07/03/14

CENTRO  UNIVERSITÁRIO  UNA   ELETROFORESE  DE  PROTEÍNAS  EM  GEL  DE  POLIACRILAMIDA  
INSTITUTO  DE  CIÊNCIAS  BIOLÓGICAS  E  SAÚDE   INTRODUÇÃO  
 

PAGE: Polyacrylamide gel electrophoresis

Eletroforese em Gel de Poliacrilamida

Poros (malha) com dimensões moleculares, onde a

ELETROFORESE   separação no gel ocorre de acordo com a filtração em gel e
com mobilidade eletroforética das moléculas.

Indicada para separação de:

§  DNA
§  Proteínas

Dalton  Di7z  

DETERMINAÇÃO  DA  MALHA  DO  GEL  

A polimerização entre Acri-Bis é catalisada por
radicais livres:
§  APS: persulfato de amônio. Se decompõe
naturalmente formando radicais livres.

§  TEMED: estabiliza os radicais livres formados a

partir do APS.

A formação do polímero entre acrilamida ligada a N, N’- ELETROFORESE  EM  CONDIÇÕES  DESNATURANTES  
metilenobisacrilamida determina a dimensão dos poros
formados (malha) no gel. SDS-­‐PAGE  

Depende da quantidade de ligações cruzadas:

Varia em função da concentração de acrilamida e N, N’-
metilenobisacrilamida

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Desnaturação da proteína:
§  Aquecimento a 100 °C
§  β-mercaptoetanol: agente redutor
§  SDS: dodecil sulfato de sódio. Detergente aniônico forte. Desnaturação da
proteína
Efeito do SDS sobre as
proteínas desnaturadas:
Interage com a proteína de §  Conformação linearizada
modo independente da
seqüência primária §  Carga líquida negativa
Ligaçao de SDS
(proporcional a massa com a / proteína
molecular).
1 molécula de SDS para cada
2 resíduos de aminoácidos

Gel
concentrador

Gel
separador

Aparato para eletroforese em

SDS-PAGE

VISUALIZAÇÃO  DAS  PROTEÍNAS  

kDa
75
50 Quitinase de
Crhomobacterium
35
violaceum expressa em
30 Escherichia coli
25

Coloração por azul brilhante de

Coomassie
Coloração por azul
brilhante de Coomassie

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WESTERN  BLOT  

Anticorpo secundário marcado com:

- enzima
- radioativo
- fluorescente

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