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Simone Weschenfelder
Simone Weschenfelder
(Qumica Industrial de Alimentos/UNIJU-UERGS)
Porto Alegre
Fevereiro de 2009
Simone Weschenfelder
(Bacharel em Qumica Industrial de Alimentos/UNIJU-UERGS)
DISSERTAO
Caracterizao de kefir tradicional quanto composio fsico-qumica, sensorialidade e
atividade anti-Escherichia coli.
Aprovada em:...../......./..........
Pela Comisso Examinadora:
ADRIANO BRANDELI
Prof. Dr. Guiomar Pedro Bergmann Diretor do Instituto de Cincia e
Faculdade de Veterinria/UFRGS Tecnologia de Alimentos. ICTA/UFRGS
AGRADECIMENTOS
Agradeo a Deus;
Ao orientador e amigo professor Dr. Jos Maria Wiest.
A co-orientadora professora Dra. Heloisa Helena Chaves Carvalho.
As bolsistas e mestrandas do grupo de pesquisa.
Aos professores e funcionrios do PPGCTA.
A minha famlia.
Aos meus amigos.
Dedico este trabalho a minha famlia e em
especial a minha me, Ida Maria, que sempre
esteve do meu lado.
WESCHENFELDER, S. Caracterizao de kefir tradicional quanto composio fsico-
qumica, sensorialidade e atividade anti-Escherichia coli. 72 p. Dissertao (Mestrado em
Cincia e Tecnologia de Alimentos) - Instituto de Cincia e Tecnologia de Alimentos,
Universidade Federal do Rio Grande do Sul, (2009).
RESUMO
Kefir um alimento fermentado resultante da dupla fermentao do leite pelos gros de kefir,
sendo estes gros uma associao simbitica de leveduras, bactrias cido-lticas e bactrias
cido-acticas. Do kefir pode-se obter o kefir leban e o soro de kefir, ambos resultantes da
filtrao do kefir em tecido de algodo esterilizado, por 24 horas, a 25C 2C. Este estudo
tem por objetivos caracterizar e avaliar o comportamento de diferentes amostras de gros de
kefir tradicional e de derivados (kefir, kefir leban e soro de kefir) quanto s caractersticas
fsico-qumicas, sensoriais, inteno de compra e atividade anti-Escherichia coli, quando
inoculados em diferentes concentraes, padronizando-se o tipo de leite, o tempo e a
temperatura de incubao, a maturao e a filtrao. Foram desenvolvidas anlises fisico-
qumicas, a avaliao sensorial atravs do teste de aceitabilidade e preferncia e a
determinao de atividade anti-Escherichia coli. Os resultados demonstraram que a tcnica de
manipulao e padronizao das amostras foi eficaz na obteno de produtos com
caractersticas idnticas, visto a reprodutibilidade dos resultados. Tambm indicam que o
volume de leite utilizado na incubao influencia significativamente nas caractersticas do
produto final. O kefir leban obtido do experimento apresentou consistncia cremosa,
semelhante ao queijo quark, aroma caracterstico de laticnio fermentado, cor amarela
esbranquiada, sabor cido e boa espalhabilidade. Manteve os teores de clcio contidos no
leite aps o processamento, concentrou as protenas e gorduras, alm de no conter lactose.
Apresentou boa aceitabilidade e 58% de inteno de compra, quando utilizado na elaborao
de formulaes alimentares tipo antepasto. O kefir e o soro de kefir apresentaram Intensidade
de Atividade de Inibio Bacteriana/bacteriostasia e Intensidade de Atividade de Inativao
Bacteriana/ bactericidia mximas frente ao inculo bacteriano Escherichia coli (ATCC
11229), testado em concentraes 108 UFC/mL.
Palavras-chave: gros de kefir, kefir, kefir leban, soro de kefir, caractersticas fisico-
qumicas, sensoriais, atividade antibacteriana.
WESCHENFELDER, S. Characterization of traditional kefir on physicalchemical
composition, sensorial characteristic and anti-Escherichia coli activity. 72 p. Master
Dissertation (Masters Degree in Food Science and Technology) - Institute of Food Science
and Technology, Federal University of Rio Grande do Sul, (2009).
ABSTRACT
Kefir is a fermented food resulting from the double fermentation of milk by kefir grains, these
grains are a symbiotic association of yeasts, acid-lactic and acetic-acid bacteria. From kefir
can be obtained kefir leban and kefir whey, both from the filtration of kefir in sterile cotton
cloth, during 24 hours at 25C 2C. This study aims to characterize and evaluate the
behavior of different samples of traditional kefir grains and products derived (kefir, kefir
leban and kefir whey) on the physicochemical composition, sensorial characteristic, intent to
buy and anti-Escherichia coli activity, when inoculated in different concentrations,
standardized the type of milk, the time and temperature of incubation, the maturation and
filtration processes. Were developed physical and chemical analysis, the sensory evaluation
using the tests of acceptability and preference and determination of anti-Escherichia coli
activity. The results showed that the technique of handling and standardizing of the samples
was effective in providing products with similar characteristics as the reproductibility of
results. It is also indicate that the volume of milk used in the incubation influence
significantly the characteristics of the final product. The kefir leban obtained in the
experiment showed creamy consistency, similar to quark cheese, characteristic aroma of
fermented dairy, whitish yellow color, acid flavor and good spread. He maintained the
calcium contained in milk after processing,he concentrated protein, and don't contain any
lactose. The product showed good acceptability and 58% of purchase intention, when used in
the preparation of food formulations such hors doeuvre. The kefir and the kefir whey
showed maximal intensity of bacterial inhibition activity/bacteriostasys, and intensity of
bacterial inactivation activity/bactericidie in front of inoculum of Escherichia coli (ATCC
11229), tested at concentrations 108CFU/mL.
Keywords: kefir grains, kefir, kefir leban, whey kefir, physicochemical and sensorial
characteristics, antibacterial activity.
LISTA DE FIGURAS
CAPTULO I
CAPLUTO II
CAPTULO III
CAPTULO I
CAPTULO II
CAPTULO III
Tabela 1- Formulaes alimentares tipo antepasto preparadas para realizao das anlises de
aceitabilidade e preferncia, com provadores no treinados ...................................................66
Tabela 2- Peso final dos gros de kefir aps incubao e maturao em diferentes
concentraes ...........................................................................................................................66
Tabela 3- Valores de pH, acidez e lactose em relao concentrao de gros/leite, aps 168
horas de incubao e maturao ..............................................................................................66
Tabela 5- Composio centesimal do kefir leban obtido das populaes agrupadas das
alquotas A e B aps incubao, maturao e filtrao em relao concentrao de
gros/leite .................................................................................................................................67
Tabela 6- Avaliao da aceitabilidade por teste de escala hednica de trs tipos de antepasto
elaborados a base de kefir leban ..............................................................................................67
Tabela 7- Avaliao da preferncia associada a inteno de compra dos trs tipos de antepasto
elaborados a base de kefir leban ..............................................................................................67
CAPITULO IV
Tabela 1- Peso final dos gros de kefir aps incubao e maturao em diferentes
concentraes ...........................................................................................................................69
Tabela 2- Valores de pH, acidez e lactose em relao concentrao de gros/leite, aps 168
horas de incubao e maturao ..............................................................................................69
Tabela 4- Composio centesimal do kefir leban obtido das populaes agrupadas das
alquotas A e B aps incubao, maturao e filtrao em relao concentrao de
gros/leite .................................................................................................................................70
Tabela 5- Avaliao da aceitabilidade por teste de escala hednica de trs tipos de antepasto
elaborados a base de kefir leban ..............................................................................................70
Tabela 6- Avaliao da preferncia associada a inteno de compra dos trs tipos de antepasto
elaborados a base de kefir leban ..............................................................................................70
CAPTULO I
1 INTRODUO
com sabor e textura semelhantes ao queijo tipo quark. Pode ser consumido puro ou usado em
formulaes substituindo o cream cheese ou queijo cottage, alm do desenvolvimento de
outros produtos. O soro de kefir consiste na fase lquida obtida da mesma filtrao, podendo
este ser aproveitado de diversas maneiras, desde o uso como matria prima na elaborao de
bebidas lcteas, at a utilizao de modernas tecnologias para obteno de produtos
especficos a serem utilizados principalmente pelas indstrias alimentcias (CZAMANSKI
2003; SCHNEEDORF et al., 2004).
A produo de kefir em escala comercial j existe em alguns pases, no entanto, a
maioria das indstrias utiliza apenas algumas amostras bacterianas isoladas dos gros de kefir
para a produo da bebida, o que faz com que muitas das propriedades naturais, encontradas
na bebida oriunda da fermentao com os gros, que apresentam uma complexa microbiota,
no sejam encontradas nos produtos comerciais. Bezerra et al. (1999) comentam que, embora
ainda no industrializado no Brasil, o kefir vem conquistando adeptos em vrias regies do
pas nos ltimos anos. Sua preparao, apenas em nvel artesanal, resulta em um produto com
uma srie de caractersticas fsico-qumicas, sensoriais e microbiolgicas ainda no bem
definidas e se restringe a poucas famlias que, de alguma forma, conseguiram amostras de
gros de kefir e a eles adicionam leite, obtendo o produto fermentado.
Assim, considerando-se as caractersticas e atributos do kefir como produto, referidos
pela literatura, realizou-se a caracterizao de quatro diferentes populaes de gros de kefir
tradicional existentes no Laboratrio de Higiene de Alimentos do Instituto de Cincia e
Tecnologia de Alimentos ICTA/UFRGS, oriundos de distintas manipulaes domiciliares. A
seguir, os derivados kefir, kefir leban e soro de kefir obtidos da padronizao do tipo de leite,
do tempo e da temperatura de incubao, maturao e filtrao das amostras, foram descritos
quanto sua composio fsico-qumica, sensorialidade e atividade anti-Escherichia coli.
1.2 Objetivo
1.3 Hipteses
2. REVISO BIBLIOGRFICA
Os microrganismos que podem ser encontrados nos gros de kefir esto listados na
Tabela 2:
das propriedades naturais, que s os gros produzem em funo de sua complexa microbiota,
no sejam encontradas nos produtos comerciais. Bezerra et al. (1999) comentam que no Brasil
o kefir praticamente desconhecido e se restringe a algumas famlias que, de alguma forma,
conseguiram o fermento ou os gros de kefir e a ele adicionam leite, obtendo um produto
fermentado, de qualidade e caractersticas variveis.
Existem, segundo a literatura, diversas relaes entre o peso dos gros e o volume de
leite ideal para produo do kefir. De acordo com Simova et al. (2002) a razo entre o peso
dos gros e o volume de leite ideal seria de 1:10, ou seja, 100 gramas de kefir para 1,0L de
leite inoculados a temperatura ambiente por 24 horas.
Durante a fermentao do leite os gros crescem, propagam-se e passam suas
propriedades s geraes seguintes de novos gros (SIMOVA et al., 2002). tambm nesse
momento que os microrganismos so dispersos no leite. De acordo com Toba et al. (1989) os
gros perdem a capacidade de se multiplicar aps 3 ou 4 dias de transferncia de um leite para
outro, no entanto eles continuam a fermentar o leite e a produzir kefir.
A partir do kefir pode-se obter o leban e o soro de kefir. O leban a fase slida, obtida
da filtrao do kefir. um produto leve e altamente digervel, com sabor e textura
semelhantes ao queijo quark, pode ser consumido puro ou usado em formulaes substituindo
o cream chesse ou queijo cottage, alm do desenvolvimento de outros produtos. O soro de
kefir consiste na fase lquida obtida da mesma filtrao, este pode ser aproveitado de diversas
maneiras, desde o uso como matria prima na elaborao de bebidas lcteas, at a utilizao
de modernas tecnologias para obteno de produtos especficos a serem utilizados
principalmente pelas indstrias alimentcias (CZAMANSKI 2003; SCHNEEDORF et al.,
2004).
As figuras abaixo ilustram o kefir e seus derivados:
aps este perodo, esse tipo de pesquisa perdeu interesse no campo de investigao, cedendo
lugar para as pesquisas na rea da toxicologia. O resultado foi que nos ltimos anos pouco se
fez no Brasil para conhecer melhor nossos alimentos do ponto de vista nutricional.
Recentemente, em virtude de novos conceitos cientficos surgidos em nutrio e cincias dos
alimentos, e do reconhecimento da importncia do assunto, o interesse comeou a renovar-se
(LAJOLO, 1995).
Assim, a obteno de dados referentes composio de alimentos brasileiros tem sido
estimulada com o objetivo de reunir informaes atualizadas, confiveis e adequadas
realidade nacional. Dados sobre composio de alimentos so importantes para inmeras
atividades: avaliar o suprimento e o consumo alimentar de um pas, verificar a adequao
nutricional da dieta de indivduos e de populaes, avaliar o estado nutricional, para
desenvolver pesquisas sobre as relaes entre dieta e doena, em planejamento agropecurio,
na indstria de alimentos, alm de outras (HOLDEN, 1997).
Segundo Garrote et al. (1996) a composio qumica dos gros de kefir de 89-90%
de gua, 0,2% de lipdeos, 3% de protena, 6% de carboidrato e 0,7% de cinzas. Souza et al.
(1984) ao avaliar a composio fsico-qumica do kefir, nas condies de seu experimento,
encontrou os resultados expressos na Tabela 4.
Segundo Maciel (2004), muito mais que um ato biolgico, a alimentao humana um
ato social e cultural. Mais que um elemento da chamada cultura material, a alimentao
implica em representaes e imaginrios, envolve escolhas, classificaes e smbolos que
organizam as diversas vises de mundo no tempo e no espao. O alimentar-se ento,
mutvel como a cultura, sofrendo interaes e integraes.
A anlise sensorial um mtodo cientfico utilizado pela indstria e por instituies de
pesquisa, para evocar, medir, analisar e interpretar as caractersticas dos alimentos que
possam ser percebidos pelos sentidos do paladar, viso, olfato, tato e audio, utilizando
conhecimentos de cincia de alimentos, fisiologia, antropologia, psicologia e estatstica
(SIMPSON et al., 1998).
Dento da anlise sensorial encontramos os testes afetivos, que podem ser classificados
em duas categorias: aceitabilidade e preferncia. O primeiro tem o objetivo de avaliar o grau
com que consumidores gostam ou desgostam de um determinado produto e o segundo
objetiva avaliar a preferncia do consumidor quando ele compra dois ou mais produto,
comparando-os entre si. Estes testes afetivos, ento, so usados para avaliar a preferncia e/ou
aceitao de produtos ou formulaes alimentares. Geralmente um grande nmero de
julgadores requerido para essas avaliaes. Os julgadores no so treinados, mas so
selecionados para representar uma populao alvo. Os testes afetivos so uma ferramenta
importante, de forma que acessam diretamente a opinio do consumidor j estabelecido ou
potencial de um produto, sobre caractersticas especficas ou idias sobre o produto
(MEILGAARD et al., 1991). As principais aplicaes dos testes afetivos so a manuteno da
qualidade do produto, otimizao de processos e desenvolvimento de novos produtos. A
indstria de alimentos, ao lanar novos produtos no mercado, opta por aqueles com
28
aceitabilidade igual ou superior a 70%. A escala hednica usada para medir o nvel de
preferncia de produtos por uma populao e relata os estados agradveis e desagradveis no
organismo (MACFIE et al., 1994).
A anlise sensorial de produtos em ascenso, como o caso dos leites fermentados,
mais especificamente do kefir importante, pois contribuir na padronizao dos processos,
bem como na definio das concentraes e elaborao de novas formulaes alimentares a
base deste produto.
Gould (1995) refere que o sistema antimicrobiano ocorre naturalmente nos alimentos e
cita enzimas derivadas de animais como a lisozima e a lactoperoxidade, protenas como a
lactoferrina, ovo transferrina e outros; cita derivados de microrganismos, por exemplo,
bacteriocinas como a nisina e pediocina; refere-se ainda a sistemas antimicrobianos naturais
derivados das plantas como por exemplo as fitoalexinas, componentes de baixo peso
molecular, ervas e condimentos, derivados fenlicos como a oleuropena, alm de leos
essenciais entre outros. O autor salienta ainda que na utilizao dos sistemas antimicrobianos
naturais para a preservao dos alimentos existe o sinergismo de vrios elementos, dentre eles
os componentes de origem animal, os de origem microbiana, bem como os de origem vegetal
e os processos fsicos de empacotamento e armazenagem de alimentos.
Dentre os benefcios atribudos ao kefir est a atividade antimicrobiana contra
bactrias Gram-positivas e Gram-negativas (GARROTE et al., 2000). Estudos relatam que as
bactrias cido-lcticas dos gros de kefir produzem bacteriocinas e o prprio kefiran, que so
substncias que tm sido responsabilizadas por suas propriedades antimicrobianas
(RODRIGUES et al., 2005).
Garrote et al. (2000) tem demonstrado que em vrias fontes de pesquisa, metablitos
produzidos por bactrias cido-lticas inibem o crescimento de bactrias patognicas e
saprfitas. Esta atividade antagnica pode envolver diferentes mecanismos, semelhantes s
competies por nutrientes livres e produo de metablitos, inibidores (perxido de
hidrognio, cidos orgnicos, diacetil e bacteriocinas). Em muitos casos, a combinao destes
fatores pode ser responsvel pela inibio.
Alm (1983) atravs de estudos in vitro demonstrou atividade antimicrobiana em
diversos produtos originados de leite fermentado. Especificamente o kefir demonstrou
capacidade de inibio frente Salmonella typhimurium, aps uma hora de exposio.
30
Ota (1999) sugere que o uso do kefir auxilia na preveno da contaminao por E. coli
O-157 enterohemorrgica, pois ele capaz de aumentar o nmero de bactrias cido lticas e
bfidas, nativas do trato gastrintestinal.
Shama (1998), atravs de estudos in vitro, descreveu algumas caractersticas
higinico-sanitrias de seis amostras de kefir tradicional, como a pesquisa de coliformes totais
e fecais, de enterococos, de mesfilos aerbios, a acidez expressa em graus Dornic e o pH.
Todas as amostras apresentaram, no incio do experimento, coliformes totais expressos em
nmeros mais provveis. Estes ndices, porm, reduziram-se zero, ao estender-se a
fermentao das alquotas de cada amostra nos diferentes experimentos, por um perodo de
dez dias. Nenhuma das amostras utilizadas apresentou coliformes fecais e enterococos no
momento da integrao ou do encerramento do experimento, dez meses mais tarde.
Posteriormente, as seis amostras de kefir foram contaminadas com E. coli (NCDC n 25922).
s vinte e quatro horas do processamento tradicional adotado, atingiu-se, em todas as
amostras, 106 UFC/mL. Aps dez dias houve reduo para 104 UFC/mL em cinco das
amostras, e para 105 UFC/mL na amostra restante, havendo evidncias de descontaminao.
Ao estudar a atividade antibacteriana e antifngica de cepas isoladas de gros de kefir
frente Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidernidis, Pseudomonas aeruginosa,
Proteus vulgaris, Klebsiella pneumonia, Bacillus subtilis e Candida spp. Cevikbas et al.
(1994) encontraram cepas que produziam uma bacteriocina com amplo espectro de inibio,
com maior atividade frente as bactrias gram-positivas. Santos et al. (2003) avaliaram a
atividade antimicrobiana de 58 cepas isoladas do kefir frente a bactrias enteropatognicas,
observando atividade da maioria das cepas frente aos agentes testados.
Czamanski (2003) determinou as concentraes inibitrias mnimas (CIMs) e
concentraes bactericidas mnimas (CBMs) do filtrado de kefir tradicional frente a duas
bactrias Gram-positivas (Staphylococcus aureus ATCC 25923, e Enterococcus faecalis
ATCC 19433) e duas bactrias Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 11229 e Salmonella
enteritidis ATCC 11076). Os resultados demonstram um maior efeito bacteriosttico frente a
bactrias Gram-negativas e um melhor efeito bactericida frente a bactrias Gram-positivas.
Rodrigues et al. (2005) e Kwon et al. (2003), em estudos sobre a ao inibitria dos
microrganismos presentes nos gros de kefir, observaram atividade antimicrobiana contra
Staphylococcus aureus.
31
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36
CAPTULO II
Simone WESCHENFELDER2
Jos Maria WIEST3
Heloisa Helena Chaves CARVALHO4
SUMRIO
1
Mestre em Cincia e Tecnologia de Alimentos do Instituto de Cincia e Tecnologia de
Alimentos da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. E-mail:
simone.weschenfelder@yahoo.com.br
*
Autor para correspondncia. Local de realizao do trabalho: Instituo de Cincia e
Tecnologia de Alimentos (ICTA/UFRGS) Porto Alegre RS/Brasil
2
Professor Doutor orientador do Instituto de Cincia e Tecnologia de Alimentos da
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. E-mail: jmwiest@ufrgs.br
3
Doutora Nutricionista do Instituto de Cincia e Tecnologia de Alimentos da Universidade
Federal do Rio Grande do Sul. E-mail: hhcarvalho@terra.com.br
39
1 INTRODUO
A dupla fermentao no leite por bactrias e leveduras, que ocorre no kefir, resulta na
produo de um alimento rico em cido ltico, actico e glicnico, lcool etlico, gs
carbnico, vitamina B12 e polissacardeos que conferem ao produto caractersticas sensoriais
singulares (HERTZLER et al., 2003). O cido ltico formado a partir da fermentao da
lactose age como conservante natural, tornando o kefir um produto biologicamente seguro,
que combina-se tambm com os nutrientes clcio e ferro, facilitando a absoro desses
elementos. O produto possui ainda, alta digestibilidade, que atribuda natureza da
coalhada, cujas protenas sofreram, durante a fermentao, desnaturao em vrios graus,
obtendo assim uma coalhada de partculas finamente divididas e facilmente penetradas pelos
sucos gstricos (SOUZA et al., 1984).
Atravs da composio microbiolgica e qumica o kefir pode ser considerado um
produto probitico complexo, ou seja, possui em sua composio microrganismos vivos
capazes de melhorar o equilbrio microbiano intestinal produzindo efeitos benficos sade
do indivduo que o consome. Sua capacidade de imunomodulao, resultante da ingesto oral
j foi relatada em alguns estudos (FARNWORTH, 2005; VINDEROLA et al., 2005).
Outro benefcio atribudo ao kefir a atividade antimicrobiana contra bactrias Gram-
positivas e Gram-negativas (GARROTE et al., 2000). Estudos relatam que as bactrias cido-
lcticas dos gros de kefir produzem bacteriocinas e o prprio kefiran, que so substncias
que tm sido responsabilizadas por suas propriedades antimicrobianas (RODRIGUES et al.,
2005).
Board (1988) afirma que Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Clostridium
perfringens, Escherichia coli, e outros como Vbrio parahemolyticus, Bacilus cereus,
Clostridium botulinum, Campylobacter jejuni, Yersnia enterocoltica so os microrganismos
de maior importncia em sade pblica, contaminando direta ou indiretamente os alimentos,
principalmente os produtos de origem animal, envolvidos em toxinfeces alimentares.
Dentre eles, destaca-se a Escherichia coli, que se encontra largamente difundida na
natureza, tendo como habitat principal o trato intestinal de animais de sangue quente,
integrando as bactrias do grupo coliforme, subdividindo-se em vrios bitipos e sorotipos,
alguns dos quais patognicos em potencial para o homem, constituindo-se os alimentos e a
gua sua principal fonte de infeco. Esta bactria referenciada ainda hoje como indicador
de contaminao fecal em alimentos, pela facilidade de sua comprovao diagnstica e por
sua representatividade (FRAZIER et al., 1993). Os diferentes sorotipos (enterohemorrgico,
41
2 MATERIAL E MTODOS
maturao, sob refrigerao a 7C 2C, por 144 horas. Aps esta maturao, realizou-se uma
tamisagem prvia em peneira de ao inoxidvel, sob assepsia, separando-se o kefir dos gros
de kefir. O kefir assim obtido foi submetido a uma filtrao, em tecido de algodo
esterilizado, por 24 horas a 25C 2C para obteno do kefir leban e do soro de kefir. Os
gros retidos na tamisagem prvia foram novamente inoculados ao leite, repetindo-se as
etapas acima descritas. O fluxograma abaixo (figura 1) ilustra o processo adotado durante o
experimento:
Tamisagem da amostra
O kefir e o soro de kefir foram previamente testados quanto colimetria total e fecal
atravs do plaqueamento direto de diferentes alquotas em meio gar Chromocult (Merck).
2.2.1 Amostras
43
2.2.2 O inculo
Foi testada amostra padro Escherichia coli (ATCC 11229) oriunda da coleo
bacterioteca do Laboratrio de Higiene de Alimentos do Instituto de Cincia e Tecnologia de
Alimentos ICTA/UFRGS para a avaliao da atividade antibacteriana. O inculo foi reativado
em meio de cultura BHI (Brain Heart Infusion, OXOID), 37C por um perodo de 18 a 24
horas de incubao aerbia, at atingir a concentrao 1,0 x 108 UFC/mL (AVANCINI,
2002).
Foram realizadas diluies seriadas, a partir do inculo inicial, transferindo-se 1mL
deste para tubos de ensaio contendo 9mL de gua peptonada 0,1% para obter a diluio 10-1, e
assim sucessivamente at a diluio 10-12. Das diluies 10-6 e 10-7 foram transferidas trs
gotas para placas de Petri, contendo gar Chromocult (MERCK), utilizando micropipetas
de 15 L e a leitura realizada em 24 horas de incubao aerbia 37C, para avaliao da
concentrao inicial do inculo em estudo. O valor final considerado constituiu-se da mdia
das contagens das gotas triplicadas, avaliadas biometricamente segundo Cavalli-Sforza
(1974).
2.2.3 O mtodo
diluio serial logartmica (10-1 a 10-12 UFC/mL) do inculo bacteriano padro. Os tubos
foram ento agitados e incubados a 36C.
Os resultados foram lidos como Intensidade de Atividade de Inibio
Bacteriana/bacteriostasia (IINIB) e Intensidade de Atividade de Inativao
Bacteriana/bactericidia (IINAB). Entende-se por IINIB o resultado do confronto da bactria
com a soluo antibacteriana de kefir e soro de kefir em meio BHI (Brain heart infusion,
OXOID), atravs de leitura por plaqueamentos, independentes de crescimento/turvao em
meio seletivo, gar Chromocult (MERCK), em intervalos de 24, 48 e 72 horas de
incubao a 36C. Entende-se por IINAB o mesmo resultado, porm sob a influncia dos
desinibidores bacterianos (Tween 80 a 3%; Histidina a 0,1% e Lecitina a 0,3%) acrescidos ao
BHI. Segundo Andrade et al. (1996) estes desinibidores tem a funo de inativar as solues
antibacterianas em teste, alm de fornecer substrato para as bactrias, facilitando seu
crescimento.
IINIB e IINAB foram representados por variveis ordinais arbitrrias, que assumiram
valores de 12 a 0, sendo que o valor de 12 (doze) representava atividade mxima e 0 (zero) a
no-atividade, que uma amostra testada tem sobre uma dada dose infectante do
microrganismo, nas diferentes condies do experimento, ou seja, com e sem desinibidores
bacterianos (tabela 1).
Tabela 1. Representao dos valores ordinais arbitrrios de intensidade de atividade atribudos s variveis
Intensidade da Atividade de Inibio Bacteriana/bacteriostasia (IINIB) e Intensidade de Atividade de Inativao
Bacteriana/bactericidia (IINAB) e suas correspondentes diluies e doses infectantes dos inculos.
12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 Variveis
ordinrias de
intensidade de
atividade
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10 10-11 10-12 n.a UFC/mL
diluies de
inoculo inibidas
ou inativadas
107 106 105 104 103 102 101 1 10-1 10-2 10-3 10-4 n.a UFC/mL doses
infectantes
inibidas ou
inativadas
n.a: ausncia de atividade antibacteriana;
UFC/mL: unidades formadoras de colnias por mL.
45
3 RESULTADOS E DISCUSSO
4 CONCLUSES
SUMMARY
Through Dilution Tests, in Multiple Tubes System it was determined, in vitro, the
intensity of bacterial inhibition activity (IINIB/bacteriostasy) and the intensity of bacterial
inactivation activity (IINAB/bactericidie) from traditional kefir and kefir whey, not heat-
treated, patterned on the type of milk and the binomial time/temperature of incubation and
maturation, as opposed to standardized inoculum of Escherichia coli (ATCC 11229) indicator
microorganism in food interest. Kefir is a fermented milk produced by the addition of kefir
grains, forming a symbiotic association between acid-lactic bacteria, acid-acetic bacteria and
yeast, surrounded by a matrix of polysaccharides, the kefiran, while the whey is the product of
the filtration of kefir. Both, the kefir, as the whey of kefir, had maximum capacity for
inhibition and inactivation of the bacterial inoculum, in concentrations 108 CFU/mL.
Keywords: traditional kefir; antibacterial activity of kefir; bacterial inhibition;
bacterial inactivation.
5. REFERNCIAS
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51
ULUSOY, B.H.; OLAK, H.; HAMPIKYAN, H.; ERKAN, M. E. An in vitro study on the
antibacterial effect of kefir against some food-borne pathogens. Trk Mikrobiyol Cem Derg
2007
VINDEROLA, C.G.; DUARTE, J.; THANGAVEL, D.; PERDIGN, G.; FARNWORTH, E.;
MATAR, C. Immunomodulating capacity of kefir. J. Dairy Res., v.72, p.195-202, 2005.
CAPTULO III
RESUMO
Kefir um leite fermentado resultante da dupla fermentao no leite pelos gros de kefir,
estes gros so descritos como uma associao simbitica de leveduras, bactrias cido-lticas
e bactrias cido-acticas. Do kefir pode-se obter o kefir leban e o soro de kefir, ambos
resultantes da filtrao do kefir. Este estudo teve por objetivo caracterizar e avaliar o
comportamento de diferentes populaes de gros de kefir tradicional e de seus derivados, o
kefir, o kefir leban e o soro de kefir, quanto s caractersticas fsico-qumicas, sensoriais e
inteno de compra, quando inoculados em diferentes concentraes de leite padronizado,
levando em considerao as variveis tempo/temperatura de incubao, maturao e filtrao.
Os resultados demonstraram que a manipulao e padronizao das populaes de gros de
kefir foram eficazes na obteno de produtos com caractersticas semelhantes e que o volume
de leite utilizado na incubao influencia significativamente nas caractersticas dos derivados.
A avaliao sensorial apresentou boa aceitabilidade e obteve-se 58% de inteno de compra.
Palavras-chave: Gros de kefir, Kefir, kefir leban, soro de kefir, caractersticas fsico-
qumicas e sensoriais.
1
Mestre em Cincia e Tecnologia de Alimentos do Instituto de Cincia e Tecnologia de
Alimentos da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. E-mail:
simone.weschenfelder@yahoo.com.br
*
Autor para correspondncia. Local de realizao do trabalho: Instituo de Cincia e
Tecnologia de Alimentos (ICTA/UFRGS) Porto Alegre RS/Brasil
2
Professor Doutor orientador do Instituto de Cincia e Tecnologia de Alimentos da
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. E-mail: jmwiest@ufrgs.br
3
Doutora Nutricionista do Instituto de Cincia e Tecnologia de Alimentos da Universidade
Federal do Rio Grande do Sul. E-mail: hhcarvalho@terra.com.br
54
ABSTRACT
Kefir is a fermented milk from of the double fermentation in milk by kefir grains, these grains
are described as a symbiotic association of yeasts, acid-lactic and acid-acetic bacteria. Kefir
leban and kefir whey can be obtained by the filtration of kefir. This study aimed to
characterize and evaluate the behavior of different traditional kefir grains populations and
their derivatives, the kefir, the kefir leban and the kefir whey, on physicochemical and
sensorial characteristics, including purchase intention, when inoculated into different
standardized milk concentrations, with the incubation time / temperature, maturation and
filtration variables. The results showed that the handling and the standardization of kefir
grains populations have been effective in obtaining products with similar characteristics and
that the volume of milk used in the incubation has influenced significantly the characteristics
of the derivatives. The sensory evaluation showed good acceptability and purchase intention
was up 58%.
Keywords: kefir grains, kefir, kefir leban, kefir whey, physicochemical and sensorial
characteristics.
1 INTRODUO
industrializado no Brasil, o kefir vem conquistando adeptos em vrias regies do pas nos
ltimos anos. Sua preparao, apenas em nvel artesanal, resulta em um produto com uma
srie de caractersticas fsico-qumicas, sensoriais e microbiolgicas ainda no bem definidas
e se restringe a poucas famlias que, de alguma forma, conseguiram amostras de gros de kefir
e a eles adicionam leite, obtendo o produto fermentado.
O presente trabalho que teve por objetivo caracterizar e avaliar o comportamento de
diferentes populaes de gros de kefir e dos derivados, o kefir, o kefir leban e o soro de kefir,
quanto composio fsico-qumica, aceitao sensorial e inteno de compra.
2 MATERIAL E MTODOS
Figura 1
2.2.1 Rendimento
Foram realizadas pesagens sucessivas nos gros de kefir a cada etapa ou ciclo
completado desde a inoculao at a obteno do kefir leban e do soro de kefir para verificar a
influencia da concentrao de gros/leite.
Tabela 1
3 RESULTADOS E DISCUSSO
3.1 Rendimento
Tabela 2
59
3.2.1 Kefir
Tabela 3
Tabela 4
Tabela 5
Tabela 6
Tabela 7
4 CONCLUSES
5 AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pelo apoio financeiro ao projeto.
6 REFERNCIAS
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MATAR, C. Immunomodulating capacity of kefir. J. Dairy Res., v.72, p.195-202, 2005.
Tamisagem da amostra
Tabela 1. Formulaes alimentares tipo antepasto* preparadas para realizao das anlises de aceitabilidade e
preferncia, com provadores no treinados.
Antepasto I Antepasto II Antepasto III
5 g de sal
90 g de kefir leban
* Antepastos so pequenas iguarias, pratos servidos como entrada ou aperitivo, antes da refeio principal.
Tabela 2. Peso final dos gros de kefir aps incubao e maturao em diferentes concentraes.
Populaes de gros de kefir e concentrao de Peso dos gros na Peso dos gros aps
gros/leite incubao tamisagem
1, 2, 3 e 4 (A) 50g a 60g b
1, 2, 3 e 4 (B) 50g a
50g a
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Letra A corresponde concentrao de gros/leite 1:10; Letra B corresponde a concentrao de gros/leite 1:5.
Tabela 3. Valores de pH, acidez e lactose em relao concentrao de gros/leite, aps 168 horas de incubao
e maturao.
pH Acidez (D) Lactose (%)
Kefir A B A B A B
1 3,60 a 3,79 b 141,95 a 184,02 b 1,21 a 0,96 b
2 3,76 a 3,59 b 210,20 a 248,54 b 1,59 a 1,30 b
3 3,61 a
3,57 a
251,09 a
266,98 b
1,04 a
0,93 b
4 3,77 a
3,70 b
156,14 a
201,02 b
1,50 a
1,07 b
Letras minsculas diferentes na mesma linha, considerando cada anlise independente entre si,
indicam diferena significativa (p0,05).
Letra A corresponde concentrao de gros/leite 1:10; Letra B corresponde a concentrao de gros/leite 1:5
67
Tabela 4. Valores residuais de lactose no soro de kefir em relao concentrao de gros/leite, aps 168 horas
de incubao e maturao.
Lactose
Soro de kefir A (1:10) B (1:5)
1 1,51 a 1,30 b
2 1,66 a
1,23 b
3 1,30 a
0,95 b
4 1,47 a
0,91 b
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Tabela 5. Composio centesimal do kefir leban obtido das populaes agrupadas das alquotas A e B aps
incubao, maturao e filtrao em relao concentrao de gros/leite.
Determinaes A (1:10) B (1:5)
Umidade % 79,39 a 79,41 a
Protena % 9,23 a
8,11 b
Gordura % 8,29 a
9,26 b
Cinzas % 0,89 a
0,83 a
Clcio % 0,11 a
0,10 a
Lactose % ausncia ausncia
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Tabela 6. Avaliao da aceitabilidade por teste de escala hednica de trs tipos de antepasto elaborados a base
de kefir leban.
Antepasto I Antepasto II Antepasto III
Aceitabilidade 6,8 a 5,6 b 5,1 b
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Tabela 7. Avaliao da preferncia associada a inteno de compra dos trs tipos de antepasto elaborados a base
de kefir leban.
Antepasto I Antepasto II Antepasto III
Inteno de compra (%) 58,06 a 25,80 b 16,12 c
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
68
CAPTULO IV
1. CONSIDERAES FINAIS
Tabela 1. Peso final dos gros de kefir aps incubao e maturao em diferentes concentraes.
Populaes de gros de kefir e Peso dos gros na incubao Peso dos gros aps tamisagem
concentrao de gros/leite
1, 2, 3 e 4 (A) 50g a 60g b
1, 2, 3 e 4 (B) 50g a
50g a
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Letra A corresponde a concentrao de gros/leite 1:10; Letra B corresponde a concentrao de gros/leite 1:5.
Tabela 2. Valores de pH, acidez e lactose em relao concentrao de gros/leite, aps 168 horas de
incubao e maturao.
pH Acidez (D) Lactose (%)
Kefir A B A B A B
1 3,60 a 3,79 b 141,95 a 184,02 b 1,21 a 0,96 b
2 3,76 a 3,59 b 210,20 a 248,54 b 1,59 a 1,30 b
3 3,61 a
3,57 a
251,09 a
266,98 b
1,04 a
0,93 b
4 3,77 a
3,70 b
156,14 a
201,02 b
1,50 a
1,07 b
Letras minsculas diferentes na mesma linha, considerando cada anlise independente entre si,
indicam diferena significativa (p0,05).
Letra A corresponde a concentrao de gros/leite 1:10; Letra B corresponde a concentrao de gros/leite 1:5
70
Tabela 3. Valores residuais de lactose no soro de kefir em relao concentrao de gros/leite, aps 168 horas
de incubao e maturao.
Lactose
Soro de kefir A (1:10) B (1:5)
1 1,51 a 1,30 b
2 1,66 a
1,23 b
3 1,30 a
0,95 b
4 1,47 a
0,91 b
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Tabela 4. Composio centesimal do kefir leban obtido das populaes agrupadas das alquotas A e B aps
incubao, maturao e filtrao em relao concentrao de gros/leite.
Determinaes A (1:10) B (1:5)
Umidade % 79,39 a 79,41 a
Protena % 9,23 a
8,11 b
Gordura % 8,29 a
9,26 b
Cinzas % 0,89 a
0,83 a
Clcio % 0,11 a
0,10 a
Lactose % ausncia ausncia
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Tabela 5. Avaliao da aceitabilidade por teste de escala hednica de trs tipos de antepasto elaborados a base
de kefir leban.
Antepasto I Antepasto II Antepasto III
Aceitabilidade 6,8 a 5,6 b 5,1 b
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
Tabela 6. Avaliao da preferncia associada a inteno de compra dos trs tipos de antepasto elaborados a
base de kefir leban.
Antepasto I Antepasto II Antepasto III
Inteno de compra (%) 58,06 a 25,80 b 16,12 c
Letras minsculas diferentes na mesma linha indicam diferena significativa (p0,05)
71
manipulao e padronizao adotadas para o kefir que se mostraram eficazes, pois permitiram
a obteno de um produto com caractersticas antibacterianas similares e reprodutivas.
Concluindo, pode se considerar que os resultados aqui apresentados constituem
ferramenta para novos estudos na rea, visando o desenvolvimento de observaes e de
experimentos que permitam melhor explorar as propriedades dos gros de kefir e de seus
derivados (kefir, kefir leban e soro de kefir), inclusive com vistas ao lanamento de novos
produtos alimentcios no mercado.