Relatório Bioprocessos - Dominique Martins Sala

UNIVERSIDADE TECNOLGICA FEDERAL DO PARAN
CMPUS CAMPO MOURO

CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL
Biorremediao ex situ de um solo da Universidade Tecnolgica

Federal do Paran - Campus Campo Mouro, municpio de
Campo Mouro PR, contaminado por hidrocarboneto derivado
do petrleo
Alunos: Dominique Martins Sala
Professor Orientador: Dr. Jos Hilton Bernardino de Arajo
Resumo: Os tratamentos biolgicos aplicados a solos contaminados com hidrocarbonetos de petrleo consistem
em processos com o uso de organismos degradadores, fungos, bactrias ou vegetais. Com isso tem-se o conceito
de biorremediao, sendo uma nova tecnologia para tratar solos contaminados com o uso de microrganismos
capazes de modificar as estruturas e/ou decompor poluentes. H dois tipos de biorremediao, in situ e ex situ.
Nas tcnicas aplicadas in situ, a remediao feita no prprio local de contaminao. J nas tcnicas ex situ,
ocorre remoo e destinao do material contaminado para uma outra instalao apropriada, como um
laboratrio por exemplo. O objetivo do presente trabalho verificar a tcnica de biorremediao ex situ de solo
da Universidade Tecnolgica Federal do Paran, Campus Campo Mouro, utilizando fungos como agentes
biolgicos para degradao de um hidrocarboneto derivado de petrleo. O procedimento experimental consistiu
na escolha do fungo,
inoculao desse fungo em Placa de Petri contendo os meios de cultura BDA,
contaminao do solo com leo diesel, inoculao do fungo, acrscimo de efluente e gua, acompanhamento do
crescimento e por fim a identificao do fungo. O fungo selecionado e identificado para a biorremediao do
solo contaminado foi o
Auricularia nigricans, que possui caractersticas no patognicas e corpos de
frutificao gelatinosos. Aps um perodo de aproximadamente uma semana, foi possvel observar o incio do
desenvolvimento fngico
quase que imperceptvel. Nas duas semanas subsequentes, o fungo apresentou
desenvolvimento gradativo em relao a primeira semana. Na terceira semana, atingiu o pice do seu
crescimento e houve uma regresso at a sexta semana. Ao atingir o mximo de decrescimento,
desenvolvimento se igualou e foi sessado. Conforme os resultados apresentados e discutidos neste estudo, foi
possvel verificar que o fungo Auricularia nigricans, no possui capacidade de desenvolvimento e remediao
de solos contaminados por hidrocarbonetos derivados do petrleo.
Palavras chave: Fungos, Solos, Remediao, Hidrocarbonetos.
1.
Introduo
orgnica. base tambm para os recursos hdricos e

equilbrio destes, associado a fauna e flora de seu
O solo apresenta grande importncia para a

vida humana, de microrganismos e organismos em
entorno, com papel importante no ciclo da gua e

reposio de nutrientes. (SEABRA, p.548, 2008)
geral, fauna e flora, sendo um dos elementos base
Dentre os microrganismos encontrados no
para a formao de habitats e para a existncia de
solo, esto os fungos. Os fungos apresentam uma
vida na Terra.
srie de caractersticas que os tornam essenciais

atividade
para a vida de um ecossistema, sendo encontrados,
microbiana, associado a decomposio de matria
tanto no corpo humano quanto no ambiente em que
No
solo
uma
intensa

CMPUS CAMPO MOURO
vivem, e em praticamente todos os substratos.
adaptao dos microrganismos ao consumo e
(QUEIROZ et al., 2008)
presena de contaminantes e as condies do
De acordo com Raven, Evert e Eichhorn

(2007),
fungos so organismos heterotrficos
ecologicamente importantes como decompositores.
ambiente,
como
quantidade
de
nutrientes
disponveis, temperatura, incidncia de luz, entre

outros. (MARIANO, 2006)
A decomposio quebra as molculas de matria
Tem-se ainda dois tipos de biorremediao,
orgnica e libera o dixido de carbono na
in situ e ex situ. Nas tcnicas aplicadas in situ, a
atmosfrica
remediao
retorna
ao
solo,
compostos
nitrogenados e outras substncias.

Desde
sociedades
surgimento
humanas,
das
vem
primeiras
tratados
por
no
prprio
local
de
ocorrendo
remoo e destinao do material contaminado para

uma
diversos
outra
instalao
apropriada,
como
um
laboratrio por exemplo. (ALLEBRANDT, 2015)
vazamentos de petrleo ou por seus derivados,

ser
feita
contaminao. J nas tcnicas ex situ, ocorre
contaminao de solos. Quando contaminados por

podem
O objetivo do presente trabalho verificar a
processos
tcnica de biorremediao ex situ de solo da
qumicos, fsicos, biolgicos, fsico-qumicos e
Universidade Tecnolgica Federal do Paran,
trmicos.
Campus Campo Mouro, utilizando fungos como
Os tratamentos biolgicos aplicados a solos

contaminados com hidrocarbonetos de petrleo
agentes
biolgicos
para
degradao
de
um
hidrocarboneto derivado de petrleo.
consistem em processos com o uso de organismos

2.
degradadores, fungos, bactrias ou vegetais.

A
degradao
consiste
em
eliminar
compostos orgnicos acumulados em um ambiente,
Procedimento Experimental
Escolha do Fungo
geralmente perigosos, e que apresentam riscos
A escolha do fungo (Figura 1) foi realizada a
significativos a sade da populao. Algumas
critrio de cada aluno da turma de Bioprocessos e
vantagens no uso de tratamentos biolgicos podem
Biotecnologia Aplicada, sendo que o presente fungo
ser citadas, sendo o seu baixo custo, baixo consumo
foi coletado nas imediaes da Universidade
de energia e que acarretam em poucas mudanas
Tecnolgica Federal do Paran - UTFPR, Cmpus
nas caractersticas do meio em que atuam.
Campo Mouro PR, e mantido sob refrigerao
(SEABRA, p.548, 2008)
por 24h, sendo retirado horas antes da realizao do
Com
de
procedimento
em
biorremediao, sendo uma nova tecnologia para
Bioprocessos
tratar
Universidade.
solos
isso
tem-se
contaminados
o
com
conceito
o
uso
de
microrganismos capazes de modificar as estruturas

e/ou decompor poluentes, e apresenta diversas
estratgias, como a utilizao de microrganismos
locais, sem qualquer interferncia de tecnologias
ativas de remediao; a adio de agentes
estimulantes como por exemplo nutrientes; e a
inoculao de microrganismos enriquecidos. A
eficincia da biorremediao est associada a
aula,
no
Biotecnologia
Laboratrio
de
Aplicada
da

CMPUS CAMPO MOURO
Figura 1. Fungo coletado em um tronco de

rvore nas imediaes da UTFPR-CM
danificar esta, e retirando-o imediatamente, este

contato rpido o suficiente para haver crescimento
do microrganismo na placa.
Preparo do solo
Imediatamente aps a inoculao, o fungo

Realizou-se
coleta
do
solo
nas
dependncias da Universidade Tecnolgica Federal
coletado foi colocado na camada superficial do solo

(Figura 3).
do Paran. O solo classificado como Latossolo

Vermelho com textura argilosa.
Foi pesado 1kg desse solo, colocando-o em
recipiente de plstico transparente de polipropileno
(garrafa pet) (Figura 2).
Figura 3. Fungo na camada superficial do

solo
As placas foram levadas a estufa a uma
temperatura de 30C onde permaneceram por 6
dias.
Aps
esse
perodo,
foi
verificado
crescimento de microrganismos (Figura 4).
Figura 2: 1kg de solo em

recipiente de plstico
Inoculao do fungo em Placa de Petri contendo
os meios de cultura BDA
Foi
preparado
com
alguns
dias
de
antecedncia da aula prtica duas placas de Petri

por aluno, contendo o meio de cultura BDA estril e
solidificado.
Aps a coleta do fungo, este foi inoculado
nas duas placas de Petri a fim de se obter maior
Figura 4. Crescimento de microrganismos nas

placas de Petri inoculadas.
efetividade e confirmao na identificao do

fungo,
posterior
utilizao
no solo para
intensificar a ao do fungo na degradao do

hidrocarboneto contaminante do solo.
Contaminao do solo, inoculao do fungo e

acompanhamento
Antes do fungo ser colocado na camada
As inoculaes foram feitas colocando
superficial do solo, este foi contaminado com leo
delicadamente o fungo no meio de cultura, sem
diesel. Para a contaminao, transferiu-se com o

CMPUS CAMPO MOURO
auxlio de pipeta graduada, 20mL de leo diesel
formando uma estufa bacteriolgica, para que a luz
para
no incidisse completamente, e a temperatura
recipiente,
de
forma
que
fosse
uniformemente distribudo.
mantivesse constante (na faixa de 28C) e adequada
Posteriormente, foi transferido os meios
para o desenvolvimento e ao dos microrganismos.
inoculados das duas placas para a superfcie do
Foram
mantidos
nessas
condies
por
solo, junto com o fungo inteiro. A transferncia
aproximadamente 90 dias, recebendo 10mL de gua
foi feita com o auxlio de uma esptula. Essa
a cada 7 dias para manter a umidade do ambiente
introduo de microrganismos cultivados tem a
adequada tambm para o desenvolvimento do
funo de auxiliar e potencializar a degradao de
fungo.
contaminantes e chamada de bioaumento.

Ao
final
do
procedimento,
utilizou-se
Identificao do fungo
serragem a granel para recobrir toda a rea

superficial do fungo e dos meios inoculados,
distribuindo-a
uniformemente
por
toda
circunferncia da garrafa pet. Foram adicionados
A identificao foi feita com base em

literatura especfica e em caractersticas macro e
micromorfolgicas do fungo.
tambm 10mL de gua. (Figura 5)

3.
A serragem utilizada foi adquirida no

Laboratrio de Bioprocessos e Biotecnologia
Aplicada da Universidade e utilizada com a
finalidade de enriquecer o cultivo dos fungos.
Resultados e Discusso
O fungo selecionado e identificado para a
biorremediao
do
solo
contaminado
foi
Auricularia nigricans, que possui caractersticas

no
patognicas
corpos
de
frutificao
gelatinosos.
O fungo Auricularia nigricans pertence ao
Reino Fungi, Classe Agaricomycetes, Ordem
Auriculariales e Famlia Auriculariaceae. (NCBI,
2015)
Apresenta
ocorrncia
em
florestas
caduciflias, e seu substrato na madeira (tronco)

das plantas. Sua nutrio caracterizada por ser
saprotrofia e um fungo comestvel com sabor
Figura 5. Recipiente aps a
transferncia do fungo, dos meios de
cultura e da serragem.
suave e odor indeterminado. Apresenta ainda,

colorao
escura,
marrom
ou
preto,
com
himenforo esbranquiado. (NAGRZYBY, 2015)

Uma semana depois, foi colocado 50mL de
efluente proveniente de um abatedouro bovino da
regio, com o propsito de aumentar os nutrientes
do solo, favorecendo o desenvolvimento do fungo,
e chamado de bioestmulo.
Aps a inoculao, os recipientes foram
mantidos semi fechados, com saco plstico preto,
crescimento
foi
acompanhado
semanalmente at o trmino da biorremediao,

com um total de 13 semanas (90 dias). O
procedimento e observaes tiveram incio no dia
27 de agosto de 2015 e trmino em 26 de novembro
de 2015.

CMPUS CAMPO MOURO
Aps um perodo de aproximadamente uma

semana,
foi
possvel
observar
o incio
do
Grfico 1. Estimativa da evoluo de

crescimento do fungo Auricularia nigricans ao
longo do perodo de biorremediao.
desenvolvimento fngico quase que imperceptvel.

Nas duas semanas subsequentes, o fungo
Como foi observado, o fungo no se adaptou
apresentou desenvolvimento gradativo em relao a
s condies dispostas para seu crescimento, e com
primeira semana.
isso no foi possvel haver a degradao do leo
Na terceira semana, atingiu o pice do seu
diesel. Esse fato provavelmente ocorreu, pois o
crescimento e houve uma regresso at a sexta
microrganismo escolhido no possui em suas
semana. Ao atingir o mximo de decrescimento, o
caractersticas a capacidade de utilizar poluentes
desenvolvimento se igualou e foi sessado.
orgnicos
A figura 6 mostra o aspecto do fungo na

ltima semana do processo.
como
fonte
de
energia.
Fungos
necessitam de condies ambientais especficas

para realizar a biodegradao de um contaminante,
caso contrrio, a populao entrar em estado de
latncia
at
que
as
condies
ideia
sejam
disponibilizadas. O contaminante, por conta de sua

composio qumica, provavelmente apresentou-se
txico ao metabolismo do fungo, tendo em vista
que a quantidade colocada no solo, tambm pode
ter sido um fator limitante, se a concentrao foi
muito elevada.
Dos fatores ambientais que podem ter
ocasionado essa dificuldade do fungo em se
estabelecer no solo tem-se a temperatura, umidade e
pH do solo.
A temperatura, um dos fatores mais
importantes no controle da atividade microbiana e
Figura 6. Aspecto do fungo na ltima semana de
biorremediao (13a).
das taxas de biodegradao da matria orgnica,

afetando
tambm,
de
forma
indireta,
biodegradao de um componente, pela mudana

O
grfico
mostra
curva
de
de suas propriedades fsicas, composio qumica
progressividade no crescimento do fungo ao
ou toxidade microflora. (SEABRA, 2005) A
decorrer da anlise.
temperatura mdia desses 90 dias estava dentro do

admissvel e caracterstico para crescimento de
microrganismos, entretanto, pode ter ocorrido uma
variao muito brusca de temperatura no intervalo
dos 3 meses, caracterstico do clima da cidade de
Campo Mouro-PR.
A umidade do solo por sua vez, importante
pois o solo deve conter um teor suficiente para
estimular o crescimento dos microorganismos

CMPUS CAMPO MOURO
degradadores, mas no em demasia, a ponto de
estar fora da faixa propcia, o que no foi possvel
tornar o solo impermevel. (SEABRA, 2005) O
deduzir pois no foram realizadas medies
baixo e quase nulo crescimento do fungo em estudo
especficas dos diversos parmetros.
pode ser explicado por um possvel exagero na
Em funo da quantidade de semanas da
reposio de gua semanal, deixando o solo
anlise e da variao grande de temperatura que
encharcado e inapropriado para a proliferao do
ocorre no municpio de Campo Mouro-PR, este
fungo.
tambm pode ter sido um fator limitante de

Por ltimo, visto que o pH do solo tambm
crescimento.
influencia no crescimento, pois a faixa em que
Conforme os resultados apresentados e
possuem capacidade de vida de 5 a 9. Mudanas
discutidos neste estudo, foi possvel verificar que o
no
fungo Auricularia nigricans, no possui capacidade
pH
causam
mudanas
na
comunidade
microbiana. (SEABRA, 2005) No foi feito
de
desenvolvimento
remediao
de
solos
medies de pH em nenhum momento no decorrer
contaminados por hidrocarbonetos derivados do
do tempo de anlise, e portanto, no possvel
petrleo.
dizer se este parmetro estava favorvel ou no.

Em contrapartida, a quantidade de nutrientes
Referncias
no solo no foi um fator limitante, pois alm do

meio de cultura colocado, que j uma fonte de
nutriente,
foi
acrescentado
efluente,
com
excedente de matria orgnica, com a finalidade de

no suprir uma possvel falta nesses 3 meses.
Concluso
O estudo do uso de microrganismos para
biorremediao natural em reas contaminadas por
hidrocarbonetos derivados do petrleo de grande
importncia, principalmente pois as contaminaes
antrpicas de solos vem se fazendo frequente, e esta
uma estratgia de baixo custo de implantao e
muito simples se comparada com outras tcnicas.
Entretanto, no presente estudo, no foi feito
a comprovao dessa recuperao de solos, pelo
fato do fungo selecionado no ter se apresentado
com boa capacidade de adaptao e crescimento no
meio em que foi colocado.
Os possveis fatores limitantes para se
desenvolvimento foram, o poluente hidrocarboneto
derivado do petrleo, a quantidade que foi utilizada
deste e umidade do solo. Alm disso, o pH poderia
ALLEBRANDT, Sara R. Aplicao de microorganismos para remediao de reas

contaminadas com hidrocarbonetos. Tese de
Doutorado. Programa de Ps-Graduao em
Biologia Celular e Molecular da Universidade
Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, 76f,
2015.
NCBI. Centro Nacional de Informaes sobre
Biotecnologia: NCBI Taxonomy. 2015.
Disponvel em:
http://www.gbif.org/species/103767418. Acesso
em: 30 nov. 2015.
MARIANO, Adriano P. Avaliao do potencial de
biorremediao de solos e de guas
Subterrneas contaminados com leo diesel. Tese
de Doutorado. Instituto de Geocincias e Cincias
Exatas da Universidade Estadual Paulista.
Programa de Ps-Graduao em Geocincias e
Meio Ambiente, Rio Claro, So Paulo, 2006.
NAGRZYBY. Nigricans Auricularia. 2015.
Disponvel em: http://nagrzyby.pl/atlas/1702.
Acesso em: 30 nov. 2015.
QUEIROZ, Jlia C. de; MENDONA, Veronica R.
de; BANDEIRA, Ammanda A. A.; SILVA, Etienne
A. A. da. Fungos: Uma anlise experimental
sobre os agentes causadores de problemas aos
produtos txteis. Encontro de ensino, pesquisa e
extenso. Universidade Federal Rural de
Pernambuco. 2008.

CMPUS CAMPO MOURO
RAVEN, P.H., EVERT, R.F. & EICHHORN, S.E.

Biologia Vegetal, 7a. ed. Coord. Trad. J.E.Kraus.
Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, p. 277-278,
2007.
SEABRA, P. N. C. . Biorremediao de solos
contaminados por petrleo e derivados. In:
Itamar Soares de Melo; Joo Lcio de Azevedo.

(Org.). Microbiologia Ambiental. 2ed.Jaguarina:
Embrapa Meio Ambiente, 2008, v. , p. 547-570.

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Biorremediao ex situ de um solo da Universidade Tecnolgica

inoculao desse fungo em Placa de Petri contendo os meios de cultura BDA,

Auricularia nigricans, que possui caractersticas no patognicas e corpos de

quase que imperceptvel. Nas duas semanas subsequentes, o fungo apresentou

orgnica. base tambm para os recursos hdricos e

O solo apresenta grande importncia para a

entorno, com papel importante no ciclo da gua e

geral, fauna e flora, sendo um dos elementos base

Dentre os microrganismos encontrados no

para a formao de habitats e para a existncia de

solo, esto os fungos. Os fungos apresentam uma

srie de caractersticas que os tornam essenciais

para a vida de um ecossistema, sendo encontrados,

microbiana, associado a decomposio de matria

tanto no corpo humano quanto no ambiente em que

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vivem, e em praticamente todos os substratos.

adaptao dos microrganismos ao consumo e

(QUEIROZ et al., 2008)

presena de contaminantes e as condies do

De acordo com Raven, Evert e Eichhorn

fungos so organismos heterotrficos

ecologicamente importantes como decompositores.

disponveis, temperatura, incidncia de luz, entre

A decomposio quebra as molculas de matria

Tem-se ainda dois tipos de biorremediao,

orgnica e libera o dixido de carbono na

in situ e ex situ. Nas tcnicas aplicadas in situ, a

nitrogenados e outras substncias.

remoo e destinao do material contaminado para

laboratrio por exemplo. (ALLEBRANDT, 2015)

vazamentos de petrleo ou por seus derivados,

contaminao. J nas tcnicas ex situ, ocorre

contaminao de solos. Quando contaminados por

O objetivo do presente trabalho verificar a

tcnica de biorremediao ex situ de solo da

qumicos, fsicos, biolgicos, fsico-qumicos e

Universidade Tecnolgica Federal do Paran,

Campus Campo Mouro, utilizando fungos como

Os tratamentos biolgicos aplicados a solos

hidrocarboneto derivado de petrleo.

consistem em processos com o uso de organismos

degradadores, fungos, bactrias ou vegetais.

compostos orgnicos acumulados em um ambiente,

geralmente perigosos, e que apresentam riscos

A escolha do fungo (Figura 1) foi realizada a

significativos a sade da populao. Algumas

critrio de cada aluno da turma de Bioprocessos e

vantagens no uso de tratamentos biolgicos podem

Biotecnologia Aplicada, sendo que o presente fungo

ser citadas, sendo o seu baixo custo, baixo consumo

foi coletado nas imediaes da Universidade

de energia e que acarretam em poucas mudanas

Tecnolgica Federal do Paran - UTFPR, Cmpus

nas caractersticas do meio em que atuam.

Campo Mouro PR, e mantido sob refrigerao

(SEABRA, p.548, 2008)

por 24h, sendo retirado horas antes da realizao do

biorremediao, sendo uma nova tecnologia para

microrganismos capazes de modificar as estruturas

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Figura 1. Fungo coletado em um tronco de