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Enzimas (β-glicosidade)
Atividade da β – glicosidade:
1. Equipamentos:
Balança analítica
pHmetro
Banho-maria
Espectrofotômetro
2. Reagentes:
Ácido cítrico
Ácido maléico
Ácido bórico
Tris (hidroximetil aminometano)
Cloreto de cálcio
p-nitrofenil fosfato
Tampão universal (MUB) - solução estoque: dissolver 12,1 g tris; 11,6 g de ácido
maléico; 14 g de ácido cítrico e 6,3 g de ácido bórico em 500 mL de NaOH (1 mol L-1) e
diluir a solução para 1000 mL com água destilada. Armazenar a solução em geladeira a
4°C.
CaCl2 (0,5 mol L-1): dissolver 73,5 g de CaCl2.2H2O em 700 mL de água destilada,
completar o volume para 1000 mL com água destilada.
Tampão Tris (0,1 mol L-1), pH 12: dissolver 12,1 g de Tris em 700 mL de água destilada
e titular a solução com NaoH até atingir pH 12. Transferir para um balão volumétrico
1000 mL e completar o volume com água destilada.
Solução PNG (p-nitrofenil β-D –glicopiranosídeo 25mM): dissolver 0,377 g de PNG
em 40 mL de MUB (pH 6,0), após a dissolução, completar a solução para 50 mL com o
mesmo tampão. Estocar a solução em geladeira.
Procedimento: