franz;
Pele espessura normal, mas sem estrato crneo (removido atravs de 10 strippings, utilizando-se fita adesiva (Book Tape no
845, Scoth3M);
c
Dermatmetro 50 mm (NOUVAG AG TCM 3000, Sua)
ND: abaixo do limite de deteco
b

Assim sendo, novos estudos de permeao foram conduzidos com pele dermatomada para
comparar as diferentes formulaes (soluo, NC e NE). A permeao a partir da soluo

87
(0,64 g/cm2) foi maior do que aquela observada para as duas outras formulaes (NC e
NE), nas quais a quantidade permeada foi abaixo do limite de deteco (Tabela 10). A
penetrao cutnea do AR (estrato crneo + epiderme + derme) a partir da NC (1,25
g/cm2) e NE (1,37 g/cm2) foi ligeiramente maior do que aquela observada para a soluo
(1,21 g/cm2). No entanto, as diferenas no foram estatisticamente significativas (P > 0,05).
Tabela 10: Penetrao e permeao cutnea do AR (% dose aplicada e g/cm2) a partir de
soluo, nanocpsula (NC) e nanoemulso (NE) atravs de pele de orelha de porco
dermatomadab, aps 8h
Formulaesa

Permeao

Penetrao

% dose aplicada

g/cm2

% dose aplicada

g/cm2

Soluo

1,01 0,00

0,64 0,00

1,21 0,06

0,77 0,04

NC

ND

ND

1,25 0,33

0,75 0,20

NE

ND

ND

1,37 0,15

0,59 0,07

Concentrao do AR foi de 1, 0,94 e 0,68 mg/mL para Soluo, Nanocpsula e Nanoemulso, respectivamente; formulaes
foram aplicadas sobre pele de orelha de porco dermatomada e montadas em clulas de Franz;
b
Dermatmetro 50 mm (NOUVAG AG TCM 3000, Sua)
Cada valor representa media DP (n = 3)
ND: abaixo do limite de deteco

A ausncia de permeao detectvel com nanopartculas contendo AR neste estudo sugere

que a encapsulao no facilita o transporte atravs da pele. Esses resultados esto de
acordo com estudos prvios, que relataram que carreadores particulados de frmacos
(micropartculas e nanopartculas) aumentam a residncia do frmaco na pele sem
aumentar o transporte transdrmico (ALVARZ-ROMN et al., 2004b). Alves e
colaboradores (2007) mostraram que a nimesulida no foi detectada no compartimento
receptor quando encapsulada em nanoesferas, nanocpsulas e nanoemulso. Estes
resultados esto de acordo com outros estudos, sugerindo que os nanocarreadores no
favorecem o transporte transdrmico. Por outro lado, pode ser postulado que as reaes
adversas decorrentes da aplicao tpica do AR sejam menores no caso das formulaes
de NC e NE do que aquelas observadas para uma soluo do frmaco.

Este comportamento tambm tem sido observado com outros sistemas carreadores.
Jenning e colaboradores (2000) demonstraram que nanopartculas lipdicas slidas
contendo vitamina A efetivamente liberaram a vitamina em camadas superiores da pele,
mas no favoreceram o aumento da concentrao da vitamina A em camadas mais
profundas da pele. Como discutido anteriormente, nanopartculas lipdicas slidas contendo
isotretinona no permearam a pele abdominal de rato (LIU et. al., 2007).

88
Os carreadores coloidais apresentam vantagens para aplicao tpica, uma vez que a
liberao sustentada importante para suprir a pele com o frmaco por um perodo
prolongado. O mecanismo de ao das nanopartculas pode ser atribudo associao com
a superfcie da pele. O pequeno tamanho da partcula e a elevada rea de superfcie
asseguram um maior contato com o estrato crneo. O agente encapsulado penetrando na
pele vivel facilita o transporte do frmaco por alterar o coeficiente de partio
veculo/estrato crneo. A habilidade do frmaco em uma formulao tpica de permear a
pele e exercer seu efeito depende de dois eventos consecutivos: o frmaco deve primeiro
difundir do veculo para a superfcie da pele e ento deve permear essa barreira. A funo
dessas partculas liberar um ingrediente ativo nas camadas superiores da pele e, em
aplicaes timas, prolongar o tempo no qual este frmaco permanece sobre a pele (ALVES
et al., 2007).

89

CONCLUSO

90

CONCLUSO

O encapsulamento do cido retinico em nanocpsulas seria uma alternativa interessante

para o tratamento tpico da acne vulgaris. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi o
desenvolvimento e a caracterizao de nanocpsulas contendo AR e a avaliao da sua
permeao cutnea in vitro atravs da pele de orelha de porco, comparada com sistemas
convencionais.

A vetorizao do AR em nanocpsulas poderia evitar o contato direto do frmaco com a

pele, reduzindo processos de irritao no local da aplicao, alm de controlar a liberao
do frmaco, garantindo eficcia em tempo prolongado com menos reaes adversas, e
direcionar o frmaco no alvo especfico da doena, o folculo piloso. A nanoencapsulao
tambm poderia minimizar a degradao do AR pela luz, ar e calor.
NC brancas e contendo AR foram obtidas e caracterizadas. A preparao da NC foi
conduzida por um mtodo simples e de fcil execuo. Estas preparaes apresentaram
aspecto leitoso, caracterstico de suspenso coloidal. O dimetro mdio obtido das
partculas se manteve na faixa de 200 a 300 nm. As formulaes de NC tambm foram
caracterizadas atravs da determinao do Potencial Zeta. Os valores obtidos foram
similares aqueles previamente relatados para NC preparadas com o mesmo polmero. A
morfologia externa das nanocpsulas foi visualizada por microscopia de fora atmica,
comprovando a existncia de um ncleo oleoso central, envolto por uma membrana
polimrica, que capaz de se deformar quando depositado sobre uma superfcie. A taxa de
encapsulao do AR em NC foi alta (~90%) e foi independente do tensoativo usado para o
preparo destes sistemas. Estes dados confirmam que o sistema de vetorizao escolhido,
nanocpsula, indicado para frmacos extremamente lipoflicos, tais como o AR, que
apresentam boa solubilidade no ncleo oleoso. As NC brancas e contendo AR se mostraram
estveis, quanto ao tamanho, potencial zeta e ndice de polidisperso, quando armazenadas
por at 45 dias a temperatura ambiente. O teor de AR decaiu at 40% em 30 dias, na
presena de sistema antioxidante. Desta forma, uma abordagem mais profunda a cerca da
estabilidade do AR em NC deve ser proposta, com o intuito de se solucionar problemas de
degradao do frmaco, viabilizando a possvel utilizao futura da nanocpsula
desenvolvida no campo farmacutico.

91
O estudo de liberao in vitro obtido para as nanocpsulas delineou um perfil de liberao
sustentada. A liberao do AR a partir da NC foi menor do que aquela observada a partir de
uma nanoemulso e foi independente da matriz polimrica e porosidade das membranas
utilizadas nestes estudos de liberao.
Os experimentos de permeao foram conduzidos com pele intacta, sem estrato crneo e
dermatomada. Na pele intacta, no foi observada permeao do AR a partir da soluo
alcolica e da NC. Em contraste, a penetrao cutnea (estrato crneo e epiderme + derme)
a partir da soluo etanlica foi cerca de 8 vezes maior que aquela observada para NC. Isto
pode ser explicado pelo efeito acelerador de penetrao do etanol. Em pele dermatomada, a
permeao a partir da soluo foi maior do que aquela observada a partir da NC e NE,
enquanto que penetrao cutnea (epiderme + derme) foi similar para todas as formulaes
avaliadas (NC, NE e soluo).
O conjunto dos dados obtidos mostrou que a encapsulao do AR em NC permitiu
penetrao do frmaco na pele com ausncia de permeao atravs da pele intacta e
dermatomada, o que sugere que a encapsulao no facilita o transporte do frmaco
atravs da pele. Sendo assim, a NC garante a biodisponibilidade local e tem potencial para
reduzir reaes adversas ocorridas com a entrada do frmaco na derme. As nanocpsulas
representam uma alternativa interessante para aumento da penetrao do AR em camadas
superiores da pele, impedindo a permeao cutnea indesejvel.

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