Atividade antitumoral de folhas de Himatanthus drasticus (Mart.

)
Plumel Apocynaceae (janaguba) no tratamento do sarcoma 180 tumor

Resumo
Himatanthus drasticus, conhecida popularmente como janaguba, tem uma longa histria
de emprego na cura do cncer no nordeste brasileiro, porm quase sem registro na
literatura. O objetivo desse trabalho foi investigar a atividade antitumoral do extrato
bruto metanlico das folhas deHimatanthus drasticus frente ao modelo experimental
Sarcoma 180 e avaliar sua toxicidade aguda. A determinao da toxicidade aguda foi
realizada segundo a metodologia da OECD 423 e o transplante do tumor slido de
sarcoma 180 foi realizado seguindo a metodologia de Stock. O extrato apresentou baixa
toxicidade nas doses testadas (50, 300 e 2000 mg/kg) por via oral. A anlise
histopatolgica apresentou alteraes em nvel heptico, pulmonar, bao e renal. A
atividade antineoplsica apresentou inibio tumoral significativa em relao ao grupo
controle nas doses de 300 mg/kg e 400 mg/kg de peso do animal com um percentual de
inibio de 67.7% e 68% respectivamente. Na menor dose analisada, 200 mg/kg, o
percentual de inibio tumoral foi apenas de 32.8%.

Palavras-chave: Himatanthus drasticus/atividade antitumoral; Himatanthus

drasticus/toxicidade aguda; Janaguba/atividade antitumoral; Sarcoma 180/estudo
experimental.
INTRODUO

As plantas contm uma grande variedade de compostos que ter uma

actividade biolgica importante incluindo anticancro atividade (Ramakrishna et ai.,
1984). Vrios medicamentos usados para o tratamento do cancro so derivados de
produtos naturais, tais como Paclitaxel, um diterpenide de Taxus brevifolia (Souza,
2004), alcalides da vinca tais como vincristina e vinblastina de Catharanthus roseus
(Almeida et al., 2005), natural camptotecina alcalide da Camptotheca acuminata (Silva
et al., 2003), entre outros. Portanto, a anlise de plantas fundamental para desenvolver
de forma purificada e bem definida compostos qumicos para medicamentos controlados
de dose.
A determinao da toxicidade de extratos de plantas relevante porque no
h nenhum efeito benfico nico considerando biotransformao ocorre, e estes
produtos podem ter efeitos secundrios txicos que so prejudiciais para a sade
humana (Hilary et al., 2004).
A planta do Himatanthus (Apocynaceae) genus uma rvore de mdio
porte, que cresce em terra firme no sul Amrica do Sudeste do Brasil para os franceses
Guiana (Plumel, 1991). Na Floresta Nacional do Araripe, sul do Estado do Cear, as
espcies encontradas H. drasticus, conhecido como janaguba. Seu ltex tronco de
madeira popularmente utilizado no tratamento de cncer no Nordeste do Brasil Regio
(Amaro et al., 2006a).
Para nosso conhecimento, apenas trs papis tm sido relatados na literatura
sobre H. drasticus. No entanto, no haja estudos que descrevem suas folhas ou
actividade anti-tumoral (Amaro et ai, 2006a.; Colares et al., 2008).
Em 2008, Colares et al. isolado e identificado um extrato etanlico de H.
drasticus casca do caule, a saber, triterpene cinamato lupeol que provavelmente uma
substncia com potencial para a actividade anti-tumoral. o ativo ingrediente de H.
sucuuba tambm foi isolado (um iridide fulvoplumierin) e esta actividade tambm
mostrou contra o O carcinoma epidermide humano da nasofaringe (Perdue, Blomster,
1978).
Neste Estudo, a Toxicidade oral, aguda e antitumoral atividade contra o
Sarcoma 180 do tumor fazer metanlico bruto extrair Folhas drsticas foi Himatanthus
descrito.

EXPERIMENTO

Material vegetal

Folhas de Himatanthus drasticus foram recolhidos em Dezembro de 2007

em Araripe National Forest, Jardim, Cear, Brasil, e identificados por Marlene Barbosa,
PhD. Uma amostra da amostra (N 48,961) foi depositado na herbrio Geraldo Mariz,
da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).
Preparao do extrato

As folhas foram secas a temperatura ambiente em fresco ar durante sete

dias, e, em seguida, cortada em pequenos fragmentos. O material de amostra (500 g) foi
macerado com metanol temperatura ambiente (30 2 C). trs extraes foram feitos
permitindo 48h para cada extrao macerado. O solvente foi evaporado a 60 C sob
presso reduzida e secou-se em alto vcuo durante 10 horas proporcionando o produto
em bruto extrair (100,6 g).

Animais

Camundongos Swiss machos 60 dias de idade albinos pesando entre 25 e 35

g, foram alojados sob condies de temperatura controlada condies (22 2 C) e 12h
ciclo claro / escuro. Comida e gua estavam disponveis ad libitum antes e durante todo
o experimentos. Todos os estudos foram aprovados pela Research Comisso de tica
(CEEA) da Universidade Federal de Pernambuco (n 23.076,03566 / 2008-71), de
acordo com o Instituto Nacional de Sade "Guia para o Cuidado e Uso de Animais de
Laboratrio "(NIH publicao n . 86-23, 1985).

Toxidade oral aguda

A toxicidade aguda do extracto metanlico do folhas de Himatanthus

drasticus foi avaliada em ratinhos usando o up-and-down procedimento (OECD, 423).
Masculino ratos, (pesando 25-35 g, com idade de 6-8 semanas) recebeu uma nica
administrao por sonda inicial contendo uma dose de 50 mg / kg de Himatanthus folha
drasticus extrato metanlico. Trs animais foram usados em cada passo. O nvel de dose
utilizado como o A dose inicial foi selecionado a partir de um dos quatro nveis fixos:
50, 300 e 2000 mg por kg de peso corporal. Os animais foram continuamente
observados para desenvolvimento de toxicidade durante as primeiras 4 horas aps a
administrao de cada dose. Finalmente, o nmero de sobreviventes foi observada aps
24 horas, e estes animais foram ento mantidos vivos durante mais 14 dias, enquanto
observaes foram feitas numa base diria. A experincia foi ento repetida aps o fim
do primeiro ensaio.

Estudos histopatolgicos

A anlise macroscpica e exame histopatolgico dos corpos dos animais

submetidos toxicidade aguda em doses mais elevadas foram realizadas. O fgado, rins,
bao e os tecidos pulmonares foram excisados e lavados com um frio de gelo- soluo
salina normal, a fim de remover o sangue e detritos aderir aos tecidos. Estes tecidos
foram ento fixadas numa soluo de formalina a 10% durante 24 h. O fixador foi
removido lavando as amostras cuidadosamente com gua corrente da torneira durante a
noite. Aps a desidratao atravs de uma srie gradual de alcois, os tecidos foram
limpos em metil-benzoato de metilo, e embebido em cera de parafina. As seces foram
cortadas 7 mm de espessura e corados com hematoxilina e eosina (Michelany, 1980).
Aps desidratao e de limpeza, as lminas foram montadas e observadas ao
microscpio de luz para mais detalhes.

Atividade antitumoral

O transplante do tumor slido de Sarcoma 180 foi realizado de acordo com

a metodologia Stock et al. (1955). O tratamento foi iniciado 48 horas posttumor
transplante. Os animais foram divididos em grupos (N = 5): grupo normal
(ciclofosfamida, CTX, 10 mg / kg), grupo de controlo (NaCl a 0,9%) e os grupos
tratados I, II e III, que recebeu o extrato metanlico de janaguba, em 200, 300 e 400
mg / kg doses, respectivamente. Todas as substncias tinham sido gerida por
administrao oral durante os sete dias anteriores. No oitavo dia, o os animais foram
sacrificados e os seus tumores e removida pesados. Subsequentemente, a diferena entre
o tratada grupos e controle de grupo foi calculada para dar o ndice de inibio do tumor
de acordo com a frmula abaixo.
TWI% = C - T x 100/C
Onde:
TWI% = inibio do peso do tumor (%)
C = peso mdio do tumor nos animais do grupo de controle
T = peso mdio do tumor nos animais tratados do grupo

Anlise estatstica

Os resultados so apresentados como a mdia S.E.M. e significncia

estatstica entre os grupos foi analisada por meio de anlise de varincia seguida do teste
t de Student. Os valores de P <0,05 foram considerados significativos.

RESULTADOS E DISCUSSO

Toxidade oral aguda

No estudo de toxicidade aguda, os animais eram tratados com uma nica

dose do extracto em questo para uma perodo de aproximadamente 24 horas (Simes,
2003). a via oral administrao do extrato metanlico de H. drasticus folhas em doses de
50 e 300 mg no apresentou alterao em os animais durante os primeiros 30 minutos
de observao. O animais permaneceu sem alteraes aps 14 dias. Dentro os primeiros
15 minutos de administrao da dose de 2.000 mg / kg, os animais apresentaram
excitabilidade e agitao incluindo exoftalmia, agitao, vibrissa, estereotipado e do
crculo movimentos. Eles tambm apresentaram aumento respiratria taxa, posio na
garra, edema focinho, a falta de fugir tentativa. Aps este perodo, depressivos, tais
como reaes de reduo o trem posterior e prostrao tornou-se evidente. Depois de 14
 dias, no foram observados mortalidade ou mudanas no comportamento. A
excitabilidade seguido por comportamentos depressivos sugere uma reduo na
quantidade de neurotransmissores estimulantes durante a fase de excitao (Fai et al.,
2005). Durante o perodo de observao, os animais no apresentaram nenhuma
variao nas suas aparncia geral. Estes resultados obtidos para metanlico extrair a
partir de folhas drasticus H. estavam de acordo com as normas estabelecidas para a
OCDE 423, e apresentou baixa toxicidade para a administrao oral de 2000 mg / kg. o
general resultados de toxicidade oral aguda so mostrados na Tabela I.

Estudos histopatolgicos

Corpos dos animais foram macroscopicamente preservada. O exame

histopatolgico dos fgados apresentou congesto heptica em sinusides e o navio
portal, pericentro globular micro-esteatose, a proliferao celular Kuffe, necrose difusa
hepatcitos e infiltrado mononuclear. Dentro os rins, os achados foram atrofia
glomerular, cpsula espessamento, renal congestionamento crtico-medular, hemorragia
e infiltrado mononuclear. Os achados pulmonares foram alveolar espessamento do
interstcio, pulmonar intensa congesto, infiltrado mononuclear, pneumcito do tipo II
proliferao, enfisema pulmonar, o edema e a embarcao espessamento. No bao, os
autores observaram congestionamento polpa vermelha, hiperplasia da polpa branca e
clulas apoptticas no centro germinativo.

Atividade antitumoral

Os animais de laboratrio experimental representam um valioso sistema

para a compreenso do mecanismo de cncer em humanos. A maioria do actualmente
aceite conceitos de tumorignese so fortemente influenciados pela modelos de
desenvolvimento de cncer em camundongos. Organismos ratos so modelos acessveis
e possuem sistemas semelhantes aos seres humanos (Kamb, 2005). Sarcoma 180 um
tumor original do mouse e uma das linhagens celulares mais frequentemente utilizadas
na pesquisa da actividade anti-tumor (Lee et al, 2003;. Magalhes et al., 2006).
A atividade antitumoral do extrato metanlico de H. drasticus folhas foi
testado por administrao oral contra o modelo experimental do Sarcoma 180. figura 1
mostra o peso mdio dos tumores no grupo de controlo (NaCl a 0,9% de soluo), grupo
padro (ciclofosfamida, CTX, 10 mg / kg), tratado I (200 mg / kg), tratada II (300 mg /
kg) e tratou-se grupos III (400 mg / kg). O grupo padro inibio do crescimento
tumoral significativa apresentada de 70,4% em comparao com o grupo de controlo.
Os grupos tratados tambm apresentaram uma reduo no crescimento do tumor em
relao para o grupo de controlo; No entanto, as doses de 300 mg / kg e 400 mg / kg
demonstrou tambm o crescimento tumoral acentuada atividade de inibio de 67,7% e
68%, respectivamente. Em a inibio a 200 mg / kg de dose, o crescimento do tumor era
de 32,8%.
A anlise macroscpica dos animais do grupo de controlo revelou ascite
hemorrgica; slido e invasiva tumor, adere a epiderme e bem vascularizado. No
entanto, nos grupos tratados, apenas o grupo tratado I (200 mg / kg) apresentou ascite,
tumor slido e invasiva, aderido a epiderme e bem vascularizado. O II Tratada (300
mg / kg) e tratou-III (400 mg / kg) os grupos apresentaram tumores slidos bem
descritas que foram menos vascularizado que os tumores do grupo de controlo.
O antitumor janaguba mecanismo subjacente actividade ainda no foi
elucidado. Sabe-se que o Himatanthus gnero possui iridide e triterpene em sua
qumica constituio, e uma dessas substncias provavelmente responsvel para a
actividade. Estudos detalhados esto sendo realizados para esclarecer a atividade
antitumoral de folhas de H. drasticus, bem como para determinar novas vias de
administrao de drogas.
Com base nestes resultados, podemos concluir que o extrato metanlico das
folhas drasticus H. possui baixo toxicidade e actividade anti-tumoral significativa nas
doses testadas administrada por via oral. Os resultados para a actividade antitumoral
eram muito bons em relao ao controle ciclofosfamida, a droga sinttica amplamente
utilizados em protocolos de quimioterapia. O extrato tambm foi encontrado para ser
seguro em termos de aguda toxicidade em modelos animais experimentais
Considerando que as futuras estudos so necessrios sobre a sua toxicidade crnica,
mutagenicidade e de carcinogenicidade para determinar a segurana e os benefcios de a
planta.

AGRADECIMENTOS

Os autores gostariam de agradecer ao Conselho Nacional de

Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq-Brasil) para apoio financeiro e bolsas
de estudo. Os autores tambm estender os seus agradecimentos ao Dr. Marlene Barbosa
para identificao botnica.