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Escola Secundria/3 de Marco de Canaveses

FICHA INFORMATIVA Biologia 12Ano

Nome:

_____________________________________ Data: __/__/2009 MICROSCPIO TICO COMPOSTO

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Turma:

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1. CONSTITUIO DO MICROSCPIO TICO COMPOSTO

Microscpios binoculares

Microscpio monocular

2. NORMAS BSICAS DE UTILIZAO (O microscpio um aparelho caro. Use-o com cuidado.) - Antes de pegar na caixa do microscpio verifique se esta est bem fechada. Transporte-a encostada ao seu corpo. - Transporte o microscpio com ambas as mos: apoie numa delas a base ao microscpio e segure o brao/coluna deste com a outra. - Coloque o microscpio sobre a mesa (suficientemente afastado do bordo desta). Mantenha sobre a mesa de trabalho o material estritamente necessrio/indispensvel.

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- Evite molhar a platina do microscpio quando executar preparaes temporrias (nas quais utiliza gua ou qualquer outro lquido como meio de montagem). - As lentes do microscpio devem ser limpas com material prprio e em movimentos circulares. 3. FUNCIONAMENTO DO MICROSCPIO TICO Notas:
- As lentes objetivas e as lentes oculares tm inscrito o seu poder ampliador (exemplo da figura da direita: poder ampliador das lentes objetivas - 10x; 40x, 100x). - A utilizao do revlver permite a troca das lentes objetivas. A objetiva est em posio de observao quando se ouvir um pequeno estalido. - Os parafusos macromtrico e micromtrico permitem o afastamento ou a aproximao platina do microscpio s lentes objetivas. Rode-os com cuidado, especialmente o macromtrico que efectua movimentos amplos.

1. Desloque a platina toda para baixo e coloque a objetiva de menor poder ampliador em posio de observao (na direco do orifcio da platina). 2. Ilumine o microscpio. Acenda a lmpada ou, olhando pela lente ocular, oriente o espelho de modo a que o campo de observao fique bem iluminado. Verifique se o diafragma se encontra aberto (de modo a que o campo do microscpio fique bem iluminado) e se o condensador est completamente subido. 3. Coloque a preparao sobre a platina (com a lamela voltada para cima e de modo a que o objeto fique na direo da lente frontal da objetiva). Fixe a preparao com as pinas. 4. Olhando lateralmente, rode o parafuso macromtrico de modo a aproximar a platina da lente objetiva. 5. Proceda focagem (observe pela lente ocular e rode o parafuso macromtrico lentamente de modo a afastar a preparao da lente objetiva at observar uma imagem no campo do microscpio). Afine a focagem utilizando o parafuso micromtrico. 6. Sempre que necessrio: regule a intensidade de luz, abrindo e/ou fechando o diafragma. 7. Para utilizar uma objetiva de maior poder ampliador, sem alterar a focagem anterior, deve rodar lentamente o revlver para a objetiva de poder ampliador imediatamente superior e afinar a focagem com o parafuso micromtrico. 8. Regule a iluminao ajustando convenientemente a posio do diafragma e do condensador. 9. Para utilizar a objetiva de imerso deve ser usado um lquido de imerso (leo de cedro). 10. Mude de objetiva e desloque a preparao sempre que achar conveniente. 11. Quando terminar a observao: - Coloque a objetiva de menor ampliao no prolongamento do tubo; - Baixe a platina e retire a preparao arrumando-a no lugar que lhe destinado; - Abra o diafragma e suba o condensador; - Certifique-se que a platina e as lentes ficam limpas; - Apague a luz ao microscpio (se tiver lmpada); - Suba a platina ao mximo; - Cubra o microscpio com a proteco e guarde-o na respetiva caixa. 4. PODER DE AMPLIAO E LIMITE DE RESOLUO A ampliao com que se est a observar um dado objecto dada pela frmula:

ATotal = Aocular X AObjetiva


Limite de Resoluo a capacidade de distinguir nitidamente dois pontos muito prximos. Limite de resoluo do olho humano = 0,1mm (100m). Para que dois pontos sejam observados separadamente tm que se encontrar separados por uma distncia mnima de 0,1mm.

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Limite de resoluo do microscpio tico composto = 0.2m. mais elevado nas objetivas de grande ampliao, como por exemplo, na de imerso. Quanto menor for o limite de resoluo melhor a imagem fornecida pelo microscpio. 5. CARACTERSTICAS DA IMAGEM AO MICROSCPIO TICO COMPOSTO A imagem que o observador recebe utilizando o microscpio tico tem as seguintes caractersticas: - ampliada; - simtrica; - invertida; - virtual

6. PREPARAES MICROSCPICAS Para se observar ao microscpio torna-se necessrio proceder a uma preparao do material biolgico. Existem dois tipos de preparaes microscpicas: preparaes temporrias (ou extemporneas) e preparaes definitivas. As preparaes temporrias so de curta durao e permitem fazer a observao de clulas vivas, no seu estado natural e no meio onde vivem. No entanto, se a observao for mais demorada pode ocorrer a evaporao de meio aquoso, acompanhada de um processo de degradao da clula decomposio e autodestruio autlise. Embora seja possvel o estudo microscpico de clulas vivas, muitas vezes h vantagem em obter uma preparao definitiva, na qual as clulas fiquem preservadas, isto , fixadas e coradas para melhor demonstrao dos seus componentes, permitindo posteriores observaes. O material biolgico tem, por isso, de ser submetido a diversas operaes que permitam que no se decomponha. O material biolgico observado encontra-se, por isso, morto.

7. MONTAGEM DE UMA PREPARAO TEMPORRIA Nas preparaes microscpicas so utilizados uma lmina de vidro, um meio de montagem (gua, soro fisiolgico, entre outros, onde deve estar imerso o material a observar) e uma lamela. Como montar uma preparao? - Coloque uma gota do lquido de montagem no centro da lmina; - Com a ajuda de uma pina ou de uma agulha de disseco coloque, sobre a gota, o objeto a observar; - Segurando a lamela, com a ajuda de uma agulha de disseco, de modo a que ela faa um ngulo de cerca de 45 com a lmina, deixa-se cair lentamente. (A inclinao progressiva da lamela evita a formao de bolhas de ar, facilitando a observao do material); - Retire o excesso de gua com papel de filtro e observe a preparao ao microscpio.

8. COLORAO
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A maioria das estruturas celulares apresenta pouco contraste tico pelo que, aparentemente, o contedo celular homogneo. Por essa razo temos de recorrer a estratgias que permitam uma melhor observao do contedo celular. Esse problema ultrapassado mediante a utilizao de corantes. Estas substncias coram diferencialmente uma ou mais estruturas celulares, permitindo distingui-las e observ-las com muito mais nitidez. Os corantes podem ser vitais ou no vitais. Para realizar preparaes temporrias utilizam-se corantes vitais porque podem ser usados em clulas vivas sem as matar. Esto em concentraes muito baixas (0,01%), a fim de diminuir a toxicidade nas clulas. Um mesmo corante pode ser vital ou no, dependendo da concentrao em que se encontra na soluo. Azul de metileno pode ser um corante vital se estiver em baixa concentrao. Soluto de lugol - corante no vital pois mata rapidamente o material biolgico. No existe uma tcnica de colorao que ponha em evidncia todas as estruturas celulares. Cada corante tem afinidade para determinada(s) estrutura(s) celular(es). So corantes seletivos. Tipo de corante Bsicos ou nucleares cidos Neutros Corantes Azul de metileno Vermelho neutro gua iodada Eosina e Fucsina cida Violeta de Genciana Soluto de Lugol Estruturas evidenciadas Cora o ncleo de azul Acumula-se em vacolos Cora o ncleo e amiloplastos Citoplasma Cromossomas de clulas vivas em diviso Gros de amido, paredes celulsicas

TCNICAS DE COLORAO

COLORAO POR IMERSO - o material biolgico fica imerso durante alguns minutos no corante (Fig. A). COLORAO POR IRRIGAO - substitui-se o meio de montagem de uma preparao j efectuada por outro,

que neste caso o corante. Para tal, coloca-se uma gota de corante num dos bordos da lamela e, com a ajuda de um papel de filtro, faz-se deslocar o corante em direo ao bordo oposto da lamela. (Fig. B e C)

9. MICROSCPIO ELECTRNICO O microscpio electrnico (figura da direita) um instrumento com um poder de ampliao muito superior ao do microscpio tico (ampliao superior a 250 000 vezes). Nesse aparelho, as amostras so iluminadas por um feixe de eletres e produzem imagens detalhadas. Existem dois tipos base de microscpios eletrnicos: de transmisso e de varredura. Ao mostrar imagens de objetos infinitamente menores que os observados ao microscpio tico, o microscpio electrnico contribuiu para o progresso do conhecimento da estrutura da matria e das clulas.
O professor

Lus Filipe Aires da Silva

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