UNIVERSIDADE DO OESTE DE SANTA CATARINA - UNOESC

CURSO DE ENGERMAGEM
DISCIPLINA DE BIOLOGIA MOLECULAR E GENÉTICA

Aula Prática 01

Extração de ácidos nucléicos de cebola

A extração de ácidos nucléicos (DNA e/ou RNA) geralmente é a primeira de várias etapas para o
estudo da Biologia Molecular de um organismo. Nesta aula, utilizaremos reagentes de uso doméstico
para a extração dos ácidos nucléicos da cebola (Allium cepa). Modificado de: Loreto, E. L. S. e Sepel,
L. M. N. Atividades experimentais e didáticas de Biologia Molecular e Celular. São Paulo, Editora
Sociedade Brasileira de Genética, 2002.

Material necessário:
- Uma cebola grande
- Ralador
- Sal de cozinha (NaCl)
- Detergente para lavar louça (líquido ou gel)
- Água quente (65°C a 80°C)
- Papel filtro ou filtro de café ou algodão
- Funil ou suporte para filtro de café
- Gelo
- Álcool gelado
- Dois frascos de vidro (~200 mL)
- Bastão ou pipeta de vidro
- Recipiente para o banho de gelo

Procedimento:

1. Rale a cebola e coloque-a em um dos frascos (até ~40mL).

1. Adicione 100 mL de uma solução feita com 80 mL de água quente, 20 mL de detergente e uma
colher de sopa de sal (NaCl). Misture bem a solução com a cebola ralada. Aguardar por ~10 min.

2. Coloque o frasco com a cebola em um banho de gelo (recipiente plástico com um pouco de água
e gelo). À medida que a solução onde está a cebola esfria é possível observar que o líquido
parece estar “talhando”.

3. Quando a solução com a cebola ralada estiver fria, filtre a solução coletando o líquido em um
frasco limpo.

4. Incline o vidro com o líquido filtrado (ângulo de 30° a 40°) e derrame vagarosamente, pela
parede, o álcool gelado. Você verá que o álcool não se mistura prontamente com a solução
filtrada, formando duas fases (na superior fica o álcool). Entre as duas fases é possível observar
a formação de um precipitado com aspecto de “fiapos” esbranquiçados, que são os ácidos
nucléicos.

5. Com a ajuda do bastão ou da pipeta de vidro, é possível enrolar os ácidos nucléicos que estão
precipitando, ou seja, você pode “pescar” o DNA e o RNA da cebola.

6. Uma vez enrolados no bastão, os ácidos nucléicos devem secar por alguns minutos ao ar para a
evaporação do etanol; depois o material deve ser transferido da extremidade do bastão para um
tubo com 0,2 mL de água destilada. Assim a amostra irá reidratar rapidamente e poderá ser
utilizada na eletroforese.

Determinação Espectrofotométrica da Quantidade de DNA ou analise em eletroforese em gel

de agarose.