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TESTES IMUNOHEMATOLGICOS
PR- TRANSFUSIONAIS
Os testes imunhematolgicos pr- transfusionais, tem por finalidade assegurar os melhores
resultados possveis de uma transfuso sangunea, propiciando a mxima segurana ao
paciente e preveno de reaes transfusionais hemolticas.
Quais os testes imunohematolgicos obrigatrios na rotina transfusional?
O servio de hemoterapia deve realizar os testes imunohematolgicos pr-transfusionais,
segundo os critrios estabelecidos pelo Ministrio da Sade, sendo obrigatrios:
- Tipagem ABO / Rh;
- Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI);
- Prova de compatibilidade;
- Reclassificao ABO/Rh do doador e receptor.
fundamental o acompanhamento das publicaes do Ministrio da Sade com as normas
tcnicas que definem os critrios para a atividade hemoterpica no Brasil.
Quais os procedimentos bsicos necessrios antes de executar os testes imunohematolgicos?
1- Limpe a bancada e providencie todos os materiais e equipamentos necessrios para a realizao do
teste.
2- Antes de iniciar o procedimento, verifique se os equipamentos esto em condies adequadas para
uso.
3- Organize a bancada;
4- Retire os reagentes utilizados em cada teste da geladeira e verifique se eles esto em condies de
uso e o prazo da validade, pois reagentes vencidos possibilitam resultados falso- positivo e falsonegativo.
5- Faa a inspeo visual dos reagentes de hemcias observando se existe hemlise, grumos,
alterao de cor, pois qualquer alterao torna o reagente imprprio para o uso;
6- Confira a amostra e o pedido transfusional e inicie a rotina seguindo os procedimentos
detalhados de cada teste.
No se esqueam de identificar os tubos...
Ateno: Proteja-se dos riscos de contaminao, para isso utilize sempre equipamentos de proteo
individual (avental, luvas, culos e mscara ou protetor facial) e manipule as amostras como material
potencialmente infectante.
DESCRIO DA TCNICA:
1- Identificar um tubo com o nmero da amostra do paciente e preparar uma suspenso de
hemcias a 5% (19 gotas de salina + 1 gota do concentrado de hemcia).
2- Identificar 7 tubos com o nmero da amostra do paciente e as seguintes identificaes
AntiAB, AntiA, AntiB, AntiD, Controle(Ctrl), ReversaA (RA), RervesaB(RB).
3- Colocar uma gota dos anti-soros correspondentes Anti-AB, Anti-A, Anti-B, Anti-Rho(D), Ctrl
Rh em cada tubo.
4- Adicionar uma gota da suspenso de hemcias do paciente aos tubos com os anti-soros.
5- Nos tubos RA e RB, colocar duas gotas de soro/plasma em cada e adicionar uma gota de
suspenso do reagente de hemcias A1 e B, respectivamente.
6- Homogeneizar todos os tubos e centrifug-los por 15 segundos de 3000 a 3600 rpm. Agitar
levemente os tubos, realizando a leitura, um a um, sobre um fundo branco ou aglutinoscpio. Ler
e anotar a intensidade da aglutinao (de 0 a 4+).
Prova Direta
AB
+
+
+
+
+
+
O
O
A
+
+
O
O
+
+
O
O
B
O
O
+
+
+
+
O
O
Reversa
D
+
O
+
O
+
O
+
O
C. Rh
O
O
O
O
O
O
O
O
HA1
O
O
+
+
O
O
+
+
= A+
= B+
= O+
HB
+
+
O
O
O
O
+
+
Interpretao
A+
AB+
BAB +
AB O+
O-
= AB+
= OObservaes: os resultados das provas direta e reversa devem ser concordantes, caso eles se
apresentem discrepante, deve-se repetir o procedimento completo. Se a discrepncia no for
solucionada, comunicar o laboratrio de referncia.
O controle (-C) do reagente deve ser feito em paralelo com o teste de tipagem Rh
(inclusive ambos devero ser do mesmo fabricante), para evitar falsos resultados Rh positivos. Se
o controle for positivo, o resultado da tipagem Rh deve ser revisto. Normalmente indivduos que
possuem anticorpos aderidos s hemcias (Coombs Direto positivo) apresentam controles
positivos.
As amostras com discrepncia ABO devero ser encaminhadas aos centros de pesquisa.
Em relao ao Rh, os indivduos podem ser: Rh positivo/ Rh negativo CDE positivo/ Rh
negativo CDE negativo.
todos os resultados de Tipagem Rh D negativo se aplica a pesquisa de D fraco.
DESCRIO DA TCNICA:
1- Rotular 3 tubos: anti-D, anti-CDE, anti-Ctrh (anotar em cada tubo o nmero da amostra do
paciente);
2- Colocar uma gota da suspenso a 5% (a mesma suspenso preparada para a determinao do
grupo sanguneo) nos tubos e adicionar 1 gota dos soros correspondentes;
3- Homogeneizar e centrifugar os tubos por 15 segundos (3000 a 3600 rpm);
4- Agitar levemente os tubos, realizando a leitura, um a um, sobre um fundo branco ou
aglutinoscpio;
5- Ler e anotar a intensidade da aglutinao (de 0 a 4+).
6- Em seguida, incubar todos os tubos a 37oC durante 20 minutos ou conforme instruo de cada
fabricante do reagente;
7- Lavar 3 vezes em salina e decantar totalmente o sobrenadante;
8- Adicionar 1 gota de soro anti-IgG e centrifugar por 15 segundos de 3000 a 3600 rpm;
9- Agitar levemente os tubos, realizando a leitura, um a um, sobre um fundo branco ou
aglutinoscpio. Ler e anotar a intensidade da aglutinao (de 0 a 4+);
10- Interpretar resultados conforme a tabela.
Anti- CDE
0
+
+
*
Anti-D
0
0
+
*
Controle Rh
0
0
0
+
Resultado
Rh- CDE- DFRh- CDE+ DFRh+
Teste invlido
Realizar o controle de coombs aos tubos com resultados negativos, adicionando 1 gota de
Controcel. Centrifugar por 15 segundos de 3000 a 3600 rpm. Ler e observar se houve
aglutinao. Este procedimento obrigatrio a presena de aglutinao, pois significa que o soro
antiglobulina est reagindo.
Se a tipagem Rh do receptor no puder ser definida e a transfuso for essencial, deve ser
administrado sangue Rh negativo.
DESCRIO DA TCNICA:
1- Lavar as hemcias teste 3 4 vezes em salina preparar uma suspenso de 3 5% em salina.
2- Identificar dois tubos ( IgG, Poli) e acrescentar 1 gota de suspenso de hemcias em cada tubo;
3- Adicionar de 1 a 2 gotas do soro antiglobulina correspondente a cada tubo;
4- Misturar e centrifugar de 3000 a 3600 rpm por 15-20 segundos;
5- Ressuspender gentilmente e examinar a aglutinao. Registrar os resultados.
Quando o Coombs direto for negativo com a leitura imediata, deixar 15 minutos em
temperatura ambiente, centrifugar e ler novamente.
Os resultados negativos devero ser confirmados adicionando o controle de Coombs,
centrifugando e observando a aglutinao:
- controle de Coombs positivo valida o resultado negativo do Coombs direto;
- controle de Coombs negativo invalida a reao e indica que o resultado do Coombs
direto falso-negativo. Neste caso necessrio repetir a tcnica.
Os testes positivos devem ser encaminhados para laboratrio especializado para realizao de
estudos. A presena de aglutinao indica que as hemcias podem estar sensibilizadas por
anticorpos ou por componentes do complemento. Para se definir a especificidade do anticorpo
deve ser aplicado testes de eluio.
Observao:
As amostras de sangue de cordo devem ser lavadas 6-8 vezes antes da realizao do
TDA, para a retirada da gelia de Wharton que pode interferir no resultado do teste.
ORIENTAES IMPORTANTES
INTERPRETAO DAS REAES DE AGLUTINAO
Todas as reaes devem ser graduadas de acordo com um sistema padro familiar a todos
aqueles que trabalham no laboratrio.
Intensidade
4+
3+
2+
1+
(+)
0
TRANSFUSO DE CRIOPRECIPITADO
Armazenamento: < -20 -30oC em cmaras de conservao especficas para esta
finalidade. Dever ser descongelado 37oC (protegido da exposio da gua do banho-maria) e
administrado em at 2 horas aps o descongelamento.
Suas principais funes so reposies de fibrinognio, fator VIII e fator XIII.
No necessrio seguir a tipagem ABO/ Rh do paciente, exceto em recm nascidos,
crianas e mulheres em idade frtil (nestes casos, deve ser ABO compatveis).
TRANSFUSO DE PLAQUETAS
Armazenamento: temperatura ambiente (20oC a 24oC) em agitao contnua.
Procura-se selecionar plaquetas do mesmo grupo sanguneo do paciente.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
Manual de Orientaes em Hemoterapia- Hemocentro de Campinas. Verso 2008.
Patrcia T. Pisciotto,MD. Teraputica Transfusional para mdicos. 3a ed. AABB (Associao
Americana de Bancos de Sangue). 1993.
Guia para uso de hemocomponentes. Ministrio da Sade.Braslia, 2009.
Immunohematology Methods and Procedures. First Edition. 1993 by The American National
Red Cross.