Ao do sujeito de condroitina A associado ciprofloxacina em lceras de crnea em cavalos

AO DO SULFATO DE CONDROITINA A ASSOCIADO CIPROFLOXACINA EM LCERAS DE CRNEA EM CAVALOS Action of Chondroitin Sulfate Associate to the Ciprofloxacin Corneal Ulcers in Horses
Antnio Felipe Paulino de Figueiredo Wouk 1 Ivan Zulian 2 Graziela Muller 3 Ana Letcia Groszewicz de Souza 4

Resumo
Os glicosaminoglicanos possuem ao inibidora da plasmina, uma enzima fibrinoltica encontrada em altas concentraes em crneas lesadas, alm de ao anablica sobre fibroblastos, condrcitos e sinovicitos. O objetivo desta pesquisa foi estudar os efeitos clnicos da instilao tpica de uma associao de ciprofloxacina e sulfato de condroitina A sobre a cicatrizao de lceras corneanas experimentais produzidas em cavalos. Para isso, foram utilizados 10 olhos de cinco cavalos, nos quais a crnea foi submetida trefinao central e observao durante 24 horas para incio dos tratamentos. Considerando-se cada animal como seu prprio controle, os olhos do lado direito compuseram o grupo controle, nos quais se instilou colrio de tobramicina quatro vezes ao dia e os olhos do lado esquerdo o grupo tratamento, submetidos instilao de uma associao de sulfato de condroitina A com ciprofloxacina duas vezes ao dia. Os cavalos foram examinados a cada dois dias, durante 30 dias, para avaliao dos sinais clnicos. A cicatrizao das lceras foi confirmada por prova de reteno de fluorescena negativa. Os olhos tratados com sulfato de condroitina A e ciprofloxacina apresentaram reduo precoce dos sinais clnicos e preenchimento do leito da lcera com tecido cicatricial de melhor qualidade, obtendo cicatrizao sem leucoma em 80% dos olhos em 14 dias. Os olhos controle apresentaram edema corneano e neovascularizao mais importantes e a reduo dos sinais clnicos, bem como a cicatrizao iniciaram-se tardiamente, resultando em discreto leucoma. Palavras-chave: lcera; Crnea; Glicosaminoglicano; Eqino.

2 3

Professor Titular de Clnica Cirrgica e Oftalmologia Veterinria da UFPR e PUCPR, Av. Sete de setembro, 5415/901. CEP: 80240000, Curitiba/PR, e-mail: arsvet2@bsi.com.br. Professor Assistente de Clnica Mdica de Eqinos da UFPR, Departamento de Medicina Veterinria UFPR, e-mail: dmv@ufpr.br. Mestranda do Curso Ps-graduao em Cincias Veterinrias da UFPR, Departamento de Medicina Veterinria UFPR, e-mail: dmv@ufpr.br. Mdica Veterinria Residente do Hospital Veterinrio para Animais de Companhia da PUCPR, Departamento de Medicina Veterinria UFPR, e-mail: dmv@ufpr.br.

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

11

Antnio Felipe Paulino de Figueiredo Wouk et al.

Abstract
Polisulfated glicosamynoglycans (PSGAG) inhibits plasmin, a fibrinolitic enzyme found at high concentration in corneal wounds. They also have an anabolic effect on fibroblasts, chondrocytes and synoviocytes. This study was conducted to evaluate the potential efficacy of one topical ocular association of ciprofloxacin and chondroitin sulfate, a PSGAG, on the healing of experimental corneal ulcers in horses. Ten eyes of five horses were employed. The corneas were submitted to central trephination and watched during 24 hours until onset of treatments. The right eyes were the control group treated with tobramicin drops, four times a day, and the left eyes were treated with association of chondroitin sulfate and ciprofloxacin drops, twice a day. The horses were monitored every two days during 30 days, for the ocular clinical signs. They were considered healed when negative for fluorescein. The treated eyes with chondroitin and sulfate ciprofloxacin showed early decrease of clinical signs and more rapid healing leading to 80% of healed ulcers in 14 days. The control eyes presented a more important and longer corneal edema and neovascularization (pannus) and later healing with limited leukoma. Keywords: Ulcer; Cornea; Glicosamynoglycan; Equine.

Introduo
Perdas epiteliais e de pores variadas do estroma corneano so definidas como ceratite ulcerativa (STARTUP, 1984). Nessa ltima, dor, lacrimejamento, blefarospasmo, secreo ocular, fotofobia e uvete reflexa so os sinais clnicos mais representativos (KERN, 1990). Dentre as vrias causas capazes de motivar seu aparecimento, destacam-se os traumas, corpo estranho, anormalidades palpebrais dos clios e aparelho lacrimal, infeces virais e micticas, deficincias nutricionais, queimaduras qumicas e imunopatias (HELPER, 1989; SLATTER, 2001). As lceras corneanas esto entre as afeces oculares mais comuns em eqinos (DAVIDSON, 1991). Essas so classificadas conforme sua profundidade em superficial, profunda ou descemetocele. As primeiras reparam-se por meio de migrao e mitose de clulas basais num perodo de 4 a 7 dias, com mnima formao de cicatriz (BANKS, 1992; SLATTER, 2001; DONZIS; MONDINO, 1987; WHITLEY, 1991). Nos casos de cronificao e retardo na formao de tecido cicatricial, pigmentos representados por melancitos invadem as reas lesadas e comprometem a transparncia corneana (SLATTER, 2001). Quando a leso localiza-se no estroma profundo e infeces bacterianas cursam simultaneamente, o processo exudativo mais complexo (SLATTER, 2001). As leses estromais demandam maior tempo para que sejam reparadas e, em muitos casos, a regenerao depende de neovascularizao apropriada, embora a cura ocorra em condies de avascularidade (NASSISSE, 1985; WHITLEY, 1991). Como produto final do processo de

reparao cicatricial, o arranjo irregular de fibras colgenas condio comumente vista e se manifesta sob as formas de nbula, mcula ou leucoma (SLATTER, 2001). As stem cells so consideradas indispensveis para a integridade da superfcie corneana, promovendo sua renovao em condies normais e reepitelizao em processos reparatrios (SWIFT et al., 1996; HAAMANN et al., 1998; DUA; AZURABLANCO, 1999). Elas possuem alta capacidade de proliferao, diferenciao e maturao e so encontradas na poro basal do epitlio do limbo (HAAMANN et al., 1998). Seus movimentos centrpetos na periferia da crnea, limbo e conjuntiva so responsveis pela substituio do epitlio corneano (WAGONER, 1997). Assim como as stem cells, a fibronectina, uma glicoprotena presente no plasma e matriz extracelular, tambm considerada de grande importncia na cicatrizao de lceras corneanas, pois essa protena promove migrao das clulas epiteliais, permite o ancoramento delas membrana basal e promove a organizao de tecido conectivo corneano (NISHIDA, 1983; TERVO apud WOUK et al., 1998; TERVO apud WOUK et al., 1998). Sua destruio ocorre por ao da plasmina, uma enzima fibrinoltica encontrada em altas concentraes nas feridas de crnea, cuja capacidade de destruio confere importncia relevante na patognese das lceras corneanas (SALONEN apud WOUK et al., 1998). Os glicosaminoglicanos polissulfatados (GAGPS) inibem tanto a plasmina como os ativadores do plasminognio (BURKHARDT; GHOSH apud WOUK et al., 1998; WILLEFORD; MILLER; ABRAMS apud ANDREW; GELATT, 2001). Esses

12

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

Ao do sujeito de condroitina A associado ciprofloxacina em lceras de crnea em cavalos

possuem efeito anablico sobre fibroblastos, condrcitos e sinovicitos (BURKHARDT; GHOSH apud WOUK et al., 1998). Alm disso, os GAGPS possuem a habilidade de varrer radicais livres, diminuir a liberao de prostaglandina E2, bloquear a ativao do complemento e diminuir a produo de interleucina-1, exercendo, assim, ao antiinflamatria (RASHMIR-RAVEN et al., 1992 RONCA et al. apud DAVIDSON, 2000). Segundo Clegg et al. (1998), os GAGPS tambm inibem a degradao de colgeno pelas metaloprotenas grupo de enzimas responsveis pela degradao fisiolgica e patolgica da matriz extracelular do estroma. Miller (1996) e Wouk et al. (1998) estudaram os efeitos dos GAGPS em lceras recorrentes de ces e eqinos, respectivamente. Ambos utilizaram uma soluo oftlmica de glicosaminoglicanos polissulfatados a 5% e obtiveram a cicatrizao de lceras num perodo de 1 a 3 semanas aps o trauma, com sucesso de 83% e 86%, respectivamente. Verificaram, ainda, diminuio do blefarospasmo nas primeiras 48 horas, o que permitiu sugerir sua ao antiinflamatria tpica. O sucesso no manejo das lceras corneanas consiste em, a partir do diagnstico, determinar sua etiologia, prevenir sua progresso e realizar procedimentos que visem a manuteno da integridade da crnea e a produo de condies timas para a sua cicatrizao (SLATTER, 2001). Terapia antimicrobiana profiltica indicada no tratamento de lceras corneanas em cavalos, sendo direcionada contra microrganismos da flora conjuntival normal, capazes de colonizar o estroma em presena de dano epitelial. Neomicina, polimixina B, gentamicina e cloranfenicol so opes de antibiticos, assim como gentamicina, amicacina e tobramicina ou ciprofloxacin, norfloxacin e ofloxacin (DAVIDSON, 1991; HAMOR; WHELAN, 1999; WHITLEY, 2000; WHITLEY, 2000). Tambm esto indicados os inibidores da colagenase como a acetilcistena, a cistena, o citrato, o ascorbato de sdio, o tripeptdeo -mercaptometil, a tetraciclina sistmica, o EDTA sdico e soro sangneo, entre outros (BARNETT et al., 1995; DONZIS; MONDINO, 1987; BURNS et al., 1990; WAGONER, 1997; BURNS et al., 1990; BARNETT et al., 1995). A eficcia dos derivados da tetraciclina em reduzir a atividade da colagenase deve-se quelao do zinco, impedindo a sua ligao ao stio ativo da enzima, e limpeza de

radicais livres realizada pelos polimorfonucleares (PMNs) (WAGONER, 1997). Alguns autores recomendam a utilizao de sucedneos da lgrima, fator de crescimento epidrmico, cido retinico, hialuronato de sdio e fibronectina (WAGONER, 1997; BURNS et al., 1990; MORI et al., 1993). O uso de medicamentos como antiprostaglandinas sistmicas (flunixin-meglumine e o cido acetilsalislico) e tpicas (indometacina e o flurbiprofeno) tem sido proposto devido intensa liberao de prostaglandinas, resultado de inflamao intra-ocular (WAGONER, 1997). As condutas cirrgicas reservam-se queles casos de persistncia ou evoluo dos sinais clnicos. Dentre essas, destacam-se retalhos ou enxertos conjuntivais, enxertos de crnea, transposio crneo-conjuntival, flap de escorregamento conjuntival e tarsorrafia temporria (HAMOR; WHELAN, 1999; WHITLEY, 2000; BARNETT et al., 1995; DAVIDSON, 1991). O prognstico da evoluo de crneas lesadas implica em considerar as possibilidades da perda de transparncia corneana, a intensidade da isquemia ou necrose lmbica e da conjuntiva bulbar, bem como a qualidade da neovascularizao (WAGONER, 1997). Pelo exposto acima, aventa-se a hiptese de que os GAGPS sejam capazes de promover a reparao corneana em menor perodo de tratamento e formao de arranjo regular das fibras colgenas da crnea, alm de reduo do quadro inflamatrio, resultante da produo experimental de lceras corneanas em eqinos. Dito isto, o objetivo da presente pesquisa foi avaliar clinicamente o potencial de eficcia da instilao tpica de uma associao de sulfato de condroitina A 5% com ciprofloxacina em lceras corneanas experimentalmente produzidas, por trepanao, em cavalos.

Materiais e mtodos
Foram utilizados dez olhos de cinco cavalos (Equus caballus), de propriedade da Polcia Militar de Curitiba, onde a pesquisa foi realizada durante o ano de 2001. Selecionaram-se animais adultos, do sexo masculino e de raas variadas. Esses passaram inicialmente por exame geral e oftalmolgico especfico para padro-

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

13

Antnio Felipe Paulino de Figueiredo Wouk et al.

nizao dos indivduos e eliminao das variveis indesejveis. Na semiologia oftlmica, consideraram-se os seguintes exames: teste lacrimal de Schirmer, biomicroscopia em lmpada de fenda, tonometria de aplanao, oftalmoscopia binocular indireta e direta e prova de fluorescena5 . Aps a seleo, os animais foram identificados e mantidos em baias individuais apropriadas, com a alimentao e cuidados adequados. Inicialmente, realizaram-se lceras experimentais, para as quais os animais foram tranqilizados com neuroleptoanalgesia uma associao de butorfanol6 na dose de 2 ml com acepromazina7 a 1% na dose de 3 ml por via intravenosa. Aps alguns minutos, realizou-se bloqueio anestsico dos nervos auriculopalpebral e supra-orbital com 5 ml de lidocana8 a 2% sem vasoconstritor, promovendo analgesia e anestesia retrobulbar. A anestesia da crnea foi completada com pomada oftlmica anestsica base de prilocana9 . A trepanao das crneas foi realizada com um punch de 0,6 mm em posio de 12 horas, no eixo pupilar. Em seguida, procedeu-se a everso do bordo epitelial para mimetizar o quadro clnico de lcera indolente. Confirmou-se a produo das leses corneanas com teste de reteno de fluorescena positivo e, ento, aguardou-se um perodo de 24 horas para o incio dos tratamentos. Os dez olhos foram divididos em dois grupos: controle, composto pelos olhos direito, e tratamento, composto pelos olhos esquerdo. Para esses ltimos, adotou-se um protocolo de instilao de colrio com associao de sulfato de condroitina A 5% e ciprofloxacin10 , em intervalos de 12 horas, at reteno negativa de fluorescena. Nos olhos direito, utilizou-se soluo oftlmica estril de tobramicina11 , na concentrao 0,3%, a cada 6 horas, at cicatrizao

das lceras. Cada animal constituiu-se em uma unidade experimental, sendo seu prprio controle. As crneas foram avaliadas diariamente com oftalmoscopia direta e prova de reteno de fluorescena e, em dias alternados, com oftalmoscopia indireta e biomicroscopia em lmpada de fenda durante 30 dias. A anlise dos parmetros relacionados a blefarospasmo, fotofobia, epfora, quemose, edema e pannus foi realizada sempre pelo mesmo examinador, de acordo com os seguintes critrios quali-quantitativos: (0) ausncia de sinais, (+) sinais discretos, (++) sinais moderados e (+++) sinais intensos. Esses dados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis, utilizando-se um nvel de significncia de 5% (p = 0,05). Aps o perodo de 30 dias, os eqinos sofreram exame oftlmico quinzenal durante cinco meses.

Resultados e discusso
Obedecendo aos critrios quali-quantitativos, verificaram-se os seguintes resultados: os olhos do grupo controle e os olhos do tratamento (100%) apresentaram blefarospasmo (FIGURA 1) e fotofobia (FIGURA 2) e 80% desses manifestaram epfora, com durao mdia de trs dias (FIGURA 3). O desaparecimento desses sinais clnicos ocorreu no grupo de cinco olhos tratados com associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina, dois dias antes do grupo controle, o qual permaneceu apresentado sinais de intensidade leve at o quinto dia. A remisso do edema (FIGURA 4) de crnea, observado em todos os olhos, ocorreu em trs dias e num perodo mdio de cinco dias, nos olhos tratados e controle, respectivamente.

5 6 7 8 9 10 11

Tiras de Fluorescena Ophthalmos/PR. Torbugesic Ford Dodge S. A. Acepran Univet S. A. Lidocana 2% Apsen do Brasil Ind. Qum. e Farm. Ltda. Emla Astra Qumica e Farmacutica Ltda. Ciprovet Labyes S. A. Tobrex Alcon Ltda.

14

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

Ao do sujeito de condroitina A associado ciprofloxacina em lceras de crnea em cavalos

FIGURA 1 Ocorrncia, em dias, de blefarospasmo em olhos de eqinos tratados topicamente com tobramicina e a associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina. Grau de intensidade dos sinais: (0) ausncia de sinais, (+) sinais discretos, (++) sinais moderados e (+++) sinais intensos.
Figure 1 Occurrence, in days, of blefarospasmo in equines eyes topically treated with tobramicin and the association with chondroitin sulfate and with ciprofloxacin. Degree of intensity of the signals: (0) absence of signals, (+) discrete signals, (++) moderate signals e (+++) intense signals.

DIAS

FIGURA 2 Ocorrncia, em dias, de fotofobia em olhos de eqinos tratados topicamente com tobramicina e a associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina. Grau de intensidade dos sinais: (0) ausncia de sinais, (+) sinais discretos, (++) sinais moderados e (+++) sinais intensos.
Figure 2 Occurrence, in days, of photophobia in equines eyes topically treated with tobramicin and the association with chondroitin sulfate and with ciprofloxacin. Degree of intensity of the signals: (0) absence of signals, (+) discrete signals, (++) moderate signals e (+++) intense signals.

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

15

Antnio Felipe Paulino de Figueiredo Wouk et al.

FIGURA 3 Ocorrncia, em dias, de epfora em olhos de eqinos tratados topicamente com tobramicina e a associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina. Grau de intensidade dos sinais: (0) ausncia de sinais, (+) sinais discretos, (++) sinais moderados e (+++) sinais intensos.
Figure 3 Occurrence, in days, of epiphora in eyes of equines topically treated with tobramicin and the association with chondroitin sulfate and with ciprofloxacin. Degree of intensity of the signals: (0) absence of signals, (+) discrete signals, (++) moderate signals e (+++) intense signals.

FIGURA 4 Ocorrncia, em dias, de edema em crneas de eqinos tratados topicamente com tobramicina e a associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina. Grau de intensidade dos sinais: (0) ausncia de sinais, (+) sinais discretos, (++) sinais moderados e (+++) sinais intensos.
Figure 4 Occurrence, in days, of equines corneal edema topically treated with tobramicin and the association with chondroitin sulfate and with ciprofloxacin. Degree of intensity of the signals: (0) absence of signals, (+) discrete signals, (++) moderate signals e (+++) intense signals.

16

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

Ao do sujeito de condroitina A associado ciprofloxacina em lceras de crnea em cavalos

No quinto dia de tratamento com associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina, trs olhos apresentaram preenchimento do leito da lcera em plano estromal (FIGURA 5), porm ainda positivo ao tes-

te de fluorecena. Os outros dois olhos apresentaram incio de preenchimento da lcera com tecido cicatricial a termo e, por meio da oftalmoscopia direta, observou-se leve neovascularizao da crnea.

FIGURA 5 Ocorrncia, em dias, da epitelizao da crnea de eqinos tratados topicamente com tobramicina e a associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina. Grau de intensidade dos sinais: (0) ausncia de sinais, (+) sinais discretos, (++) sinais moderados e (+++) sinais intensos.
Figure 5 Occurrence, in days, of the equines cornea epithelial formation topically treated with tobramicin and the association with condroitin sulfate and with ciprofloxacin. Degree of intensity of the signals: (0) absence of signals, (+) discrete signals, (++) moderate signals e (+++) intense signals.

Sulfato de Condroitina A e Ciprofloxacina Tobramicina

15 DIAS

No dcimo dia de tratamento com sulfato de condroitina A e ciprofloxacina, constatou-se em quatro olhos maior evoluo da organizao cicatricial e ausncia de leucoma. Nessa fase, o quinto olho apresentou preenchimento do leito da lcera por tecido cicatricial em plano epitelial. Com 16 dias de evoluo do tratamento, 80% dos olhos tratados apresentaram completa cicatrizao, constatada pelo resultado negativo da prova de fluorescena. As crneas apresentavam-se transparentes, avasculares e sem leucoma. Os demais 20% tiveram a resoluo da lcera completada em mdia com 21 dias de tratamento. Todas as cicatrizaes do grupo de tratamento ocorreram sem formao de leucoma ou neovascularizao. Nos olhos do grupo controle, aos nove dias, observou-se 80% das crneas ainda ulce-

radas e incio do preenchimento do leito da lcera em 20% delas. Em todos os olhos, verificou-se edema e neovascularizao intensos (FIGURA 6) pannus. O incio do preenchimento do leito das lceras com tecido cicatricial e diminuio do pannus foi verificada aps 10 e 15 dias de tratamento, respectivamente. A completa cicatrizao das lceras e o teste de reteno de fluorescena negativo somente foram verificados aps 20 dias de tratamento com colrio de tobramicina. Com 30 dias, observou-se ainda a presena de discreto leucoma. Aos 90 dias de observao, notou-se transparncia corneana completa, sem leucoma, em quase todos os olhos do grupo controle e, aos cinco meses, verificou-se ainda discreto leucoma em um olho.

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

17

Antnio Felipe Paulino de Figueiredo Wouk et al.

FIGURA 6 Ocorrncia, em dias, de neovascularizao em crneas de eqinos tratados com tobramicina e associao de sulfato de condroitina A e ciprofloxacina. Grau de intensidade dos sinais: (0) ausncia de sinais, (+) sinais discretos, (++) sinais moderados e (+++) sinais intensos.
Figure 6 Occurrence, in days, of neovascularization in equine corneas treated with tobramicin and association with chondroitin sulfate and with ciprofloxacin. Degree of intensity of the signals: (0) absence of signals, (+) discrete signals, (++) moderate signals e (+++) intense signals.

Na anlise estatstica foram encontradas diferenas significativas em relao ao edema no stimo dia (p=0,0254), neovascularizao no quinto dia (p=0,0254) e epitelizao

no nono dia (p=0,0254). Para os demais sinais clnicos no foram encontradas diferenas significativas entre os olhos dos dois grupos (TABELA1).

TABELA 1 Valores mnimos significativos (p) do teste de anlise de varincia para dados no paramtricos (Kruskal-Wallis) dos sinais clnicos em cada dia, onde p < 0,05 indica diferena significativa.
Table 1 Significant minimum values (p) of the analysis of variance test for non-parametric data (Kruskal-Wallis) of the clinical signals in each day, where p < 0.05 indicates significant differences. Sinais DIAS 1 dia 3 dias 5 dias 7 dias 9 dias 15 dias

Blefarospasmo Quemose Fotofobia Epfora Edema Neovascularizao Epitelizao 1,0000 1,0000 0,3613 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 0,2482 0,1360 0,1709 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 0,5762 0,5762 0,5762 0,0254* 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 0,0254* 0,1709 1,0000 0,3613 1,0000 0,5762 0,5762 0,5762 0,0254* 0,5762

*Valores de p < 0,05

18

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

Ao do sujeito de condroitina A associado ciprofloxacina em lceras de crnea em cavalos

A cicatrizao corneana normal ocorre por meio de migrao celular e mitose, que cobrem os pequenos e os grandes defeitos, respectivamente. Sua ocorrncia parece ser dependente da formao e adeso da membrana basal s clulas epiteliais da crnea. Esses eventos, por sua vez, so beneficiados pela fibronectina, importante glicoprotena envolvida na migrao celular e capaz de promover um leito para as clulas epiteliais em regenerao aderirem-se ao estroma. No entanto, devido suscetibilidade dessa molcula s proteinases envolvidas na patogenia das leses corneanas, o processo de cicatrizao da crnea apresentar-se-ia prejudicado se sua destruio ocorresse. Muito embora, conforme concluso de Phan et al. (1989), a matriz fibrina-fibronectina no seja essencial para a migrao de clulas epiteliais em um modelo experimental de ferida superficial de crnea, o mesmo parece no acontecer na cicatrizao de modelos de leses envolvendo extenso dano tecidual e infiltrao de clulas inflamatrias. Exemplos disso so as leses corneanas por queimaduras qumicas ou trmicas, por infeces virais ou bacterianas, nas quais a fibronectina parece apresentar papel mais crtico na cicatrizao (PHAN et al., 1989). Considerando-se que altos nveis de plasmina foram demonstrados em crneas humanas ulceradas Salone e, ainda, que isto poderia ocorrer tambm em crneas animais ulceradas, o uso de substncias inibidoras da plasmina no tratamento dessas leses, como os GAGPS, impediria a destruio da fibronectina e, portanto, permitiria a ocorrncia do processo de cicatrizao das clulas epiteliais da crnea em menos tempo quando comparado ao tratamento convencional. Isso explicaria o menor perodo de tempo gasto na cicatrizao das crneas ulceradas dos cavalos tratadas com sulfato de condroitina A e o percentual de sucesso de 80%, semelhante aos obtidos por (MILLER 1996; WOUK et al., 1998). Outra hiptese a ser considerada que assim como a eroso epitelial persistente, as lceras de crnea tambm poderiam envolver um ciclo contnuo de atividade proteoltica na crnea, via cascata de fatores ativadores de plasminognio-plasmina. Uma vez que clulas epiteliais, polimorfonucleares e ceratcitos secretam fator ativador do plasminognio, o qual converte plasminognio em plasmina, essa ltima interromperia a adeso das clulas epiteliais e da fibrina por meio de destruio da fibronectina, promovendo, por conseguinte, degradao da membrana basal. Conforme estudos realizados por Phan et al. (1989), a fibronectina parece ser muito mais necessria para a deposio de fibrina do que o contrrio.

Aps 24 horas da leso corneana experimental, todos os animais apresentaram sinais clnicos compatveis com ceratite ulcerativa, concordando com a descrio feita por Kern (1990). No entanto, no se observou uvete reflexa em nenhum dos cavalos estudados. O blefarospasmo observado em todos os olhos e a fotofobia vista na maioria deles so sinais clnicos compatveis com dor ocular e conseqncia do quadro inflamatrio instalado. Por conseguinte, a reduo desses sinais e da inflamao ocular, ocorrida antecipadamente nos olhos do grupo tratado, decorrente do uso dos GAGPS, sugerindo assim um efeito antiinflamatrio tpico, conforme feito por Miller (1996) e Wouk et al. (1998). Essa ltima ao dos GAGPS explicada por sua capacidade de varrer radicais livres, diminuir a sntese de prostaglandina E2, bloquear a ao do sistema complemento e reduzir a produo de interleucina-1. Outro importante efeito relacionado utilizao dos GAGPS refere-se qualidade da cicatrizao corneana. Nenhum dos olhos tratados com a associao de ciprofloxacina e sulfato de condroitina A (100%) apresentou opacidades como nbula, mcula ou leucoma ao final da cicatrizao corneana. Sugere-se que esse efeito, tambm obtido nos estudos de Miller (1996), Wouk et al. (1998), ocorra, muito provavelmente, devido mistura dos glicosaminoglicanos metilcelulose, resultando em ntima adeso das clulas epiteliais ao estroma subjacente e em perfeito arranjamento das fibrilas de colgeno, proporcionando cicatrizao sem opacidades nem vascularizao. Somando-se a isso, a inibio da degradao da fibronectina tambm contribuiria para a cicatrizao sem nbula, mcula ou leucoma devido a sua capacidade de organizar o tecido conectivo corneano (TERVO apud WOUK et al., 1998).

Concluses
Os resultados obtidos com a pesquisa permitiram concluir que a instilao tpica de uma associao de sulfato de condroitina A a 5% com ciprofloxacina promove a cicatrizao mais rpida de lceras de crnea produzidas experimentalmente em cavalos, alm de evitar a formao de cicatriz corneana e reduzir as manifestaes oculares de origem inflamatria. Em decorrncia dos bons resultados obtidos nesta e em outras pesquisas, os GAGPS tm se mostrado muito promissores no tratamento de alguns tipos de leses corneanas e, portanto, novos estudos submetendo-os a novos desafios devem ser perseguidos.

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.

19

Antnio Felipe Paulino de Figueiredo Wouk et al.

Referncias
ANDREW, S. E.; GELATT, K. N. Erosiones corneales persistentes en los perros. Waltham Focus, v. 11, n. 1, p. 10-15, 2001. BANKS, W. J. Olho e ouvido. In: ______. Histologia Veterinria Aplicada. 2. ed. So Paulo, SP: Manole, 1992. p. 589-617. BARNETT, K. C.; CRISPIN, S. M.; LAVACH, J. D. et al. Cornea. In: ______. Equine Ophthalmology, London: Mosby-Wolf, 1995, p. 98-135. BURNS, F. R. et al. Inhibition of purified collagenase from alkali-burned rabbit corneas. Investigative Ophthalmology & Visual Science, v. 30, n. 7, p. 1569-1575, 1989. CLEGG, P. D. et al. The effect of drugs commonly used in the treatment of equine articular disorders on the activity of equine matrix metalloproteinase-2 and 9. Journal Veterinary Pharmacology Therapeutics, v. 21, p. 406-413, 1998. DAVIDSON, G. Glucosamine and chondroitin sulfate. Compendium on Continuing Education, v. 22, n. 5, p. 454-458, 2000. DAVIDSON, M. G. Equine Ophthalmology. In:______. GELATT, K. N. Veterinary Ophthalmology. 2th ed. London: Febiger, 1991. p. 576-610. DUA, H. S., AZUARA-BLANCO, A. Allo-limbal transplantation in patients with limbal stem cell defeciency. Brasilian Journal Ophthalmology, v. 83, p. 414-419, 1999. HAAMANN, P. et al. Limbal autograff transplantation. Acta ophthalmol. Scond., v. 76, p. 117-118, 1998. HALL, P. A., WATT, F. M. Stem cells: the generation and maintenance of cellular diversity. Development, v. 106, p. 619-633, 1989. HAMOR, R. E., WHELAN, N. C. Equine Infectious keratitis. Clinical pharmacology and therapeutics. The Veterinary Clinics of North America, v. 15, n. 3, p. 623-646, 1999. HELPER, L. C. Diseases and surgery of the cornea and sclera. In: _____ . Magranes Canine Ophthalmology. 4th ed. Philadelphia: Febiger, 1989. p. 102-149. KERN, T. J. Ulcerative keratitis. The Veterinary Clinics of North American Small Animal Practice, v. 20, n. 3, p. 643-666, 1990.

MILLER, W. W. Using polysulfated glycosaminoglycan to treat persistent corneal erosions in dogs. Veterinary Medicine, v. 91, p. 916-922, 1996. MORI, E. M. et al. Fibronectina tpica no tratamento de lceras de crnea de coelho aps queimadura por lcali. Arquivo Brasileiro de Oftalmologia, v. 56, n. 5, p. 254-257, 1993. NASSISSE, M. P. Canine ulcerative keratitis. Compendium on Continuous Education, v. 7, n. 9, p. 686-701, 1985. NISHIDA, T. et al. Fibronectin promotes epithelial migration of cultured rabbit cornea in situ. The Journal of Cell Biology, v. 97, n. 5, p. 1653-1657, 1983. PHAN, T. M. et al. Role of fibronectin and fibrinogen in healing of corneal epithelial scrape wounds. Investigative Ophthalmology & Visual Science, v. 30, n. 3, p. 377-385, 1989. RASHIMIR-RAVEN, A. M. et al. Inhibition of equine complement activity by polysulfated glycosaminoglycans. Americans Journal Veterinary Research, v. 53, n. 1, p. 87-90, 1992. SLATTER, D. Cornea and sclera. In: ______. Fundamentals of Veterinary Ophthalmology. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 2001. p. 260-313. STARTUP, F. C. Corneal ulceration in the dog. Journal Small Animal Practice, v. 25, p. 737-752, 1984. SWIFT, G. J. et al. Survival of rabbit limbal stem cell allografts. Transplantation, v. 62, n. 5, p. 568-574, 1996. WAGONER, M.D. Chemical injuries of the eye: current concepts in pathophisiology and therapy. Survey Ophthalmology, v. 41, n. 4, p. 275-313, 1997. WHITLEY, R. D. Canine corneas. In: GELATT, K. N. Veterinary Ophthalmology. 2th ed. Phliladelphia: Febiger, 1991. p. 307-356. WHITLEY, R. D. Infectious disease and the eye. The Veterinary Clinics of North America Small Animal Practice, v. 30, n. 5, p. 1098-1380, 2000. WOUK, A. F. P. F. et al. Polysulfated glycosaminoglycan used for the treatment of indolent corneal ulcers in equine patients. Rivista Societ Italiana di Ippologia, v. 4, n. 1, p. 87-90, 1998.

Recebido: 02/12/2005 Aprovado: 31/03/2006

20

Rev. Acad., Curitiba, v.4, n.4, p. 11-20, out./dez. 2006.