CRISTALOGNESE DO CLORETO DE COBRE: EFEITO DE EXTRATOS DE SEMENTES DE FEIJOEIRO (Phaseolus vulgaris L.

) *
IBRAHIM OCTAVIO A B R A H O * *

RESUMO

Estudam-se os modelos de cristalizao de cloreto de cobre obtidos

na presena de extratos de sementes de feijoeiro (P. vulgaris L.). So descritos e comparados os modelos obtidos em 11 sries de cristalizao,
com 5 repeties. Os fatores de variao envolvidos so: 3 variedades
(roxinho, pintado, preto), 2 procedncias (solos e soluo nutritiva),
2 processos de obteno de extrato (sementes secas e sementes midas)
e 3 concentraes (0,05:0,5; 0,025:0,5 e 0,025:0,75). A concluso
principal que o cloreto de cobre produz modelos de cristalizao caractersticos e especficos para extratos de sementes de feijoeiro. Menos
especficos so os efeitos de variedade c procedncia, embora alguns
caracteres possam ser assinalados.
INTRODUO

A aplicao do mtodo t Pfciffer a plantas envolve ^MD srie de variveis, cada lima das quais pode, isoladamente, afetar o modelo de cristalizao. So fatores de variao: a espcie, a variedade, a idade da planta, o rgo, a procedncia, a concentrao de
extrato e de cloreto de cobre, o mtodo de obteno do extrato, etc. A pesquisa com o
mtodo consiste, ento, em fazer variar um fator enquanto os demais so mantidos constantes e estudar o seu efeito sobre o modelo de cristalizao. Somente aps essa fase
que se poder cogitar da aplicao do mtodo na soluo de problemas especficos.
O presente trabalho trata da aplicao do mtodo de Pfeiffer a sementes de feijoeiros, levando-se em conta as variveis: variedade, concentrao, procedncia e tipo de
extrato.

REVISO DA LITERATURA

PFEIFFER (1930) foi o primeiro a mostrar que a extrema variabilidade do hbito

de cristalizao do cloreto de cobre, C u C l . 2 H 0 , pode ser usada para caracterizar
solues. Estabelecido que o hbito sensvel e especificamente modificado por substncias presentes na soluo de que o cloreto se cristaliza por evaporao, numerosos
trabalhos tm sido publicados sobre o assunto. A maior parte relata o xito da aplicao do mtodo na diagnose de vrias molstias. Os trabalhos com plantas sO menos numerosos. O prprio PFEIFFER (1930) relata o efeito de adubao sobre o modelo de
cristalizao. Posteriormente (1940), observa diferenas significativas no modelo de cristalizao obtido na presena de extratos de plantas ss e atacadas por fungos.
2

* Entregue para publicao em 3 0 / 1 2 / 1 9 7 5 .

** Departamento de Solos e Geologia, ESALQ - USP.

MORRIS e MORRIS (1938) aplicaram o mtodo a gros de cereais (aveia, trigo e

milho), amido e glicognio. Obtiveram modelos caractersticos para cada tipo de semente, mas o amido obtido a partir de cada um dos cereais produz modelos equivalentes.
Obtiveram, ainda, o que consideram a frao ativa dos extratos, responsvel pelo modelo de cristalizao. MORRIS e MORRIS (1939) comparam os modelos obtidos com
glicognio de origem animal e extrato de milho doce. Concluem que o extrato concentrado do milho doce produz modelo muito semelhante, mas no idntico ao de glicognio animal que, por sua vez produz modelo indistinguvel do de glicognio de milho
doce. Ainda MORRIS e MORRIS (1941) procuram detectar a natureza de substncias
presentes com o glicognio no extrato de milho doce e que afetassem o modelo de
cristalizao. Relatam que pequenas quantidades de protenas podem afetar grandemente o modelo produzido pelo polissacardeo, embora o efeito fosse no especfico.
KRGER (1949), estudando extratos de Hyosciamus niger, verificou que os modelos variam conforme o material seja colhido de manh, tarde ou noite, concluindo
que os de melhor qualidade so de plantas coletadas pela manh. KRGER (1950) apresenta uma srie de dados relativos a modelos de diferentes rgos, de diferentes espcies, a maior parte das quais de carter medicinal. O autor procura correlacionar o
modelo da planta com o do rgo para o qual medicinal.
SELA WRY e SELAWRY (1957) publicam o mais completo trabalho at aqui sobre
a cristalognese do cloreto de cobre e sua aplicao a questes biolgicas. Relatam os
resultados obtidos com cerca de 21.000 sries de cristalizao o que confere experincia suficiente para recomendarem tcnica de cristalizao muito bem estudada. A maior
parte de seus resultados diz respeito ao estudo de substncias puras, medicamentos,
extratos de rgos e, principalmente diagnose por cristalizao. No captulo dedicado
a plantas os autores relatam a influncia de diferentes rgos de diferentes espcies medicinais sobre o modelo de cristalizao. Relatam, ainda, a influncia do tipo de solo e
da natureza da adubao sobre o modelo de cristalizao obtido com extratos de ervilhas.
ABRAHO (1965) aplica o mtodo de Pfeiffer a extratos aquosos de diferentes
rgos (razes, caules, folhas, flores, frutos e sementes) de trs variedades de feijoeiro,
em diferentes estgios de desenvolvimento. Conclui que a melhor relao de concentraes de extrato e de cloreto para ensaios comparativos de 0,05 .,5. Conclui que os
modelos variam especificamente em funo da variedade, rgos e idade da planta.
ABRAHO (1970) aplica o mtodo a sementes de caf, com o objetivo principal de estabelecer as melhores concentraes a serem usadas com esse material. Recomenda o
emprego da tcnica de mistura filtrada e concentraes, por placa, entre 0,05 e 0,075 g,
para extrato, e entre 0,5 g e 1,0 g, para cloreto. ABRAHO (1971) faz uma reviso
crtica de todos os resultados alcanados at ento na aplicao do mtodo de Pfeiffer.
ABRAHO (1971) apresenta um estudo morfolgico sobre a cristalognese do cloreto
de cobre aplicada ao feijoeiro. Observa grande variao na morfologia dos modelos de
cristalizao e introduz alguns novos termos descritivos.

MATERIAL MTODOS

Material

1 Sementes, Foram utilizadas sementes de 3 variedades de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.), obtidas de cultivo em vasos e em soluo nutritiva: roxinho, pintado e
preto.
2 Cmara de cristalizao. Utilizou-se a cmara recomendada por SELAWRY e
SELAWRY (1957), e descrita por ABRAHO (1965) com dimenses 1,60 1,60
2,00 m, paredes duplas e adiabticas, com dispositivo para manter a temperatura
constante at 50C. A cmara dispe de mesa de vidro suspensa, de 0,70 1,50
0,01 m, rigorosamente nivelada, onde se processa a evaporao das solues nas
placas.
3 Placas de cristalizao. Foram utilizadas placas de vidro especialmente montadas
para esse fim segundo recomendaes de SELAWRY e SELAWRY (1957) e modificaes de ABRAHO (1965).
4 - Cloreto de cobre e material fotogrfico. Usou-se cloreto de cobre purssimo p.a.
Merck e filmes 35 mm Kodak Panatomic X e papel Kodabromide F-4, que permitem grandes ampliaes.

Mtodos

1 Tcnica de cristalizao. A tcnica utilizada para ambiente de trabalho, velocidade

de cristalizao, controle de temperatura e umidade, nivelamento, limpeza das placas de cristalizao, obteno do extrato e decurso de cristalizao a que recomendam SELAWRY e SELAWRY (1957), com as modificaes sugeridas por
ABRAHO (1965).
2 Planejamento. Foram efetuadas 11 sries de cristalizao, com 5 repeties, em conjuntos de 4, 4 e 3 sries, num total de 55 placas. Os resultados obtidos nas sries
1 a 4 foram a base para as sries 5 a 8 e os obtidos nas sries 1 a 8 a base para
9 a 1 1 . 0 esquema experimental adotado permitiu, ento, estudar:
a) 2 mtodos de obteno de extrato: de sementes secas e de sementes deixadas
previamente em gua por 6 horas.
b) 3 concentraes diferentes de extrato: cloreto de cobre: 0,05:0,5; 0,025:0,5 e
0,025:0,75.
c) 2 procedncias de sementes: de solos cultivados em vasos, e de soluo nutritiva completa.
d) 3 variedades: roxinho, pintado e preto.

As 11 sries foram as seguintes:

Sries 1 ^ 4 :

sementes secas
sementes midas

solo
soluo nutritiva

Sries 5 a 8:

sementes de solo
sementes de soluo nutritiva

Sries 9 a 11: sementes roxinho

sementes pintado
sementes preto

0,05:0,5

0,0^5:0,5
0,025:0,75

x 0,05:0,5

3 Exame, descrio e protocolo. As placas foram protocoladas, descritas e fotografadas individualmente. A descrio se fez com base nos termos descritivos de SELAWRY e SELAWRY (1957) e ABRAHO (1965, 1971). Para cada espcie foi estabelecido um padro mdio das 5 repeties. De cada placa obteve-se uma fotografia em
tamanho natural e pelo menos 5 com aumento de 3X, de regies da placa de interesse particular. Eventualmente, utilizaram-se maiores aumentos nas comparaes,
com base no arquivo fotogrfico das 290 fotografias obtidas.

R E S U L T A D O S DISCUSSO

Seguem-se as descries das 11 sries e algumas observaes sobre cada conjunto

de ensaios.
1 Sries 1 a 4 . Os extratos foram semelhantes, mais turvos e com mais resduo para
sementes midas, mais para sementes de soluo nutritiva do que de solos.
Srie 1: sementes de solo, secas, 0,05:0,5
Identidade perfeita. Cristalizao bem diferenciada, sem nenhum indcio de cristalizao fibrosa. Centragem regular, coordenao e irradiao boas. Individualidade
comprometida pela cobertura da cristalizao central e pela abundncia de deposies
na periferia, sendo as agulhas de bom calibre. Formas vazias presentes, bem delimitadas, com muitas deposies. Borda bem diferenciada.
Srie 2 : sementes de solo, midas, 0,05:0,5
Identidade perfeita. Cristalizao bem diferenciada, de tipo prprio, com regio
circular de cobertura total em torno do centro. Centragem perfeita. Coordenao e
irradiao boas. Individualidade m na regio do centro, melhorando com a irradiao,
com agulhas de bom calibre. Cristalizao fibrosa ausente. Grande quantidade de deposies. Formas vazias sempre presentes, bem delimitadas, com deposies. Borda bem
diferenciada.
Srie 3 : sementes de soluo nutritiva, secas, 0,05:0,5
Identidade perfeita. As mesmas observaes gerais das sries anteriores so vlidas
aqui, sendo inferiores a coordenao e irradiao. Individualidade pior, tanto na regio

ae alta cobertura como na periferia, com menor calibre das agulhas. Muito maior quantidade de deposies entre as agulhas e no interior de vacolos, sempre presentes e bem
delimitados. As deposies prejudicam a nitidez do quadro e a diferenciao da borda.
Srie 4 : sementes de soluo nutritiva, midas, 0,05:0,5
Identidade perfeita. Mesmas observaes da srie anterior com um excesso de deposies prejudicando o quadro. Novamente se observa o bom aspecto das agulhas e as
formas vazias bem definidas. Borda comprometida pelas deposies.
As sries de 1 a 4 mostram com muita nitidez a influncia especfica do extrato de
sementes sobre a cristalizao do cloreto de cobre. O quadro geral tem caracteres muito
bons, estando ausente cristalizao fibrosa e as agulhas tm excelente calibre.
A grande quantidade de deposies foi uma constante nas 4 sries, exercendo influncia negativa. Ocorrem por toda a placa, freqentemente dendrticas, prejudicando
a nitidez do quadro e a perfeio das formas vazias, estas de ocorrncia sistemtica.
Nenhuma vantagem foi observada atravs do preparo de extrato a partir de sementes deixadas na gua. Pelo contrrio, tal procedimento torna o extrato ainda mais turvo, acarretando maior quantidade de deposies, especialmente para sementes de soluo nutritiva.
A concentrao 0,05:0,5 satisfatria no que diz respeito obteno de modelos
tpicos, de fcil reconhecimento. Caracteres diferenciais podem ser estabelecidos. Outras concentraes, todavia, devero ser ensaiadas, visando diminuio de deposies.
2 Sries 5 a 8 . Em vista dos resultados das sries anteriores, passa a ser usado apenas
extrato de sementes secas, na concentrao de 0,025 g por placa. Para cloreto incluiu-se tambm a concentrao 0,75 g por placa, a fim de provocar uma definio ainda melhor nas formas vazias e na configurao geral.
Srie 5 : sementes de solo, 0,025:0,75
Boa identidade. Tipo de cristalizao muito definido, com centragem perfeita e
coordenao, irradiao boas. Individualidade satisfatria na periferia da cristalizao
central, agulhas de bom calibre. Formas vazias perfeitas, contendo deposies que tambm ocorrem entre as agulhas, em quantidade moderada. Borda bem diferenciada.
Srie 6: sementes de solo, 0,025:0,75
Identidade perfeita com relao ao tipo de cristalizao, com pequenas variaes
de centragem. Boa diferenciao geral, coordenao e irradiao satisfatrias e boa individualidade na periferia da cristalizao central. Formas vazias perfeitas, algumas extremamente bem delimitadas (fig. 1), contendo ou no deposies (figs. 3, 4, 5). Borda
bem diferenciada, com uma estreita faixa de agulhas curtas junto ao anel de vidro.
Srie 7 : sementes de soluo nutritiva, 0,025:0,5
Boa identidade. Cristalizao de bom tipo, bem definido, de centragem regular e
coordenao e irradiao satisfatrias. Identidade regular na periferia da regio central,

que inteiramente coberta. Formas vazias bem delimitadas, pequenas, com deposies.
Estas so generalizadas, abundantes, prejudicando a diferenciao da borda.

Srie 8 : sementes de soluo nutritiva, 0,025:0,75

Identidade perfeita, especialmente para o tipo de cristalizao. Centragem perfeita.
Cristalizao central inteiramente coberta de cristais. Coordenao e irradiao satisfatrias. Individualidade regular na periferia da regio central. Deposies presentes, em
quantidade menor que na srie anterior. Formas vazias de delimitao perfeita, mas
muito pequenas, sem deposies (fig. 2). Borda bem diferenciada, com faixa estreita de
agulhas curtas junto ao anel de vidro.
Os modelos de cristalizao ganharam maior clareza, especialmente os de 0,75 g.
Para sementes de soluo nutritiva, 0,025 g de extrato ainda concentrao alta. Para
qualquer concentrao, todavia, o modelo para sementes sempre de muito bons caracteres e tpico.
Caracteres diferenciais podem ser estabelecidos. Na concentrao 0,025:0,75 verifica-se claramente que as formas vazias nas sementes de solos so maiores que as de
soluo nutritiva, onde so muito diminutas, apesar de bem delimitadas (figs. 1 e 2).
O mesmo ocorre na concentrao 0,025:0,5, com menor nitidez. Tambm a maior
quantidade de deposies nos vacolos de sementes de soluo nutritiva carter possivelmente diferencial entre as procedncias.

3 Sries 9 a 11: Utilizou-se a concentrao 0,05:0,5, recomendada para ensaios comparativos com feijoeiro (ABRAHO, 1965), introduzindo-se 3 variedades da planta
como nova varivel.
Srie 9 : sementes,variedade roxinho, 0,05:0,5
Identidade perfeita. A srie mostra cristalizao de tipo muito definido e constante,
com variaes mnimas entre as repeties. Centragem m ou regular, ocorrendo 3 ou 4
centros, extremamente ntidos, a cada um dos quais se filia uma parte bem definida da
cristalizao. A regio central da placa, praticamente circular, destaca-se com muita nitidez, contrastando com a borda. de cristalizao espessa, com cobertura praticamente
total da superfcie. As agulhas, apesar de seu bom calibre, tm sua individualidade comprometida pela cobertura na cristalizao central, melhorando sensivelmente na periferia
dessa regio, na transio com a borda. Deposies so abundantes em toda a placa, mais
visveis nas regies de maior espaamento das agulhas, na borda e no interior de formas
vazias. Estas esto sistematicamente presentes junto aos centros de cristalizao, sendo
geralmente pequenas e de boa delimitao. Borda larga, de dimenses constantes em toda a circunferncia, demonstrando transio gradativa com a regio central. Constitui-se
de agulhas longas, bem individualizadas e de bom calibre, formando leques no limite
com a cristalizao central. Inteira ausncia de anis concntricos de qualquer tipo e de
ondas. Junto ao anel de vidro uma estreita faixa mostra-se constituda de agulhas curtas.

Srie 10: sementes, variedade pintado, 0,05:0,5 (fig. 6)

Identidade perfeita quanto ao aspecto geral do modelo, comprometida por variaes de centragem, nmero de centros e tamanho de formas vazias. Centragem de regular a m, com 2 a 4 centros muito ntidos e caracterizados, geralmente bem afastados.
Diferenciao geral, coordenao e irradiao boas. A cristalizao central de tipo
muito definido, espessa, destacando-se bem na placa. Nessa regio a individualidade no
boa, em virtude da cobertura praticamente total. Na transio com a borda, com o aumento de espaamentos entre as agulhas, a individualidade muito melhor. Deposies
generalizadas e abundantes, bem visveis na regio de transio, na borda e no interior
dos vacolos. Estes sempre ocorrem, junto aos centros, de tamanho varivel, muito bem
delimitados. Borda bem diferenciada, de largura constante, constituda de agulhas longas, com leques na transio da cristalizao central. de cristalizao fina, agulhas
longas, bem individualizadas, com tendncia a dar anis concntrics. Uma descontinuidade observada entre a borda e uma estreita faixa perifrica, de agulhas curtas, junto
ao anel de vidro.
Srie 1 1 : sementes, variedade preto, 0,05:0,5
Identidade perfeita, principalmente entre 4 repeties, com desvio na ltima apenas para nmero de centros. Centragem perfeita, cem apenas um centro de cristalizao, muito ntido, coincidindo ou no com o centro geomtrico da placa, do qual as
agulhas irradiam para constituir toda a cristalizao Diferenciao geral, coordenao
e irradiao muito boas. Regio central de cobertura grande, de tipo definido, praticamente circular em torno do centro. Nessa regio a individualidade das agulhas no
boa, apesar da sua tendncia para bom calibre. Essa regio de dimetro relativamente
pequeno. Sua transio com a borda propriamente dita uma faixa intermediria larga, onde as agulhas so muito espaadas, de bom calibre e muito boa individualidade.
Deposies generalizadas, mais visveis na faixa de transio, na borda e no interior de
vacolos. Estes ocorrem sempre bem delimitados. Borda bem diferenciada, de largura
constante, constituda de agulhas longas, ramificadas em leques no limite com a faixa
de transio. Inteira ausncia de anis concntrics, de ondas e de cristalizaes transversais.

CONCLUSES

1 Nenhuma vantagem foi assinalada na obteno de extrato atravs de sementes

midas. Pelo contrrio, seus extratos so mais turvos e a suspenso acaba por se
traduzir em tal quantidade de deposies que prejudica o modelo de cristalizao.
2 Nas concentraes estudadas, deve-se recomendar 0,05:0,5, uma vez que a mais
indicada para ensaios comparativos com outros rgos e produz modelo caracterstico. Nada impede, porm, o emprego da concentrao 0,025:0,75, pois os modelos melhoram e as deposies diminuem, especialmente para sementes de soluo
nutritiva.
3 0 modelo para sementes caracterstico, no se confundindo com o de nenhum
outro rgo. Os caracteres mais evidentes e que permitem seu pronto reconhecimento so o tipo da cristalizao central, a diferenciao e largura da borda, o calibre das agulhas, a faixa de transio entre a regio central e a borda, a inteira ausncia de anis concntricos e ondas. As sries de sementes assumem, ento, um carter tpico e sem indcios de caracteres perturbadores, como cristalizao fibrosa
e espessamentos. Apenas a espessura da cristalizao central e a quantidade de deposies seriam desejveis diminuir.
4 Caracteres diferenciais entre variedades no so numerosos e seguros. O mais evidente a perfeita centragem que diferencia a variedade preto das demais. Essa variedade apresenta, tambm, uma regio de transio entre a borda e a cristalizao
central mais larga que as outras e com perfeita individualidade das agulhas, decorrente de seu maior espaamento. Tendncia para formao de anis concntricos s se observa para pintado e cristalizaes transversais s foram constatadas para
roxinho, embora sem constncia. Apenas para roxinho as agulhas da borda atingem
sistematicamente a periferia, sem deixar uma pequena faixa de descontinuidade,
observada para preto e pintado. As formas vazias apresentam variaes entre uma
srie e outra em tamanho e nmero, mas variaes dentro da srie impedem que se
forneam indicaes mais precisas.
5 A rea das formas vazias parece ser uma clara tendncia de distino entre procedncias diferentes de sementes de feijoeiro sendo maiores nas de solos do que nas
de soluo nutritiva. A quantidade de deposies, todavia, maior para sementes
de soluo nutritiva. Tratando-se de caracteres quantitativos, um estudo mais especfico sobre o assunto recomendado.

SUMMARY

EFFECT OF BEAN SEED (Phaseolus vulgaris L.) EXTRACT ON THE CRYSTALO

GENESIS OF COPPER CHLORIDE
Crystallization models of copper chloride obtained in the presence of bean seed
extracts (P. vulgaris L.) are studied. The models obtained in 11 crystallization series,
replicated 5 times, are described and compared. The sources of variation considered are
as follows: 3 bean varieties (roxinho, pintado, preto), 2 origins (soils and nutrient solution), 2 extracting procedures (dry seeds and humid seeds) and 3 concentrations (0,05:
0,5; 0,025:0,5 and 0,025:0,75). The main conclusion is that copper chloride yields
crystallization models that are specific and characteristic for bean seeds extract. The
effects of variety and origin though less pronunced contribute to the appearance of
some characters.

LITERATURA CITADA

ABRAHO, I.O., 1965. Cristalognese do cloreto de cobre. Aplicao do mtodo de Pfeiffer ao

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