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Estudo da resistncia cicatricial cutnea de

ratos tratados com fototerapia a laser
ARTICLE JUNE 2010
DOI: 10.5585/conssaude.v9i2.2267

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READS

210

7 AUTHORS, INCLUDING:
Paulo R. Barja
Universidade do Vale do Paraba
85 PUBLICATIONS 197 CITATIONS
SEE PROFILE

Available from: Paulo R. Barja

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Recebido em 8 maio 2010. Aprovado em 18 jun. 2010

Editorial

Estudo da resistncia cicatricial

cutnea de ratos tratados com
fototerapia a laser
Study of the strength of healing skin of rats treated with
phototherapy in laser

Cincias
bsicas

Kelsyanne de Castro Carvalho1; Renata Amadei Nicolau2; Antnio Luis Martins Maia3; Paulo Roxo
Barja4; Hoctvio Pereira de S5; Luanna Anielle Evangelista do Santo5; Gilvnia Melo da Rocha5
Mestre em Engenharia Biomdica Univap. So Jos dos Campos, SP Brasil. Professora da Faculdade Santo Agostinho, Professora
do Centro de Ensino Unificado de Teresina. Teresina, PI Brasil.
Professora Doutora em Engenharia Biomdica e Cincias Mdica Bsicas Univap. So Jos dos Campos, SP Brasil.
3
Mestre e Doutorando em Engenharia Biomdica Univap. So Jos dos Campos, SP Brasil. Professor Faculdade Santo Agostinho,
Professor Faculdade Integral Diferencial. Teresina, PI Brasil.
4
Professor Doutor, Coordenador do PPG em Bioengenharia IP&D, Univap. So Jos dos Campos, SP Brasil.
5
Acadmico de Fisioterapia Faculdade Santo Agostinho. Teresina, PI Brasil.
1

Cincias
aplicadas

Endereo para correspondncia

Kelsyanne de Castro Carvalho
R. Oclio Lago, 1257, Ininga
64049-765 Teresina PI [Brasil]
kelsyanne@hotmail.com

Resumo

Estudos
de casos

Introduo: Terapia com laser tem sido amplamente estudada por seu efeito cicatrizante; contudo, poucos estudos foram desenvolvidos avaliando resistncia
tenso ps-fototerapia. Objetivo: Analisar a tenso cicatricial em incises cutneas de ratos, aps terapia laser (InGaAlP-670nm). Mtodo: Vinte ratos Wistar,
divididos em dois grupos (placebo/irradiado), sofreram inciso cutnea no dorso. O grupo irradiado recebeu dose de 6J/cm 2 e no grupo placebo o equipamento
manteve-se desligado. Aps sacrifcio, em trs e sete dias ps-cirurgia, amostras
de pele foram submetidas anlise tnsil-histolgica. Resultados: Observou-se
diferena significante na fora de ruptura intergrupos, assim como tendncia
de diminuio na deformao mxima, porm sem expressividade estatstica.
Ocorreu reduo do infiltrado inflamatrio e acelerao de fibroplasia e angiognese, compatveis com elevao da sntese de colgeno na rea das leses no
grupo irradiado. Concluso: A terapia com laser de baixa intensidade aumenta a
resistncia tnsil da pele, melhorando a resposta reparacional, reduzindo riscos
de deiscncia e complicaes ps-cirrgicas.

Revises
de literatura

Descritores: Cicatrizao de feridas; Lasers; Pele.

Abstract

Instrues
para os autores

Introduction: Laser therapy has been widely studied for its healing; however,
few studies have been developed to evaluate tensile strength after phototherapy. Objective: To analyze voltage scar skin incisions in rats after laser therapy
(InGaAlP-670nm). Method: Twenty rats were divided into two groups (placebo/
irradiated), underwent skin incision on the back. The irradiated group received
a dose of 6J/cm 2 and in the placebo group the equipment remained off. After sacrifice, three and seven days post-surgery, skin samples were subjected to tensilehistological analysis. Results: It was observed significant difference in breaking
strength between groups, decrease in maximum deflection (without statistical
expression), reduction of the inflammatory infiltrate and acceleration of fibroplasia and angiogenesis, consistent with increased synthesis of collagen in the
area of lesions in the irradiated group. Conclusion: Therapy with low-intensity
laser increases the tensile strength of the skin, enhancing tissue repair response,
reducing risks of dehiscence and postoperative complications.
Key words: Lasers; Skin; Wound healing.

ConScientiae Sade, 2010;9(2):179-186.

179

Estudo da resistncia cicatricial cutnea de ratos tratados com fototerapia a laser

Introduo
A ferida constitui uma interrupo da
continuidade de um tecido corpreo, causada
por qualquer tipo de trauma fsico, qumico,
mecnico ou desencadeada por uma afeco
clnica, que estimula a defesa do organismo
lesionado iniciando o processo cicatricial. A
cicatrizao dessas leses um processo eficaz e dinmico fisiologicamente, tendo como
finalidade a recuperao da estrutura tissular
para manter sua funcionalidade, mesmo com a
perda tecidual que ocorre no incio do processo
leso-reparao tecidual1.
O processo de cicatrizao tecidual envolve muitos eventos biolgicos, tais como coagulao, inflamao, formao de tecido de
granulao, contrao do ferimento e remodelao tecidual. Aps 24 horas do acometimento
lesional, as clulas epiteliais migram da epiderme para invadir o cogulo. Em ferimentos de
bordas bem-aproximadas, do tipo incisional, no
decorrer de 48 horas uma camada contnua de
clulas epiteliais recobre o ferimento. No terceiro ou quarto dia, o tecido de granulao se sobrepe e inicia-se a deposio de colgeno. No
primeiro ms, h uma proporcionalidade entre a
resistncia tnsil e a quantidade e qualidade do
colgeno no ferimento2.
Os profissionais da rea de sade se deparam constantemente com desafios no tratamento de feridas no cicatrizadas, ou com dificuldade de cicatrizao. A fisioterapia tem
demonstrado atuar na preveno e tratamento
de tais feridas, usando recursos fsicos como o
laser, para acelerar o processo de cicatrizao
dos tecidos envolvidos 3, 4. A terapia com laser
de baixa intensidade (TLBI) tem sido sugerida
como opo teraputica efetiva para modulao
da dor e favorecimento do processo reparacional da cicatrizao cutnea5.
Apesar de qualquer laser apresentar as caractersticas de monocromaticidade, coerncia e
colimao, os efeitos biolgicos podem ser diferentes, dependendo do comprimento de onda,
180

parmetros de irradiao e caractersticas do tecido irradiado 6.

Os lasers de baixa intensidade apresentam
efeitos conhecidos como fotobiomoduladores os
quais so importantes na cicatrizao, no que se
refere ao aumento da formao de tecido de granulao 6, 7, neovascularizao8 e proliferao de
fibroblastos6, rpida epitelizao8, 9.
Interao eficiente do laser com o tecido
tratado requer correspondncia entre as caractersticas de um e outro (por exemplo, o tecido
deve absorver bem a radiao no comprimento
de onda emitido pelo laser). Quando radiao de
baixa intensidade usada, minimiza-se o efeito
trmico e a energia absorvida, gerando essencialmente efeitos fotobiomoduladores10, 11.
Apesar da existncia de vrios estudos
sobre a fototerapia no processo cicatricial, a resistncia da cicatriz pouco abordada pela comunidade cientfica, embora seja extremamente
importante na rea clnica. Em decorrncia disso, este estudo props a anlise tensiomtrica da
pele, aps terapia com laser, em cicatrizes incisionais no dorso de ratos.

Materiais e mtodo
O projeto de pesquisa foi submetido
apreciao do Comit de tica e Pesquisa da
Faculdade Integral Diferencial (Teresina, PI) e
obteve aprovao, sob protocolo n253/09, seguindo os princpios ticos da experimentao
animal, de acordo com as Normas Internacionais
de Proteo aos Animais e do Colgio Brasileiro
de Experimentao Animal (COBEA).
Foram estudados 20 ratos (Rattus norvegicus albinus) machos, da linhagem Wistar, pesando entre 200 a 250g, provenientes do biotrio da
Faculdade Santo Agostinho (Teresina, PI). Os
animais foram distribudos e acondicionados
aleatoriamente em caixas especficas para ratos, mantidos desde o nascimento em um ciclo
claro/escuro de 12/12 horas, com alimentao e
gua ad libitum (Tabela 1).

ConScientiae Sade, 2010;9(2):179-186.

Carvalho KdeC et al.

A
B

Subgrupo
(n=5)

Sacrifcio

Tratamento

A3

3 PO

Placebo

A7

7 PO

Placebo

B3

3 PO

Laser

B7

7 PO

Laser

6J/cm2

Potncia

16mW

Comprimento de onda

670nm

rea do feixe

0,09cm

Tempo

33,7s

Nmeros de pontos

seguida, as amostras foram alocadas em recipientes com soluo de Ringer Lactato e encaminhadas imediatamente (tempo inferior a 60
minutos) para submisso ao teste de resistncia
tenso no Laboratrio de Ensaio Mecnico
(Servio Nacional de Aprendizagem Industrial
SENAI, Teresina PI), por meio da Mquina
de Ensaio DL20000 (Emic Equipamentos e
Sistemas de Ensaio Ltda, Brasil), com garras de
presso ajustveis manualmente e sistema eletrnico de aquisio de dados com utilizao do
software Tesc, verso 1.0113.
A pele sofreu pinamento por meio de um
dispositivo de ao inoxidvel com presso gradual, observando-se a fora de ruptura (FR) e a
deformao mxima (DM). A FR corresponde ao
maior valor de fora necessrio durante a trao
da amostra, ou seja, o maior valor de resistncia da amostra para que se atinja a ruptura; a
DM d o valor de deslocamento (deformao sofrida pela amostra) entre uma garra e outra do
maquinrio at a ruptura total do fragmento. A
trao ocorreu com velocidade de 50 mm/min. e
a fora de trao foi constantemente mensurada
automaticamente.
A poro distal da leso (1cm) foi fixada em
formol a 10% e submetida a processamento histolgico. De cada amostra foram obtidos oito cortes
semisseriados (5m), sendo quatro corados por
Hematoxilina-Eosina, e quatro, com Tricrmico
de Masson. A anlise do nmero de fibroblastos, vasos sanguneos e clulas inflamatrias foi
realizada nos cortes corados com HematoxilinaEosina, e a anlise da rea do colgeno, nos cortes
corados com Tricrmico de Masson.

Revises
de literatura
Instrues
para os autores

ConScientiae Sade, 2010;9(2):179-186.

Densidade de energia

Estudos
de casos

O grupo A (placebo) recebeu simulao

de irradiao com equipamento de fototerapia
desligado nos mesmos perodos do grupo tratado. O grupo B foi submetido a tratamento com
irradiao a laser: i) nos 30 minutos posteriores
leso, e ii), aps 48 horas. A fototerapia foi realizada utilizando-se um laser de Fosfeto de
ndio Glio Alumnio (InGaAlP) de baixa intensidade (PHYSIOLUX DUAL, Bioset Indstria de
Tecnologia Eletrnica Ltda., Brasil). A irradiao
foi realizada de forma pontual, transcutnea, perpendicularmente pele do animal, com contado
e localizada entre os pontos de sutura (Tabela 2)15.
Decorrido o experimento, procedeu-se ao
sacrifcio dos animais com aplicao de uma
dose excessiva de anestesia13. A seguir, retirouse o fio de sutura e o fragmento de pele para
anlise tensiomtrica e histolgica14.
A resistncia da cicatriz cutnea foi medida retirando-se um retalho de pele de 4x2 cm
transversal cicatriz, e em sua parte mdia. Em

InGalP

Cincias
aplicadas

Grupo
(n=10)

Parmetros do laser
Diodo

Cincias
bsicas

Tabela 1: Diviso de grupos experimentais

Tabela 2: Parmetros de irradiao

Editorial

Todos os animais receberam, por via

subcutnea, um pr-tratamento com atropina
(relaxante muscular), na dose de 0,04mL para
cada 100g de peso corpreo, aguardando-se 15
minutos para o procedimento anestsico12. Os
animais foram submetidos anestesia dissociativa com xilazina e quetamina na proporo
de 1:1, na dose de 0,1mL para cada 100g do peso
do animal, sendo depilados na regio dorsal 24
horas antes do procedimento cirrgico. Aps a
anestesia, realizou-se uma inciso longitudinalmente (3 cm) pele da parte mediana do dorso,
poupando msculos subjacentes. Em seguida, as
bordas da ferida foram suturadas, com quatro
pontos simples, sendo utilizado fio de nylon monofilamentar 4-013, 14.

181

Estudo da resistncia cicatricial cutnea de ratos tratados com fototerapia a laser

Resultados
Na observao macroscpica das leses,
no foi detectado nenhum sinal de infeco da
ferida cirrgica ou mesmo deiscncia de sutura
da pele.

Anlise tensiomtrica
Na anlise da tenso cicatricial dos retalhos cutneos, no terceiro e stimo dia ps-cirurgia, observou-se fora de ruptura superior no
grupo placebo no terceiro dia ps-cirurgia em
182

relao ao grupo laser. No stimo dia, aps a cirurgia, a fora de ruptura foi superior no grupo
tratado com laser (Figura 1).

Fora de ruptura (gf)

7000

p = 0,0873

6000
p = 0,0386

5000
4000
3000
2000
1000
0

Placebo
3 dias

Laser
7 dias

Figura 1: Fora de ruptura dos grupos placebo

e laser no 3 e 7 dia ps-cirurgia. Valores
expressos em mdia desvio-padro
No foram observadas diferenas significativas na Deformao Mxima do retalho
cutneo entre os grupos placebo e laser, tanto
no terceiro quanto no stimo dia ps-cirurgia
(Figura 2).
16

Deformao mxima (mm)

As lminas histolgicas foram submetidas

anlise por microscopia ptica e captura de
imagem digital, no laboratrio de Fisiologia e
Farmacologia do Instituto de Desenvolvimento
e Pesquisa da Universidade do Vale do Paraba.
A captura das imagens foi efetuada por meio
de uma cmara digital da marca Nikon, modelo Coolpix 5400, com resoluo de 2592 X 1944
pixels e acoplada a um microscpio binocular,
modelo Eclipse E200, da mesma marca, com
objetivas planacromticas. Para o acoplamento
desses equipamentos usou-se um adaptador de
cmera digital da marca Meiji Techno, modelo
MA 151/40/52. As fotomicrografias foram obtidas em aumentos de 40 e 100 vezes e armazenadas no formato JPEG (Joint Photographic
Experts Group).
Para a anlise quantitativa das clulas, utilizou-se o programa ImageJ verso 1.43s. Atravs
do plugin Cell Counter, realizou-se a contagem
manual das clulas inflamatrias, fibroblastos e
vasos sanguneos. Com o plugin Threshold Colour,
analisou-se a quantidade por rea de colgeno.
Todas as variveis obtidas no estudo foram analisadas com o auxlio do programa GraphPad
Prism, verso 2.00. Os resultados foram submetidos anlise de varincia (ANOVA) para
mltiplas comparaes, seguida do teste t
Student para comparao entre os grupos placebo e laser, considerando um nvel de significncia de 5% (p<0,05).

14
12
10
8
6
4
2
0

Placebo
3 dias

Laser
7 dias

Figura 2: Grfico comparativo das mdias de

Deformao Mxima dos diferentes grupos
no terceiro e stimo dia ps-cirurgia. Valores
expressos em mdia desvio-padro

Anlise histolgica
Na anlise dos cortes histolgicos verificou-se, no terceiro dia ps-cirurgia, um padro

ConScientiae Sade, 2010;9(2):179-186.

histolgico menos organizado que no stimo dia

ps-cirurgia em ambos os grupos (Figura 3).

p = 0,0474

0,007
0,006

p = 0,0349

0,005

Editorial

rea de colgeno (mm2)

Carvalho KdeC et al.

0004
0,003
0,002
0,001
0

Placebo

Laser
7 dias

Cincias
bsicas

3 dias

Figura 4: rea de colgeno no terceiro e

stimo dias ps-cirurgia. Valores expressos
em mdia desvio-padro

rea do colgeno
medida que o reparo tecidual evolui os
feixes de colgeno aumentam em nmero, tamanho e espessura proporcionando maior resistncia cicatriz (Figura 4).
A rea de colgeno apresentou-se significativamente maior no grupo laser em relao ao
grupo placebo, tanto no terceiro quanto no stimo dia ps-cirurgia.
A cicatrizao um processo dinmico
no qual o tecido lesado substitudo por tecido
conjuntivo vascularizado. Isso ocorre em fases
do processo de reparao como inflamao, proliferao, sntese (fases iniciais) e remodelao
(fase final). Na Tabela 3, podem ser observados
os valores das clulas inflamatrias, fibroblastos
e vasos, relacionados s fases iniciais do processo de reparo tecidual.

Estudos
de casos
Revises
de literatura

Em comparao ao grupo placebo

(Figura 3. A3) observou-se menor concentrao de clulas inflamatrias no grupo laser no
terceiro dia. No grupo laser, pode-se observar
maior presena de lquido em meio ao interstcio no terceiro dia ps-cirurgia. Contudo, a
presena de fibroblastos era mais evidente no
grupo tratado com luz, nesse tempo experimental (Figura 3. B3).
No stimo dia ps-cirurgia, verificou-se
menor presena de clulas inflamatrias e de
sntese no grupo laser. Nesse grupo, foi possvel
observar maior concentrao de colgeno, com
fibras bem organizadas, quando comparado ao
grupo placebo, ambos no stimo dia ps-cirurgia (Figuras 3. A7 e B7), indicando tecido mais

maduro em comparao ao grupo placebo em

mesmo perodo de reparo.

Cincias
aplicadas

Figura 3: Fotomicrografias dos grupos

experimentais nos diferentes momentos da
reparao tecidual. Grupos placebo (A3 e
A7) e laser (B3 e B7) no terceiro e stimo dia
ps-cirurgia

Variveis histolgicas
Clulas inflamatrias

Placebo

Laser
3 dia

217 25

148 10

0,0076

Placebo

Laser
7 dia

100 7

70 13

Instrues
para os autores

Tabela 3: Valores mdios de clulas inflamatrias, fibroblatos e vasos no 3 e 7 dia ps-operatrio

P
0,0029

Fibroblastos

98 8

114 13

0,0447

108 9

109 7

NS

Vasos

0,6 0,5

3,0 1,6

0,0161

1,4 1,1

3,2 2,4

NS

Dados expressos em mdias desvio-padro. P= diferena significativa entre os grupos placebo e laser.
NS = no significativo

ConScientiae Sade, 2010;9(2):179-186.

183

Estudo da resistncia cicatricial cutnea de ratos tratados com fototerapia a laser

O nmero de clulas inflamatrias foi significativamente maior no grupo laser, tanto no

terceiro quanto no stimo dia ps-operatrio. O
nmero de fibroblastos e vasos foi significativamente maior no grupo tratado com laser no terceiro dia, quando comparado ao grupo placebo.
Contudo, no foram observadas diferenas significativas entre os grupos no stimo dia, tanto
para o nmero de fibroblastos quanto de vasos
sanguneos.

Discusso
A proposio deste estudo foi observar o
efeito da fototerapia a laser na cicatrizao, aps
inciso em tecido cutneo de ratos, enfatizando
a resistncia trao dessa cicatriz e sua evoluo histolgica.
A TLBI uma opo teraputica para acelerar a cicatrizao por sua ao bioestimuladora,
analgsica e anti-inflamatria. Tem sido relatada
a maior deposio de fibras colgenas, bem como
a minimizao da presena de clulas inflamatrias na zona de leso, aps terapia com laser16, 17.
Segundo estudos, esse tipo de terapia promove
um efeito cicatricial por meio do aumento da atividade mittica, nmero de fibroblastos, sntese
de colgeno e neovascularizao18, 19.
A resistncia de uma cicatriz operatria,
medida pela tenso mxima, um parmetro
bastante empregado na avaliao do processo de
cicatrizao21, o que justifica a escolha do mtodo avaliativo proposto neste estudo para anlise
de tecido cutneo tratado com equipamento de
fototerapia, que tem por objetivo a otimizao
do reparo tecidual e o aumento da resistncia
cicatricial, principalmente na fase de sntese e
remodelao.
No decorrer do processo cicatricial, iniciase a sntese do colgeno pelos fibroblastos, ao
mesmo tempo em que ocorre o aumento da resistncia tnsil da ferida. Nas primeiras duas semanas do processo reparacional, a resistncia da
cicatriz diretamente proporcional quantidade de colgeno depositada 20, 21, 22. Comparando-se
184

o grupo placebo com o tratado (laser), no terceiro

dia ps-cirurgia, os resultados mostram que a
mdia de fora necessria para romper a cicatriz
no grupo placebo alcana ndices maiores que
no tratado. No incio do processo de reparao
tecidual, o tecido cicatricial ainda muito delicado e sua resistncia pequena e a resistncia
tnsil da cicatriz (trao) depende quase que exclusivamente da capacidade de sustentao das
suas bordas13. Na anlise histolgica, observouse maior espaamento no interstcio, sugerindo
presena de exsudato mais evidente no grupo
tratado. Entretanto, o nmero de clulas inflamatrias foi menos evidente nesse grupo. Essa
maior concentrao de lquido no interstcio e o
nmero de vasos sanguneos podem ter acarretado menor resistncia ruptura para o grupo
laser. No entanto, essa reduzida resistncia
tenso no comprometeu a deformao mxima do tecido. Aps sete dias da leso, o efeito
de reduo do processo inflamatrio, associado ao estmulo celular (nmero de fibroblastos)
e de sntese de colgeno acarretaram aumento
da fora de ruptura no grupo tratado em relao ao placebo. Segundo Nunes Jr.23 a fora de
ruptura est relacionada com a resistncia mecnica e com o contedo de fibras colgenas, enquanto a deformao mxima est relacionada
com a elasticidade e, nesse caso, com o contedo de fibras elsticas. De acordo com Hawkins
e Abrahamse24, os grupos tratados apresentam
declnio brusco de clulas inflamatrias para
ceder espao aos fibroblastos, o que determina
o recuo da fase inflamatria almejado na cicatrizao de feridas incisionais25. Evidencia-se
no stimo dia maior nmero de fibroblastos no
grupo tratado; com presena de fibras colgenas
mais coesos e organizados, corroborando achados de Yasukawa et al.12. Esses dados confirmam
estudo de Nascimento et al.26 em feridas incisionais, no qual observou a ao do laser HeNe
(632,8 nm) sobre a acelerao da sntese de colgeno e diferenciao dos fibroblastos.
Estudos de Corazza et al.27 verificaram que
a TLBI, com dose de 5 J/cm, estimula a angiognese. A neoangiognese uma das caracte-

ConScientiae Sade, 2010;9(2):179-186.

Carvalho KdeC et al.

rsticas histolgicas mais importantes do tecido

6.

Dall Agnol MA, Nicolau RA, Liam CJ, Munin E.

Comparative analysis of coherent light action (laser)

de granulao no processo de cicatrizao cut-

versus non-coherent light (light-emitting diode)

nea . No trabalho aqui apresentado, observou-

for tissue 6 repair in diabetic rats. Lasers Med Sci.

19

ser em relao ao grupo placebo no terceiro dia

2009;24(6):909-16.
7.

Editorial

se um nmero de vasos superiores no grupo la-

Bourguignon-Filho AM, Feitosa ACR, Beltro

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ps-cirurgia.

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Pinheiro AL. Healing of surgical wounds made with

na fora de ruptura e diminuio da deformao

lambda 970-nm diode laser associated or not with

mxima na anlise tensiomtrica, provavelmenavaliao histolgica evidenciou modulao do

processo inflamatrio pela TBLI, promovendo,
assim, acelerao do reparo cicatricial.

laser phototherapy (lambda 655 nm) or polarized

light (lambda 400-2000 nm). Photomed Laser Surg.

Cincias
aplicadas

te pela sntese de colgeno mais pronunciada. A

Cincias
bsicas

wound healing in induced diabetic and nondiabetic

O tratamento com laser InGaAlP, no com6J/cm 2, interferiu na cicatrizao de peles de ratos

Rabelo SB, Villaverde AB, Nicolau RA, Salgado

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