Lista Reatores- Esterilização do ar.

Fontes de micro-organismos no ar:

a. O que são os aerossóis microbianos?
As espécies microbianas suspensas no ar atmosférico, assim como sua
concentração, podem ser extremamente variáveis, dependendo de uma série
de fatores. Pode-se encontrar micro-organismos de maiores dimensões, como
bolores (fragmentos de hifas) e leveduras, assim como espécies de menores
dimensões como bactérias ou seus esporos. Esses microrganismos são
provenientes do solo, ou de plantas, ou ainda de cursos de água, sendo postos
em suspensão pela movimentação do ar ambiente, sendo os de menores
dimensões frequentemente associados a partículas de poeira.

b. Qual é, em média, a concentração de micro-organismos no ar?

Segundo AIBA et al. indicam, para a atmosfera de Tóquio, urna concentração
média de microrganismos de 12x103 partículas/rn3, enquanto que
GADEN;HUMPHREY 2 indicam, para Londres, um valor de 3 a 9x103
partículas/rn3• PARIS et al.3 chegaram a urna concentração média de 1 a
3x10^3 partículas/rn3, no que se refere à atmosfera da capital de São Paulo,
após realizarem amostragens durante o período-de um ano e em diversas
localidades
c. Qual a origem dos micro-organismos no ar? Eles se encontram livres no ar
ou associados a algum suporte? Esporos tendem a se encontrar livres ou
associados? Os micro-organismos do ar são provenientes do solo, ou de plantas, ou
ainda de cursos de água, sendo postos em suspensão pela movimentação do ar
ambiente, sendo os de menores dimensões frequentemente associados a partículas
de poeira. Os esporos geralmente encontram-se associados a partículas de poeira.
d. Como o clima interfere na concentração de micro-organismos no ar?
Dependendo do clima de urna dada localidade, ou mesmo de um dia para outro em
urna mesma localidade, pode-se encontrar diferentes concentrações de micro-
organismos suspensos no ar, assim corno distintas espécies de micro-organismos
suspensos. De fato, ao se efetuar a contagem de micro-organismos no ar em um
ambiente livre de radiações solares e com umidade relativa elevada, muito
provavelmente obtêm-se concentrações elevadas de células vegetativas. Ao contrário,
urna determinação feita após longa exposição à luz solar forneceria urna contagem
preferencial de espécies mais resistentes, corno ·os esporos de bactérias.
Analogamente, a concentração de microrganismos suspensos no ar é drasticamente
reduzida após um período de chuvas e extremamente elevada após um período de
ventos fortes
e. Onde deve ser coletado o ar para um bioprocesso? O local de captação não
deve ser entendido corno aleatório, pois podemos estar captando ar de locais muito
contaminados, corno seria o caso de se localizar a entrada de ar do sistema de
compressão muito próxima do solo, ou ainda voltada para locais particulares e sujeitos
a um maior nível de contaminação.
f. Qual o tamanho dos micro-organismos presentes no ar? Isso será importante
para definir o tamanho adequado de filtros absolutos
As dimensões dos microrganismos suspensos no ar, pode-se considerar corno
representativos valores da ordem de 0,5 a 1,0 µm, ou seja, dimensões de bactérias ou
seus esporos. Por outro lado, as partículas de poeira, que frequentemente transportam
os microrganismos, apresentam diâmetros frequentemente superiores a 4 µm sendo
que os esporos normalmente não estão associados a estas partículas de poeira.
a) Qual é o princípio básico de funcionamento dos amostradores estudados?

c. Explique dois dos amostradores estudados, abordando

funcionamento, vantagens e problemas associados com seu uso.
De uma forma geral, todos os amostradores operam de maneira semelhante,
pois o princípio básico deles consiste em reter, de alguma forma, os
microrganismos suspensos em um determinado volume de ar, dando-se, a
seguir, condições para que estas células proliferem, de maneira a tornar
possível a contagem de colônias, para a quantificação dos contaminantes no
volume de ar amostrado
d. O que é o orifício crítico no amostrador Impinger e qual sua função?
Essa expressão "orifício crítico" significa uma condição de trabalho na qual a
relação entre as pressões reinantes nas extremidades do tubo capilar é
suficiente para produzir velocidade do ar igual à do som.
e. Como é feito um teste de efetividade de esterilização e quais micro-
organismos são utilizados? ( este assunto está abordado no item
“Amostradores” mas vai um pouco além do amostrador).
Apesar dos inconvenientes e cuidados apontados no que se refere a esse tipo
de amostrador, ele apresenta certas vantagens sobre os demais. De fato,
pode-se imaginar a realização de teste de um determinado sistema para a
esterilização do ar, corno por exemplo o teste de um determinado material
filtrante, determinando de forma contínua a eficiência de esterilização ao longo
do tempo de operação do sistema. Pelo emprego de urna suspensão de um
dado microrganismo conhecido, marca-se no meio de cultura a posição da
fenda no instante inicial. Após a incubação, pode-se proceder à contagem do
número de colônias existentes em determinados setores da placa, os quais
corresponderão a certos intervalos de tempo conhecidos, desde que se
conheça a velocidade de rotação da placa. Corno se conhece a vazão, sabe-se
o volume de ar amostrado em cada setor da placa e, portanto, a
correspondente concentração de microrganismos no ar que passou pelo
elemento filtrante em teste. Pode-se, assim, determinar a variação da eficiência
de retenção em função do tempo de amostragem, ou de operação do sistema
de esterilização.
e. Quais os problemas associados à amostragem de ar? Conduzem a
subestimação ou superestimação da contaminação? Cuidados devem ser
observados, especialmente quando se trabalha com aerossóis de microrganismos
definidos, a fim de evitar a presença de aglomerados, que podem ser aleatoriamente
desfeitos sobre a superfície coletora durante a amostragem, gerando contagens
igualmente aleatórias
f. (Questão indicada nos slides) Procure na internet outros tipos de amostradores de
gases, mostrando a figura, indicando a fonte, demonstrando o princípio básico de
funcionamento e o preço.
Calor é o segundo método mais usado na indústria para esterilizar ar em
bioprocessos.
a. Como é operacionalizada a esterilização de ar por calor? Aborde o
funcionamento do equipamento e as faixas de temperatura e tempo
necessários.
O processo consiste em forçar a passagem do ar através de resistores
elétricos, onde o ar é aquecido e, através de sistema adequado, obrigá-lo a
permanecer o tempo necessário a altas temperaturas. Apenas temperaturas
relativamente elevadas permitem tempos de exposição na ordem de alguns
segundos, o que claramente limita a utilização dessa técnica, em se tratando
de elevadas vazões de ar.
b. Schmidell (pg 76) cita um equipamento para esterilização da New
Brunswick. Pesquise esse equipamento.

5. Para vencer diversas situações de perda de carga (listadas em aula) é

necessário fornecer ar sob pressão aos reatores. Normalmente se usa um
compressor para tal.
a. Qual é a relação da compressão com a esterilização do ar?
Em se tratando de reatores de grande porte, diz respeito à necessidade de se
comprimir o ar que é enviado aos reatores, até pressões efetivas da ordem de
3 kg/cm2, a fim de vencer uma série de perdas de carga como a existente nos
filtros para a esterilização do ar, no dispersar do ar no fundo do reator, altura
da coluna líquida de meio de cultivo e a sobrepressão mantida na "cabeça" do
reator (da ordem de 0,2 a 0,5 kg* /em\ a fim de evitar a entrada do ar ambiente
que proporcionaria contaminações (entende-se por "cabeça" do reator o
volume interno acima do líquido
c. É possível esterilizar ar com um compressor?
A compressão obrigatória do ar provoca inevitavelmente um aquecimento do
ar, atingindo-se valores que não são desprezíveis. Assim, um compressor
estacionário, tipo helicoidal, provoca, para uma vazão de ar de 170 m3 /min e
descarga a 3 kglcm2, um aquecimento do ar de 20°C a cerca de 180°C, além
de ser necessária uma certa filtração do ar, na entrada do compressor, para
evitar um maior desgaste de suas partes móveis. Temperaturas inferiores a
200°C são pouco efetivas para a obtenção de ar esterilizado. Sabe-se, no
entanto, que as temperaturas citadas são suficientes para inativar células
vegetativas, apesar do baixo tempo de permanência, restando desta maneira
os esporos e as células que possam estar protegidas de alguma forma. Por
outro lado, caso se imaginasse atingir temperaturas da ordem de 300°C, a fim
de obter ar esterilizado em poucos segundos de permanência significaria,
dependendo do tipo de compressor e da vazão de ar necessária, comprimir o
ar a pressões bem mais elevadas (da ordem de 10 a 12 kg*/cm2), o que traria
um encarecimento excessivo tanto do equipamento, quanto no que se refere
ao consumo de energia, não sendo, portanto, uma solução de interesse.

O método mais usado para esterilizar grandes quantidades de ar, ou

ar em grandes vazões na indústria e até mesmo em laboratório é a
filtração.
a. Schimidell recomenda um filtro para cada reator, e não uma filtração central
e distribuição do ar estéril. Por quê? Esse procedimento centralizado não é
conveniente, independentemente das dimensões dos reatores e, portanto, das
vazões de ar necessárias, pois coloca-se em risco todo o conjunto de reatores,
caso ocorra a falha do sistema de filtração. A eventual economia que se possa
 fazer, quanto ao investimento inicial, não justifica o risco que se irá correr ao
longo da operação da planta.
b. O que são filtros absolutos e em profundidade? Os filtros de membranas
microporosas, elaboradas a partir de materiais poliméricos, em geral
apresentando características hidrofóbicas, proporcionam a retenção dos
aerossóis microbianos na superfície do elemento filtrante, havendo, portanto, a
retenção apenas por impacto direto das partículas contra o filtro, o qual
apresenta poros de dimensões menores do que os microrganismos a serem
retidos. Normalmente· utilizam-se membranas com poros de 0,2 ou 0,22 ~m,
ou ainda membranas de 0,45 m. Essa é a razão pela qual esses filtros são
também chamados de filtros absolutos. Antes da introdução dos filtros
absolutos (Pall Corporation, Filtron, Millipore, etc.) para a esterilização do ar,
utilizavam-se filtros dé profundidade, contendo como material filtrante carvão
animal (perigo de explosão), fibras de vidro ou lã de vidro.

d. Quais as características de cada um deles? Classifique-as como

vantagens ou desvantagens.
Filtros por profundidade:
Vantagem: Nesses filtros observa-se que os poros ou interstícios entre as
fibras, através dos quais ocorre a passagem do ar, são de dimensões maiores
do que o diâmetro das fibras, empregando-se normalmente fibras com
diâmetro médio da ordem de 3 µm, ou até mesmo fibras de 19 µm. Por esse
motivo a retenção dos microrganismos suspensos no ar não ocorre apenas por
impacto direto, ou retenção mecânica, havendo a participação de diversos
outros mecanismos para a observada eficiência global da camada fibrosa
filtrante. Também por essa razão a operação é designada corno filtração em
profundidade, pois as partículas são retidas ao longo de toda a altura da
camada filtrante.
Desvantagens: Normalmente o filtro deve ser esterilizado ao final de cada
processo fermentativo, de forma a se iniciar o processo seguinte em perfeitas
condições de segurança. Com isso os filtros são esterilizados com muita
frequencia (da ordem de uma vez por semana), ocorrendo uma deterioração da
lã de vidro, a qual vai se tornando opaca e quebradiça, havendo um nítido
aumento da perda de carga e diminuição da eficiência de coleta da camada
filtrante (formação de canais preferenciais). A ocorrência de fibras quebradiças
causa também o arraste de pequenos pedaços de fibras, juntamente com a
corrente de ar. A perda de eficiência, o aumento da perda de carga e esse
arraste, obrigam a se providenciar a troca completa da camada filtrante após
algum tempo de operação

Filtros absolutos
Vantagens:
O emprego de materiais poliméricos hidrofóbicos é aspecto de importância,
pois estes filtros também devem ser esterilizados por vapor, antes do início da
operação de esterilização do ar, havendo ainda a possibilidade da presença de
umidade no ar a ser esterilizado. Assim, essa água não deve permanecer no
filtro, pois isto poderia causar o crescimento de microrganismos na superfície
do elemento filtrante, colocando em risco a obtenção de ar esterilizado, além
de provocar um certo bloqueio à passagem do ar pelos poros, o que significaria
um aumento inconveniente da perda de carga.
i. Que materiais são usados para cada um desses tipos de filtros? Lã de vidro

ii. Quais os mecanismos de retenção de partículas em filtros fibrosos?

A retenção dos micro-organismos suspensos no ar não ocorre apenas por
impacto direto, ou retenção mecânica, havendo a participação de diversos
outros mecanismos para a observada eficiência global da camada fibrosa
filtrante. Também por essa razão a operação é designada corno filtração em
profundidade, pois as partículas são retidas ao longo de toda a altura da
camada filtrante.

iii. Descreva o filtro de lã de vidro apresentado por Schmidell e faça um

breve resumo da operação, cuidados no enchimento, esterilização,
problemas associados, período médio de troca, etc.
- O filtro de lã de vidro consiste simplesmente num recipiente, normalmente em
aço inoxidável, com dimensões da ordem de 2 a 3 m de altura e 1 a 1,5 m de
diâmetro, dimensões estas que são variáveis, dependendo da quantidade de lã
de vidro que deve acomodar. Na parte inferior conecta-se a tubulação de
entrada do ar e, na parte superior, a de saída para o fermentador.
- A camada filtrante ocupa a parte central do recipiente, apresentando
dimensões variáveis dependendo de uma série de fatores, tais como vazão de
ar e diâmetro do recipiente, compactação da camada filtrante, diâmetro da fibra
e eficiência de retenção desejada. A camada de lã de vidro é sustentada por
uma grade de ferro e comprimida por uma segunda grade, colocada na parte
superior da camada filtrante. Após o preenchimento do recipiente com a lã de
vidro, coloca-se a tampa que veda perfeitamente o sistema. Nessa tampa
existem hastes que servem para fixar a grade superior, impedindo que ocorra a
movimentação da camada filtrante, quando submetida a elevadas vazões de
ar.
- O preenchimento do filtro com a lã de vidro deve ser feito de forma muito
cuidadosa, procurando-se distribuí-la uniformemente em todo o volume
disponível, buscando evitar a ocorrência de zonas contendo menos fibras, o
que propiciará a formação de caminhos preferenciais para a passagem do ar.

e. Membranas vem ganhando cada vez mais espaço em aplicações na

indústria bioquímica.
i. Quais as características dos filtros de membranas? Apresentam
características hidrofóbicas, proporcionam a retenção de aerossóis
microbianos na superfície do elemento filtrante. Normalmente utilizam-se de
membranas com poros de 0,2 ou 0,22 µm, ou ainda, membranas de 0,45 µm.

ii. Classifique-as como vantagens ou desvantagens.

Os filtros existentes no mercado são bastante resistentes à esterilização,
havendo menções da possibilidade de efetuar algo como 150 esterilizações a
145°C por 30 min. Novamente, supondo-se a execução de uma esterilização
por semana, isto significaria algo como 3 anos de operação. No entanto,
encontram-se sugestões na literatura segundo as quais se deve providenciar a
troca dos elementos filtrantes uma vez por ano, o que significaria algo como 50
esterilizações. Claramente há a possibilidade de operações mais prolongadas,
mas deve ocorrer um aumento da perda de pressão nos elementos filtrantes,
aumento este que depende da qualidade do ar que chega à membrana
esterilizante.
 A troca dos elementos esterilizantes é muito simples, requerendo pouco tempo
para a sua realização. No entanto, tal operação deve ser efetuada com todo
cuidado, a fim de não se,danificar a membrana filtrante, além de posicionar
adequadamente os anéis de vedação do sistema. Após a operação de troca de
cartuchos, deve-se efetuar testes de manutenção de pressão interna, a fim de
verificar a existência de vazamentos, assim como é recomendável a realização
de testes de efetiva obtenção de ar esterilizado, através do uso de
amostradores

iii. Ao utilizar membranas, pré-filtros podem ser instalados. Por que são
utilizados? Normalmente, com a finalidade de aumentar a vida útil do filtro,
sugere-se a instalação de pré-filtros, construídos com materiais mais
grosseiros e de baixo custo, a fim de retirar do ar partículas de poeira de
maiores dimensões.
iv. Pesquise o valor de algum filtro de membrana e o descreva.

v. Com base nas Fig 5.10 e 5.11 de Schmidell, analise a perda de carga na
filtração em membranas.
As várias empresas capacitadas para fornecerem esse tipo de filtro já dispõem
de propostas adequadas para as necessidades de uma determinada planta,
indicando-se nas Figuras 5.10 e 5.11 alguns dados a respeito desta perda de
pressão, em função da vazão de ar, para elementos filtrantes de 25 em (10")
ou 100 em (40") de comprimento, respectivamente. Conforme fica evidente
nessas figuras, as perdas de carga são realmente reduzidas, e o aumento do
comprimento do elemento filtrante, o que significa aumentar a área de
passagem do ar, permite o emprego de vazões mais elevadas com menores
perdas de carga. Observa-se, também, em ambas as figuras, que um aumento
da pressão de entrada do ar para uma mesma vazão, acarreta uma menor
perda de pressão, o que é devido a um aumento da densidade do gás com o
aumento da pressão.

vi. As membranas podem ser esterilizadas? Como? Sim, por processos de

autoclavagem, por exemplo.

e. O que é um filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air)?

f. Os filtros HEP A ("High Efficiency Particulate Air") são os filtros especialmente
empregados em câmaras assépticas, ou áreas limpas. São placas de acetato
de celulose, apresentando uma eficiência de 99,97% na remoção de partículas
de diâmetro médio 0,3 µm, ou ainda elaborados a partir de fibra de vidro,
apresentando eficiência superior a 99,97% na remoção de partículas
superiores a 0,5 µm.

i. Onde encontram aplicação?

Esses filtros são empregados especialmente em câmaras assépticas,
registrando-se que presentemente predominam as chamadas câmaras
de fluxo laminar, ou seja, câmaras nas quais a velocidade de circulação
do ar é baixa, de forma a se contar com um fluxo em regime laminar.
Dessa forma, imagina-se que os contaminantes gerados no interior da
câmara possam ser retirados deste ambiente pelo próprio fluxo de ar,
 impedindo que um fluxo turbulento possa causar um acúmulo de
contaminantes
ii. Como funciona uma capela de fluxo laminar?
. O conceito de fluxo laminar encontrou várias aplicações, havendo
diferentes sistemas operando em distintas condições, como é o caso de
operar com velocidades de circulação do ar muito baixas, da ordem de
0,1 m/s e até 0,075 m/s.
iii. Sugestões de consulta:
http://www.itpacporto.com.br/arquivos/Professor/Manual%20Capela%20Fluxo
%20La
minar%20QUIMIS.pdf
http://www.splabor.com.br/blog/cabine-de-seguranca-biologica/conheca-
asaplicacoes-de-cabines-de-seguranca-biologica-e-capelas-de-fluxo-laminar-e-
definaqual-e-a-indicada-para-a-sua-necessidade/