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DEPARTAMENTO DE FITOPATOLOGIA
LABORATÓRIO DE BACTERIOLOGIA DE PLANTAS
36.571-000 VIÇOSA - MG – BRASIL
Bacteriocinas têm sido conceituadas como substâncias produzidas por bactérias e que
são capazes, em baixas concentrações, de inibir a multiplicação de outras bactérias
taxonomicamente afins (Brock, 1974; Jack et al., 1995; Riley, 1998; Stanier et al., 1986). São
elas, consequentemente, antibióticos por definição (Davies, 1990; Klement et al., 1990;
Kurylowicz, 1981; Riley, 1998; Romeiro, 1995). Originalmente essas substâncias eram
denominadas "colicinas" pois a maioria das pesquisas eram conduzidas com isolamentos de
Escherichia coli mas, após a constatação de que sua síntese era comum outros grupos
bacterianos, Jacob et al. (1953) cunharam o termo mais genérico bacteriocina para designá-
las.
Histórico
Em conformidade com Jack et al. (1995), já no final do Século IXX, Pasteur e Joubert
relataram a ocorrência de interações antagonísticas entre bactérias, ao observar que um
isolamento bacteriano (talvez E. coli) era capaz de interferir com o crescimento de Bacillus
anthrax. Da mesma forma, Babes, citado pelos mesmos autores observou, em 1985, a
inibição de Corynebacterium diphteriae por um isolamento de Staphylococcus sp., isolamento
esse que passou a ser utilizado no tratamento de difteria na época, sob forma de nebulizadores
para aplicação nasal (Florey, 1946). Contudo, foi o trabalho pioneiro de Gratia (1925) o
primeiro claramente elucidadtivo sobre bacteriocinas, ao encontrar que um isolamento de E.
coli produzia, em meio líquido de cultura, uma substância termoestável e dializável, capaz de
inibir, em baixas concentrações, o crescimento de outro isolamento da mesma espécie. É
possível que esse tenha sido o passo inicial para o estudo das bacteriocinas (Jack et al., 1995).
Natureza
Síntese
Células de estirpes sensíveis possuem em sua superfície sítios receptores que são
bioquimicamente reconhecidos pela bacteriocina (Jack et al., 1995; Riley, 1998), num
processo de complementaridade molecular, à semelhança de outras moléculas informacionais
(Lehninger, 1976). A partir desse processo de reconhecimento, o bacteriocina ganha o interior
da célula via processos ainda não muito bem esclarecidod e, dependendo da interação
microbiana em foco, múltiplos mecanismos de ação podem atuar, isolada ou
concomitantemente, ocasionando a morte de células sensíveis. Dentre esses, como
mencionado por Jack et al. (1995) e também por Riley (1998), a morte das células sensíveis
pode dar-se por alterações na permeabilidade do sistema de membranas, inibição de síntese e,
ou, degradação de ácidos nucléicos, interferência com a síntese de proteínas, bloqueio da
síntese de peptídeo-glicano, interferência com a geração de energia, comprometimento do
fenômeno de transdução, etc.
Significado Biológico
Procedimentos
Esse método, mais qualitativo que quantitativo, é útil quando se deseja testar um
grande número de culturas. Foi utilizado, por exemplo, por Moura (1996) e Moura et al.
(1995), para detectar atividade antimicrobiana em actinomicetos de solo contra R.
solanacearum. Sua grande vantagem é permitir testar vários isolamentos produtores e
indicadores, simultaneamente, na mesma placa.
a) Preparar placas contendo uma camada delgada de meio de cultura adequado ao
crescimento das estirpes produtoras.
b) Proceder ao semeio das poteciais indicadoras, em riscas paralelas e equidistantes,
de comprimento um pouco menor que o diâmetro da placa. Incubar sob condições
que favoreçam o bom desenvolvimento das estirpes
c) Proceder à morte das estirpes produtoras, como anteriormente descrito
(Clorofórmio, UV ou combinação dos dois).
d) Verter meio de cultura propício ao desenvolvimento das estirpes cuja
sensibilidade deseja-se testar, de modo a formar uma sobrecamada de 1mm de
espessura. Aguardar a solidificação.
Semear as estirpes indicadoras, por meio de estrias paralelas e equiditantes entre si, mas em
ângulo reto com as estrias anteriormente feitas na camada de baixo. Incubar e aguardar
descontinuidade de crescimento nas estrias da sobremacada, indicativas de produção de
bacteriocinas pela estirpe semeada na camada de baixo (Figura 5).
N
N
N
N
Cromossoma pAgK84 R2 - O - CH2
R3 - O
Figura 1: Agrocina 84, uma bacteriocina produzida por Agrobacterium radiobacter. (a) -
Plasmídeo pAgK84, que contém gens que codificam para a síntese; (b) - Estrutura
proposta para a Agrocina 84, adaptada de Kerr (1980)
P
E R
SEMEIO
S O
INCUBAÇÃO POR PONTOS
T D
I U
RADIAÇÃO
R T
UV (254nm)
P O
E R
I A
E N
S D
T I
I C INCUBAÇÃO
R
P
A
D
+ SOBRECAMADA
CAMADA BÁSICA
MEIO SEMI-
E O
SÓLIDO
R
A
Segunda camada
Semeio das estirpes
Inibições indicadoras
Segunda camada
Semeio das estirpes
Inibições indicadoras
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