Funo protica

(ou nanobiotecnologia sem criador)

Prof. Dr. Francisco Prosdcimi

 Aula baseada no livro do Lehninger (Nelson e Cox) Captulo 5

The cell
Cap 11

Hormnios proticos
Hormnios que so protenas
Prolactina Hormnio de crescimento (GH, HGH) Hormnio adenocorticotrfico (ACTH) Vasopressina Oxitocina Insulina Somatostatina, etc.

Todos esses hormnios viajam no sangue e precisam ser reconhecidos e incorporados em clulas especficas que so identificadas e reconhecidas atravs de receptores proticos ligados s membranas celular

Cascatas de regulao
Protenas viajam no sangue at encontrar receptor de membrana Interaes protenaprotena e protena-ligante regulam o metabolismo celular Acionadas por protenas de membrana Reconhecem modificaes no meio externo e modificam o ambiente intracelular em resposta

A estrutura dinmica das protenas

Ligao reversvel a outras molculas: ligantes
Permite resposta rpida a modificaes ambientais e condies metablicas

Stio de ligao: interage com o ligante

Complementar em tamanho, forma, carga e afinidade gua

A estrutura definida da protena como uma foto, na realidade a protena opera de forma dinmica

O Ligante e o encaixe induzido

O stio de ligao discrimina entre diferentes molculas, ou seja, a interao especfica Uma protena pode ter stio de ligao para diversas molculas Protenas so flexveis, vibram, respiram Mudanas conformacionais (alostricas) so essenciais para a funo protica Encaixe induzido: adaptao estrutural da protena que se liga firmemente a ele

Teoria do caos e estrutura de protenas

Novas teorias dizem que o modelo chave-e-fechadura est refutado A protena fica em um estado de movimentao dinmica razoavelmente catico
o substrato induz a mudana conformacional na protena

Complementaridade interativa: como se a chave moldasse a fechadura ao encontrar com ela ou vice-versa

Modificaes conformacionais
Em uma protena contendo vrias subunidades, uma mudana conformacional em uma delas normalmente afeta a conformao das demais As ligaes com os ligantes podem ser reguladas por meio de interaes especficas (fosforilao, glicosilao, etc.) ou por ligao a outros ligantes Nas enzimas, os ligantes so chamados substratos e o stio de ligao chamado stio cataltico ou stio ativo Palavras-chave: ligao, especificidade e mudana conformacional

Protenas de ligao ao O2
A mioglobina e a hemoglobina so provavelmente as protenas mais estudadas do mundo
Primeiras a terem estrutura 3D conhecida Reao reversvel de ligao ao O2

Por que uma protena?

O2 pouco solvel em soluo aquosa (sangue)

Como ligar e transportar O2

O problema: nenhuma cadeia lateral de aminocido adaptada a ligar uma molcula de oxignio
Sabe-se que metais de transio (Ferro e cobre) ligam-se bem ao O2, mas... Ferro livre gera espcies reativas de oxignio

Grupo prosttico: composto associado permanentemente a uma protena e que contribui para sua funo O grupo heme: anel de protoporfirina, seis ligaes

A mioglobina
154 aa; 16700 Kda
Encontrada no tecido muscular de mamferos
Em focas e baleias guarda O2 para mergulhos longos

>gi|44955888|ref|NP_976312.1| myoglobin [Homo sapiens] MGLSDGEWQLVLNVWGKVEADIPGHGQEVLIR LFKGHPETLEKFDKFKHLKSEDEMKASEDLKK HGATVLTALGGILKKKGHHEAEIKPLAQSHAT KHKIPVKYLEFISECIIQVLQSKHPGDFGADA QGAMNKALELFR KDMASNYKELGFQG

Globina (prot. globular)

8 -hlices 78% dos resduos

Ligaes protena-ligantes so descritas por expresses de equilbrio

P+L PL

Hemoglobina
Protena tetramrica quase esfrica com 4 grupos heme
2 cadeias alfa 2 cadeias beta

<50% de similaridade na cadeia primria!!

Estrutura 3D muito similar

Eritrcitos
Eritrcitos so clulas altamente especializadas em transportar O2
Perderam ncleo, mito, retculo Vivem 120 dias 34% de seu peso total de hemoglobina

Hemoglobina est 96% saturada no sangue arterial e 64% no sangue venoso o CO tem mais afinidade hemoglobina do que o O2

Protenas alostricas
Hemoglobina possui 2 tipos de estados conformacionais: T(enso) e R(elaxado) A ligao do O2 subunidade da hmb no estado T desencadeia mudana para o estado R Em protenas alostricas, como a Hmb, a interao com um ligante altera as propriedades de ligao a outros stios da mesma protena

A hemoglobina tambm carrega o CO2

Liga CO2 de forma inversamente proporcional quando relacionado ligao com o oxignio CO2 liga-se como grupo carbamato ao grupo amino do aminocido que est no Nterminal Os carbamatos formam pontes salinas adicionais que auxiliam na estabilizao do estado T e provem liberao do O2

A ligao do O2 hmg regulada por BPG

2,3 bisfosfoglicerato Presente em alta concentrao nos eritrcitos Uma molcula ligada para cada hemoglobina estabiliza o estado T
Dificulta a ligao do O2 hmg

Quantidade de O2 liberada nos tecidos ~40% da quantidade mxima transportada no sangue regulado com altitude Excesso de BPG => hipoxia Funcionamento inadequado do pulmo Feto tem hemoblogina que mais afim de O2 do que a da me

Anemia falciforme
A mutao homozigota (aa) de um nico nucleotdeo que codifica para a cadeia B da hemoglobina faz com que a forma da hemcea seja modificada
No h cura, transporte ineficiente de O2

Por outro lado, o heterozigoto (Aa) possui maior resistncia malria j que o Plasmodium no consegue infectar to bem as hemceas falciformes
Qual o tipo de tratamento que se d doenas genticas?

Interaes proticas moduladas por energia qumica (ATP)

Prof. Dr. Francisco Prosdocimi

Citoesqueleto
Rede de filamentos proticos que se prolongam no citoplasma Rede estrutural da clula
Define formato e organizao geral do citoplasma

Responsvel pelos movimentos celulares

Transporte interno de organelas Transporte de cromossomos na mitose

Estrutura dinmica
Organizado e desorganizado (diviso celular)

Composio do citoesqueleto
Formados por trs tipos principais de filamentos arranjados em conjunto e associados a organelas e membrana por protenas acessrias
Filamentos de Actina Filamentos intermedirios Microtbulos

Funes
Motilidade celular, transporte de organelas, diviso celular e outros tipos de transporte celular
FA FI

MT

Filamentos do citoesqueleto
Cada tipo de filamento do citoesqueleto um polmero construdo a partir de subunidades menores (monmeros) Podem difundir-se rapidamente pelo citoplasma Protenas acessrias associam-se ao citoesqueleto

Os polmeros do citoesqueleto so mantidos por ligaes fracas (no covalentes)

Actina
Protena globular, principal protena do citoesqueleto
20% das protenas totais de uma clula Leveduras: um gene; Mamferos: 6 genes

Uma das protenas mais conservadas sendo 90% idntica desde os fungos at os mamferos
Usada frequentemente como controle negativo

Quando polimerizada forma filamentos do citoesqueleto Participa da contrao muscular, mobilidade celular, diviso celular, citocinese, movimentao de vesculas e organelas, sinalizao celular, estabilizao e manuteno das junes celulares, formato celular Interage com as membranas celulares

Filamentos de Actina
Microfilamentos formam feixes ou redes tridimensionais com propriedades de gis semi-slidos O arranjo e a organizao dos filamentos, as ligaes entre feixes e redes e estruturas celulares so regulados pela ligao com uma variedade de protenas de associao com a actina Os filamentos so particularmente abundantes junto membrana plasmtica
Suporte mecnico e forma celular Movimento da superfcie celular

Microfilamentos de actina
Cada monmero de actina faz uma rotao no filamento, que apresenta estrutura de hlice de dupla cadeia Possui uma polaridade que ser importante para a definio do movimento da miosina Polimeriza espontaneamente em condies fisiolgicas
Polimerizao reversvel (dinmica)

Extremidade positiva cresce de 5 a 10 vezes mais rpido do que a negativa

Organizao dos filamentos

Feixes de actina
Filamentos ligados em agrupamentos paralelos Protenas empacotadoras de actina

Redes de actina
Arranjo ortogonal

Feixes paralelos
Responsveis pelas microvilosidades das membranas

Redes de actina
Filamentos de actina ligados por protenas filaminas Ligaes ortogonais
Malha tridimensional frouxa

Sustentao da superfcie da clula

Adeso celular
Responsveis pelo contato com clulas adjacentes Fibras de estresse
Fibras de actina que promovem adeso celular

Fibras de alfa-actinina ligam cateninas e caderinas Contato clula-clula

Junes de adeso

Projees de membrana
Microvilosidades intestinais Estruturas de resposta a estmulo
Formadas por formao e retrao de feixes de actina

Pseudpodos Microespculas

Resumo: filamentos de actina

A: Microvilosidades B: feixes contrteis citoplasmticos C: Protruses em forma de lmina e em forma de dedo D: Anel contrtil durante a diviso celular

Actina, miosina e o movimento celular

Filamentos de actina esto associados a protenas miosinas, responsvel por movimentos celulares

A miosina motor molecular

Converte ATP em energia mecnica Gera fora e movimento

Responsvel pela contrao muscular, diviso celular, movimentaes celulares

Miosinas
Reconhecidas originalmente como ATPases presentes em msculos lisos e estriados Conservadas na cabea (liga actina e hidrolisa ATP), mas variveis na cauda (interao com molculas) Genoma humano possui aproximadamente 40 genes diferentes para miosinas

Forma define a velocidade com a qual se deslocam nos feixes de actina

Contrao muscular
Especializao das clulas musculares Msculo como modelo para o estudo do movimento em nvel celular e molecular Msculos
Estriado esqueltico: movimentos voluntrios Estriado cardaco: bombeia sangue do corao Liso: movimentos involuntrios do estmago, intestino, tero e vasos sanguneos

Msculo esqueltico
So feixes de fibras musculares Citoplasma composto de miofibrilas
Filamento espessos de miosina Filamentos finos de actina

Sarcmeros
Cadeia de unidades contrteis

Sarcmeros
Protenas titinas
Ligam miosina da linha M at o disco Z

Linha M

Modelo do filamento deslizante (1954)

Contrao do sarcmero Aproximao dos discos Z Banda A no sofre alterao Bandas I e H desaparecem Deslizamento dos filamentos de actina

O modelo do filamento deslizante

As cabeas globulares da miosina ligam-se actina
Ligao entre filamentos finos e espessos

A miosina movimenta seus domnios globulares sobre os filamentos de actina em direo ao terminal positivo

Modelo da ponte pnsil

Alm de ligar-se actina, as regies globulares da miosina ligam-se e hidrolisam o ATP, que fornece a energia para a realizao do deslizamento Deslizamento dos feixes de miosina sob os feixes de actina

Miosinas no-convencionais
No formam filamentos Envolvidas em outros tipos de movimentos celulares
Transporte de vesculas e organelas Fagocitose, emisso de pseudpodos

Caudas se ligam a organelas Movimentao sob o esqueleto de actina

Microtbulos
Cilindros ocos de 25nm de dimetro Estruturas dinmicas em constante processo de organizao e desorganizao Definem a forma da clula Promovem locomoo, transporte intracelular de organelas e separao dos cromossomos durante a mitose

Tubulina
Protena globular Arranjos das formas alfa e beta formam os microtbulos

Estrutura dos microtbulos

Formado por dmeros de tubulinas alfa e beta Formados por 13 filamentos lineares organizados em volta do centro do tbulo Assim como os filamentos de actina so estruturas polares
Extremidade positiva: crescimento rpido Extremidade negativa: crescimento lento

A polaridade interfere na direo do movimento ao longo do microtbulo

Instabilidade dinmica
Tubulina ligada a GTP incorporada ao microtbulo A adio de tubulina-GTP ocorre mais rpido do que a hidrlise do GTP -> formao de cap GTP Na falta de molculas de GTP ligadas a tubulina, a hidrlise ocorre de forma mais rpida e o complexo despolimerizado Remodelamento dos microtbulos importante na mitose

Microtbulos, drogas e cncer

Drogas que se ligam tubulina, como a colchicina e a colcemida inibem a polimerizao de microtbulos

Inibem assim a diviso celular (mitose)

Outras drogas que se ligam aos microtbulos so tambm utilizadas no tratamento de cncer, como vincristina e vimblastina

Centrolo, centrossomo e organizao dos microtbulos

Microtbulos se estendem a partir de um centro organizador de microtbulos
O centrossomo se localiza junto ao ncleo

Durante a mitose os centrossomos formam os fusos mitticos, responsveis pela separao dos cromossomos nas clulas filhas

Centrossomos
Formados por um par de centrolos organizados perpendicularmente, circundados pelo material pericentriolar Centrolo: estrutura cilndrica formada por 9 tripletes de microtbulos Funes de organizao dos microtbulos pelo centrossomo

Organizao dos microtbulos na mitose

Organizao do fuso mittico: responsvel pela separao dos cromossomos homlogos
Centrolo e componentes do centrossomo so inicialmente duplicados Os dois centrossomos so ento localizados em cada um dos lados do ncleo

Na mitose ocorre despolimerizao e retrao geral dos microtbulos

Microtbulos motores e movimentos

Responsveis por movimentos celulares, transporte intracelular, posicionamento de vesculas e organelas, separao dos cromossomos, batimento de clios e flagelos Assim como no caso da actina a movimentao realizada por protenas motoras que usam a energia do ATP Cinesinas e dinenas fazem aqui o papel da miosina

Cinesinas e dinenas
Movem-se em direes opostas ao longo dos microtbulos
Cinesina: move-se para a extremidade positiva Dinena: extremidade negativa

Cerca de 100 diferentes cinesinas em humanos

Transporte de organelas
Neurnios com metros de comprimento precisam ter molculas transportadas para o axnio Vesculas secretoras vindas do Golgi so transportadas ao longo dos microtbulos aos axnios

Separao dos cromossomos mitticos

Ocorre durante a anfase Anfase A
Movimento dos cromossomos em direo ao polo do fuso Anfase B Separao dos polos do fuso

Clios e Flagelos
Projees de membrana formadas por microtbulos e responsveis pelo movimento de clulas eucariticas Flagelos de bactrias so proticos (no tubulina) Estrutura em axonema (9+2)

Sistema imunolgico
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi

Protenas e imunologia
A maioria das interaes protena-ligante no envolve grupo prosttico
Discriminao efetiva do ligante na forma de stio de ligao protena-protena

Resposta imunolgica
A distino molecular entre prprio e no-prprio Teoria de rede O sistema homeosttico bioqumica altamente sensvel e desenvolvido atravs das reaes entre ligantes e protenas

Sistemas imunolgicos
Imunidade celular
Clulas hospedeiras infectadas por vrus, parasitas e tecidos estranhos Linfcitos T
Parasitas possuem receptores de clulas Tc Clulas T auxiliares produzem protenas sinalizadoras (citocinas)

Imunidade humoral
Infeces bacterianas e virais, protenas estranhas Anticorpos ou imunoglobulinas (Ig) 20% das protenas do sangue so Igs produzidas pelos linfcitos B

Protenas imunolgicas
Protenas de reconhecimento altamente especficas (humanos teem 108 anticorpos com especificidades diferentes)
Receptor de clula T Anticorpo produzido por clula B

Antgeno: molcula que induz resposta imunolgica

Epitopo: determinante antignico, regio da molcula reconhecida

Imunoglobulinas (igs): formadas por 4 cadeias polipeptdicas, sendo 2 pesadas e 2 leves

Imunoglobulinas
Ligao especfica entre antgeno e anticorpo Imunoglobulinas podem ser encontradas em monmeros, dmeros, trmeros, multmeros Marcao do patgeno para engolfamento por macrfagos

Ligao antgeno-anticorpo
Firme e especfica a base para procedimen-tos analticos importantes Anticorpo
policlonal: reconhecido por vrias clulas B diferentes Monoclonal: reconhecidos pela mesma populao de clulas B

Anticorpo pode ser ligado a uma resina cromatogrfica para separao de uma protena especfica Exames sorolgicos: detecta presena e quantidade do antgeno Immunoblot

Concluses
As protenas teem inmeras funes celulares A estrutura da protena altamente relevante para que ela tenha uma funo celular O contato protena-protena regula muitas funes intra e intercelulares (receptores de membrana) As protenas mudam de conformao quando encaixadas a um ligante
A ligao reversvel da protena ao ligante importante na regulao do metabolismo Stios de ligao podem ligar diferentes molculas, algumas com mais afinidade do que o ligante desejado

Protenas interagem para a formao do citoesqueleto e contrao muscular, gastando energia qumica Polimerao e despolimerizao de complexos polimricos acontecem em todo o instante nas clulas Protenas podem ligar molculas indiretamente -- atravs de grupos prostticos H um controle dos ligantes mais comuns dentro de um organismo e a presena de novas molculas desconhecidas aciona o sistema imune

 Aula baseada no livro do Lehninger (Nelson e Cox) Captulo 5

The cell
Cap 11