rees

s
l t
toor
ssu
u l
oon
n
Tópicos em Validação de M étodos

AA C
C
F &
&
BBF
D r O scar B ahia Filho
B F& A C onsultores

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 1

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Sistema de Gestão
no Lab

s
s
Barreira 1

ee
Confiabilidade Instrumental

t
toor
r
s u
ull
o n
n s 1. Reconhece Padrões,

Barreira 2
C
C o 2. Observa e mantém

AA
“Gargalos” da Análise
sob controle,

&
&
3. Melhora

F
BBF
Barreira 3
Significância do resultado

Barreira 4 Gestor
Cumprimento dos requisitos legais

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 2

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Como os “de fora” pensam
que é

Método Analítico

rees
s
o r
“Sistema Analítico”

o
Como realmente é

u
ullt
t
ss
Qualificação Instrumental Réplica Experimental

Avaliação
oon
n 9 padrão

C
C
Ens aio Lo c al

AA
s 9 Matriz
Adequado? 9 Analitos

F &
& n Adequado?
n
Otimiza Método

BBF
Ajusta / s
Verifica
Es tabilidade
9 Matriz
9 Analitos

Análise de Rotina

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 3

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Por que validar?

s
s
9 A validação do método é feita para garantir que a metodologia

ree
analítica é exata, reprodutível e flexível sobre uma faixa específica

o r
t o
que uma substância será analizada.

s u
ullt
s
9 É uma avaliação que garante a conformidade com as exigências

n
n
legais ou fim proposto (interesse de terceiros) do método analítico

oo
AA C
C
“O processo que prove evidência documentada de que realiza aquilo

&
&
para o qual está indicado para fazer.”

F
BBFObstáculo: Linguagem Metrológica x Linguagem Científica

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 4

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Definições

ICH*

ee
“O objetivo da validação de um método analítico é demonstrar que é

r s
s
adequado para o seu propósito”.

l t
toor
s uu l
*Internacional Conference on Harmonization of Technical Requiriments for Registration of Pharmaceuticals for

s
n
Human Use

Coon
USP**
AA C Para
Para quem?
quem?

&
&
Validação de um método analítico é o processo que fornece uma

F
BBF
evidência documentada, através de estudos de laboratório, de que realiza
aquilo para o qual é indicado para fazer.
A performance é expressa em termos de características analíticas.

**United States Pharmacopeia 24

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 5

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Credenciamento / Avaliação

99 Reconhecimento
Reconhecimento formal
formal da
da competência
competência de
de um
um laboratório
laboratório para
para realizar
realizar
ensaios
ensaiosespecíficos
s
específicos
99Voluntário
Voluntárioeeaberto
abertoaaqualquer
qualquertipo
tipode
delaboratório
laboratório
r
rees
llt
too
nssu
u
Coon
Um
Um laboratório
de
laboratório de
de seus
de ensaios,
ensaios, deve
seus relatórios/laudos.
relatórios/laudos.
deve ter
ter meios
meios para
C
para assegurar

AA
assegurar aa qualidade
qualidade

Os
Os principais
principais meios
&
&
meios são:
são:

F
9 BBF 9
9
usar métodos validados,
ter POP´s de controle interno da qualidade,
9 participar de programas de ensaios de proficiência, e
9 estar credenciado por Norma nacional/internacional

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 6

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Avaliação para Credenciamento

rees
s
r
9 Exame de um laboratório de calibração ou ensaio para

l t
too
determinar a conformidade com os requisitos de credenciamento

l
u
u
previamente estabelecidos

n
nss
9Requisitos do Credenciamento*
C
Coo
NBR ISO/IEC 17025
AA
&
&
NIT DICLA 028 (BPL)

F
BBF
NIT DICLA 083 (Lab. Clínicos)
outros

* Todas as normas fazem alusão a: Validação de métodos e Estimativa da Incerteza da medida

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 7

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Protocolos de Validação

9 EuraChem,
rees
s
9 ICH

l t
toor
9 US FDA
9 US EPA
ssu
u l
9 ICH
oon
n
IUPAC (Interdivisional Working Party on
Harmonisation of Quality Assurance
9 USP
9 FAO/AIEA
9 Codex, AA C
C Schemes for Analytical Laboratories)

9 MAPA (CLAVE),

F &
&
BBF
9 MS (ANVISA)
9 MMA (IBAMA)....

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 8

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Processo de Validação

e s
s
Método Analítico

r e
Software

l t
toor
u
u l
Validação
ss
oon
n Critérios Conformidade

AA C
C
Hardware

F &
&
validação. BBF
9 A qualificação instrumental (IQ) é uma etapa anterior ao processo de

9 Antes de validar um método, deve-se certificar que todos os esforços de

otimização já tenham sido esgotados para as condições locais do ensaio.

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 9

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Elementos da validação

rees
s
9 Especificidade/ seletividade (interferência)

l t
toor
l
9 LOD
9 LOQ

nssu
u
9 Faixa (Linearidade)

Coon
C
9 Exatidão (recuperação)

AA
9 Precisão ( Repetibilidade, Precisão intermediária e

&
&
Reprodutibilidade)

F
BBF
9 Robustez (resistência a variações intencionais)
9 Aplicabilidade (nível)

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 10

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Plano de Validação

s
Elemento de validação

s
1. Linearidade e Faixa

o r
ree
- prepare 5 níveis de soluções padrão

ullt
t o Tarefa experimental
- adicione 0, 50, 75, 100 e 150% TD

n
nssu
o
- mede 3 x cada

C
C o
AA
Critérios de aceitação
- gráfico adequado
- RSD 10%

F &
&
BBF
- modelo de Regressão
- média, SD e RSD%
- LOD e LOQ (instrumental)
Cálculos

- Limite superior (LSC) e inferior da curva (LIC)

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 11

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Plano de Validação

Elemento de validação

s
s
2. Exatidão

o r
ree
- prepare 12 réplicas de placebo

ullt
t o
Tarefa experimental
- fortifique 0, 80, 100 e 120% TD
- mede 3 x cada
n
nssu
C
Coo Critérios de aceitação
- 80 ≥ % recuperação ≤ 120
AA
&
- RSD (médio) 15%

F &
BBF
Cálculos
- % recuperação
- média, SD e RSD%
- LOD e LOQ (método)

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 12

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Plano de Validação

s
Elemento de validação

s
3. Seletividade/Especificidade

o r
ree
- prepare 5 réplicas de placebo

ullt
t o
Tarefa experimental
- mede 3 x cada

n
nssu
- média ≤ 33% do LOQ (método)
C
Coo
AA
Critérios de aceitação
- RSD ≤ 15%

F &
&
BBF
- Concentração equivalente do placebo
- média, SD e RSD%
Cálculos

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 13

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Plano de Validação

s
Elemento de validação

s
4. Precisão (repe e repro)

o r
ree
ull
- prepare 5 réplicas de placebo (2 labs mínimo)
t
t o Tarefa experimental
- fortifique com 100% LOQ

n
nssu
o
- mede 3 x cada

C
C o
AA
Critérios de aceitação
- RSD ≤ 15%

&
- 80 ≥ % recuperação ≤ 120

F &
BBF
- % de recuperação
- média, SD e RSD%
- teste de significância de Fisher
Cálculos

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 14

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Plano de Validação

s
Elemento de validação

s
5. LOQ e LOD

o r
ree
- prepare 5 réplicas de placebo

ullt
t o
Tarefa experimental
- fortifique 100% TD

n
nssu
o
- mede 3 x cada

C
C o
AA
Critérios de aceitação
- 80 ≥ % recuperação ≤ 120

&
&
- RSD (médio) 15%

F
BBF
- % recuperação
- média, SD e RSD%
Cálculos

- LOD e LOQ (método)

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 15

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Plano de Validação

Elemento de validação
6. Robustez*

rees
s
l t
toor Tarefa experimental

l
- Nas 12 réplicas do placebo e 5 níveis de
solução padrão, medidas 3 x cada.

nssu
u
Coon
C
- nível de treinamento do técnico, Variações intencionais

AA
- diferentes dias,
- diferentes fornecedores,

&
&
- diferentes laboratórios,

F
- pequenas mudanças nas etapas do método

BBF
- etc.

- dependem das variações Cálculos

*Planejamento experimental (arranjo fatorial) minimiza esforços e promove

informações quanto a robustez.
Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 16
I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 Testes Estatísticos

Usados para facilitar a tomada de decisões, evitando as subjetivas, os

mais comuns são:

rees
s
9 Student

l t
toor
l
Distribuição normal dos valores experimentais – Linearidade e Faixa,
Robustez

nssu
u
9 Cochran

Coon
C
Testa a homogeneidade (variância) dos dados – Linearidade e Faixa,

AA
Exadidão, Precisão
9 Dixon

F &
&
Descobre dados outliers se o teste de Cochram for falso – Linearidade e

BBF
Faixa, Exadidão, Precisão
9 Fischer
Compara a varância de duas populações – Linearidade e Faixa, Exadidão,
Precisão, Robustez

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 17

I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
 LOD e LOQ

u. de Resposta
s
s

ar
e

ne
Inclinação

Li
r
a

r
a
ix
o
Fa
ullt
t o
S/N > 10 e RSD < 10% LoQ

n
nssu
S/N > 3
LoD

o
Interseção

o
b

IUPAC
AA C
C u. de Concentração

F &
&
YL= yB + k * SB

BBF
YL é a menor leitura diferente do “branco”, yB é a média das medidas do “branco”, SB é o desvio
padrão do “branco” e k fator (2,3, etc..)

Referência
LD = 3 * S / a * C LQ = 10 * S / a * C

S é o desvio padrão da medida, a é a inclinação da curva de calibração e C é a concentraçào usada

Tópicos em Validação de Métodos BF&A_ 18
I Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003