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Micropropagao de jambu [Acmella oleracea (L.) R.K. Jansen]

MALOSSO, M.G.; BARBOSA, E.P.; NAGAO, E.O.


Universidade Federal do Amazonas, Instituto de Cincias Biolgicas, Bloco E, Laboratrio de Cultura de Tecidos
Vegetais. Avenida Rodrigo Otvio Jordo Ramos, 3000 Mini-Campus Universitrio, Bairro Japiim. CEP: 69,077330, Manaus (AM) Brasil. (milena@ufam.edu.br; barbosaed@bol.com.br; eonagao@ufam.edu.br).

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi definir um protocolo para rpida multiplicao in vitro de
jambu, uma planta medicinal da Amaznia com atividade larvicida contra Aedes Aegyptii.
Segmentos nodais advindos de plantas adultas mantidas em casa de vegetao foram submetidos
a trs concentraes de hipoclorito de clcio. Brotos axnicos resultantes do tratamento com
0,25% deste agente desinfestante foram utilizados como fonte de explantes para quatro
experimentos de multiplicao. O meio de cultura indicado foi o MS suplementado com 0,1 mg L-1
de cinetina, que proporcionou 100% de explantes com brotao, 93,33% de plantas enraizadas
e ausncia total de calos. Experimentos comprovaram que as posies centrais da gema
promovem 86,67% de explantes com brotao e brotos com 7,61 cm de altura, alm de induzir
100% de plantas enraizadas, e que o substrato Plantmax o mais indicado para a aclimatao,
apresentando 78,81% de plantas vivas. Deste modo, esta espcie pode ser produzida em larga
escala pelo protocolo aqui estabelecido.
Palavras-chave: micropropagao, plantas medicinais, Amaznia, atividades anestsica e
larvicida, Acmella oleracea
ABSTRACT: Micropropagation of jambu [Acmella oleracea (L.) R.K. Jansen]. The objective
of this work was to develop a protocol for a fast in vitro multiplication of jambu, an Amazonian
medicinal plant with larvicidal activity against Aedes aegyptii. Nodal segments from adult plants
maintained in a greenhouse were subjected to three calcium hypochlorite concentrations. Axenic
sprouts resultant of the treatment with a 0.25% solution of this disinfectant agent was utilized as
explant source for four multiplication experiments. MS medium supplemented with 0.1 mg L-1
kinetin was established, which led to 100% explants with sproutings, 93.33% rooted plants and
total absence of callus. Experiments proved that bud central positions resulted in 86.67% explants
with sproutings and in 7.61cm-height sprouts, besides inducing 100% rooted plants; also,
Plantmax substrate was the most indicated for acclimatation, presenting 78.81% live plants.
Thus, this species can be produced in large scale through the protocol here established.
Key words: Micropropagation, medicinal plants, Amazonia, larvicidal and anesthetic activities,
Acmella oleracea

INTRODUO
A Acmella oleracea (L.) R.K. Jansen
(Compositae), popularmente conhecida como jambu,
uma espcie medicinal da Amaznia que promove
sensao de formigamento e, por isso, a populao
do Norte do Brasil utiliza o ch de suas folhas no
tratamento de males da boca e da garganta, bem
como anestsico para dor de dente (Lorenzi & Matos,
2002). Embora no haja, at o momento, ensaios
farmacolgicos sistematizados com este vegetal,

estudos realizados por Ramsewak et al. (1999),


detectaram a presena de espilantol nesta espcie
e, seus estudos demonstraram que esta N isobutilamida apresenta potente atividade larvicida
contra Aedes aegyptii, podendo ser utilizado como
importante ferramenta no controle da dengue no Brasil.
Por estas razes, diversas indstrias tm coletado
estes indivduos de maneira indiscriminada,
acarretando em sua eroso gentica.

Recebido para publicao em 20/08/2007


Aceito para publicao em 18/12/2007

Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.10, n.3, p.91-95, 2008.

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No que se refere produo de plantas, a


adoo de metodologias biotecnolgicas como a
micropropagao de extrema importncia, uma vez
que esta tcnica produz um grande nmero de
plntulas em um curto espao de tempo e, de acordo
Guerra et al. (1999), tambm garante a fitossanidade
e estabilidade gentica das mudas, o que possibilita
a reinsero dessas espcies em seu habitat natural,
visto que este est sendo incessantemente devastado
pela ao antrpica.
Portanto, o desenvolvimento de um protocolo
de micropropagao in vitro torna-se importante
ferramenta para a produo de biomassa vegetal,
principalmente quando a espcie em estudo j
apresenta uso potencial como fitoterpico.

MATERIAL E MTODO
Este trabalho foi realizado com Acmella
oleracea L. R. K. JANSEN, popularmente conhecida
como Jambu. Esta espcie da famlia Compositae
foi identificada pelo Prof. Dr. Ari de Freitas Hidalgo e
a excicata encontra-se depositada no Herbrio da
Universidade Federal do Amazonas, sob o nmero
HPM/UFAM:042-C. As plantas aqui utilizadas foram
compradas na Feira do Japiim I, no ms de agosto
de 2004. Para os testes de assepsia, foram utilizados
explantes provenientes de plantas adultas, mantidas
por seis meses em vasos na casa de vegetao da
Universidade Federal do Amazonas. Segmentos
nodais de jambu, com aproximadamente 0,5 cm foram
lavados com detergente ODD neutro e enxaguados
em gua corrente. A primeira assepsia foi realizada
com a imerso dos explantes em soluo de Benomil
1% (m/v), por uma hora, seguida de um banho em
soluo de lcool 70% por 1 minuto. Na seqncia,
aos explantes foi adicionada uma soluo de
hipoclorito de clcio 0,50% (m/v) por 30 minutos. O
mesmo procedimento foi realizado como descrito
anteriormente, porm, com solues de 0,25 e 0,10%
(m/v) de hipoclorito de clcio, respectivamente. Ao
trmino de cada etapa de desinfestao, os explantes
foram lavados trs vezes com gua destilada estril
e inoculados em meio de cultura MS basal, acrescido
de 30,0 g L-1 de sacarose e 8,0 g L-1 de agar-agar, e
mantidos em sala de crescimento. Aps 30 dias, os
explantes foram avaliados quanto presena ou
ausncia de fungos e bactrias, bem quanto a sua
porcentagem de sobrevivncia.
Quatro experimentos foram montados para
desenvolver o protocolo de multiplicao in vitro desta
espcie. Para estes experimentos, os explantes foram
retirados de plantas axnicas crescidas in vitro. No
primeiro, segmentos nodais foram inoculados em
meio de cultura MS suplementado com as citocininas:
benzilaminopurina, cinetina e thidiazuron nas

respectivas concentraes de 0,0; 0,1; 1,0; 3,0 e 5,0


mg L-1. No segundo, gemas localizadas em diferentes
posies no caule (1 a 6), foram seccionadas e
inoculadas em meio de cultura MS suplementado com
0,1 mg L-1 de cinetina. No terceiro, segmentos nodais
foram inoculados, respectivamente, em meio MS, WP
e B5 nas concentraes originais e nas
concentraes diludas duas e quatro vezes, todos
suplementados com 0,1 mg L-1 de cinetina. Todos
estes experimentos foram mantidos em sala de
crescimento e, aps 30 dias, os explantes foram
avaliados quanto porcentagem de explantes com
brotao, ao nmero de brotos por gema, ao nmero
de gemas por haste, a altura de brotaes e a
presena de calos e razes.
Para a aclimatao desta espcie, plntulas
enraizadas in vitro, com parte area de aproximadamente
12,0 cm de altura foram plantadas em bandejas de
isopor contendo trs tipos diferentes de substrato:
Plantmax, terra e areia. Estas plntulas foram
mantidas cobertas por frascos de vidro transparente
durante 30 dias, na casa de vegetao, quando, ento,
os vidros foram retirados. Aps 45, 60 e 75 dias do
plantio, as plntulas foram avaliadas quanto a sua
sobrevivncia ou no em ambiente ex vitro.
Em todos os experimentos deste trabalho
foram utilizados 10 explantes por tratamento e estes
foram realizados em triplicata. O delineamento
experimental adotado neste trabalho foi o inteiramente
casualizado e para a comparao das mdias dos
tratamentos utilizou-se o teste de Tukey ao nvel de 5%.

RESULTADO E DISCUSSO
Todos os explantes tratados com a
concentrao de 0,50% (m/v) de hipoclorito de clcio
morreram (Tabela 1).
Segundo Nietsche et al. (2006), este fato
pode ser explicado pela relao entre o tamanho do
explante e a ao do agente desinfestante, uma vez
que tecidos pequenos so muito susceptveis
degenerao dos tecidos causados pelo hipoclorito
de clcio. Com este experimento, tambm foi
verificado que, com o tratamento de 0,10% (m/v) de
hipoclorito de clcio nenhum explante foi
descontaminado, indicando que concentraes muito
baixas desta substncia no apresentam atividade
bactericida efetiva no jambu. Embora o tratamento
com 0,25% de hipoclorito de clcio tenha
proporcionado baixa porcentagem de explantes vivos
e descontaminados, esta espcie possui uma alta e
rpida taxa de multiplicao, que o nmero de brotos
por gema multiplicado pelo nmero de gemas por
haste (Oliveira & Silva, 1997), tornando possvel
assim, a proposta de desenvolver um protocolo de
micropropagao in vitro para este vegetal a partir
desta assepsia.

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TABELA 1. Porcentagem de desinfestao de


segmentos nodais de jambu com trs diferentes
diluies de hipoclorito de clcio.

A partir dos resultados pode ser indicado para


a multiplicao in vitro de jambu, o tratamento com
0,1 mg L-1 de Cinetina, uma vez que este proporcionou
a maior taxa de explantes com brotaes e boa taxa
de multiplicao, alm da maior altura do broto e a
ausncia total de calos (Tabela 2).
De acordo com Lu (1993), o thidiazuron
mais ativo que a benzilaminopurina para a maioria
das espcies vegetais cultivadas in vitro. No entanto,
para o jambu, tanto o thidiazuron como a
benzilaminopurina mostraram-se menos efetivos na
taxa de multiplicao.
Os tratamentos acrescidos de baixas
concentraes de citocininas, alm de menos

onerosos, apresentam ainda pouca probabilidade de


induo de variao somaclonal (Serafini et al., 2001),
e, alteraes genticas nestes indivduos, podem levar
justamente perda da caracterstica desejada.
Gemas coletadas em diferentes posies da
haste foram avaliadas quanto capacidade de
germinar novas brotaes e, com este experimento,
verificou-se que as gemas da posio 3 induziram a
maior porcentagem de explantes com brotao e
maior taxa de enraizamento, quando comparada com
as demais gemas (Tabela 3).
Esse dado importante porque nem todas
as gemas da haste so potencialmente teis, e no
devem ser usadas indistintamente no processo de
repicagem, pois no fornecero explantes uniformes
quanto ao desenvolvimento in vitro. Isto ocorre porque
elas podem acumular nveis diferentes de reguladores
vegetais endgenos em diferentes posies da haste
e, portanto, podem promover respostas diversas
(Pereira et al., 2005).
As diluies pela metade e pela quarta parte
dos meios WP e B5 promoveram as menores taxas
de multiplicao desta espcie e, as concentraes
basais destes dois meios de cultura induziram as
menores alturas de broto (Tabela 4). O mesmo ocorreu

TABELA 2. Efeito de diferentes tipos e concentraes de citocininas no desenvolvimento in vitro de explantes(1) de jambu.

(1)

Mdias seguidas das mesmas letras, nas mesmas colunas, no diferem estatisticamente, entre si, pelo teste de Tukey ao nvel de 5%.

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TABELA 3. Efeito das diferentes posies da gema no desenvolvimento in vitro de explantes(1) de jambu.

(1)

Mdias seguidas das mesmas letras, nas mesmas colunas, no diferem estatisticamente, entre si, pelo teste de Tukey ao nvel de 5%.

TABELA 4. Efeito de diferentes diluies dos meios de cultura basais, MS, B5 e WP e suas diluies pela metade
e pela quarta parte, no desenvolvimento in vitro de explantes(1) de jambu.

(1)

Mdias seguidas das mesmas letras, nas mesmas colunas, no diferem estatisticamente, entre si, pelo teste de Tukey ao nvel de 5%.

com o meio MS/4. Esta diferena no desenvolvimento


dos explantes provavelmente ocorre porque as vias
bioqumicas e metablicas bsicas que funcionam
nas plantas que crescem sob condio ex vitro so
conservadas nas clulas e tecidos cultivados in vitro
e, por isso, os meios nutritivos devem proporcionar
os nutrientes necessrios ao metabolismo das clulas
em cultivo para o crescimento e diferenciao dos
tecidos (Pereira & Fortes, 2003). Embora no tenha
havido diferena estatstica significativa entre o meio
de cultura MS e MS/2 para as demais caractersticas
analisadas, o meio de cultura MS na concentrao

original foi considerado o mais adequado para o


desenvolvimento in vitro de jambu, j que induziu
brotao em todos os explantes, bem como a maior
taxa de multiplicao (Tabela 4). Como todos os
explantes deste tratamento apresentaram razes, esta
etapa pde ser eliminada do protocolo, tornando-o
menos oneroso.
A aclimatao ex vitro das plntulas de jambu
apresentou alto ndice de sobrevivncia aps 45 dias
de plantio, no substrato Plantmax (Tabela 5). At
aps 75 dias de aclimatao, as plantas sobreviventes
continuaram verdes e vigorosas.

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Tabela 5. Porcentagem de explantes(1) de jambu que


sobreviveram aclimatao em diferentes tipos de
substratos.

AGRADECIMENTO
FAPEAM e SUFRAMA pelo apoio
financeiro e ao Dr. Ari de Freitas Hidalgo pela
identificao da espcie vegetal.

REFERNCIA BIBLIOGRFICA

Um dos fatores que influenciou no ndice de


mortalidade das plantas enraizadas est relacionado
principalmente ao substrato, cujos nutrientes so
limitados e/ou esgotados em pouco tempo. Segundo
Silva et al. (2001), o substrato Plantmax tem sido
considerado adequado para o procedimento de
aclimatao devido aos seus constituintes qumicos,
principalmente pela presena de fsforo, que, de
acordo com Mendona et al. (2003), estimula o
crescimento da parte area da planta, ou ainda s
caractersticas fsicas que apresentam maior
porosidade total, o que d a este substrato maior
capacidade de reteno de gua e aerao. Conforme
Torres et al. (1998), outro fator que pode ter propiciado
a mortalidade das plntulas em processo de
aclimatao a mudana drstica de condies
ambientais, uma vez que a transferncia do ambiente
in vitro para o ex vitro exige que se adapte rapidamente
a estas novas condies ambientais para sobreviver.
Durante a aclimatao, as plntulas passam de um
ambiente onde h baixa transpirao para outro que
exige maior transpirao, o que pode ocasionar
estresse hdrico e, ainda, h outras adaptaes
importantes como a passagem de um estado
heterotrfico para um autotrfico e a alterao de um
ambiente assptico para outro sujeito ao ataque de
microorganismos saprfitos e, eventualmente
patognicos, que podem levar muitas mudas ao bito.
Assim, com os resultados obtidos neste
trabalho, pode-se concluir que a produo de Acmella
oleracea via micropropagao vivel e o protocolo
pode ser utilizado para propagar esta espcie em larga
escala.

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