DISCIPLINA: Biologia Celular

PROFESSOR: Ulisses Cesar de Araujo

ROTEIRO DE AULA PRÁTICA

TÍTULO
Observação das estruturas celulares por microscopia óptica

INTRODUÇÃO
Existem dois níveis de organização das células- o nível procariótico que inclui os domínios Archae e
Eubacteria e o nível eucariótico - Eucaria, ao qual pertencem todos os demais seres vivos (protistas, fungos,
animais e vegetais).
Entre os procariotos há uma evidente simplicidade estrutural e reprodutiva, enquanto que a organização
eucariótica claramente evoluiu com o aumento de complexidade estrutural - aumento de tamanho e
compartimentação -, aperfeiçoamento de funções metabólicas com divisão de trabalho e especialização
(organelas), além da aquisição de genomas grandes, com enorme quantidade de DNA extra.

OBJETIVOS
• Identificar a diversidade entre células;
• Analisar estruturas em diversos tipos de células;
• Utilizar corretamente o microscópio (figura identificando suas partes- em anexo), observando os cuidados
necessários à sua conservação
• Avaliar a importância do microscópio como instrumento imprescindível à observação
de estruturas celulares.

MATERIAL

− microscópio óptico
− béquer contendo água da torneira
− conta-gotas - infusão de alface ou água natural
− papel toalha ou de filtro - ramo de Elódea (Anacharis canadensis)
− solução de azul de metileno a 1%
− vidro de relógio ou placa de Petri
− lâminas e lamínulas
− solução salina a 8%

PROCEDIMENTOS

A - Observação das células da elódea

Material: - microscópio, lâmina, lamínula

- folhas de Elodea sp.
- Água, solução salina 8%
- Papel de filtro

Procedimento:
1 – Retire uma folhinha da planta aquática (Elodea sp.), e utilizando água, prepare uma lâmina para
observar ao microscópio.
2 – Use a lente de pequeno aumento para ter uma idéia geral da folha e, em seguida, coloque um
aumento maior. Observe os corpúsculos verdes (cloroplastos) que preenchem as células. Tente localizar
o núcleo e o citoplasma.
Fique atento para ver se os cloroplastos se movimentam (ciclose).
 Faça o desenho científico deste tecido vegetal.

3 – Para evidenciarmos a ocorrência de osmose, basta pingar uma gota de solução salina 8% sobre
um bordo da lamínula, e no lado oposto, utilizarmos um pedaço de papel de filtro para substituirmos a
água pela solução salina 8% entre a lâmina e a lamínula. Observe as modificações sofridas pelas células
deste tecido, faça o desenho científico e tire suas conclusões.
B - Observação das células da mucosa bucal

Material: - microscópio, lâmina, lamínula.

- papel filtro, swab
- corante (azul de metileno)

a) Bocheche com água potável a fim de limpar a cavidade bucal;

b) Como auxílio de uma espátula ou swab, raspe a face interna (mucosa) da bochecha;
c) Despreze o material mucoso obtido e raspe a novamente, na mesma região;
d) Deposite o material coletado em uma lâmina limpa e, em seguida, pingue uma gota de solução de
azul de metileno sobre a mesma;
e) Cubra o material com uma lamínula limpa e deixe corar por 10 minutos;
f) Coloque a lâmina entre dois discos de papel de filtro dobrado, e numa superfície
perfeitamente plana, proceda ao esmagamento do material, pressionando a lamínula como
o dedo polegar;
g) Leve a preparação ao microscópio e movimente a platina, percorra o campo a fim de localizar as
células. Faça observações com as objetivas de médio e maior aumentos;

– Observe ao microscópio e procure identificar as células.

Conseguiu observar as células?
Qual o seu aspecto geral?
Observou o núcleo?
Faça o desenho científico da célula observada.

Desenhe o que você observou:

C - Observação da infusão de alface / água natural
A infusão de alface deve ser preparada macerando-se uma pequena folha de alface em água natural. Deixe
repousar por dois ou três dias em local ventilado, protegido da luz direta do sol, para que “flora”. Algumas
fontes de águas naturais são naturalmente ricas em germens tornando desnecessário o enriquecimento com a
alface, porém podemos tentar observar estes mananciais diretamente. Nesse caso, centrifugue uma pequena
amostra de água para decantar/concentrar os organismos.
a) Coloque uma gota da infusão de alface ou de água natural sobre a lâmina. Em seguida,
faça a dispersão do material, com o auxílio do estilete.
b) Cubra a preparação com a lamínula;
c) Leve a lâmina ao microscópio e observe a preparação com as objetivas de 4x, 20x e 40x;
d) Caso observe estruturas menores móveis, pingue uma gota de óleo de imersão na lamínula
e utilize a objetiva de imersão para identificação dos procariotas.
e) Desenhe as células observadas. (compare com as células contidas nas pranchas do final do documento).

ATIVIDADES
1. Identifique as células observadas em: procarióticas ou eucarióticas, animais ou vegetais, descrevendo
diferenças entre estes tipos celulares.
2. Entre os unicelulares, podemos destacar sua diversidade em mecanismos utilizados para locomoção,
sobretudo nos protozoários. Que estruturas celulares são responsáveis pela locomoção nos protozoários?
4. A elódea representa um vegetal. Que características são peculiares às suas células?
6. Explique a importância da organização compartimentada, característica das células eucarióticas;
ANEXO

Partes do Microscópio Óptico de

Campo Claro
Partes que compõem o microscópio

1. Oculares: contêm as lentes oculares, as quais fornecem um poder de aumento de 10x a 15x, geralmente. É
por aqui que você olha através.
2. Revólver: segura as lentes objetivas e pode ser girada facilmente para mudar o aumento.
3. Lentes objetivas: geralmente, há três ou quatro lentes objetivas em um microscópio, consistindo de poderes
de aumento de 4x, 10x, 40x e 100x. A fim de obter o aumento total de uma imagem, você precisa multiplicar o

aumento das lentes oculares pelo aumento das lentes objetivas. Portanto, se você utilizar em conjunto uma

lente ocular de 10x com uma lente objetiva de 40x, o aumento total é de 10 x 40 = 400 vezes.
4. Presilhas: seguram a lâmina no lugar.
5. Platina: é uma plataforma plana que suporta a lâmina sendo analisada.
6. Diafragma: controla a intensidade e o tamanho do cone de luz projetado sobre o espécime. Como uma regra
geral, quanto mais transparente o espécime, menos luz é requerida.
7. Fonte de luz: projeta luz para cima através do diafragma, lâmina e lentes.
8. Base: suporta o microscópio.
9. Condensador: ajuda a focar a luz sobre a amostra analisada. É particularmente útil quando utilizado em
conjunto com as lentes objetivas mais poderosas.
10. Braço: suporta o microscópio quando carregado.
11. Botão macrométrico: quando o botão é girado, a platina é movida para cima ou para baixo, a fim de promover
um ajuste grosso de foco.
12. Botão micrométrico: utilizado para um ajuste fino de foco.

Como utilizá-lo
O Microscópio é o instrumento destinado a observar seres e coisas tão pequenas que se tornam
invisíveis a olho nu. Fundamentalmente, o microscópio está formado por um conjunto de peças móveis (parte
mecânica) e por uma associação de lentes (parte óptica).
A partir do momento em que o homem aprendeu e conseguiu polir a primeira lente, tornou-se possível
o descobrimento de um mundo até então inimaginado, povoado de numerosos e variados seres. A princípio, o
microscópio era formado por uma simples lente de aumento. Posteriormente, a associação de lentes tornou-se
possíveis maiores aumentos e, com isto, o homem começou a “espionar” aquele mundo até então invisível,
descobrindo mais e mais, à medida que a técnica no preparo das lentes e a utilização de corantes evoluíam. Hoje
em dia, não só usamos os microscópios comuns com lentes e luz, mas também microscópios eletrônicos que se
utilizam de campos eletromagnéticos e feixes de elétrons, conseguindo com esta nova técnica, aumentos que
ultrapassam a 100.000 vezes. É um “mergulho” no mundo do infinitamente pequeno.

Repare, quanto maior for o aumento, menor será a área observada. Toda vez que for
observar alguma coisa ao microscópio, use sempre a objetiva de menor aumento em primeiro lugar,
pois ela lhe dará maior visão do material. Em seguida use o segundo aumento.

Eleve o canhão e troque a objetiva girando o revólver e torne a focalizar com todo cuidado.

Atenção: O foco de uma lente, isto é, o ponto em que a imagem aparece com maior nitidez, varia com
a potência da lente. Como temos objetivas com diferentes aumentos, isto significa que teremos
diferentes focos. Quanto mais potente for a lente objetiva, tanto mais próxima ela estará da lamínula,
aumentando assim o risco de quebrá-la, portanto, cuidado!
 Atenção: A objetiva 100x deverá ser usada em microscopia de imersão, isto é, coloca-se sobre a
lâmina uma gota de óleo de cedro e, sobre esta gota, mergulha-se a objetiva. A função do óleo de
cedro é proporcionar maior iluminação ao canhão.

Em termos de formação de imagem é fundamental entendermos o significado de 3 conceitos

muito importantes, que são o poder de ampliação, o poder de resolução e o limite de resolução.
Poder de ampliação: capacidade de um aparelho aumentar n vezes uma imagem. Na
microscopia é dado pelo produto entre a ampliação das oculares e a ampliação das objetivas.
Poder de resolução: capacidade de um aparelho fornecer imagens distintas de dois pontos
distintos.
Limite de resolução: distância mínima a que dois pontos podem estar para o aparelho os
mostrar individualizados.
O que determina a riqueza dos detalhes da imagem fornecida por um sistema de imagens é o
seu poder de resolução e não o poder de ampliar o tamanho dos objetos. A capacidade de
aumentar só tem valor prático se for acompanhado de um aumento do poder de resolução. Esse
limite de resolução depende essencialmente da objetiva, já que as oculares não podem
acrescentar detalhes à imagem, pois sua função é aumentar de tamanho essa imagem que é
projetada no seu plano de focagem pela objetiva.

O aumento de uma imagem vista ao microscópio óptico é sempre o produto dos aumentos
fornecido pela ocular, multiplicado pelos aumentos fornecidos pela lente objetiva usada. Portanto, se
você estiver usando uma ocular de 10 X e uma objetiva de 40 X, a imagem observada estará
_____________________ vezes aumentada.

Atenção: Em qualquer trabalho com o microscópio, é de grande importância uma iluminação

adequada. Se o material estiver muito iluminado ou com pouca luz, não dará uma visão nítida e real.
Tenha sempre em mente todos os recursos de que o microscópio dispõe para se obter melhor
contraste.

Como montar uma lâmina e observar ao microscópio

a – coloque sobre uma lâmina limpa e desengordurada uma gota de água;

b – tome uma lamínula, também limpa e desengordurada e encoste um dos lados na lâmina, bem próximo
da gota, de modo que o líquido se espalhe em toda extensão da lamínula;
c – agora, vagarosamente, vá baixando a lamínula, só a soltando quando o ângulo formado pela lâmina e
lamínula for bem pequeno. Procedendo assim, você evitará a formação de bolhas de ar que poderão
prejudicar o seu trabalho;
d – se houver excesso de água por fora da lamínula ou se a lamínula estiver frouxa, deveremos absorver o
excesso de água com um papel de filtro.

Atenção: Tenha o cuidado de fazer a montagem da lâmina sem deixar nenhuma bolha de ar entre
lâmina e lamínula; em certas montagens isto terá grande importância.
 1) Agora coloque a lâmina preparada no microscópio seguindo as etapas abaixo:

a – eleve o canhão girando o parafuso macrométrico;

b – prenda a lâmina com o material a ser observado nas pinças encontradas sobre a mesa de platina;
c – Acenda a fonte luminosa de modo que a luz reflita através da lâmina, deixando o campo do
microscópio bem iluminado;
d – gire o revólver e coloque a objetiva de menor aumento;
e – Gire o parafuso macrométrico até chegar bem próximo da lâmina, (Atenção: Esta operação deverá ser
realizada, olhando pelo lado de fora e não pela ocular, pois assim procedendo você evitará quebrar a
lamínula, estragando o material e perdendo tempo);
f – olhando pela ocular, você suspenderá vagarosamente o canhão, até que consiga ver alguma coisa;
g – a focalização final deverá ser feita com o micrométrico, girando-o para frente e para trás até conseguir
o ponto onde a imagem tem maior nitidez (o foco).
h)Depois vai mudando a objetiva para a de 10x e depois para a de 40x, sempre observando.