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Nº Mec.:25639
Relatório de Projecto
Licenciatura em Química
2010-2011
Universidade de Aveiro Departamento de Química
Nº Mec.:25639
Relatório de Projecto
1. Introdução 1
2. Materiais e métodos 3
3. Controlo de qualidade 7
4. Resultados e discussão 10
5. Conclusões 19
6. Bibliografia 20
7. Anexos 22
1. Introdução
Este trabalho tem como objectivo determinar a fracção de hidrocarbonetos aromáticos
policíclicos (PAH’s) dos solos que poderá ser mais facilmente lixiviada e portanto também
mais disponível para os organismos e plantas. Para tal, determinou-se a fracção que é
transferida para a fase aquosa, utilizando Tenax.
Os PAH’s são hidrocarbonetos que contêm 2 ou mais anéis aromáticos fundidos [1],
constituindo uma numerosa (> 100 compostos) e diversificada família de contaminantes
orgânicos semi-voláteis, quimicamente estáveis, lipofílicos e hidrofóbicos. Devido a
respectiva persistência e mobilidade entre vários compartimentos ambientais podem ser
encontrados nos solos, sedimentos e ao longo da cadeia trófica.
Estes compostos são produzidos por processos pirolíticos e combustões incompletas de
combustíveis fósseis. As principais fontes naturais são os incêndios florestais e vulcões e
as fontes antropogénicas incluem incineração de lixo, geração industrial de energia,
produção de alcatrão e produção de alumínio [2]. Em áreas urbanas, como Lisboa, devido
ao tráfego e indústria, os PAH’s são libertados para atmosfera e depositam-se
posteriormente nos solos. Os PAH’s podem ser encontrados em diversos tipos de solos: em
solos florestais a sua concentração típica varia de 5 a 100 μg/kg [3] e em solos rurais
encontra-se em níveis de 10-100 μg/kg, provenientes principalmente da precipitação
atmosférica [3]. As áreas urbanas têm concentrações na faixa 600-3000 μg/kg, podendo ser
mais elevadas perto das zonas industriais [2]. Níveis de 8000-336000 μg/kg foram
relatados para poeiras de estrada [4].
Os PAH’s são poluentes orgânicos de importância ambiental e interesse toxicológico
pois muitos são cancerígenos e/ou mutagénicos. A exposição humana aos PAH’s ocorre
principalmente por inalação de ar contaminado, ingestão de alimentos ou água
contaminada e também através do contacto dérmico com solos contaminados. Uma vez
adsorvidos são rapidamente distribuídos pelo organismo [5].
Neste trabalho iremos apenas estudar 16 PAH’s considerados prioritários para
monitorização ambiental pela “Environmental Protection Agency” (EPA): Naftaleno
(NAF), Acenaftileno (ACY), Acenafteno (ACE), Fluoreno (FLU), Fenantreno (PHE),
Antraceno (ANT), Fluoranteno (FLA), Pireno (PYR), Benzo(a)antraceno (BaA), Criseno
(CRY), Benzo(b)fluranteno (BbF), Benzo(k)fluoranteno (BkF), Benzo(a)pireno (BaP),
1
Dibenzo(a,h)antraceno (DBah), Indeno(1,2,3cd)pireno (IND) e Benzo(g,h,i)perileno
(Bghi).
Para analisar PAH’s em solos utilizam-se diversos métodos normalmente designados
por exaustivos ou totais, como por exemplo: extracção por Soxhlet, extracção por ultra-
sons ou extracção acelerada por solventes. Porém, tem vindo a concluir-se que as
concentrações obtidas por estes métodos não são representativas dos reais riscos dos
PAH’s para animais e humanos. Estes potenciais riscos devem ser baseados em
concentrações de contaminantes que estão disponíveis [6].
Alguns estudos demonstram que a resina Tenax (polímero poroso baseado no oxido 2,6-
difenil-p-fenileno) [6] poderá ser utilizada para estimar a fracção de contaminantes
orgânicos dos solos facilmente lixiviada, podendo assim contaminar a água, e que também
está disponível para os organismos. A fracção disponível corresponde à porção de
contaminantes que pode ser assimilada ou de outra maneira exposta a um organismo alvo e
por isso também designada por biodisponível. [7].
Oleszczuk [8] utilizou o Tenax para tentar prever a perda de PAH’s durante a
compostagem de lamas de estações de tratamento de águas residuais e concluiu que o tal
estudo é importante para determinar formas de contaminantes na lama, potencialmente
biodisponíveis. Cornelissen et al [6] recorreram à extracção com Tenax para determinar a
disponibilidade de contaminantes orgânicos em sedimentos e concluíram que a extracção
com Tenax é uma maneira simples para determinar a disponibilidade e as concentrações
dos compostos adsorvidos linearmente (que corresponde à fracção que é rapidamente
desorvida), que são muito mais significativas do que as concentrações totais.
Neste trabalho os métodos utilizados foram a extracção com Soxhlet (fornece-nos a
concentração total) e a extracção com Tenax (fornece-nos a concentração parcial). Estes
resultados têm interesse visto que com eles foi possível determinar a fracção de
contaminantes que estão disponíveis nos solos. Assim como estudar o comportamento dos
diferentes compostos ( 13 PAH’s), pois apresentam diferentes perfis.
2
2. Materiais e métodos
2.1. Preparação das amostras
As amostras foram recolhidas em jardins e parques da cidade de Lisboa, secas ao ar e
crivadas a 2 mm. Para preservas as amostras, estas foram congeladas em papel de alumínio
a fim de evitar contaminações por ftalatos. Os resultados são expressos em peso seco, que
se determinou colocando 5g de amostra na estufa a 105ºC durante uma noite.
3
orgânica do solo) a 50mL de água ultra pura (Milli-Q, Millipore) [10]. Na Tabela 1
encontram-se os valores da massa de solo e de Tenax pesada para as diversas amostras.
Procedeu-se a uma agitação durante 6h (30rpm).
O Tenax foi retirado com uma pipeta de Pasteur para um frasco, adicionou-se 10ml da
mistura H:A (1:1) e adicionou-se o padrão interno [7]. O frasco foi sujeito a agitação
durante 1h e a extracção foi repetida mais 2 vezes.
O volume do extracto foi reduzido num evaporador rotativo e procedeu-se à limpeza
dos extractos. O solo foi separado da água por filtração (filtros de fibra de vidro Millipore,
0,7μm), adicionou-se sulfato de sódio e em seguida procedeu-se a uma extracção com
Soxhlet dos solos e filtros.
Extraíram-se 2 réplicas de cada amostra e para as amostras com concentrações totais
mais baixas juntaram-se as duas réplicas (amostra 4, 5, 7 e 8).
Tabela 1 - Valores das massas de solo e de Tenax usadas para cada amostra.
Amostras m Tenax (g) m amostra (g)
1 2.02 8.33
2 1,31 5,12
4 A1 1.16 9.04
4 A2 1.04 8.14
5 A1 0,87 5,07
5 A2 0,87 5,09
5 B1 0,86 5,28
5 B2 0,86 5,12
7 A1 1,57 5,14
7 A2 1,56 5,05
8 A1 0,43 5,12
8 A2 0,43 5,12
A limpeza de extractos foi efectuada num sistema SPE (Solid Phase Extraction).
Colocou-se num cartucho sílica (Supelclean-LC-SI), alumina (Spelclean-LC-Alumina-N) e
sulfato de sódio separados por discos. A sílica e a alumina foram primeiro activadas na
estufa a 130ºC durante uma noite e posteriormente desactivas com 3% de água. O sulfato
de sódio foi previamente descontaminado na mufla a 400ºC. Passou-se 5ml da mistura
H:DMC (2:1) pelo cartucho e 5ml da mistura H:DCM (9:1). A amostra foi colocada no
4
cartucho e recolhida no balão. Procedeu-se à eluição dos compostos retidos com 20ml de
H:DCM (9:1) e com 10ml de H:DCM (2:1). O volume dos extractos é depois reduzido a
cerca de 1-2 ml, transferido para um frasco de vidro e secos numa corrente de N2.
5
detecção (LOD) para cada um dos compostos, calculado como sendo 3 vezes o valor do
branco[11], é apresentado na Tabela 2.
6
3. Controlo de Qualidade:
Extracção total:
Para avaliar as recuperações e o desempenho de todos os procedimentos analíticos
foram analisados brancos, de 2 materiais de referência (CRM124 e TAQC) e de uma
amostra fortificada (spike). Foram extraída 3 réplicas de cada.
Todos os valores de concentração de PAH’s obtidos nos brancos estão abaixo do limite
de detecção. As recuperações dos materiais de referência e dos “spikes” são apresentadas
na Tabela 1 dos Anexos. Obteve-se recuperações de 62-108%, de 61-84% e 63-111% para
o CRM124, TAQC e para o “spike”, respectivamente. O desvio padrão relativo (RSD)
entre réplicas é <20% o que indica que o método é preciso de acordo com o indicado pela
USEPA: método 8270 [12].
7
Para se verificar se o Tenax poderia ser reutilizados foram efectuadas extracções com
Tenax novo e usado como indicado na Tabela 3, conclui-se que é possível reutilizar o
Tenax pois não se verificou a existência de interferências na análise dos brancos.
8
Através destes resultados concluímos que o uso de uma quantidade superior de Tenax
(usando o rácio 1:0,6 a massa de Tenax usada é de 3g) não influencia as concentrações
obtidas pois o RSD das réplicas é inferior a 20%.
9
4. Resultados e discussão
Figura 1- Gráfico de caixa mostrando a variação das concentrações das diversas amostras.
A caixa define o intervalo interquartil, a linha horizontal dentro da caixa mostra
o valor da mediana, a qual é 1235 μg kg-1. O círculo indica que existe uma
observação atípica neste conjunto de dados que corresponde à amostra 2.
Morillo et al. (2007) compararam solos urbanos contaminados com PAH’s de três
cidades europeias e obtiveram concentrações semelhantes em Ljubljana (218-4490 μg kg-1)
10
e em Torino (148-3410 μg kg-1) e valores cerca de dez vezes superiores para Glasgow
(1490-51800 μg kg-1) [13]. Poderemos afirmar que a concentração da soma dos 16 PAH’s
obtida nas nossas amostras é baixa em relação à obtida em Glasgow mas alta em relação às
outras duas cidades.
Na Tabela 4 encontram-se as percentagens de PAH’s individuais nas diversas amostras.
A maior participação foi notada para o fluoranteno, para o pireno e para o
benzo(b)fluoranteno como podemos também observar na Figura 2. De notar que os dois
primeiros compostos apresentam 4 anéis e o último apresenta 5 anéis. Estes compostos
costumam ser os mais abundantes em zonas urbanas/industriais pois geralmente estão
associados à combustão de combustíveis fosseis [14]. Os compostos com 2-3 anéis são
menos abundantes pois possuem maior volatilização destes e maior possibilidade de
degradação.
11
16
14
Anéis 2-3 4 5 6
12
Figura 3 – Gráfico de caixa mostrando a variação das concentrações das diversas
amostras. A caixa define o intervalo interquartil, alinha horizontal dentro da
caixa mostra o valor da mediana, a qual é 15,6 μg kg-1.
13
Tabela 5- Valores de concentração na extracção com Tenax (CTenax) e na extracção total
(Ctotal), valores da fracção disponível e valores da percentagem da matéria
orgânica (% OM) nas diversas amostras.
Amostras CTenax (μgkg-1) Ctotal (μgkg-1) % disponível % OM
1 21,3 10245 0,21 8,24
2 43,3 22268 0,19 8,25
4 3,69 1167 0,32 4,04
5 22,9 3575 0,64 5,70
7 9,91 915 1,08 10,4
8 4,09 1138 0,36 2,88
25000
y = 521,87x - 2598,5
20000
R² = 0,8604
15000
Ctotal (μgkg-1)
10000
5000
0
0 10 20 30 40 50
-5000
CTenax (μgkg-1)
14
Tabela 6 - Valores da percentagem de PAH’s individuais nas diversas amostras.
Amostra Amostra Amostra Amostra Amostra Amostra
1 2 4 5 7 8
(%) (%) (%) (%) (%) (%)
ACY 0,0 3,4 0,0 0,0 0,0 0,0
ACE 0,0 1,2 0,0 2,5 3,5 0,0
ANT 0,0 2,5 0,0 2,2 0,0 0,0
FLA 15 17,7 23 2 22 24
PYR 14 15 20 18 15 16
BaA 5,7 5,5 7,8 9,2 5,9 0,0
CRY 14 9,4 17 12 20 16
BbF 22 12 24 14 15 17
BkF 4,0 4,1 7,5 5,5 0,0 20
BaP 7,9 6,0 0,0 4,8 0,0 0,0
Dbah 1,5 5,0 0,0 2,0 3,8 6,8
IND 7,1 8,8 0,0 5,5 7,0 0,0
Bghi 9,0 9,3 0,0 4,8 6,9 0,0
25
20
% nas amostras
15
10
0
ACY ACE ANT FLA PYR BaA CRY BbF BkF BaP Dbah IND Bghi
-5
Anéis 3 4 5 6
Figura 6 - Valores das percentagens médias e desvio padrão de PAH’s individuais nas
amostras.
15
Comparando os valores da percentagem média de PAH’s nas amostras obtidos pela
extracção total e pela extracção com Tenax verificamos que os compostos com 4 anéis
aromáticos representam a maior contribuição nos dois casos: 14% e 11% para a extracção
com Tenax e para a extracção total respectivamente. Os compostos com 3 anéis
apresentam a menor prestação com 0,85% para a extracção com Tenax e 0,60% para a
extracção total. Como se observa pela Figura 7 os compostos de 3 e 4 anéis são mais
abundantes na extracção com Tenax enquanto os de maior peso molecular são mais
abundantes na extracção total.
25,00
Extracção com Tenax
20,00
Extracção total
Média de PAH's (%)
15,00
10,00
5,00
0,00
3 4 5 6
-5,00
Número de Anéis
Figura 7 - Contribuição da média de PAH’s nas amostras para a extracção total e para a
extracção com Tenax.
A fracção de cada um dos compostos individuais extraídos com Tenax em relação aos
16
respectivamente. Oleszczuk [8] no seu estudo também obteve maior percentagem de
PAH’s disponíveis para os compostos com 3 e 4 anéis. Tal poderá ser explicado por o
baixo peso molecular ser caracterizado por uma menor hidrofobicidade do que os
compostos de 5 e 6 anéis, que provoca uma diminuição da adsorção para a matéria
orgânica [15] e aumento da biodisponibilidade. A adsorção é mais reversível com a
diminuição do número de anéis aromáticos condensados ou com a diminuição da
hidrofobicidade [16].
Tabela 7 - Valores dos PAH’s individuais obtidos pela extracção com Tenax na extracção
Total.
Compostos % de PAH’s
ACY 0,59
ACE 2,05
ANT 0,35
FLA 0,31
PYR 0,27
BaA 0,24
CRY 0,40
BbF 0,36
BkF 0,16
BaP 0,13
DBah 0,41
IND 0,19
17
1,60
1,40
1,20
PAH's em (%) 1,00
0,80
0,60
0,40
0,20
0,00
3 4 5 6
Número de anéis
Figura 8 - Valores da percentagem PAH’s obtidos pela extracção com Tenax na extracção
total em função do número de anéis aromáticos dos compostos.
18
5. Conclusões
19
6. Bibliografia
1. USEPA (United States Environmental Protection Agency), 2008; polycyclic
aromatic Hydrocarbons (PAHs).
2. WHO (World Health Organization), 2003; Health risks of persistent organic
pollutants from long-range transboundary air pollution; Chapter 8: Polycyclic
aromatic hydrocarbons
3. WHO (World Health Organization), 1998; Selected non-heterocyclic polycyclic
aromatic hydrocarbons. Geneva, World Health Organization (Environmental
Health Criteria No. 202).
4. WHO (World Health Organization), 2000; Polynuclear aromatic hydrocarbons
(PAH). In: Air qualityguidelines for Europe, 2nd ed. Copenhagen, WHO
Regional Office for Europe (WHO Regional Publications, European Series, No.
91), 92–96.
5. Netto, A. D.; Moreira, J. C.; Dias, A. E. X. O.; Arbilla, G.; Ferreira, L. F. V.;
Oliveira, A. S. & Barek, J. ,2000; Avaliação da contaminação humana por
hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) e seus derivados nitrados
(NHPAs): Uma revisão metodológica. Química Nova 23, 765-773.
6. Cornelissen G.; Rigterink H.; Noort, P. C. M., 2001; A simple Tenax extraction
method to determine the availability of sediment-sorbed organic compounds.
Environmental Toxicological Chemical 20(4), 706-711.
7. Cofield, N.; Banks, M. K.; Schwab, A. P., 2008; Labiality of polycyclic
aromatic hydrocarbons in the rhizosphere. Chemosphere 70, 1644-1652
8. Oleszckuk, P., 2008; Tenax-TA extraction as predictor for free available
content of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in composted sewage
sludges. Journal of Environmental Monitoring.10, 883-888
9. USEPA (United States Environmental Protection Agency, 1996; Method
3540C-Soxhlet extraction; Revision 3; SW 846 Test Methods for Evaluating
Solid Wastes.
10. Macrae, J. D.; Hall, K. J., 1998; Comparison of Methods used to determine the
availability of Polycyclic Aromatic Hidrocarbons in Marine Sediment.
Environmental Science Technology 32, 3809-3815.
20
11. Miller, J. N.; Miller J.C., 2005; Statistic and Chemometrics for Analytical
Chemistry; fifth edition.
12. USEPA (United States Environmental Protection Agency), 2007. Method
8270D – Semivolatile organic compounds by Gas Chromatography/Mass
Spectrometry (GC/MS). Revision 4. SW 846 Test Methods for Evaluating Solid
Wastes.
13. Morillo, E.; Romero, A. S.; Maqueda, C., 2007; Soil pollution by PAHs in
urban soils: a comparison of three European cities. Journal of Environmental
Monitoring 9, 1001-1008.
14. Cachada, A.; Pereira, M. E.; Silva, E. F.; Duarte, A., 2010; Sources of
potentially toxic elements and organic pollutants in an urban area subjected to
an industrial impact; Environmental Monitoring Assess
15. Pignatello, J. J.; Xing, B., 1996; Mechanisms of slow sorption of organic
chemicals to natural particles. Environmental Science Technology 30, 1-11
16. Smith, J.; Burns, R. G., 1997; Bioavailability and biodegradation of polycyclic
aromatic hydrocarbons in soils. FEMS Microbiology Letters 152, 141-147
21
7. Anexos
22
Tabela 2- Valores das recuperações (% rec.), do desvio padrão (STD) e do desvio padrão
relativo (RSD) para “spikes” só com água e com solo a concentrações diferentes.
“Spike” só com água “Spike” com solo
25 ppb 250 ppb 50 ppb 250 ppb
% rec. STD RSD % STD RSD % STD RSD % STD RSD
rec. rec. rec.
ACY 100 4 4 65 10 16 108 12 11 109 6 6
ACE 74 8 11 90 9 10 86 6 7 72 4 6
ANT 83 12 15 80 10 13 87 8 9 92 5 6
FLA 86 8 9 88 12 13 88 9 10 86 8 9
PYR 88 6 7 88 12 14 93 11 12 89 7 8
BaA 82 7 9 81 11 14 87 11 13 91 3 4
CRY 84 10 12 77 10 13 89 8 9 96 10 10
BbF 86 9 10 77 9 12 91 9 10 85 10 12
BkF 88 5 6 82 14 17 116 3 3 104 8 8
BaP <LOD <LOD <LOD 76 9 12 84 8 9 65 3 4
IND 88 13 14 83 13 16 76 4 5 99 10 10
Dbah 91 13 14 81 11 14 80 6 8 86 2 3
Bghi 80 5 7 78 12 15 79 17 22 91 3 3
23
Tabela 4- Valores das concentrações expressas em μgkg-1 obtidas na extracção total das
diversas amostras.
1 2 3 4 5 6 7 8
24
Tabela 5 - Valores das concentrações expressas em μg kg-1 obtidas pela extracção com
Tenax para as diversas amostras.
25
1200
1000
Cr 800
600
400
y = 1,1164x
200 R² = 0,9997
0
0 200 400 600 800 1.000 1.200
[BkF] (ng/mL)
Figura 1- Exemplo de uma curva de calibração, neste caso para o BkF. Sendo ,
26