EXTRAÇÃO DE DNA DA CEBOLA

Objetivo

Extrair o DNA da cebola que é visualizado a olho nu e mostrar o seu aspecto.

Descrição

As membranas, celular e nuclear são compostas principalmente por lípidos. As proteínas encontram-se aprisionadas na bicamada

lipídica. Os organitos celulares são compostos por proteínas, ácidos nucleicos ( DNA e RNA ), envolvidos por uma membrana.

Cerca de 99% do DNA encontra-se no núcleo da célula. A extração de DNA de células eucarióticas será efetuada em três etapas:

a) ruptura das células para liberação do núcleo;

b) desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos, DNA e proteínas;

c) separação do DNA dos demais componentes celulares.

Material:

Uma cebola grande; / Proveta de 100mL; / 2 Béquer de 200mL; / Banho-maria(+-60°C); / Água filtrada; / Sal de cozinha(NaCl); /

Detergente líquido para louça; / Álcool etílico 95%(gelado); / Bastão de vidro ou madeira; Peneira;

Procedimento

- Pique a cebola em pedaços bem pequenos;

- Coloque na proveta 2g de sal (cerca de uma colher de chá), 10mL de detergente e complete o volume para 100mL com água;

mexe-se bem até a total dissolução;

- Coloque a cebola picada juntamente com a solução de detergente e sal e leve ao banho-maria por 15 minutos;

- Retire a mistura do banho-maria e resfrie-a rapidamente, colocando o béquer num vasilhame com o gelo picado durante 15

minutos mexendo com bastão durante o resfriamento;

- Filtre a mistura, recolhendo o filtrado em um béquer limpo;

- Adicione ao filtrado cerca de 100mL de álcool gelado, deixando-o escorrer vagarosamente pela borda. Irá formar duas fases, a

superior, alcoólica, e a inferior, a aquosa;

- Mergulhe o bastão no copo e , com movimentos circulares, puxe-o para cima. Formam-se fios esbranquiçados, que são

aglomerados de moléculas de DNA.

Análise

O detergente dissolve as membranas lipídicas além de desintegrar os núcleos e os cromossomos das células da cebola, liberando

o DNA. Com a ruptura das membranas, o conteúdo celular, incluindo DNA e proteínas, soltam-se e dispersam- se na solução. Um

dos componentes do detergente, o lalril sulfato de sódio, desnatura as proteínas, separando-as do DNA cromossômico.

A adição de sal , no início da experiência, proporcionou ao DNA um ambiente favorável. O sal contribui com íons positivos Na+

que neutralizam a carga negativa do DNA. Nessa forma, O DNA precipita na solução aquosa.

O álcool gelado, além de proporcionar uma mistura heterogênia (duas fases), em ambiente salino, faz com que as moléculas de

DNA se aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada. O DNA não se dissolve no álcool, na concentração e na

temperatura que se usou neste experimento. Pelo fato do DNA ser menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos

celulares, ele se localiza na interface da fase alcoólica e aquosa.