Ps-graduao em Microbiologia

Bacilos Gram-Positivos
aerbios, no formadores
de esporos
Prof. MSc. Marcele Louise T. Arruda

Bacilos Gram-positivos aerbios,

no formadores de esporos
Corynebacterium
Listeria
Erysipelothrix
Actinomycetes

Corynebacterium
Geralmente
Imveis
Catalase positiva

Habitantes normais de
Mucosas
vias respiratrias
trato urinrio
conjuntiva

Principal patgeno
Corynebacterium diphtheriae

Corynebacterium
diphtheriae

Corynebacterium diphtheriae
Aspectos
Bacilo diftrico
formato de clava
forma arranjos em letras chinesas

Corynebacterium diphtheriae aspectos

No interior dos bastonetes
Grnulos de distribuio irregular
Grnulos metacromticos
aspecto de contas de colar

Em gar sangue
Pequenas
Granulosas
Acinzentadas
Bordas irregulares
Pequenas zonas de hemlise

Corynebacterium diphtheriae
Causador da difteria
Controle por vacinas

anaerbio facultativo
Exigente
Requer vitamina para crescimento

Diviso em quatro bitipos

Mitis
Intemedium
Gravis
Belfanti

Os bitipos
Classificao
Caractersticas de crescimento
Morfologia da colnia
Reaes bioqumicas

Gravidade da doena
Sem importncia atual

Se necessria a classificao
Mtodos imunoqumicos e moleculares

Corynebacterium diphtheriae

Transmisso
Ocorrncia
Vias respiratrias
Feridas/pele de infectados
Portadores sos

Transmisso
Via
Perdigotos
Contato direto
Corynebacterium diphtheriae

Fatores de virulncia
Adeso?
Toxina diftrica
nico fator de virulncia?
Extremamente potente
LD50
100ng/kg de peso corporal
Efeitos necrosantes e neurotxicos

Toxigenicidade
Presena de fagos
Lise da clula
Produo de toxinas
Corynebacterium diphtheriae

A toxina
Produo in vitro
Depende da presena de ferro
pH
Concentrao de aminocidos

Produo in vivo ???

Ao local
Absorvida pelas mucosas
Destruio do epitlio e inflamao/necrose
Formao de fibrina exsudativa
Pseudomembrana acinzentada nas amgdalas
Remoo grande hemorragia

A doena
Ao sistmica
Produo ativa de toxinas
Infiltrao gordurosa
Necrose do msculo cardaco, fgado, suprarenais
Paralisia do palato mole e msculo oculares

Incomum em difteria cutnea

Pequenas pores de toxina
Anticorpos antitoxina

Exames laboratoriais
1) Coleta de suabes: nariz, garganta e
leses suspeitas
antes da administrao de
antimicrobianos
Abaixo da membrana

2) Transporte do suabe
Meio semi-slido
Meio de Amies

Exames laboratoriais

3) Colorao
Azul de metileno alcalino
ou
Gram

4) Inoculao
gar sangue
Excluir estreptococos

Meio Loeffler
Placa de telurito
gar cistina-telurito

Incubao a 37 C

Exames laboratoriais

Possvel isolado?
Avaliao de toxicidade
Mtodos
Disco com antitoxina
PCR
ELISA
Imunocromatogrfico

Outras corinebactrias
Corinebactrias no-lipoflicas
Corynebacterium ulcerans
Doena semelhante difteria

C. pseudotuberculosis
C. xerosis
C. striatum
C. amycolatum

Corinebactrias lipoflicas
C. jeikeium pacientes imunocomprometidos
C. urealyticum trato urinrio

O gnero Listeria

O gnero Listeria
Espcies
L. ivanovii

Tambm conhecida como L. monocytigenes

sorotipo 5
Patognica para ovinos e caprinos, e em determinadas
condio, ao homem

L. seeligeri
L. innocua
L. weshimeri
L. grayi

L. monocytogenes
12 sorovares conhecidos
3 (1/2a,1/2b, 4b) 90% dos casos de listeriose humana e
animal

Listeria
monocytogenes

Histrico
Conhecida desde o incio do sculo XX
1940 - Identificao definitiva como
espcie bacteriana
Nome
Lister (Lorde Joseph Lister) cirurgio ingls
Monocytogenes causa monocitose EM
COELHOS
As infeces humanas NO so acompanhadas
de monocitose!

Caractersticas do patgeno
Bastonetes Gram-positivos
No formador de esporos
Anaerbios facultativos
Crescimento favorecido por
Alguns aminocidos
Vitaminas do complexo B

Forma
bastonete
Tamanho
varivel em relao idade da cultura

Caractersticas do patgeno
Espcie extremamente ubiquitria
Mveis (25C)
Flagelos peritrquios
Movimentos caractersticos
Tombamento

De 1 a 10% da populao
Portador intestinal

Caractersticas do patgeno
Morfologia celular

Fonte: www.med.sc.edu:85/book/bacteriology-sta.htm

Caractersticas de crescimento
gares
Muller-Hinton

Em gar sangue
Pequenas reas de hemlise

Manuteno dos tecidos em geladeira

Favorece isolamento (4C)

Catalase positiva
Mvel

A listeriose

Caractersticas da doena
A partir de 1980
Em veterinria doena associada ao consumo de silagem com
pH>5
Relao com vacas leiteiras portadoras do microrganismo

Ingesto de alimentos

Saladas cruas

Leite e queijos moles ou levemente curados de matria-prima

no pasteurizada (e pasteurizada?)!

Carnes

Pratos prontos para consumo

Listeria presente em qualquer alimento fresco de origem animal ou

vegetal

Listeriose
Possveis sintomatologias
Em indivduos imunocompetentes
Sintomas semelhantes gripe
Nusea, vmitos e diarrias

Idosos, crianas, alcolatras e diabticos

Meningite, septicemia e bito

Mulheres gestantes
Abortos espontneos/natimorto

Perodo de incubao
Pode ser de meses doena sistmica
12 a 24 hs doena com sintomas alimentares

Listeriose Humana Perinatal

Granulomatose infantil sptica
Infeco intra-tero
Caracterizada por
Sepse neonatal
Leses pustulares e granulomas contendo
Listeria monocytogenes em mltiplos rgos

Sndrome de incio tardio

Meningite
Entre o nascimento e a terceira semana de
vida

Listeriose de origem alimentar

Caracterstica da ocorrncia
Casos isolados
Brasil
Doena rara ou subnotificao?
E.U.A (Fonte: FDA)
1600 casos de listeriose com 415 mortes/ano
Importncia (BHUNIA, 2003)
Ocorrncia
2.500 casos/ano

Impacto
Taxa de letalidade: 20%
Prejuzo econmico: U$ 2 bilhes/ano

Listeriose de origem alimentar

Surtos causados por Listeria monocytogenes
Tabela 1: Dados epidemiolgicos de alguns surtos de listeriose de
origem alimentar, ocorridos entre 1980 e 2000.
N Casos

Letalidade
(%)

Sorogrupo

Salada de repolho

41

44

4b

1985

Queijo mexicano

142

21

4b

Austrlia

1990

Pat

1/2a

EUA

1994

achocolatado

45

1/2b

Itlia

1997

Salada de milho

1.566

4b

EUA

2000

Carne de peru

29

24

Pas

Ano

Canad

1981

EUA

Alimento

Fonte: Adaptado de McLAUCHLIN et al. (2004).

Listeria e seus
fatores de
virulncia

Listeria e seus fatores de virulncia

Classificao dos fatores de virulncia
Adeso
Protena de adeso da Listeria
Protenas de ligao fibronectina

Lise do Vacolo primrio

Lecitinase

Invaso
Internalinas A e B

Proliferao intracelular
Listeriolisina O (LLO)
Fosfolipases C (PI-PLC, PC-PLC)

Disseminao intercelular
ActA

Lise do Vacolo secundrio

LLO

Listeria e seus fatores de

virulncia

Classificao dos fatores de virulncia

Protena de adeso da Listeria

Fonte: Adaptado de JARADAT & BHUNIA (2002)

Listeria e seus fatores de

virulncia

Invaso da parede intestinal

Fonte: VSQUEZ-BOLAND et al. (2001)

Listeria e seus fatores de

virulncia
Proliferao
intracelular
Listeriolisina O
Principal fator de
virulncia de Listeria
Toxina formadora de
poros
Fonte: VSQUEZ-BOLAND et al. (2001)

Listeria e seus fatores de

virulncia

Disseminao intercelular

Fonte: VSQUEZ-BOLAND
et al. (2001)
Fonte: Adaptado
de IRETON & COSSART (1997)

Listeria e seus fatores de virulncia

Fonte: TRABULSI & ALTERTHUM, 2005

Listeriose - Patogenicidade
Fgado
crebro

Macrfago

Bao
Circulao sangunea

Linfonodos
Feto

Fetus
BHUNIA, 2003 (adaptado)

Listeriose - Patogenicidade

Fonte: TRABULSI & ALTERTHUM, 2005

Listeriose - Patogenicidade
Disseminao celular
Bactria

Novo ciclo

Disseminao
Fagossoma

Lise do
Fagossoma

Cauda actina

Disseminao

Proliferao

Clula hospedeira
listeria3.exe

Fonte: OLIVEIRA, 2002

Patognese da invaso celular

http://www.nature.com/nri/journal/v4/n10/fig_tab/nri1461_F1.html

Caractersticas da doena
Contaminao dos alimentos
Ambiente, animais e homem so reservatrios

Fatores que favorecem a contaminao

Contaminao cruzada (industrial e domstica)

Medidas de controle
Tratamento trmico da matria-prima (leite)
Evitar contaminao da indstria
Boas prticas de fabricao

Caractersticas
auxiliares na
identificao de

Listeria

Bases para identificao

Morfologia da colnia
Colorao de Gram
Motilidade
Movimento de tombamento

Prova da Catalase
Produo de Beta-hemlise
Presena altamente correlacionada com
patogenicidade

Prova da Catalase

Fonte:http://web.fccj.edu/~lnorman/images/catalase.jpg

Fonte: http://www.rlc.dcccd.edu/mathsci/reynolds/micro/lab_manual/Catalase.jpg

Pesquisa de Listeria monocytogenes

Confirmao da presena de Listeria spp.
Prova da motilidade
gar Motilidade Nitrato
Semear atravs de picada
22 a 25C, 2 a 5 dias
Mvel, com crescimento em forma de guarda-chuva

Pesquisa de Listeria

monocytogenes
Confirmao da presena
de Listeria spp.
Prova da motilidade
Chapu chins

A prova da motilidade
tambm pode ser feita pelo
microscopia de contraste de
fase

Pesquisa de Listeria monocytogenes

Identificao da presena de Listeria

monocytogenes
Produo de alfa-hemlise
gar sangue de carneiro
36 1C, 24 48 horas
Zona clara (hemlise): resultado positivo
L. monocytogenes
L. ivanovii
L. seeligeri
Fonte: http://www.rlc.dcccd.edu/mathsci/reynolds/micro/lab_manual/hemolysis.jpg

Pesquisa de Listeria monocytogenes

Identificao da presena de L. monocytogenes
Fermentao de carboidratos
Xilose
Manitol
Ramnose
30 1C, 36 horas
Resultado positivo
Viragem do indicador de vermelho para amarelo

Pesquisa de Listeria monocytogenes

Aps a confirmao
Sorologia (Laboratrios de referncia)
Antibiograma
(recomendao internacional)

Tipos de queijos moles

http://pt.wikipedia.org/wiki/Brie

Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Camembert

Consideraes
finais

BOA
NOITE!