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ão iniciação; atenuação; ≠s σ
Transcrição:
Modificação Covalente
Proteína Alosteria
Degradação
TRANSCRIÇÃO EM PROCARIOTOS
principais elementos estruturais e funcionais
• Promotor e Fator σ
Controle da expressão gênica
(Nível da Transcrição)
Expressão constitutiva
Expressão regulada
– Induzível
– Reprimida
Reguladores
– Fatores específicos
– Repressores (Regulação negativa)
– Ativadores (Regulação positiva)
PRINCÍPIOS DA REGULAÇÃO
TRANSCRICIONAL
Sinais extracelulares Controle da
expressão de genes
Proteínas Ativadoras
Proteínas Regulatórias
(Proteínas que se ligam ao DNA)
Proteínas Repressoras
Ativação pelo recrutamento da RNA Polimerase (RNA Pol)
PROCARIOTOS
Watson, J.D et al (2008), Molecular Biology of the Gene, 6th edition, Pearson Benjamin Cummings
Interações entre
proteínas ligadas ao
DNA
a) Ligação
cooperativa a sítios
adjacentes
b) Ligação cooperativa
a sítios separados
Watson, J.D et al (2008), Molecular Biology of the Gene, 6th edition, Pearson Benjamin Cummings
Bases Moleculares da Interação DNA-Proteína
Figure 7-6 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 7-7 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 7-8 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Bases Moleculares da Interação DNA-Proteína
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Figure 7-9 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Table 7-1 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Fatores de Transcrição
Classificação em famílias
Domínios:
– de ligação ao DNA
– de trans-ativação (Ativação ou
Repressão)
– de interação proteína-proteína
3 importantes famílias de fatores de transcrição
são descritas quanto ao tipo de domínio de
ligação ao DNA
1) Hélice-Volta-Hélice
2) Dedos de Zinco
3) Leucine Zipper
Vários tipos de motivos de ligação ao DNA são
encontrados em proteínas regulatórias
(DNA-binding proteins)
Helix-turn-helix: o domínio de Repressor Lac completo: domínio de
ligação ao DNA do repressor Lac é ligação ao DNA é mostrado em azul e
mostrado em vermelho e laranja as α-hélices de tetramerização em
vermelho
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Homeodomínios
Hélice-volta-hélice
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
“Zipper” de Leucina
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3 nd edition, Worth Publishers.
QUAL A DEFINIÇÃO
DE UM OPERON
Figure 8.14.1
Expressão
constitutiva
Figure 8.14.2
Tortora et al. (2003). Microbiology: An Introduction, 8th ed. Benjamin-Cummings Pub. Co.
Expressão Tortora et al. (2003).
constitutiva Microbiology: An
Introduction, 8th ed.
Benjamin-
Cummings Pub. Co.
Inativação da Proteína
Repressora: Ativação
do Operon
Figure 8.14.4
A posição do operador é
variável com relação ao
promotor
Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.
Metabolismo da
lactose em E. coli
β-galactosidase - 2 reações:
-reação principal: metabolismo
- reação secundária: indutor do
operon lactose (operon lac)
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger
Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Operon Lac
mRNA policistrônico
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.
Glicose – cAMP
Glicose – cAMP cAMP•CAP
Watson, J.D et al (2008), Molecular Biology of the Gene, 6th edition, Pearson Benjamin Cummings
Quando glicose está ausente
cAMP), CAP•cAMP liga-
(
se ao promotor e estimula a
transcrição do RNA em cerca
de 50 vezes. Sendo, portanto,
um regulador positivo
responsivo aos níveis de
glicose, enquanto o repressor
Lac é um regulador negativo
responsivo à lactose.
Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henrique Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.
Revisando a regulação do Operon Lac
Tortora et al. (2003). Microbiology: An Introduction, 8th ed. Benjamin-Cummings Pub. Co.
PERGUNTA PARA A
PRÓXIMA AULA
DNA
RNA
Proteína
Regulação pelo mecanismo de
ATENUAÇÃO
Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3rd edition, Worth Publishers
Repressão
- circuito
Repressor/
Operador:
Regulação
pelos níveis
de Trp
livre
Proteína
Repressora
Inativa:
Operon
Induzido
Em vermelho é
mostrado as
moléculas de trp
ligadas ao repressor
Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3rd edition, Worth Publishers
Atenuação é o segundo mecanismo de
controle da expressão do operon trp e
envolve a terminação precoce da
transcrição
baseado em estruturas secundárias alternativas (grampo)
na região 5’ líder do RNA situada a montante dos genes
estruturais
O acoplamento
da transcrição
com a tradução
é crucial na
regulação por
atenuação
(síntese do
peptídeo líder) Ribossomo MM=2,7x106 Da
RNA Polimerase MM= 3,9x105
Da
Nelson, D. and Cox, M., M. (2000).
Lehninger Principles of Biochemistry,
3rd edition, Worth Publishers
Organização da região lider
Genes
estruturais
Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3rd edition, Worth Publishers
Operon Triptofano
5 genes estruturais contíguos precedidos por uma região de
controle que inclui: P, O, ORFpeptídeo líder, Atenuador
Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3rd edition, Worth Publishers
Organização da região lider
Esta estrutura de
Genes
pausa é estruturais
responsável pelo
acoplamento da
trasncrição e
tradução - controle
da atenuação
O pareamento das regiões 1 e 2 da sequência lider faz com
que a RNA polimerase pause em um sítio logo após estas
regiões
A pausa é longa o suficiente para o início da tradução pelo
ribossomo que sintetisa o peptídeo líder seguindo logo
atrás da RNA polimerase
Um atenuador (A) controla a progressão da RNA Polimerase até os genes trp.
Lewin, B. (2000) Genes VII. Trad. Henrique Ferreira et al. 2001, Ed. Artmed, Porto Alegre/RS