ROTEIRO DE AULA PRÁTICA – EXTRAÇÃO DE DNA VEGETAL

Rodrigues et al., 2008

O DNA (Ácido desoxirribonucleico) é uma molécula orgânica responsável pelo

armazenamento e transmissão das informações genéticas que compõem os organismos vivos. Nos
organismos eucarióticos, como animais, plantas e fungos, o DNA está presente no núcleo das
células sendo composto por três substâncias
químicas, que são as bases nitrogenadas, um
açúcar formado por cinco átomos de carbono
(pentose) e um radical de ácido fosfórico
(FIGURA 01).

FIGURA 01: (A) Microscopia eletrônica de DNA.

(B) Composição do DNA, onde P – Radical ácido
fosfórico; Aç. – Pentose; G – Guanina; T – Timina;
C – Citocina; A – Adenina.

O tamanho microscópico do DNA faz com que só seja possível observar essa molécula
utilizando métodos avançados de microscopia eletrônica. No entanto é possível identificar a
presença da molécula de DNA em solução a partir da extração de uma grande quantidade dessa
molécula de células vegetais. Com isso, o objetivo desse roteiro de aula é contribuir para a
identificação do DNA extraído a partir de material vegetal em solução de lise.

MATERIAL NECESSÁRIO:

> Material biológico - no caso utilizaremos cebola, morango e banana;

> Faca ou tesoura;
> Água quente;
> Prato para macerar o material biológico;
> Gelo ou água fria;
> Álcool de limpeza gelado (92%).

PARA EXTRAÇÃO DO DNA VEGETAL É NECESSÁRIO:

> Dois Béqueres ou copos de vidro;

> Uma colher de sopa de detergente líquido neutro;
> Uma colher de chá de sal de cozinha;
> Um funil ou peneira (como alternativa pode ser empregado o uso de
uma garrafa PET cortada ao meio com a tampa perfurada).
 PROCEDIMENTO:

ETAPA 01 – Coloque 80 mL ou ¾ de
água no béquer/copo. Acrescente
uma colher de detergente líquido
incolor e uma colher de chá de sal de
cozinha e misture bem com o auxílio
de uma colher. Essa é a solução de
lise que vamos utilizar para extrair o
DNA do material vegetal.

ETAPA 02 – Pique o material vegetal

em pequenos pedaços – quanto
menor eles forem, melhor – e coloque
tudo dentro do recipiente com a
solução de lise. Misture tudo
vagarosamente para evitar a
formação de bolhas devido a
presença de detergente na solução.

ETAPA 03 – Incube o béquer/copo

em água-quente (70 ºC) por 10 a 15
minutos.
ETAPA 04 – Retire o recipiente de
dentro da água quente e filtre o
material utilizando um funil com
papel filtro ou uma peneira.

ETAPA 05 – Coloque o béquer/copo

com o material filtrado em um banho
de gelo ou água fria e deixe esfriar
por cerca de 5 minutos.
ETAPA 06 – Retire o béquer/copo do
gelo e adicione o álcool gelado - com
cuidado e pela parede do recipiente.
O volume de álcool adicionado deve
ser aproximadamente equivalente ao
do material filtrado.

ETAPA 07 – Observe o DNA precipitando como uma nuvem esbranquiçada no fundo da fase
alcoólica. No topo da fase alcoólica irá se formar o acúmulo de uma outra substância
que não deve ser confundida com DNA.
 Após terminar as observações, responda as questões propostas abaixo:

01. Qual é a função da solução de lise utilizada no início do experimento? Qual a função do sal
e do detergente utilizados no preparo dessa solução?
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02. No procedimento para a realização do experimento, é orientado que você pique o material o
máximo possível, de tal maneira que quanto mais picado ele estiver, melhor a qualidade do
resultado. A que se deve essa orientação?
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03. Qual a importância da incubação à temperatura elevada de 70ºC?

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04. Qual a importância da etapa de resfriamento do filtrado em gelo ou água fria?

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05. Na ETAPA 06 é adicionado ao filtrado já resfriado cerca de 30 mL de álcool 92%. Qual a

função do álcool nesta etapa da extração do DNA vegetal?
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06. Ao final do experimento você deve ter observado, ou não, a formação de uma camada no
topo da fase alcoólica. Algumas amostras vegetais podem não apresentar o aglomerado
dessa substância e outras podem apresentar uma alta concentração da mesma. Essa
formação se dá devido a presença de PECTINA em algumas amostras vegetais, que é uma
substância presente em grande quantidade nas paredes celulares do tecido vegetal. Em qual
dos materiais vegetais utilizados foi observada maior precipitação de pectina, no morango,
na banana ou na cebola? (Observe o resultado do experimento de seus colegas para
responder a essa pergunta).
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