Aula 6 - Sistema de Reparo do DNA

É um sistema enzimático que vai desde o sistema de reparo mais simples até o mais
sofisticado. Tem reparos que há somente reversões, sem ter que retirar a base alterada, inserir
uma base normal!

O sistema de reparo que acontece durante a replicação é feito pela DNA polimerase que tem
atividade exonuclease, que insere a base e faz a conferencia! Porém, tem alguns eventos de
reparo que acontece antes e outros depois da replicação.

Sistema de reparo – complementariedade do DNA:

 Reversão direta – Reversão de bases!

Geralmente mais relacionado a raio solar, raio UV! Por exemplo, duas bases timinas quando
expostas ao raio UV, acabam se juntando formando um dímero – dimerização. Uma base
dimerizada, significa que ela tá inativada! Só que ela não tá danificada, então o que eu faço
para consertar? Basta reverter, ou seja, desfazer a dimerização e as bases voltam ao estado
anterior, tornando-as novamente ativas!

Isso acontece normalmente na pele! Então, por exemplo, se a pessoa for ´´muito exposta´´,
pegar muito sol, o sistema de reparo vai falhar! Ou a pessoa pode ter pré-disposição genética
também, já ter alteração no sistema de reparo. Como eu sei disso? Uma visão do que seriam
as lesões de pele, os sinais que temos na pele, os nevos têm dois padrões de crescimento que
chamamos de radial e vertical. O epitélio da pele é pavimentoso estratificado, temos várias
camadas na pele, o nevo radial é de um crescimento pra cima, da queratina pra cima. A
importância clínica disso é quase zero. Normalmente a cor dos nevos é preta, pq? Excesso de
melanina. Pq o sistema de reparo não consertou o excesso de melanina? O problema disso é
no padrão de crescimento vertical pois ele é para baixo, e começa-se a descer e acaba caindo
no conjuntivo que tem vasos sanguíneos. Logo, o vaso sanguíneo além de nutrir vai possibilitar
uma disseminação. Isso é um melanoma! Agora, como se sabe se tem uma pré-disposição? Se
tiver um nevo onde a pessoa não pega sol? Se a pessoa tem um nevo onde não pega sol,
significa que ela não foi induzida e mesmo assim foi elevada a expressão de melanina e o
reparo não fez a correção? Isso é uma pré-disposição! Pro melanoma, ou seja nesse caso
citado, onde tá a predisposição genética? No sistema de reparo.

Falou em reparo, falou em sistema enzimático!!!! Uma enzima que faz reparo por reversão
direta é a fotoliase!

 Dependente de homologia - é quando o dano é gerado em apenas uma das fitas de

DNA! Ou seja, quando há lesão em uma fita, pode-se usar a outra fita como molde
para reparação da área danificada!

Reparo com alta fidelidade ´´livre de erros´´ pois ocorre através de um molde –
complementariedade do DNA. Dentro desse reparo temos dois:

 Excisão – Base danificada, ocorre antes da replicação. Nesse reparo há a remoção e

substituição de uma base inteira ou nucleotídeo. Os procedimentos para retirada da
base inteira:
1 – Primeira coisa a fazer é reconhecer o dano e cortar a ligação base-açúcar. A enzima
DNA glicosilase reconhece e corta as ligações base-açúcar!
2 – AP endonuclease corta a estrutura açúcar fosfato!
Quem me garante que bases ao redor do dano principal também não estão
danificadas? Foi reconhecido o dano chave, só que posso ter outros nucleotídeos ao
redor também alterados. Posso ter uma mudança na matriz de leitura, onde a base
central alterou mas também foi alterado vários ao redor. Logo, o sistema de reparo dá
uma margem de segurança....proximo passo:
3 – Exonuclease limpa o arcabouço removendo nucleotídeos próximos ao dano!
 Depois do reparo a DNA polimerase II insere as bases e a DNA ligase as liga –
fosfodiéster!
 Mal Pareamento – Base não danificada, ocorre após a replicação (mutações INDEL)

Repara a fita recém-sintetizada não corrigida pela exonuclease. Procedimento:

1 – Reconhecer bases mal pareadas

2 – Determinar qual base é a incorreta?

3 – Remover e fazer a síntese de reparo

A base nesse caso não tá danificada, ela foi inserida errada. Então, qual tirar? Por exemplo,
após a replicação, houve um mal pareamento e a base G se ligou a base T. Qual base tirar?
G ou T? Como o sistema de reparo vai poder determinar se G ou T é o nucleotídeo
incorreto? Pois se eu tirar o G, terei que colocar um A, justamente para parear
corretamente com o T. Porém, se eu tirar o T, terei que colocar um C, justamente para
parear corretamente com o G! Nesse caso, a imagem mostrada na sala, a base G deve ser
retirada, ela é o erro pois ela tá na fita complementar à fita molde, ou seja, a base T está
na fita molde, que é a fita mãe, logo essa base não é a errada e sim a base G! Com esse
mal pareamento, várias bases ao redor ficaram distorcidas (surgimento de alças). Logo,
sigo o mesmo procedimento da excisão: Glicosilase, endonuclease, exonuclease, DNA pol II
e DNA ligase. O que muda desse reparo para o outro é somente quem faz o
reconhecimento pois depois que há o reconhecimento da base inserida errada eu faço o
mesmo procedimento da excisão. A enzima hMut detecta as distorções na fita, ou seja, ele
reconhece a base inserida errada no mal pareamento!

 Quebras bifilamentares - é quando se tem um dano que quebra ambas as fitas!

Se ambos os filamentos da dupla fossem danificados de tal modo que a complementariedade

não pudesse ser explorada? Tem dois opções de reparo: Junções de pontas não homólogas e
Recombinação homóloga.

As junções de pontas só vão ocorrer caso a célula esteja antes da fase S no ciclo celular, ou
seja, quando a célula não está se dividindo (sem duplicação). Dessa forma, não vai ter como
fazer a recombinação por homologia pois só tem as duas fitas e as duas estão quebradas.
Nesse reparo, uma mutação é induzida com essa junção, porém, é muito melhor induzir do
que ter morte celular. Ou então, eu posso até fazer o SOS, inserir qualquer base só pra tampar
o buraco pra evitar morte!

A recombinação homóloga só vai ocorrer quando a célula estiver na fase S, que é a fase de
replicação, quando as fitas são duplicadas. Desse modo, as duas fitas quebradas serão
reparadas através da recombinação com as duas outras fitas que foram duplicadas no
processo da replicação.

A RAD51 é uma enzima que nunca pode falhar! Se ela falhar, a pessoa vai ter câncer! A RAD51
é estimulada por BRCA1 lá do câncer de mama. Um dos tipos de mutações relacionadas ao
câncer de mama, o BRCA1 trabalha estimulando a RAD51 pois estimula reparo. BRCA1 é o
teste genético pro câncer de mama. (Vídeo que ele passou em sala – assistir)

Duas fitas quebradas, porém durante a divisão, tenho mais duas outras fitas intactas (4n).
Nesse momento da quebra bifilamentar, o RAD51 é estimulado e sai a caça da cromátide irmã
não danificada (fita duplicada), se ele não a encontra há a junção das pontas, porém, se ele
encontrar ele faz a cópia, insere essa cópia da região lesada e a polimerase faz a recombinação
homóloga!!!!

Independente se a célula estiver ou não dividindo, a RAD51 será sempre estimulada pra tentar
encontrar a cromátide irmã!!!