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Potentiometric Transducers Based in Conducting Pol
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Investigation of the electrocatalytic activity of sensors based on graphene oxide decorated with Pt, Au or Ag nanoparticles by scanning electrochemical microscopy
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A constante de equilíbrio de troca iônica pode ser calculada Nota-se pela tabela 2 que o melhor coeficiente nernstiano
a partir da razão molar de B- e A-. Em princípio, a seletividade para o eletrodo sensível a nitrato ocorre em valor de pH pró-
dada pela relação tamanho-exclusão do polímero, pode ser con- ximo a 7, indicando boa formação do polímero sobre a super-
trolada pelas mudanças nas condições de eletropolimerização fície do eletrodo. Isto se dá para pirrol, pois o ponto
Tabela 1. Inclinações (mV/década) para curvas de resposta potenciométrica para alguns filmes de PT depositados sobre platina em
solução de cloreto 0,1 mol.L-1 para diferentes cátions28.
Polímero H+ Li+ Na+ K+ NH4+ Mg2+ Ca2+
PT 48,2 39,4 41,8 42,4 44,9 13,6 13,7
PBT 10,6 29,6 34,9 38,5 40,8 05,3 06,0
PMT 22,3 30,7 37,4 38,1 38,8 -2,0 03,5
POT 44,4 46,6 46,2 47,4 45,0 17,5 11,7
POTd 42,8 35,5 39,1 43,5 46,2 12,3 12,6
isoelétrico do íon polimérico ocorre também em pH próximo livre de O2, com 0,5 mg.mL-1 de urease (Sigma, tipo III, 17.000-
à neutralidade. 34.000 U.g-1) em NaNO3 0,1 mol.L-1; sem a adição de eletrólito
Analogamente à equação proposta por Nernst para eletrodos à solução, obtinham-se potenciais muito elevados para
íon-seletivos, EIS, quando um polímero condutor é formado polimerização, indicando alta resistência e baixa condutividade
em solução contendo espécies redox e não-redox, um potencial da enzima, com elevada queda ohmica. Voltamogramas cíclicos
resultante, Efinal, é estabelecido na interface eletrodo-solução, obtidos para os filmes preparados, mostraram picos do par redox
dependente das contribuições dos processos de transferência do polipirrol, PPY, a 117 e 50 mV vs. Ag/AgCl (sem enzima) e
eletrônica e iônica, de acordo com a expressão: dois picos de redução, a 2 e -530 mV (com enzima), respectiva-
mente, redução do PPY e inserção de cátion, Na+, dentro do
Efinal = E’ + {Sredox ln(aox/ared) + SEIS ln(ai + Σkij.aj)} polímero, confirmado pela mudança do eletrólito - KNO3 0,1
mol.L-1. Por fim, usando o reagente de Nessler para detecção
onde E’ é a soma dos potenciais formais dos processos redox espectrofotométrica de amônia e a cronopotenciometria para
e de troca iônica (E’ = E0redox + E0EIS), S o coeficiente angular avaliar o aumento no potencial do eletrodo (devido à geração de
de Nernst (RT/nF), aox e ared as atividades das espécies oxida- íons em solução) confirmou-se a presença de atividade catalítica
da e reduzida, ai e aj as atividades do analito e interferente(s), da enzima, mostrando a potencialidade deste sensor. Uma
respectivamente, e kij o coeficiente de seletividade potencio- otimização deste biossensor é descrita logo a seguir.
métrico. Se as calibrações foram feitas em termos de aox e ared, Vários parâmetros foram otimizados na construção de
com todas as atividades em solução mantidas constantes, o biossensor potenciométrico para uréia33. A eletropolimerização do
primeiro coeficiente nernstiano pode ser obtido, e o número de filme foi conduzida no modo galvanostático com a oclusão da
cargas por mol envolvido no processo redox do polímero cal- enzima na cadeia de polipirrol, usando densidade de corrente de
culado; a relação a ox/a red pode ser determinada por meios 0,5 mA.cm-2 sobre eletrodo de platina (disco de 3mm de diâme-
ópticos. Tem sido demonstrado que no caso do politiofeno, a tro) por 3 minutos em solução contendo pirrol 0,5 mol.L-1 e 4
razão de transferência de elétrons é no mínimo 2 vezes mais mg.mL-1 de urease (Sigma, tipo III). O desempenho do biossensor
rápida que a transferência iônica e Efinal é dominado pelo pro- foi analisado em tampão fosfato 1 mmol.L-1 (pH=7) e 35 oC. Foi
cesso redox30. observada resposta nernstiana na faixa de concentrações de uréia
Neste sentido, Toniolo et al.31 demonstraram que para fil- de 0,5 a 100 mmol.L-1. Quantidades em níveis de traços de Hg2+
mes poliméricos recobertos com trocadores iônicos, Nafion para e K+ inibiram a resposta do biossensor, o qual apresentou tempo
cátions e Tosflex para ânions, a carga e a concentração das de vida pequeno.
espécies eletroativas são incapazes de afetar o potencial do ele- Entre 3 eletrodos estudados, Pt, Au e Cvítreo, o de Pt mos-
trodo, desde que as quantidades do par redox incorporados na trou melhor característica de recobrimento da superfície com
membrana de troca-iônica, representem menos que 5% da capa- filme de PPY-enzima; as concentrações de enzima e pirrol
cidade do filme. Assim, estas membranas seriam vantajosas foram escolhidas por apresentar a melhor relação espessura do
quando aplicadas sobre polímeros condutores, porém o acopla- filme-mudança no potencial do eletrodo. Valores superiores a
mento resultante apresenta vida útil muito curta, cerca de 2 dias. 0,6 mA.cm-2 produziram filmes com baixa incorporação enzi-
mática devido ao processo rápido de polimerização, bem como
4. BIOSSENSORES EMPREGANDO POLÍMEROS tempos superiores a 3 minutos resultaram num decaimento na
CONDUTORES alteração de potencial. Influências do pH e temperatura relaci-
onaram-se com a máxima atividade da urease no biossensor,
A seguir, são discutidos alguns artigos recentes que eviden- devido à problemas de desnaturação protéica quando foram
ciam a grande versatilidade na construção de biossensores, uti- empregados valores diferentes.
lizando-se matrizes poliméricas condutoras onde o material Capacidades tamponantes elevadas, variando entre 1 e 10
bioativo (enzima) é fixado ao transdutor potenciométrico tanto mmol.L-1, dificultam o processo catalítico, daí o uso de um
por oclusão como por ligação covalente entre determinados valor baixo de força iônica, 1 mmol.L-1. Um coeficiente angu-
grupos da enzima e do polímero. lar de 17,5 mV/década foi obtido para o eletrodo (concentra-
Wallace et al.32 descrevem um método para incorporação de ções de uréia de 5,0 x 10-4 a 5,0 x 10-2 mol.L-1), devido à
urease em filme de polipirrol por polimerização galvanostática complexidade do processo, com a conversão de NH3 a íons
(corrente constante) sobre eletrodo de ouro. A presença da enzima NH 4+, enquanto simultaneamente estabelecem-se equilíbrios
foi verificada por espectroscopia de raios-X, análise de amino- entre CO2, HCO3- e CO32-, além das alterações de condutivi-
ácidos, microscopia eletrônica de varredura e voltametria cíclica. dade ocorrendo no filme eletroativo de polipirrol. Na realida-
A atividade da enzima no filme polipirrol-urease foi confirmada de, uréia presente no microambiente adjacente à superfície do
pela conversão catalítica de uréia a gás carbônico e íons amônio; eletrodo, é hidrolisada pela enzima imobilizada, em íons NH4+,
o uso de métodos espectrofotométrico e potenciométrico foram HCO3- e OH -. Este último produz uma mudança de pH locali-
utilizados para determinação de uréia, conforme a equação: zada na interface eletrodo-solução, que o filme de polipirrol
detecta de modo proporcional à concentração inicial de uréia.
Íons Hg2+ e K+ inibem a atividade da urease nas proporções
de 25% ([Hg2+] = 20 mg.L-1) e 20% ([K+] = 250 mg.L-1) quan-
do a concentração de uréia foi de 57 mmol.L-1. O uso deste
biossensor mostrou-se adequado para determinações de uréia
(padrões) entre 0 e 50 mg.L-1 com porcentagens de recupera-
ção de 100 a 102% e estimativas de desvio-padrão entre 1 e
A eletropolimerização foi feita com densidade de corrente de 5% (média de 6 determinações). Esta variação acima de 100%
0,25 mA.cm-2 por 20 minutos em solução de pirrol 0,5 mol.L-1, encontrada nos testes de recuperação está dentro da precisão
E = E’ + RT/nF ln (a PANIox/aPANIred)
novos materiais poliméricos condutores e a moderna instru- glicose, uréia e triglicéries. A polianilina é obtida eletroquimi-
mentação eletroquímica, levam à construção de microeletrodos camente sobre microeletrodos de ouro por ciclagem entre -0,2
com sensibilidade maior em relação aos macroeletrodos, além e 0,8 V vs. ECS em solução 0,1 mol.L-1 de anilina e 0,5 mol.L-
1
da possibilidade de reunir estes dispositivos num único con- em ácido sulfúrico. Glucose oxidase foi imobilizada no
junto (“microarrays”)45. polímero condutor por eletropolimerização em tampão ftalato,
Um microeletrodo é definido como um eletrodo com di- pH=4, contendo anilina 0,1 mol.L-1 e 250 U.I. de enzima/mL
mensão superficial característica menor do que a espessura da de solução, por ciclagem entre -0,2 e 1,2 V durante 2 h. Já as
camada de difusão na escala de tempo do experimento eletro- enzimas lipase e urease foram imobilizadas por adsorção em
químico. Entretanto, para propósitos de discussão destes tampão acetato, pH=5,2, por 2 h. As respostas são obtidas por
microsensores, um eletrodo com dimensão menor que 50 µm alterações de pH no microambiente da matriz polimérica devi-
pode ser considerado um microeletrodo46. do às reações enzimáticas.
Em recente trabalho47, uma variedade de compostos aromá- É possível notar melhores sensibilidades (Tab. 5) destes
ticos sulfonados foram incorporados em matrizes poliméricas microsensores em relação aos macrosensores, devido princi-
de polipirrol. A habilidade destes corantes em complexar íons, palmente à facilidade com que o substrato penetra na malha
como alumínio ou cobre, pode ser usada com vantagens. polimérica de baixa espessura (< 50 µm).
Walace et al48 mostraram que alguns compostos aromáticos
(derivados de ácido sulfônico) também apresentam interações
seletivas com proteínas, propriedade que vem sendo explorada Tabela 5. Comparação entre o desempenho dos macro e
em novos sensores químicos. microbiossensores52.
Microeletrodos oferecem algumas vantagens não apresenta- Sensibilidade, mmol.L-1
das por eletrodos de tamanho convencional, como a condução Glicose Uréia Lipídeo
de experimentos eletroanalíticos em pequenos volumes de amos-
tra, da ordem de microlitros49,50 e a possibilidade de medidas in Macrosensor 0,010 0,005 0,014
vivo, citando por exemplo, a determinação de neurotransmissores Microsensor 0,027 0,015 0,076
e compostos associados em cérebros de mamíferos51.
Um sistema utilizando microeletrodos recobertos com filme
de polímero condutor, polipirrol, é usado para detecção de Um importante artigo de revisão acerca de elementos para
ânions em sistema por injeção em fluxo52. Potenciais de pulso construção de biossensores54, ressalta o crescimento na área da
de 0,40 e -1,0 V com intervalos de tempo de 60 ms são apli- polímeros condutores como sensores químicos e suportes para
cados aos microeletrodos, reduzindo e oxidando o polímero. vários elementos bioativos incorporados à matriz polimérica.
Usando glicina 1 mol.L-1 como eluente (1 mL.min-1), contendo Dentre os polímeros mais empregados estão o polipirrol
diferentes cátions e ânions, verifica-se com que seletividade (25,2%), poli-o-diamino-benzeno (6,8%), nylon (4,1%),
estes íons são incorporados dentro da matriz polimérica duran- policarbonato (3,6%), poli-vinil-piridina (3,2%) e polianilina
te o processo de oxidação. O desempenho do sistema em fluxo (2,7%) de levantamento de 202 artigos examinados, no período
(Tab. 4) mostra os limites de detecção para alguns ânions, entre 1980 e 1994. Desta forma, substanciais avanços têm ocor-
comparativamente a eletrodos de tamanho convencional com rido no desenvolvimento de novos polímeros condutores, bem
melhores resultados obtidos no experimento. Isto pode ser atri- como no estudo de suas propriedades eletroquímicas e que le-
buído a uma melhora no transporte de massa entre o analito e varão à sensores químicos com melhores características de sen-
o microeletrodo devido ao uso de baixas concentrações dos sibilidade, tempo de resposta e vida útil.
íons no eluente, melhorando a relação sinal-ruído.
7. CONSIDERAÇÕES GERAIS
-1
Tabela 4. Limites de detecção (mol.L ) usando eletrodos de Aplicações de polímeros orgânicos condutores para uso em
polipirrol dopados com ânions cloreto51. sensores químicos foram revisadas dentro do contexto potenci-
Analito Macroeletrodo Microeletrodo ométrico. A deposição eletroquímica destes polímeros garante
uma boa adesão do filme ao substrato, controle do crescimento
- -5
NO3 1 x 10 5 x 10-6 anódico e espessura polimérica, bem como a facilidade no pro-
Cl- 1 x 10-5 5 x 10-8 cesso de fabricação de sensores potenciométricos.
CH3COO- 1 x 10-4 5 x 10-8 A limitada seletividade dos polímeros a vários íons, repre-
CO32- 1 x 10-5 5 x 10-7 senta ainda, uma característica a ser melhorada na aplicação em
PO43- 1 x 10-5 5 x 10-8 eletrodos íon-seletivos. Além disso, quando um polímero condu-
tor é colocado em solução de eletrólito contendo espécies redox
e não-redox, um potencial final de mistura é estabelecido na
É descrito na literatura53 um conjunto de microbiossensores interface com valor que depende das magnitudes relativas das
baseados em polianilina para quantificação enzimática de contribuições dos processos eletrônicos e de troca iônica.