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Título: Método de DSN para determinação de açucares redutores

Método de DSN para

determinação de açucares
redutores

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Elaboração: 01.06.2019 Maykon César G. de Andrade
Verificação: 01.06.2019 César Tischer
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1. SUMÁRIO
2. OBJETIVO ...................................................................................... 3

3. Campo de Aplicação....................................................................... 3

4. Definições, Siglas e Abreviaturas ................................................... 3

5. Procedimento.................................................................................. 3

5.1 Materiais necessários .................................................................. 3

5.2 Reagentes necessários ............................................................... 4

5.3 Preparo do Reagente .................................................................. 4

5.4 Metodologia de análise................................................................ 5

6. Representação dos resultados ....................................................... 5

7. Realização do ajuste linear ............................................................. 6

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2. OBJETIVO

O objetivo deste POP é determinar a concentração de açucares redutores

através do método DSN.

3. CAMPO DE APLICAÇÃO

As aplicações para o método de DSN para determinação de açucares

redutores totais são diversas, porém iremos utilizar o método para determinar a
concentração de açucares redutores em uma amostra de glicose.

4. DEFINIÇÕES, SIGLAS E ABREVIATURAS

Espectrofotômetro - instrumento que mede a intensidade de radiação para

cada comprimento de onda numa região do espectro eletromagnético, ger. no
espectro visível.
UV – Radiação ultravioleta (UV) é a radiação eletromagnética ou os raios
ultravioletas com um comprimento de onda menor que a da luz visível e maior
que a dos raios X, de 380 nm a 1 nm.
Açúcar redutor - Um açúcar redutor é qualquer açúcar que, em solução
básica, apresenta um grupo carbonílico livre aldeído (derivado de uma aldose).
Sua capacidade de redução se dá pela presença de um grupo aldeído ou cetona
livre. Todo monossacarídeo, alguns dissacarídeos e oligossacarídeos.

5. PROCEDIMENTO

5.1 Materiais necessários

Balão volumétrico

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Béquer
Cubetas de vidro
Frascos âmbar
Pipetas graduadas
Tubos de ensaio
Espectrofotômetro

5.2 Reagentes necessários

Água destilada
Ácido 3,5-dinitrosalicílico
Glicose
NaOH
Tartarato de sódio e potássio
Fenol
Metabissulfito de sódio
Fenolftaleína

5.3 Preparo do Reagente

Para preparar o regente de DSN precisaremos dissolver em 700 ml de

H2O destilada 5,3 g de ácido 3,5 dinitrosalicílico, 9,9 g de NaOH e após a diluição
adicionar 153g de Tartarato de sódio e potássio, 3,8 g de Fenol aquecido a 50°C
e 4,15 g de Metabissulfito de sódio.
Após o preparo do reagente devemos testa-lo titulando 3 ml do reagente
de DSN com HCl na concentração de 0,1 N com a utilização de 2 gotas de
fenolftaleína como indicador. Para a titulação deve ser gasto um volume de 5 a
6 mL de HCl. Caso na titulação seja gasto um volume menor que 5 mL de HCl

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iremos adicionar 2g de NaOH para cada mL de HCl que gastar a menos do

esperado.

5.4 Metodologia de análise.

Para determinarmos a concentração de glicose na amostra primeiro

precisamos criar uma curva de calibração com amostras de concentrações
conhecidas de açucares redutores. Portanto utilizamos a tabela abaixo como
referência para preparar as soluções de glicose com reativo de DSN.

Figura 1 - Tabela com as medidas de glicose e reativo de DSN para cada tubo.

6. REPRESENTAÇÃO DOS RESULTADOS

Após a preparação dos tubos iremos preparar também a nossa amostra

coletando uma alíquota de 1 mL e adicionando 0,5 do reativo de DSN. Tendo
todas as soluções preparadas iremos realizar a leitura da absorbância em um
espectrofotômetro no comprimento de onda de 540 nm.

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Figura 2 - Quadro para ser utilizado como esquema durante o preparo das soluções e registro das
leituras de abs.

Após a medição dos valores de absorbância iremos realizar a plotagem

dos dados obtidos na tabela acima para realizar um ajuste linear dos dados.

7. REALIZAÇÃO DO AJUSTE LINEAR

Com o auxílio do software Excel imputamos os valores lidos de

absorbância em uma planilha e as respectivas concentrações para cada leitura,
após isso inserimos um gráfico de dispersão e adicionamos uma linha de
tendência linear. Abaixo segue um exemplo de gráfico com ajuste linear.

Figura 3 - Modelo de gráfico de ajuste

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Como agora temos a equação de ajuste, podemos utilizar a equação e

isolar a concentração, dessa forma conseguimos detectar a concentração da
amostra de interesse.

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