Produo de Antibiticos

No solo, os -os podem conviver em duas relaes principais:

Simbiose: H uma cooperao, sendo que o metabolismo de um -o pode
completar o de outro, pela produo de substncias especificas, como
vitaminas.
Antibiose: H uma concorrncia por alimento, sendo que um -o secreta no
meio substncias que inibem o crescimento de outros.
Ambos os relacionamentos podem ser aproveitados do ponto de vista
industrial. Inicialmente veremos a antibiose.
Os antibiticos so utilizados atualmente no tratamento de infees por
vrus, bactrias, fungos e helmintos. Drogas para o tratamento do cncer,
obesidade, reduo do colesterol e rejeio de transplantes tambm foram
desenvolvidas a partir de antibiticos.
Alm do impacto sobre a medicina humana, os antibiticos causaram
um grande impacto sobre a produo de alimentos de alimentos.
-os produtores de antibiticos
Como j foi dito, vrios -os presentes no solo podem produzir
antibiticos. A seguir um breve histrico das descobertas
Pasteur antibiose 1877
Tyndal antibiose fungos/bactrias 1881
1906 Introduo dos extratos de Pseudomonas pyocyanea. Logo foram
retirados do mercado por problemas de regularidade.
Fleming 1928 descoberta da penicilina
Waskman 1940 trabalho sistemtico com -os de solo
Inicio da era dos antibiticos

39

Principais classes de antibiticos

Os antibiticos so divididos em classes, de acordo com sua estrutura
qumica e -os produtores.
-lactamicos
So a principal classe de antibiticos na atualidade, correspondendo a
cerca de 60% do total. O que marca esse antibiticos o anel -lactama, que
mostrado dentro do quadro. So produzidos por fungos dos gneros
Penicillium sp. e Cephalosporium sp. So sensveis a hidrlise e metais.
Devido sua importncia, sero os antibiticos discutidos em mais
detalhes.
Precursores biosintticos: amino-cidos
R

H
N

H
N

N
O

R1

NH
O
N

O
HO

HO

Penicilinas

Cefalosporinas

O
S
-

O Na+

Monobactans

Tetraciclinas
O que caracteriza esses antibiticos o sistema de quatro anis(tetra
ciclo). So produzidos por Streptomyces sp. So antibiticos bsicos,
sensveis a hidrlise, a luz e metais.
O precursor biosinttico a acetilCoA
H 3C
CH3

HO

CH3

H
OH

NH2
OH
OH

OH

40

Amino glicosidicos
Esses antibiticos so derivados de aucares. O comum a todos eles
possuir um tipo de amino-aucar chamado amino-inositol, mostrado dentro
do quadro. So produzidos por Streptomyces sp.
Precursores biosintticos: Aucares.
NH2
O

HO
HO

NH2
O

H2N
O

HO

NH2

HO

HO

OH

O
NH2

NH2

H
OH

Neomicina

Macrolideos
Esses antibiticos possuem um anel macrociclico do tipo lactona, ao
qual esto ligados aucares. Esses antibiticos tem natureza bsica so
sensveis a hidrlise.
Acetil coA
O
H3C

CH3

OH

OH

H3C

CH3

OH
H3C

H 3C

CH3

HO

H3C

CH3
O

H 3C

O
CH3

Aucares

CH3
O

CH3

OH

Eritromicina Streptomyces erythreus

41

Rifamicinas
So antibiticos macrociclicos em que um anel naftaleno incorporado
a estrutura do macrociclo. So produzidos por Streptomyces mediterranei. A
rifanpicina, mostrada abaixo, um antibitico semi sinttico, ou seja,
transformado quimicamente aps a fermentao. So utilizados no
tratamento da lepra e tuberculose.
CH3

CH3

HO

O H3C
H3C

OH
OH

H3C

O
OH

CH3

CH3

NH

H3C
O
OH

CH3

N
CH3

Polipeptideos
Vrios antibiticos so peptideos ciclicos, como a valinomicina,
mostrada abaixo. So utilizados em tratamento tpico, por serem muito
txicos.
CH3

H3C
O
CH3

H3C

O
NH
H3C
CH3

O
HN

CH 3

CH3

H3C

HN

CH3

O
HN
H3C

H3C

H 3C

CH3

CH3

CH 3

H
N

N
H

CH 3

O
H3C

CH 3

O
H3C

CH3

Valinomicina Streptomyces fulvissimis

42

Glicopeptideos
So antibiticos que vem de uma via de biosintese mixta, que envolve
aucares e amino-cidos. A vancomicina, mostrada abaixo, foi isolada de
Streptomyces orientalis, fungo natural da Indonsia. Apesar disso, sua
patente pertence a Lilly. Mais abaixo mostada a bleomicina, antibitico
isolado de Streptomyces verticillus. Esse antibitico usado no tratamento
do cncer.
OH

NH2

H3C

HO

HO

OH
O
H3C

O
Cl

O
O

Cl
H
N

HO

OH

O
N
H

HN
HO

O
H
N

H
N
H
O

NH
NH

CH3

H
O

H3C

H
NH2

CH3

O
OH
HO

OH

Vacomicina
H2N

O
NH2
NH

O
O

NH2

CH3
O

H2N

O
CH3

NH

HO

NH
NH

HN
NH

CH3

HO

CH3

N
S

H3C

CH3

N
O O

HO

N
H

OH
OH

OH

OH

OH
O
O

H2N

Bleomicina

43

Polienicos
So antibiticos que apresentam vrias ligaes duplas. Tais
antibiticos so usados no tratamento de micoses, como a nistatina,
produzida pelo fungo Streptomyces nouersei, originado das Filipinas. A
patente pertence a Cyanamid.
OH
H3C
HO

OH

OH

CH3

OH

OH

OH

OH

O
OH

H3C
O
CH3

OH

OH
NH2

Anfenicois
O cloranfenicol, mostrado abaixo, o principal antibitico dessa famlia.
Devido a sua estrutura relativamente simples, um dos poucos antibiticos
em que o processo sinttico pode competir com a fermentao. Foi isolado
inicialmente de Streptomyces venezuelae. A patente pertence a ParK Davis.
OH

OH

Cl
O

HN

Cl
O

44

Aprimoramento de cepas para a produo de antibiticos

Os -os isolados a partir de fontes naturais produzem antibiticos em
baixas concentraes. Por esse motivo, no inicio da era dos antibiticos o
preo dos produtos era muito elevado. Para melhorar o rendimento da
produo um dos trabalhos que foi desenvolvido foi a aprimoramento de
cepas, utilizando tcnicas clssicas de induo de mutaes. Um exemplo
o desenvolvimento de cepas produtoras de penicilina
Penicillium crisosenum
NRRL (70UI/ml)
seleo
NRRL B25 (200UI/ml)
raio X
1612 (500 UI/ml)
UV
Q176 (750UI/ml)
UV
47-638
s, mostarda
49-133 (2000UI/ml)
vrias selees
20000 UI/ml

Como pode ser visto, o trabalho de melhoramento resultou em cepas

altamente produtivas. As mutaes provocam o aumento da produo de
antibiticos das seguintes maneiras:
Aumentam a expresso das enzimas responsveis pela biosintese do
antibitico.
Modificam os stios de controle alostrico das enzimas que produzem os
antibiticos.
Diminuem a expresso de enzimas que degradam os antibiticos e
precursores de antibiticos.
45

Meios para a produo de antibiticos

Cada -os tem um meio especifico para seu crescimento, de modo a
maximizar a produo do antibitico com um custo aceitvel. Na produo de
-lactamicos o meio de gua de milho se mostrou o mais promissor, sendo
usado at hoje.
gro de milho

limpeza mecnica

gua a 50oC - 48h

SO2

Slidos
Vrias
etapas

gua de milho
diluida
Evaporador

- Oleo de milho
- Maizena
- Karo

gua de milho
concentrada

A gua de milho concentrada tem a seguinte composio mdia:

Componente
Slidos totais
N total
cido lactico
ucares totais
SO2
Cinzas
pH

%
50-55
3,5 4,5
15 28
0 8,0
0,1
39
3,5 4,5

Amino-cidos
Alanina
Arginina
cido glutmico
Leucina
Prolina
Isoleucina
Treonina
valina
Fenilalanina
Metionina
Cistena

(% do N total)
25
8
8
6
5
3,5
3,5
3,5
2
1
1

Um micro constituinte da gua de milho muito importante a feniletil

amina. Sua importncia ser discutida mais adiante.

46

A formulao bsica de um meio para a produo de penicilinas

mostrada abaixo:
Kg/m3
10
20-50
15-50
0-5
0-1
10
0-4
0-0,25
0-0,04
0-0,02
A
B
6,5 7,0 c

Componente
glicose
lactose
Slidos da gua de milho
NaNO3
Na2SO4
CaCO3
KH2PO4
MgSO4
ZnSO4
MnSO4
cido fenil actico
Anti espuma
pH

A- depende do teor de feniletilamina na gua de milho

B- depende do agente utilizado
C- a correo feita aps a esterilizao

Processo fermentativo
Biosintese da penicilina
Vrios estudos foram feitos para acompanhar a biosintese da
penicilina. A biosintese da penicilina comea pela produo dos amino-cidos
precurssores. Os amino-cidos so a valina, a cistena e a lisina.
A biosintese da cisteina comea com o 3-fosfo glicerato, intermedirio da via glicoltica.
OH
O

OH

OH

NAD+

OH

HO

O
O

NADH + H+
OH

OH

OH

O
O

OH

H2N

H2N

OH

O
O

O
OH

OH

OH
OH

OH
O

H2S

OH
OH

OH

OH

AcetilCoA

OH
O

H2N

H2N

SH
O

O
O

CoA

H3C
OH

H2N

OH

CH3

Existem duas vias alternativas na biosintese, que passam por homocistena.

47

OH

OH
O

OH

Rearranjo
O

CH3
O

HO

HO

CH3

CH3 CH3
O

CO2

CH3

NADH + H+

NAD+

OH

OH

O
O

CH3

OH

H2N

OH

H2N

CH3

OH

CH3

O
O

CH3

O
OH

Biosintese da valina em P. crisogenum. A biosintese comea com duas molculas de

piruvato, intermedirio que vem da via glicolitica.

OH

OH

CoA

OH

Rearranjo

AcetilCoA

O
OH

OH
HO

HO

OH

OH

OH

NAD+

NADH + H+

OH
O
O
H2N

OH
OH

O
HO

NH2

OH

HO

OH
HO

OH
O
O

OH

CO2

O
OH

Biosintese do cido amino adipico. O primeiro substrato vem do ciclo de Krebs. Essa via
sofre um controle alostrico muito forte por lisina.

48

Biosintese da Penicilina
OH
OH
O
NH2

HS
H3C

HS

H2N

CH3

H2N

H
N

CH3
N
H

OH
OH

HS

OH

H3C

H2N
O

NH2

OH

H3C

CH3

N
H

OH
O

OH

OH
H
N

H
N

SH

H3C

O
NH2

CH3

NH2

CH3

N
H

O
CH3
HO

OH
O

O
OH
H
N

OH

SH

H
N

O
NH2

CH3

O
NH2

CH3

CH3
CH3

N
O

HO

OH

HO
HN

O
H
N

CH3

OH

CH3

N
O

O
HO

As etapas da biosintese da penicilina. Forma-se primeiro um dipeptideo entre a valina e a

cistena, sendo depois incorporado o cido aminoadipico. O sulfeto da cistena oxidado
a tialdeido, e em seguida ocorre a primeira ciclizao, formando o anel b-lactamico. Em
seguida a cadeia lateral da valina oxidada, formando o derivado insaturado. Esse
derivado passa pela segunda ciclizao, formando o anel tiazol. Observe que ocorre a
inverso da configurao da valina. Na ltima etapa a cadeia lateral modificada,
eliminando-se o cido aminoadipico e formando vrios tipos de amidas. As penicilinas
naturais so mostradas abaixo.

49

Penicilinas naturais

H
N

CH3

O
O

CH3

CH3

H
N

H
N

CH3

H3C
N

CH3

HO

CH3

O
HO

O
HO
H
N

O
HO

S
N

CH3
CH3

H
N

H3C
O

CH3
CH3

HO

HO

As penicilinas naturais formam-se em propores variadas,

dependendo do meio de crescimento. Foram designadas com letras
maisculas, de acordo com a cadeia lateral. gua de milho tende a
enriquecer o produto com a G. gua de milho e cido fenilactico no meio
formam exclusivamente a G.
NH2

OH

Produzir uma nica penicilina facilita os processos de purificao.

50

Controle durante a produo

Terminada a fase da fermentao, inicia-se a fase de purificao. Para

melhorar o rendimento da fermentao/purificao, a estabilidade das
penicilinas foi estudada.
Estabilidade de penicilinas
H
N

CH3

H
N

OH
O

CH3

HN

CH3

OH

CH3

HN

HO

HO

HO

-CO2

CH3

Hg+2

OH
O

H
N

H3 O +

CH3

CH3

H
N

HS

CH3

HN

O
O
HO

CH3

S
H

O
H2N
OH

CH3

N
CH3

CH3

O
HO

O
HO

-CO2
CH3

S
N

CH3

O
HO

HS

CH3

N
CH3

O
HO

A temperatura acelera todos os processos acima.

51

Purificao Etapas iniciais

52

Purificao Etapa finais

Melhoras da purificao
Processos de melhora esto em constante desenvolvimento nas
empresas. Alguns exemplos so:
Troca das extraes cido-base por colunas de troca ionica
Troca de extraes lquido-lquido por extrao em fase slida

Problemas associados a purificao

- Estabilidade, controle de pH, temperatura e umidade residual
- Resduos de solventes orgnicos
- Contaminao por bactrias. Bactrias podem produzir enzimas que
hidrolizam o antibitico.

53

Antibiticos semi-sintticos
comum os antibiticos naturais no apresentarem as propriedades
farmacolgicas ideais. Por esse motivo, foram desenvolvidos os antibiticos
semi-sintticos. Por meio de reaes qumicas, os antibiticos so
modificados para se obter produtos com as propriedades farmacolgicas
adequadas.
As penicilinas semi-sintticas so preparadas a partir de um
intermedirio chave que o 6-APA.
H
N

H
N

H
CH3

H3C

Si
O
HO

CH3

H3C

Cl

CH3

PCl5

Si

CH3

N
H2N

CH3

N
O H C
3

H3C

Amidase

CH3

Cl

CH3

N
O H C
3

CH3

Si
O

MeOH

HO

cido 6-amino penicilinnico

6-APA

CH3

H
S

CH3

H2O

H3C

CH3

H
S

OMe

CH3
CH3

N
O H C
3
Si
H3C

O
O

CH3

Acima so mostrados os dois mtodos de preparo de do 6-APA. O

mtodo enzimtico usa uma amidase, de origem microbiolgica. Apesar de
ser um mtodo direto, a converso baixa. A enzima tem que estar muito
pura, mas pode ser utilizada imobilizada. No mtodo qumico necessrio
um controle muito grande sobre as condies.

54

Preparo da amoxacilina
H

H2N

CH3

H3C
N

CH3

N
O

CH3

H3C
O

Si

HO

H
N

H3C

H
CH3

Si
CH3

CH3

N
O H C
3

Cl

CH3

Si
H3C

CH3

NH 3

Cl

H3C

NH2

H
N

H
S

O
HO

NH3
H3C
CH3

H
S

O
HO

Amoxacilina

CH3

H2O

CH3

N
O

Si

CH3
CH3

N
O H C
3

HO

Si
H3C

O
O

CH3

Ativa por via oral

Padronizao de antibiticos
Mtodo clssico: medida da atividade anti-microbiana, utilizando-se uma
amostra de -o de referencia e antibitico de referencia. No caso da
penicilina G foi estabelecido:
1 unidade = 0,5988 g
Mtodo moderno : Uso de cromatografia lquida de alta eficincia.

55