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Desinfestação e estabelecimento in vitro de explantes de bananeiraIAC 2001´

em diferentes concentrações de hipoclorito de sódio

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Gustavo Alves Pereira

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 Desinfestação e estabelecimento in vitro de explantes de bananeira ´IAC 2001´
em diferentes concentrações de hipoclorito de sódio

Gustavo Alves Pereira1, Bruno Vasconcellos Ribeiro2, Humberto de Carvalho Marcílio3

e Marcílio Bobroff Santaella3
1
Empresa Matogrossense de Pesquisa, Assistência e Extensão Rural S/A – EMPAER-MT (gustavoempaer@yahoo.com.br)
2
Aluno de Graduação Univag - Várzea Grande-MT
3
EMPAER-MT (humbertoempaer@hotmail.com, marcilios19@hotmail.com)

Resumo - A contaminação de explantes ocasiona grandes perdas na micropropagação de plantas, comprometendo a fase de
estabelecimento in vitro. Com o objetivo de obter material vegetal livre de contaminação, foram avaliadas diferentes
concentrações de hipoclorito de sódio na desinfestação de explantes de bananeira (Musa sp.) cultivar IAC 2001. Os
explantes foram imersos em soluções de hipoclorito de sódio contendo 0,2%, 0,5% e 1% de cloro ativo durante vinte
minutos e introduzidos em meio de cultura MS sólido com pH 5,8. O estabelecimento foi realizado em sala de crescimento
com temperatura 25 ± 2 °C e fotoperíodo de 16 horas de luz a uma intensidade luminosa de 30 µmol.m-2.s-1. O delineamento
experimental foi o inteiramente casualizado com quatro tratamentos e cinco repetições, sendo cada repetição composta por
um explante. A maior eficiência dentre os tratamentos testados foi o de imersão dos explantes em hipoclorito de sódio a 1%
de cloro ativo por vinte minutos, e as doses testadas não foram tóxicas aos explantes, permitindo o desenvolvimento normal
dos mesmos.

Palavras-chave: Musa, contaminação, micropropagação, cloro ativo

Disinfection and in vitro establishment of banana tree ´IAC 2001´ explants

in different concentrations of sodium hypoclorite
Abstract - The explants contamination causes great losses in the plants micropropagation, compromising the phase of in
vitro establishment. With the objective of reducing those contaminations, different concentrations of sodium hypoclorite
were evaluated in the desinfection of the explants of banana tree (Musa sp.) cultivar IAC 2001. The explants were immersed
in concentrations of 0.2%, 0.5% e 1% of active chlorine for twenty minutes and introduced in solid medium SM, with pH
5.8. The establishment was accomplished at growth room with temperature 25 ± 2 °C and photoperiod of 16 hours of light at
a luminous intensity of 30 µmol.m-2.s-1. The experimental design was entirely randomized with four treatments and five
replicates, being each replicate composed by five explants. The largest efficiency among the tested treatments was the
immersion of the explants in sodium hypoclorite (1% of active chlorine) for twenty minutes and the tested doses were not
poisonous to the explants, allowing the normal development of the same ones.

Keywords: Musa, contamination, desinfection, micropropagation, active chlorine

Introdução tradicional, mesmo o material sendo de ótima

O Brasil é um dos principais produtores mundiais de
banana, com uma área plantada de 511.151 hectares e área
colhida de 504.586 hectares, no ano de 2006. O Estado de
Mato Grosso cultivou, em 1994, uma área de 56 mil hectares
de banana, tornando-se um dos principais produtores no país,
mas em 2006 a área plantada diminuiu para 7.527 hectares,
segundo dados do IBGE (2008). Essa diminuição na área
plantada começou a ocorrer com a disseminação de pragas e
doenças por meio de mudas tradicionais e com a entrada da
Sigatoka-negra no Estado de Mato Grosso, em 1999, na
região de Cáceres (Souza & Feguri, 2004).
A propagação da bananeira (Musa sp.) pode ser feita de
várias formas: por sementes oriundas da sua inflorescência,
vegetativamente por meio de mudas ou in vitro. Pelo método
qualidade, o processo é lento e permite a disseminação
de doenças e pragas (Souza et al., 2006). A propagação
in vitro é vantajosa, por possibilitar um maior número
de mudas em um tempo de cultivo menor. A
micropropagação de banana pode produzir de 150 a
300 mudas por explante em um prazo de 6 a 8 meses,
como também, no campo, apresenta produção até
30% maior do que as mudas propagadas in vivo (Alves
et al., 2004). O sucesso da micropropagação depende
da sequência de fases ou etapas, onde o êxito de cada
uma é necessário para o êxito da próxima etapa e a
introdução do explante no meio de cultivo
(estabelecimento), cujo sucesso depende de uma
eficiente assepsia dos explantes a serem estabelecidos
(George, 1993).

Tecnol. & Ciên. Agropec., João Pessoa, v.3, n.2, p.43-46, jun. 2009 43
 Um dos princípios básicos para o sucesso da cultura de
tecidos é a utilização de material vegetal em condições
assépticas e, consequentemente, controlar a contaminação
microbiana (Leifert et al., 1994). Esta técnica normalmente
proporciona um ambiente favorável para o crescimento de
microrganismos como: bactérias, leveduras e fungos
filamentosos (Dantas et al., 2002). Os micro-organismos
contaminantes competem com os explantes pelos nutrientes
do meio de cultura, eliminando no meio metabólitos tóxicos,
podendo ocasionar a morte da plântula (Pereira et al., 2003;
Montarroyos, 2000).
Para prevenir ou eliminar a contaminação no cultivo in
vitro de plantas várias pesquisas foram realizadas sobre
assepsia de explantes (Garcia & Rafael, 1990; Erig &
Schuch, 2003), tratamentos das plantas matrizes (Erig &
Schuch, 2003) e uso de produtos antimicrobianos ao meio de
cultura (Pereira & Fortes, 2003; Handa et al., 2005).
Na fase de estabelecimento do cultivo, a contaminação
pode comprometer o trabalho de micropropagação. Quando
é exógena a possibilidade de controle dos principais agentes
contaminantes (fungos e bactérias) é considerável, quando a
contaminação é endógena as consequências podem ser
limitantes, podendo haver perda de tempo, de recursos
financeiros e de material genético (Souza et al., 2006).
Para minimizar a contaminação microbiana, inúmeros
protocolos de esterilização são apresentados por diversos
autores. Estes relatam o uso de substâncias como hipoclorito
de sódio e etanol 70% e, em alguns casos, a adição de
antibióticos ao meio de cultura (Garcia & Rafael, 1990;
Leifert et al., 1991; Buckley et al., 1995; Tahpresert & Reed,
1998; Reed et al., 1998).
Dentre as substâncias com ação germicida, as mais
usadas para a desinfestação de explantes são os compostos à
base de cloro, tais como: o hipoclorito de sódio, hipoclorito
de cálcio. O hipoclorito de sódio por ser um alvejante
comercial e de fácil acesso é o mais utilizado em laboratórios
de cultura de tecidos (Gratapaglia & Machado, 1998).
Os primeiros explantes introduzidos no Laboratório de
Cultura de Tecidos Vegetais da EMPAER-MT apresentaram
perdas consideráveis na fase de estabelecimento in vitro em
decorrência de contaminação superficial com a bactéria
Erwinia sp., sendo esta identificada pelo Laboratório de
Fitopatologia da EMPAER-MT.
O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do hipoclorito
de sódio na desinfestação de explantes de bananeira cv. IAC
2001.
Materiais e Métodos
O trabalho foi realizado no Laboratório de Cultura de
Tecidos da Empresa Matogrossense de Pesquisa, Assistência
e Extensão Rural S/A - EMPAER-MT, localizado no
Município de Várzea Grande, MT.
Foram utilizadas mudas de bananeira do tipo chifrinho da
cultivar IAC 2001, procedentes do Campo Experimental da
44 Tecnol. & Ciên. Agropec., João Pessoa, v.3, n.2, p.43-46, jun. 2009
EMPAER-MT, localizado no Município de Cáceres-MT.
Após a obtenção dos rizomas, os mesmos foram lavados para
retirar o excesso de solo e raiz. Em seguida, as bainhas foram
seccionadas com uma faca estéril (autoclavada), permitindo
assim a redução de seu tamanho. Esses rizomas reduzidos
foram mantidos imersos em água deionizada para evitar a
desidratação até o momento da extração do meristema.
Os tratamentos que constituíram o experimento foram:
T1 (testemunha, sem hipoclorito de sódio); T2 (10%
hipoclorito de sódio ou 0,2% de cloro ativo); T3 (25%
hipoclorito de sódio ou 0,5% de cloro ativo) e T4 (50%
hipoclorito de sódio ou 1% de cloro ativo). Os rizomas, em
tamanhos reduzidos, ficaram imersos nos respectivos
tratamentos durante vinte minutos.
A extração dos meristemas foi realizada em condições
assépticas e incubados em meio de cultura MS (Murashige &
Skoog, 1962), suplementado com sacarose a 30 g.L-1 e o
solidificante phytagel a 2,5 g.L-1, com pH ajustado para 5,8
antes da autoclavagem (esterilização) a 120 °C com 1
Kgf.cm-2 durante vinte minutos. A fase de estabelecimento
foi realizada em sala de crescimento com temperatura 25 ± 2
°C e fotoperíodo de 16 horas de luz a uma intensidade
luminosa de 30 µmol.m-2.s-1.
As avaliações foram realizadas aos 30 dias após o
estabelecimento dos explantes.
O delineamento experimental foi o inteiramente
casualizado com quatro tratamentos e cinco repetições,
sendo cada repetição representada por um explante. Os
dados obtidos foram submetidos à análise de variância e as
médias comparadas pelo teste Tukey a 5% de probabilidade
(Gomes, 1985).
Resultados e Discussão
Os tratamentos utilizando o hipoclorito de sódio (NaClO)
em diferentes concentrações para assepsia dos explantes
resultaram em diferença significativa para as avaliações
realizadas trinta dias após o inicio do trabalho (Tabela 1).
Observa-se que no tratamento Testemunha ocorreram 80%
de contaminação, enquanto nos tratamentos com 0,2% e
0,5% de hipoclorito de sódio houve 20% de contaminação e
somente no tratamento com 1,0 % de hipoclorito de sódio
não houve contaminação. Chaves et al. (2004), em Prunus
sp., verificaram baixo índice de contaminação em explantes
tratados com hipoclorito de sódio nas concentrações 0,5%,
1% 1,5% e 2%. Nietsche et al. (2006) afirmaram que o
hipoclorito de sódio é mais tóxico do que o hipoclorito de
cálcio, e dependendo do tempo de imersão pode ocorrer
desidratação do explantes, porém as concentrações
utilizadas foram eficientes na assepsia e não tóxicas aos
explantes. Naue et al. (2007) verificaram que a utilização de
álcool 70% e hipoclorito de sódio não foram eficientes para
controlar micro-organismos contaminantes em explantes de
Nicotiana tabacum. Carneiro et al. (2000) observaram níveis
de contaminação bacteriana inferior a 30% em explantes de
banana imersos em hipoclorito de sódio, porém não foi
eficiente no controle de fungos. Erig & Fortes (2002), no
estabelecimento in vitro de cultivares de pereira (Pyrus
spp.), obtiveram contaminação bacteriana em 45,7% das
gemas e 18,8% dos meristemas utilizando-se como rotina de
assepsia somente álcool 70% e hipoclorito de sódio. Moraes
et al. (2007) verificaram que as concentrações de 2, 3 e 4% de
hipoclorito de sódio reduziram a contaminação das gemas
axilares em abacaxizeiro, também verificaram que a
concentração de 2% de hipoclorito de sódio, durante 10
minutos proporcionou menor contaminação e sobrevivência
de gemas axilares de abacaxizeiro.
Tratamentos % de contaminação
T1 - 0,0% de hipoclorito de sódio 80
(Testemunha)
T2 - 0,2% de hipoclorito de sódio 20
(0,2% de cloro ativo)
T3 - 0,5% de hipoclorito de sódio 20
(0,5% de cloro ativo)
T4 - 1,0% de hipoclorito de sódio 00
(1% de cloro ativo)
Valores seguidos de letras iguais não diferem entre si, pelo teste de
Tukey a 5% de probabilidade
Conclusões
1. A maior eficiência dentre os tratamentos testados foi o
de imersão dos explantes em hipoclorito de sódio a 50%,
durante vinte minutos;
2. As doses testadas não foram tóxicas aos explantes,
permitindo o desenvolvimento normal dos mesmos.
Agradecimentos
Os autores agradecem à Empresa Matogrossense de
Pesquisa, Assistência e Extensão Rural S/A - EMPAER-MT,
à Empresa Brasileira Pesquisa Agropecuária - EMBRAPA e
à Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Mato Grosso
- FAPEMAT.
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