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1, 2004
REVISÃO BIBLIOGRÁFICA
MICROBIANA DO SOLO
MARINICE O. CARDOSO
1
RESUMO
A biomassa microbiana do solo (BMS) é o principal componente do subsistema de decompositores, que regula
a ciclagem de nutrientes, o fluxo de energia, a produtividade das plantas e dos ecossistemas. Portanto, sua
quantificação é de grande importância para estudos sobre a melhoria ou perda da qualidade do solo. Para quantificação
da BMS muitas e diversificadas técnicas foram criadas. Nos métodos pioneiros contavam-se células microbianas
pela observação direta de lâminas de solo ao microscópio. Foram introduzidas, posteriormente, melhorias como o
uso de corantes vitais e o cálculo da biomassa através do biovolume celular e da densidade média das estruturas
vivas. Outros métodos, baseados na extração e determinação de algum componente celular específico (ácido
murâmico para bactérias, quitina para fungos e ATP para a biomassa total, entre outros) surgiram em grande
fumigação-extração são os mais utilizados para a quantificação da BMS. Nesta revisão, os principais métodos são
ABSTRACT
Soil microbial biomass (SMB) is the main component of the decomposers subsystem that regulates nutrient
cycling, energy flow, and productivity of plants and ecosystems. Thus, its quantification is of great importance for
studies aiming to improve or to prevent loss of quality of soils. SMB quantification can be performed by many and
diverse techniques. In the early methods, microbial cells were counted through direct observation of soil smear
(soil samples spread on a microscope slide), under optical microscopy. Lately, improvements were introduced by
using vital stains and subsequent calculation of biomass from cell biovolume and average density of living structures.
Other methods based on extraction and determination of specific cell constituents (muramic acid of bacteria, chitin
of fungi, and ATP of total biomass, among others), appeared to a large extent. However, the current methods of
substrate-induced respiration, and fumigation-incubation and fumigation-extraction, are the most utilized methods
for quantifying SMB. In the present review, the main methods are presented and discussed with respect to their
Key words: direct microscopy, cellular constituents, induced respiration, fumigation-incubation, fumigation-extraction
A biomassa microbiana do solo (BMS) compreende microbiana viva total do solo, com base na concentração
a parte viva da matéria orgânica do solo, excluídas as de algum elemento ou de alguma substância celular,
raízes e organismos maiores do que 5 x 10 µm ,
3 3
considerando-se a população microbiana como uma
contendo, em média, 2 a 5% do carbono orgânico e 1 a entidade única (De-Polli e Guerra, 1999). Ressalva-se
5% do nitrogênio total do solo (Cerri et al., 1992; De-
que as atividades de algumas enzimas podem ser
Polli e Guerra, 1999). Operacionalmente, a BMS atua
relacionadas com a BMS e são auxiliares na
como agente de transformação da matéria orgânica, na
interpretação da condição funcional da BMS total ou de
ciclagem de nutrientes e no fluxo de energia (Wardle e
algum compartimento (Marchiori Júnior e Melo, 1999;
Giller, 1996; Marchiori Júnior e Melo, 1999). A dupla
Taylor et al., 2002; Matsuoka et al., 2003).
função da BMS, de fonte/dreno de nutrientes e de
As possibilidades metodológicas existentes para
catalisador pela execução de processos enzimáticos no
avaliação da BMS são várias e contemplam diferentes
solo, é amplamente aceita (Duxbury et al., 1989; Templer
abordagens. Alguns métodos bastante utilizados têm sua
et al., 2003). A BMS compreende uma fonte potencial
confiabilidade questionada, porque sofrem influência das
de N, P, S e outros nutrientes para as plantas, e os fluxos
através do reservatório microbiano podem ser de condições experimentais (Rodrigues et al., 1994;
particular relevância no solo (De-Polli e Guerra, 1999; Gonçalves et al., 2002). Neste trabalho, foi realizada
Kouno et al., 2002). Através da rápida imobilização de uma revisão de literatura sobre esses métodos, que são
nutrientes, que pode reduzir a disponibilidade de discutidos quanto aos vários aspectos de sua utilidade e
orgânica, a BMS pode ser enquadrada como o O aumento do interesse em microrganismos de solo
N total para aferir alterações na matéria orgânica do transformadores da matéria orgânica do solo, resultaram
conforme ocorram elevação ou redução da matéria foram realizadas com métodos desenvolvidos em
orgânica do solo num sistema ecológico, e a constância bacteriologia médica: amostras de solo eram diluídas com
dessa relação indica o novo equilíbrio desse sistema água esterilizada, disseminadas em placas com gelatina
(Anderson e Domsch, 1989). O estudo quantitativo da e, após incubação, determinava-se o número de bactérias
Até o início da década de 90, os trabalhos sobre BMS (Jackson e Raw, 1975; Grisi, 1984). O método de
tratavam, principalmente, de ajustes metodológicos plaqueamento por gotas é recomendado por Jahnel et
(Gama-Rodrigues, 1999). Neste sentido, deve-se al. (1999) para determinação do número mais provável
exame de microrganismos provenientes de amostras dos mortos, bem como muitas vezes é difícil distinguir
ambientes naturais ocorreu no início do século XX. Os partículas microscópicas do solo de células microbianas
primeiros métodos utilizados consistiam na contagem do (Casida, 1976; Grisi e Gray, 1985; Scheu e Parkinson,
número de células microbianas pela observação direta
1994). Na microscopia direta, os microrganismos podem
de lâminas de solo ao microscópio, sendo introduzido
ser corados por várias formas e observados por
depois o uso de corantes vitais, bem como o cálculo da
diferentes técnicas ópticas (Casida, 1971). Para solos
biomassa através da determinação dos volumes celulares
bem drenados, este método é freqüentemente utilizado
e da densidade média das estruturas vivas (Grisi, 1984;
como padrão, sendo a expectativa geral de que todos os
Grisi e Gray, 1985).
demais métodos apresentem boa correlação com o
ecossistema, por métodos culturais ou por meio da - Método do trifosfato de adenosina (ATP)
outras técnicas capazes de avaliar a massa dos Este método inclui-se num grupo de métodos que se
microrganismos, ou seja, a BMS (Pelczar et al., 1980; baseia, para estimar a BMS, na extração e determinação
Métodos para quantificação da biomassa clorofila, ácidos nucléicos e outros, bem como, no caso,
esse método possa ser utilizado para estimar a população Esse método, proposto por Anderson e Domsch
microbiana total, técnicas de colorações especiais são (1978), é baseado no aumento inicial da taxa de
respiração da população microbiana, até um máximo, adição da glicose em diferentes solos, visto que em alguns
quando uma fonte de carbono, prontamente ocorre um aumento rápido na respiração, enquanto em
decomponível, é adicionada em excesso ao solo. A fonte outros verifica-se inicialmente uma queda e depois uma
usual é a glicose porque a maioria dos microrganismos elevação da respiração (Anderson e Domsch, 1978; Lin
proposta original, o uso da glicose sólida foi substituído de CO devido à decomposição da população microbiana
2
por solução de glicose e o analisador de gás para medir na amostra fumigada, e em uma amostra testemunha,
o CO respirado por cromatógrafo a gás (Sparling e não-fumigada (Rodrigues et al., 1994). A biomassa,
2
West, 1988; Lin e Brookes, 1999) ou respirômetro representada pelo carbono microbiano, pode ser
eletrolítico (Tiunov e Scheu, 2000). Este método facilita liberado do solo fumigado no período de 10 dias de
respiração após o crescimento microbiano, devendo-se Brookes et al. (1985) e Stevenson e Elliott (1989)
atentar para o fato de que há variações na resposta à explicam a determinação do N da BMS pelo método de
fumigação-incubação e afirmam que o maior problema Hargreaves et al., 2003), ou o analisador de C solúvel
para sua estimativa é a desnitrificação ou imobilização Shimadzu TOC-5000A (Bailey et al., 2002; Zimmermann
Como alternativa promissora à técnica de fumigação- 0,08) por Sparling e West (1988) para solos minerais
substituição da incubação por uma extração do carbono recomendação correntemente utilizada (Tate et al.,
da biomassa, que é igualmente liberado pela ação do 1988), inclusive em solos do Brasil para os quais o fator
agente fumigante clorofórmio. Segundo esses autores, k não foi determinado (De-Polli e Guerra, 1999).
CE
umidade do solo para 40% da sua capacidade de etapa de fumigação, Ferreira et al. (1999) utilizaram a
da preparação das amostras de solo para fumigação clorofórmio, e concluíram que a irradiação durante dois
(Grisi, 1997), o que é adotado também no método de minutos foi suficiente para estimar o C, e também o N,
do solo com o clorofórmio, além de matar, rompe as incubação e extração. Na fase de pré-condicionamento,
fumigado contém ambos, matéria orgânica intracelular Os métodos de quantificação da BMS geralmente
Dohrman DC-180 é utilizado para quantificação do C correlacionados com aqueles determinados pelos
avaliado à maneira do C da biomassa, mas usando o Dessa forma, é mais conveniente, sempre que possível,
fator k , que tem dois valores amplamente utilizados, a utilização de mais de um método para estudos sobre a
EN
0,45 e 0,54 (Wardle, 1994), sendo 0,54 o do método biomassa microbiana (Gama-Rodrigues, 1999). Os
em extrato de K SO 0,5 M (relação solo:extrator de daqueles que dependem do crescimento microbiano, mas
2 4
1:4, extração por 30 minutos e análise após digestão de estão muitas vezes sujeitos à variabilidade da eficiência
Kjeldahl) a partir do fluxo de N solúvel total de amostras de extração e rompimento das células (Frighetto e
mic t N mic
nitrogênio microbiano do solo; FN - fluxo obtido da tipos de solos, são altamente variáveis, sendo razoável
t
diferença entre a quantidade de N total recuperado no esperar que equações de calibração derivadas a partir
extrato da amostra fumigada e o recuperado na amostra de ampla faixa de valores abrangendo maior área
não fumigada; e k - fator de correção (0,54), que geográfica sejam mais consistentes do que na faixa
N
expressa a fração do N da biomassa microbiana do solo estreita de pequena área geográfica (Wardle e Ghani,
recuperada após os processos de fumigação-extração 1985). Smolander et al. (1994) e Fierer et al. (2003)
(Brookes et al., 1985; Joergensen e Mueller, 1996). A discutem em suas pesquisas as razões de estimativas
oxidação de persulfato alcalino para determinação distintas da BMS com os métodos que utilizaram:
Muito se discute ainda sobre a confiabilidade dos consideram que os valores de ATP podem não ser
atuais métodos, principalmente quando se deseja estimar indicadores fiéis do estado metabólico de um organismo
a biomassa dos microrganismos in situ, de maneira ou de uma população, visto que apenas uma parte da
mais próxima da realidade, ou seja, estimando-se seu população poderá estar em crescimento, e admitem como
melhor indicador a carga energética de adenilato, dada população microbiana (Pfenning et al., 1992; Messias
por [(ATP) + 0,5 (ADP)] / [(ATP) + (ADP) + (AMP)]. et al., 1999). O alto teor de argila protege a matéria
Seu valor, a partir de dados de vários autores é na faixa orgânica da decomposição e torna os microrganismos
de 0,8 a 0,95 (Grisi, 1996). menos ativos pelo confinamento em pequenos poros
al., 2003). Ta m b é m , o seu emprego requer a Fumigação-extração. Neste método, pelo fato da
disponibilidade de equipamento que possa determinar fumigação ser seguida, de imediato, pela extração do
acuradamente o CO respirado (Wardle, 1994). Sobre carbono das amostras, são evitados os fatores químicos
2
isto, Hashimoto (2002) descreveu um método simples e/ou biológicos que interferem na reconstituição da
para medição de um volume pequeno do gás CO usando população microbiana, responsável pelo aumento da
2
um analisador de gás infravermelho, tanto para liberação de CO das amostras fumigadas, como ocorre
2
Igualmente, em solos com alto teor de argila aliado à dependem dos materiais do solo (Scheu e Parkinson,
determinação da biomassa microbiana com o uso dessa amostras, como terra fina secada ao ar (TFSA), teve
técnica, onde, provavelmente, as aludidas condições dos resultados promissores somente quando níveis e períodos
para avaliação da BMS, sejam várias e com diferentes substrate-induced respiration, and phospholipids fatty
abordagens, ainda não são técnicas de fácil manipulação. acid analysis. Soil Biology & Biochemistry, v.34, n.9,
da BMS. No entanto, não deve ser esperado que esses to measure microbial biomass nitrogen in the soil. Soil
métodos apresentem a precisão e exatidão dos métodos Biology & Biochemistry, v.17, n.6, p.837-842, 1985.
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