INFLUNCIA DE DIFERENTES INTENSIDADES DE LUZ E DA DENSIDADE CELULAR SOBRE A FOTOSSNTESE DA MICROALGA MARINHA Isochrysis galbana (Haptophycea)

Introduo: As microalgas constituem um dos mais eficientes sistemas biolgicos de transformao de energia solar em compostos orgnicos, atravs do processo de fotossntese. Sendo assim, esses microrganismos apresentam enorme potencial para emprego em processos biotecnolgicos, seja para produo de biomassa, utilizada como fonte de alimento, seja como fonte dos mais diversos compostos qumicos de interesse econmico. O fato de sua reproduo se dar normalmente por uma simples diviso binria, permite que o ciclo celular se complete em poucas horas, resultando numa taxa de crescimento muito elevada. Adicionalmente, as clulas crescem em suspenso aquosa, permitindo um acesso mais eficiente gua, CO2 e outros nutrientes. Podem ainda crescer em meios contendo altas concentraes salinas, permitindo a utilizao de recursos naturais no usuais, o que evita a utilizao de gua potvel destinada ao uso domstico, industrial ou agrcola. Por fim, importante ressaltar que os processos que utilizam as microalgas compem os chamados processsos limpos, j que, atravs da fotossntese, estes microrganismos fixam elevada quantidade de CO2, um dos principais gases do efeito estufa. Dentre as inmeras espcies, a microalga marinha Isochrysis galbana (Haptophycea) tem sido apontada como produtora de altas concentraes de lipdeos, potenciais percussores de bicombustveis. Sendo assim, para esta espcie, estudou-se o efeito de dois fatores no processo fotossinttico: exposio a diferentes irradincias luminosas e densidades celulares das culturas com o propsito de conhecer parmetros relacionados com o crescimento fotoautotrfico tendo em vista o cultivo desta microalga em fotobiorreatores. Com este propsito, a microalga foi inicialmente aclimatada a irradincias compreendidas entre 50 e 300 mols de ftons/m2/s. De cada cultivo foram retiradas amostras crescidas por 4 ou 7 dias para obteno dos parmetros fotossintticos atravs da confeco de curvas rpidas de luz (RLC). Estas curvas foram estimadas a partir da fluorescncia de clorofila a e permitiram a avaliao de parmetros fotossintticos de grande relevncia: a eficincia fotossinttica (), a taxa fotossinttica mxima de transporte de eltrons (rETRmax) e o ndice de saturao por luz (Ik). A partir destas curvas de luz avaliou-se tambm a dissipao de energia tanto atravs da fotoqumica (qP) quanto por intermdio de mecanismos no fotoqumicos (qN e NPQ) que resultam na emisso e fluorescncia e de dissipao na forma de calor. Os resultados obtidos sero utilizados para o desenvolvimento futuro de modelos relacionados com o crescimento da microalga em fotobiorreatores.

Materiais e Mtodos: A microalga marinha Isochrysis galbana foi cultivada em gua do mar enriquecida com nutrientes em sala climatizada a 20C1 e fotoperodo de 12h:12h (claro/escuro), sob irradincia de 50, 150 ou 300E/m2/s estimada na superfcie externa dos frascos atravs de um integrador radiomtrico equipado com um sensor quntico. A penetrao de luz no centro das culturas foi estimada com um microsensor esfrico subaqutico. Amostras de 3,5 mL foram utilizadas para obteno das curvas rpidas de luz (RLC) com o auxlio de um fluormetro subaqutico de pulso e amplitude modulada (divingPAM). Alm das curvas rpidas de luz, o mesmo fluormetro foi utilizado para estimar o potencial fotoqumico mximo (Fv/Fm) da microalga cultivada nas diferentes condies. Para tal, as amostras foram previamente adaptadas ao escuro por 20 minutos para desativar qualquer mecanismo no-fotoqumico de dissipao de energia.

Resultados e discusso: A utilizao de um sensor quntico subaqutico permitiu que a penetrao de luz no centro dos cultivos fosse estimada em funo da irradincia de crescimento e da densidade celular. Desta forma, verificou-se que a penetrao de luz atravs da cultura no era influenciada pela irradincia do cultivo e que o efeito de sombreamento era decorrente apenas da densidade celular (resultados no mostrados). A Tabela 1apresenta os valores correspondentes ao potencial fotoqumico mximo (Fv/Fm) da I. galbana em diferentes fases de cada condio de crescimento. Este parmetro reflete a aclimatao da microalga s condies de crescimento e os valores sempre acima de 0,65 demonstram que os cultivos encontravam-se saudveis e no estressados em cada condio de crescimento. Em relao aos valores de Fv/Fm encontrados ao 4odia de cultivo, a diminuio deste parmetro nas culturas de 7 dias pode ser explicado pelo fato de neste caso os cultivos encontrarem-se em incio da fase estacionria, portanto, com o metabolismo fotossinttico desacelerado, enquanto no 4 dia os cultivos encontram-se em fase exponencial de crescimento, onde o metabolismo fotossinttico mximo. Aps evidenciar que a microalga encontrava-se aclimatada a cada condio de cultivo, foram ento analisadas as RLC. Os grficos 1(a) e 1 (b) mostram a taxa relativa de transporte fotossinttico de eltrons (rETR) das culturas crescidas por 4 e 7 dias, respectivamente, nas 3 diferentes irradincas em funo da exposio por 20 seg a valores crescentes de luz actnica. Independentemente de encontrar-se em fase estacionria ou exponencial, a microalga aclimatada a 300 E/m2/s apresentou eficincia fotossinttica () e a taxa mxima de transporte fotossinttico de eltrons (rETRmax) superiores s aclimatadas a irradincas menores. Este resultado mostra que a aclimatao a maiores irradincias luminosas implicou no s num metabolismo fotossinttico mais desenvolvido em altas irradincias actnicas

(rETRmax maior), como tambm captao e processamento de energia fotoqumica mais eficiente nos centros de reao fotossintticos ( maior). A tabela 2 sumariza os parmetros fotossintticos obtidos atravs das RLC das culturas crescidas nas 6 condies estudadas. Observa-se que as clulas de I. galbana em fase exponencial e aclimatadas a 300 E/m2/s apresentaram as melhores condies fotossintticas, visto que possuam maiores valores de , de rETRMax e de Ik. Os grficos 2(a), 2(b) e 2(c) mostram a fluorescncia estacionria (F), emitida pela microalga na presena de luz actnica, e a fluorescncia mxima nestas condies (Fm), emitida aps pulsos de luz saturante, em funo da irradincia actnica (PAR). As amostras aclimatadas a 50 ou 150 E/m2/s apresentaram um rpido aumento de F, at um valor praticamente constante. Este fato decorrente do fechamento dos centros de reao, que saturados pela quantidade excessiva de energia, acabam por emitir fluorescncia. Em clulas aclimatadas a 300 E/m2/s, F aumenta pouco e permanece praticamente constante, demonstrando maior capacidade de processamento da energia disponvel, ou seja, maior capacidade fotossinttica. O declnio de Fm observado nas clulas crescidas nas 3 irradincias , muito provavelmente, promovido pelo desenvolvimento de mecanismos de dissipao no-fotoqumica de energia. O menor valor inicial de Fm apresentado pela cultura aclimatada a 300E/m2/s deve ser resultante da maior capacidade de processamento de energia atravs da fotoqumica. Observou-se ainda (grficos 3 a), 3(b) e 3(c)) em todos os cultivos um aumento de NPQ e qN e um declnio de qP em funo do aumento da irradincia, demonstrando que a microalga dissipa energia na forma de calor para proteger seu aparato fotossinttico, resultando numa menor proporo de energia utilizada em fotossntese.

Tabela 1: potenciais fotoqumicos mximos (Fv/Fm)

Fv/Fm 4 dias 7 dias

50 microE 150 microE 300 microE 0,752 0,686 0,743 0,672 0,797 0,719

Tabela 2: parmetros fotossintticos de I. galbana

50 microE Alfa 4 dias ETRmax Ik Alfa 7 dias ETRmax Ik 0,2381 347,5 1459,5 0,2103 293,1 1393,7

150 microE 0,2341 482,1 2059,4 0,2305 465,9 2021,3

300 microE 0,3012 994,1 3300,5 0,2292 589,6 2572,4

Grficos 1: taxa relativa de transporte fotossinttico de eltrons (rETR)

1200 1(a) Dia 4 1000

800

rETR

600

400

200 50 microE 150 microE 300 microE

1000

2000

3000

4000

5000

PAR

700 1(b) Dia 7 600 500 400

rETR

300 200 100 0

50 microE 150 microE 300 microE

1000

2000

3000

4000

5000

PAR

Grficos 2: fluorescncia estacionria (F) e fluorescncia mxima (Fm)

2500

(d) 50 E; Crescimento de 4 dias

Rendimento de Fluorescncia

2000

F Fm

1500

1000

500

500

1000

1500

2000

2500

3000

PAR

2500

(e) 150 E; Crescimento de 4 dias

Rendimento de Fluorescncia

2000

F Fm

1500

1000

500

1000

2000

3000

4000

5000

PAR

2500

(f) 300 E; Crescimento de 4 dias

Rendimento de Fluorescncia

2000

F Fm

1500

1000

500

1000

2000

3000

4000

5000

PAR

Grficos 3: coeficientes de dissipao(qP, qN e NPQ)

1,0 (d) 50 E; Crescimento de 4 dias 2,5

Quenching coefficients (qP e qN)

qP 0,8 qN NPQ 2,0

0,6 1,0

0,4

0,5

0,0 0,2 0 500 1000 1500 2000 2500 3000

PAR

1,0 (f) 300 E; Crescimento de 4 dias 2,5

Quenching coefficients (qP e qN)

qP 0,8 qN NPQ 2,0

0,6 1,0

0,4

0,5

0,0 0,2 0 1000 2000 3000 4000 5000

PAR

1,0 (e) 150 E; Crescimento de 4 dias 2,5

Quenching coefficients (qP e qN)

qP 0,8 qN NPQ 2,0

0,6 1,0

0,4

0,5

0,0 0,2 0 1000 2000 3000 4000 5000

PAR

NPQ

1,5

NPQ

1,5

NPQ

1,5

Concluso: Os resultados demonstram que a microalga Isochrysis galbana capaz de se aclimatar a altas irradincias e apresentar respostas fotossintticas mais eficientes. A irradincia mnima de saturao luminosa chegou a 3.300 E/m2/s, valor muito superior ao mximo de irradiao solar ao meiodia. Desta forma, I. galbana parece indicada para aplicao em processos biotecnolgicos com variaes temporais de irradincia e grandes irradincias luminosas mximas, como em fotobiorreatores solares. Os resultados ainda incentivam a aclimatao a irradincias ainda maiores, havendo grandes possibilidades de obteno de maior eficincia fotossinttica, sugerindo que, neste aspecto, a microalga se coloca como boa candidata para ser utilizada em processos biotecnolgicos.