Aula 1 Mecanismos de Patogenicidade Fatores de Virulência UEZO 2018

Patogenia das Doenças Infecciosas
Mecanismos de Patogenicidade e Fatores de Virulência

em bactérias
Profa. Dra. Flávia Pellegrino

UEZO
2018
Bibliografia Básica
1. Microbiologia para as Ciências da Saúde. Burton. Engelkirk/Duben-Engelkirk. Guanabara Koogan.
2. Microbiologia Médica. Murray/Rosenthal/Pfaller.

Mosby.
3. Microbiologia. Trabulsi & Alterthum.

Atheneu.
4. Diagnóstico Microbiológico. Texto e Atlas: Konemam/Allen/Janda/Schrekenbecerger/Winn.

Guanabara Koogan.
5. Imunologia Celular e Molecular. Abbas, Lichtman & Pillai.

Saunders Elsevier.
6. Introdução à Virologia Humana: Santos/Romanos/Wigg.

Guanabara Koogan.
Bibliografia Complementar
Artigos Científicos
Profa. Dra. Flávia Pellegrino-UEZO

WHO publishes list of bacteria for which new antibiotics are urgently needed
News release
27 FEBRUARY 2017 | GENEVA - WHO
OMS publicou lista

antibiotic-resistant "priority pathogens"
Catálogo de 12 famílias de bactérias que representam a maior ameaça à saúde humana
Objetivo: Orientar e promover a pesquisa e desenvolvimento de novos antibióticos
Contexo: Resistência bacteriana

Lista
Dividida em 3 categorias: crítica, alta e média prioridade
Urgência da necessidade de novos antibióticos
Priority 1: CRITICAL
•Acinetobacter baumannii, carbapenem-resistant
•Pseudomonas aeruginosa, carbapenem-resistant
•Enterobacteriaceae, carbapenem-resistant, ESBL-producing
Priority 2: HIGH
•Enterococcus faecium, vancomycin-resistant
•Staphylococcus aureus, methicillin-resistant, vancomycin-intermediate and resistant
•Helicobacter pylori, clarithromycin-resistant
•Campylobacter spp., fluoroquinolone-resistant
•Salmonellae, fluoroquinolone-resistant
•Neisseria gonorrhoeae, cephalosporin-resistant, fluoroquinolone-resistant
Priority 3: MEDIUM
•Streptococcus pneumoniae, penicillin-non-susceptible
•Haemophilus influenzae, ampicillin-resistant
•Shigella spp., fluoroquinolone-resistant

Aspectos da resistência
Patogenicidade
Aspectos da virulência
Plasticidade genética de Acinetobacter baumannii

Genética da Virulência
Transferência Horizontal de genes de virulência por

elementos genéticos (plasmídeos, transposons, integrons)
Ilhas de patogenicidade
Regulação da expressão de genes de virulência

(sinais para induzir ou reprimir a expressão gênica)
Ex. Controle da transcrição: em resposta a condições ambientais

[sinal químico ambiental + repressor (alteração conformacional) + liberação do operador + transcrição do
gene de virulência]

Genética da Virulência
Ex. Quorum-sensing
Comunicação celular entre bactérias da mesma espécie ou de espécies diferentes

Sinal produzido pela bactéria por autoindutores (moléculas sinalizadoras)/repressão e ativação de genes
Autoindutores variam de acordo com o grupo ou espécie de bactérias
Comportamento baseado na densidade populacional bacteriana

Crescimento bacteriano/produção e liberação de autoindutores em determinado nível
/ativação ou inibição da expressão de genes de interesse/comunicação celular
Alterações fenotípicas importantes para a sobrevivência da bactéria
Exs.
Produção de fatores de virulência
Produção de antibióticos
Competência
Transferência gênica
Etc.

Patogenicidade
Virulência

Infecção
e
Doença infecciosa

Tipos de Infecção
Localizada
Permanece em determinado local do corpo
Exs. Abcesso; Furúnculo
Sistêmica
Se espalha por todo o corpo (generalizada)
Ex. Tuberculose miliar
Latente
“latens” = escondido
O agente permanece latente até ser ativado
Ex. Herpes
Associada aos cuidados com a saúde

Adquirida no período em que a pessoa está hospitalizada ou relacionada à hospitalização ou local de assistência à saúde
Iatrogênica
Associada ao tratamento médico
Comunitária
Adquirida fora das unidades de saúde

Uma infecção pode surgir depois de outra
Ex. Infecções respiratórias virais e pneumonias bacterianas
Infecção Primária
Aquela que surge primeiro
Infecção Secundária
Surge após a infecção primária por um patógeno diferente

Etapas na Patogenia das Doenças Infecciosas
Entrada do patógeno (portas de entrada)
Fixação do patógeno ao(s) tecido(s)
Multiplicação do patógeno
Invasão ou disseminação do patógeno
Evasão das defesas do hospedeiro
Dano ao(s) tecido(s) do hospedeiro
Obs. Nem todas as doenças infecciosas envolvem todas as etapas

Por que razão nem sempre ocorre infecção do organismo humano?

Por que razão nem sempre ocorre infecção do organismo humano?
✓ Microrganismo é incapaz de se multiplicar em determinado local
✓ Ausência de receptores para fixação do patógeno
✓ Presença de antimicrobianos no local de alojamento do patógeno
✓ Presença de microbiota normal
✓ Estado nutricional
✓ Imunidade ao patógeno por contato ou vacinação
✓ Destruição do patógeno por mecanismos de defesa do hospedeiro

Considerações a respeito das Doenças Infecciosas

Doenças
❖ Aguda: de início repentino e recuperação rápida

Ex. Caxumba
❖ Crônica: tem início lento e duração longa

Ex. Tuberculose
❖ Subaguda: início repentino com evolução duradoura

Ex. Endocardite bacteriana subaguda

Fases da Doença Infecciosa
Período de incubação
Chegada do patógeno e aparecimento dos sintomas
Período prodrômico
Início de sintomas inespecíficos
Período da doença
Aparecimento de sintomas específicos
Período de convalescença
Paciente se recupera

Sintomas e Sinais da Doença
Sintoma
Evidência percebida pelo paciente
Evidência subjetiva
Ex. dor, náusea, tontura, calafrio, etc.
Doença Sintomática e Doença Assintomática
Sinal
Evidência objetiva da doença
Achados clínicos evidentes
Resultados de testes laboratoriais
Ex. hepatomegalia, anormalidades radiográficas

Patógenos
 Primários
Capazes de causar infecção em indivíduos normais
Ex. Streptococcus pyogenes
 Oportunistas
Capazes de causar infecção em indivíduos com defesas
imunes comprometidas
Ex. Pseudomonas aeruginosa

Patogenicidade e Virulência
➢ Difteria
Corynebacterium diphtheriae
Cepas toxigênicas e atoxigênicas
➢ Pneumonia
Streptococcus pneumoniae
Cepas encapsuladas e não-encapsuladas
➢ Diarréia bacteriana
Shigella é considerada mais virulenta que Salmonella
➢ Escarlatina
Cepas de Streptococcus pyogenes produtoras de toxina eritrogênica

Fatores de Virulência
Características fenotípicas
que capacitam o microrganismo a ser virulento
Estruturas
Produtos
Estratégias
Contribuem para aumentar a capacidade microbiana

de causar infecção

Exemplos de Fatores de Virulência
Adesinas
Invasinas
Cápsula
Flagelos
Enzimas
Exoenzimas
Enzimas Necrosantes
Coagulase
Quinases
Hialuronidases
Colagenase
Hemolisinas
Lecitinase
Toxinas
Evasinas
o Fatores de Virulência envolvidos com a Colonização (I)
o Fatores de Virulência envolvidos com a Lesão (II)
o Fatores de Virulência envolvidos com a Evasão (III)

Fatores de Virulência envolvidos com a Colonização
Adesão
Invasão
Sideróforos

Adesão

Adesão é uma Estratégia
Fixação do microrganismo
às células e tecidos do organismo
Mediada por Adesinas

Adesinas ou Ligantes
Estruturas de superfície do patógeno
Interagem com receptores no organismo

Bactérias produtoras de Adesinas
(fimbriais ou não fimbriais):
Escherichia coli: Fímbria P

Neisseria gonorrhoeae: Fímbria tipo IV
Vibro cholerae: Fímbria tipo IV
Streptococcus pyogenes: Proteínas M e F

Onde estão os receptores para adesinas?
Onde patógeno se fixa?
✓ Na superfície da célula do hospedeiro
✓ Na matriz extracelular
OBS. Em nível molecular (receptor/integrina)

Exemplos de Receptores para Adesinas
Gram-negativas:
moléculas de glicoproteínas e glicolipídeos
Gram-positivas:
proteínas de matriz extracelular

Por que a bactéria adere à célula do hospedeiro?

Resposta da bactéria ao processo de adesão
Influência da adesão no comportamento da bactéria
✓ O crescimento bacteriano pode ser estimulado ou inibido
✓ A expressão de certas fímbrias é induzida pelo contato da bactéria com a

célula
✓ Certas proteínas somente são secretadas depois que a bactéria adere

às células do organismo hospedeiro

Resposta da célula do hospedeiro ao processo de adesão
Varia de acordo com o tipo de célula e de bactéria
✓ Produção de citocinas
✓ Incorporam a bactéria em um processo de fagocitose

Biofilmes
Microcolônias ou agregados de bactérias

envolvidos em uma película de exopolissacarídeos
produzida pela bactéria

Locais de formação de Biofilme
• Superfícies dos diferentes dispositivos plásticos

usados em medicina
Ex. Cateter, tubulações
• Mucosas de pacientes com fibrose cística
• Dentes (placa dentária)

Bactérias formadoras de biofilme:
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus agalactiae
Pseudomonas aeruginosa

Invasão

Exemplos de Bactérias
Extracelulares
Intracelulares Facultativas e
Intracelulares Obrigatórias

Invasão também é uma Estratégia
Patógeno penetra nas células

Invasão
Cada bactéria é dotada de um mecanismo próprio de invasão
As células epiteliais são os principais alvos das bactérias invasoras

Como as bactérias invadem as células?

Fagocitose Natural
ou
Fagocitose Induzida

1. Fagocitose Natural
Processo natural exercido pelas células fagocitárias

Participação de anticorpos e do sistema complemento

2. Fagocitose Induzida
Processo induzido pela bactéria

Exercido pelas células epiteliais e por outras células não-fagocitárias
Participação das Invasinas
Invasinas
Proteínas localizadas na membrana externa da bactéria
ou injetadas no citosol
Protegem a bactéria das defesas do organismo

Formas de Fagocitose Induzida
Mecanismos de “trigger” (gatilho ou disparo)

Interação de ligantes bacterianos
com receptores celulares
A bactéria é inteiramente envolvida pela célula
Listeria e Yersinia
Mecanismos de “ruffling” (ondulações)

Bactéria emite sinais para a célula epitelial
Produção de ondulações e rearranjos do
citoesqueleto de actina
Salmonella e Shigella
Captação passiva: macropinocitose

Bactérias produtoras de invasinas:
Salmonella spp.
Shigella spp.
Yersinia enterocolitica
Listeria

Pós fagocitose induzida
Destino e comportamento bacterianos
Variáveis
• Rompem vacúolo, passam para citoplasma e se disseminam de

célula-a-célula (Listeria e Shigella)
• Permanecem dentro do vacúolo e proliferam (Salmonella)
• Permanecem dentro do vacúolo mas não proliferam (Yersinia)
• O vacúolo as transportam para o tecido subepitelial (Salmonella e
Yersinia)

Resposta da bactéria à invasão:
✓ Necessidade de regular a expressão de seus genes de virulência

para adaptação e sobrevivência em microambientes

Resposta da célula do hospedeiro à invasão:
✓ Produção de citocinas e prostaglandinas
✓ Morte celular por necrose (depleção de nutrientes, efeito de

substâncias tóxicas)
✓ Morte por apoptose (morte celular programada)

Sideróforos

Sideróforos:
Substâncias que apresentam alta afinidade pelo ferro
São capazes de retirá-lo de proteínas carreadoras
Ferro retirado é transferido para receptores que o transportam

para o citoplasma da bactéria
Exs.
Catecolaminas (fenolatos)
Hidroxamatos

Bactérias produtoras de sideróforos:
Bactérias da rizosfera: rizobactérias (Hipomeia sp., Eritrina sp.,
Mimosa sp., Cecropia sp. e Tefrosia sp.)
Burkholderia spp.

Fatores de Virulência envolvidos com a Lesão
Toxinas

Toxina
Qualquer substância de origem microbiana

capaz de causar danos ao organismo animal
Efeitos das toxinas:
o Interrupção da síntese proteica
o Destruição de células do sangue e de vasos sanguíneos
o Alteração do sistema nervoso (espasmos)
Toxemia
presença de toxinas no sangue

Duas categorias de toxinas:
Exotoxinas ou Endotoxinas
Em relação à sua posição na célula microbiana

Características das Exotoxinas
Produzidas no interior de algumas bactérias e secretadas pela

bactéria no meio circundante ou liberadas após a lise
Bactérias Gram-negativas ou Gram-positivas
Solúveis nos líquidos corporais
Produzem sinais e sintomas das doenças
Altamente específicas para cada doença

Três grupos de Exotoxinas:
I. Atuam na superfície celular
II. Danificam a membrana celular
III. Atuam interrompendo a síntese proteica celular
Em relação à interação com as células do hospedeiro

Grupo I
Atuam na superfície das células
Superantígenos
Toxinas ST

Superantígenos

Toxinas ST
Toxinas termoestáveis
Família de pequenos peptídeos não imunogênicos
Produzidos por E. coli e outras bactérias
Ex. ST de ETEC (E. coli enterotoxigênica)

Grupo II
Danificam a membrana citoplasmática

Ação
➢ Formam poros
➢ Retiram o fosfato de fosfolipídeos desestabilizando a

membrana
Efeitos
➢ Rompem a membrana dos fagossomos
➢ Levam a lise de hemácias para obter ferro da hemoglobina
➢ Levam à morte celular

➢ Formação de poros

➢ Retirada de fosfato

Toxinas que danificam a membrana citoplasmática

Grupo III
Inibem síntese proteica

Toxinas A-B
Maior número de toxinas
As mais importantes como fatores de virulência

Toxinas A-B
Molécula com 2 tipos de subunidades:
Subunidade A:
Porção enzimaticamente ativa
Penetra na célula
Exerce os efeitos biológicos da toxina
Remove ADP-ribose do NAD

Transfere para diferentes proteínas da célula
Subunidade B:
“binding”
Componente de ligação
Responsável pela ligação da toxina ao seu receptor celular

Toxinas A-B

Características das Endotoxinas
São parte da porção externa da parede celular de bactérias Gram-

negativas
São lipopolissacarídeos (LPS)
Liberadas quando a bactéria morre (lise da parede celular) ou na

multiplicação bacteriana
Ação
Induzem liberação de citocinas em concentrações muito altas
Efeitos
Calafrios, febre, fraqueza, dores generalizadas, choque e morte
Mesmos sinais e sintomas em intensidades diferentes

LPS
Pequeno número de açúcares
Ex. ácido deoxioctanóico (KDO) e heptose
Resíduos oligossacarídeos
Cadeias recobrem a superfície da célula
Parte tóxica Proteção contra a ação de substâncias hidrofóbicas,
Glicolipídeo composto de como a bile
dissacarídeos aos quais se
encontram ligados ácidos
graxos de cadeia curta e
grupos fosfato

Bactérias produtoras de toxinas:
Clostridium tetani
Clostridium botulinum
Bacillus cereus
Corynebacterium diphtheriae
Streptococcus pyogenes
Salmonella typhi
Shigella spp.
Staphylococcus aureus

Fatores de Virulência envolvidos com a Evasão

Evasinas
Fatores e Estratégias
Função
Contornar ou vencer as defesas do organismo
Defesas:
✓ Fagocitose
✓ Complemento
✓ Citocinas
✓ Anticorpos
✓ Linfócitos T citotóxicos

Como escapar da Fagocitose?
Como escapar da Morte por fagócitos após a fagocitose ter ocorrido?

1. Evitar o contato com os fagócitos
Bactérias se instalam em regiões inacessíveis aos fagócitos
Bactérias impedem a quimiotaxia
Bactérias produzem cápsula, proteína de superfície ou toxina
2. Mascarar a superfície bacteriana com substâncias próprias do

organismo
Mimetismo molecular
3. Ocorrido o contato entre a bactéria e o fagócito, a bactéria pode:
Provocar a morte do fagócito

Impedir a sua digestão
Inibir a fusão do fagossoma com o lisossoma
Escapar do fagossoma
Resistir ao conteúdo do fagolisossoma

Como escapar da ação do SC?
✓ Evitar sua ativação:
Cápsula (encobre LPS)

Ex. Streptococcus pneumoniae
Resíduos de ácido siálico (modificam LPS)
Ex. Haemophilus influenzae
✓ Destruição do SC:
Ex. Elastase de Pseudomonas aeruginosa

Como escapar da ação de Citocinas?
Controle
Em nível de transcrição
Em nível de síntese
Como escapar dos anticorpos e linfócitos citotóxicos?
1. Variação de fase e variação antigênica

2. Estilo de vida intra-celular
3. Destruição enzimática do anticorpo (IgA proteases)

Bactérias produtoras de evasinas:
Cápsula:
Streptococcus pneumoniae
Klebsiella pneumoniae
Neisseria meningitidis
Haemophilus influenzae
Enzimas:
Clostridium perfringens
Streptococcus pyogenes
Staphylococcus aureus

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Profa. Dra. Flávia Pellegrino

1. Microbiologia para as Ciências da Saúde. Burton. Engelkirk/Duben-Engelkirk. Guanabara Koogan.

2. Microbiologia Médica. Murray/Rosenthal/Pfaller.

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4. Diagnóstico Microbiológico. Texto e Atlas: Konemam/Allen/Janda/Schrekenbecerger/Winn.

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OMS publicou lista

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Plasticidade genética de Acinetobacter baumannii

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Transferência Horizontal de genes de virulência por

Regulação da expressão de genes de virulência

Ex. Controle da transcrição: em resposta a condições ambientais

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Comunicação celular entre bactérias da mesma espécie ou de espécies diferentes

Comportamento baseado na densidade populacional bacteriana

Alterações fenotípicas importantes para a sobrevivência da bactéria

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Associada aos cuidados com a saúde

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Ex. Infecções respiratórias virais e pneumonias bacterianas

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Entrada do patógeno (portas de entrada)

Fixação do patógeno ao(s) tecido(s)

Invasão ou disseminação do patógeno

Evasão das defesas do hospedeiro

Dano ao(s) tecido(s) do hospedeiro

Obs. Nem todas as doenças infecciosas envolvem todas as etapas

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✓ Microrganismo é incapaz de se multiplicar em determinado local

✓ Ausência de receptores para fixação do patógeno

✓ Presença de antimicrobianos no local de alojamento do patógeno

✓ Presença de microbiota normal

✓ Imunidade ao patógeno por contato ou vacinação

✓ Destruição do patógeno por mecanismos de defesa do hospedeiro

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❖ Aguda: de início repentino e recuperação rápida

❖ Crônica: tem início lento e duração longa

❖ Subaguda: início repentino com evolução duradoura

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Doença Sintomática e Doença Assintomática

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Contribuem para aumentar a capacidade microbiana

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o Fatores de Virulência envolvidos com a Evasão (III)

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Mediada por Adesinas

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