Objetivo:

Identificar os solutos transportados e os tipos de

transporte envolvidos em uma membrana
desconhecida
Membrana desconhecida: pele de rã
Parâmetros:
• Diferença de potencial elétrico através da
membrana (ddp) e
• Corrente de curto-circuito (Icc)

Tipos de transporte
Metodologia da “caixa preta”
Corrente de curto-circuito
 Potencial de difusão (passivo)

Estável Transitório
Vários íons permeantes
Situação final é o equilíbrio

Condição de equilíbrio Condição estacionária

(Nernst) (GHK)
 Difusão de um íon
dµ~
J = −mc = mcf
dx
J: fluxo, m: mobilidade, c: concentração, f: força
Forças envolvidas: gradiente de concentração
e/ou gradiente elétrico
Existindo força resultante ⇒ deve existir fluxo do íon (J)
Como medir?
Fluxo de cargas = corrente elétrica
I = zFJ
Membrana permeável a um só íon
1 2

Na
- ++
Na+

Cl- Cl-

∆ Ψ m = ∆ Ψ eq

Im = 0
 Membrana
1 2 permeável a

Na
-
+
+ e -
Na +
um só íon

Cl- Cl-
 = =
e-

1 2

Na
- ++
Na+

Cl- Cl-
Membrana permeável a um só íon

A B
VA – VB = E - RI

1 2 0 = E - RIcc

-+ + I CC =
E
Na Na+ R

Cl- Cl-

Icc = INa
Membrana permeável a vários íons (Cond. Estacionária)
PNa >PCl
1 2

Na
- ++
Na+

Im = 0
Cl- Cl-
Membrana permeável a vários íons (Cond. Estacionária)

1 2

Na
- +
+
Na+

Cl- Cl-

Icc = INa – ICl

Princípio da técnica: injetar
uma corrente de modo a
cancelar a ddp
Icc representa o fluxo de íons
quando submetidos a apenas
uma força, a força química
Identificar os íons
Tipos de Transporte
 Tipos de Transporte
Transporte Passivo Simples: TPS
Transporte Passivo Mediado: TPM
Transporte Ativo: TA
Metodologia da “caixa preta”
 Técnicas de aprendizado

Causa 1 Efeito
Acadêmica
Causa 2

?
Profissional Causa Efeito

Causa 1 Causa 2 .... Causa n

 1. Conhecimento teórico
2. Organização e método
3. Elaboração de um modelo

Conduta:
a) Formulação de uma hipótese de trabalho (H)
b) Elaboração de uma experiência a ser feita
c) Formulação de um resultado esperado ⇒ Resp
d) Realização da experiência ⇒ Robs
e) Conclusão
Se Robs = Resp ⇒ H pode estar correta ⇒ contra-prova
Se Robs ≠ Resp ⇒ Excluir H ⇒ Formulação de uma nova H
 Como manipular os dados?

Exemplo 1:

Avaliar as características de uma membrana desconhecida em relação à

sua permeabilidade ao Na+ e ao Cl-

H: Mb igualmente permeável aos dois íons

H: Mb impermeável aos dois íons

H: Mb mais permeável ao Na+ do que ao Cl- (PNa>PCl)

H: Mb só permeável ao Na+

H: Mb mais permeável ao Cl- do que ao Na+ (PCl>PNa)

H: Mb só permeável ao Cl-
 Ψ2 - Ψ1 > 0

P+ ≠ P-

P+ ≠ 0
P+> P-
P- = 0

Nernst Goldman
RT [ Na ]2 RT PNa [ Na ]1 + PCl [Cl ]2
Ψ2 − Ψ1 = − ln Ψ2 − Ψ1 = ln
zF [ Na ]1 F PNa [ Na ]2 + PCl [Cl ]1
Como verificar se o potencial de RT [ Na]2
membrana obedece a equação de Ψ2 − Ψ1 = − ln
Nernst? zF [ Na]1

RT RT
Ψ2 − Ψ1 = − ln[ Na ]2 − (− ln[ Na ]1 )
zF zF
RT RT
Ψ2 − Ψ1 = ln[ Na ]1 − ln[ Na ]2
zF zF
RT RT
Ψ2 − Ψ1 = x 2,3 log[ Na ]1 − x 2,3 log[ Na ]2
zF zF

Manter constante a concentração de um dos compartimentos

e variar a concentração do outro.
Ψ2 − Ψ1 = a log[ Na ]1 + b
y = ax + b
 Ψ2 − Ψ1 = a log[ Na ]1 + b
y = ax + b

ψ 2- n
ψ(mV)
1 tgα = a
RT
a= 2,3 = 58 mV / unidade log
α F

log[Na]1
 Ψ2 - Ψ1 > 0

P+ ≠ P-

P+ ≠ 0
P + > P-
P- = 0

Nernst Goldman
RT [ Na ]2 RT PNa [ Na ]1 + PCl [Cl ]2
Ψ2 − Ψ1 = − ln Ψ2 − Ψ1 = ln
zF [ Na ]1 F PNa [ Na ]2 + PCl [Cl ]1

ψ 2- ψ 1

(mV)

log[Na]1

Coeficiente angular = 58 mV/unidade log Nernst

Coeficiente angular ≠ 58 mV/unidade log Goldman
 H: Mb só permeável ao Na+

Exp: Variar a concentração de NaCl em um dos compartimentos

e medir a ddp e a Icc

Resp: Obedecer Nernst

Coeficiente angular = 58 mV/unidade log

Robs: ddp = 0 e Icc = 0

Conclusão: Resp ≠ Robs ⇒ Excluir H ⇒ Formulação de uma nova H

H: Mb igualmente permeável aos dois íons

ddp = 0
H: Mb impermeável aos dois íons
 Pele de rã

Objetivo: identificar os solutos transportados e os

tipos de transporte envolvidos

Parâmetros: ddp e Icc

Montagem:
 Montagem experimental

Icc Voltímetro

E I

Solução Solução
fisiológica de fisiológica de
ΨI - ΨE composição
conhecida
composição
conhecida
Membrana
Externo (E) Interno (I)

Solução fisiológica de
composição conhecida = Solução de Ringer
Soluções:

Ringer Na2SO4: Na2SO4 57,5 mM

KHCO3 2,5 mM
CaSO4 1,0 mM

Ringer NaCl: NaCl 115 mM

KHCO3 2,5 mM
CaCl2 1,0 mM

Ringer K2SO4: K2SO4 57,5 mM

KHCO3 2,5 mM
CaSO4 1,0 mM

Ringer com diferentes concentrações de Na+ ou de K+

Externo (E) Interno (I) ΨI - ΨE (mV) Icc (mA)

Estudo de ânions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115)
RNaCl (115) RNaCl (115)
RNa2SO4 (115) RNaCl (115)
RNaCl (115) RNa2SO4 (115)

Estudo de cátions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115)
RK2SO4 (115) RNa2SO4 (115)
RNa2SO4 (6) RNa2SO4 (115)
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (6)
RK2SO4 (6) RNa2SO4 (115)
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (6)
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (115)

Estudo de drogas
RNa2SO4 (115) + A RNa2SO4 (115)
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) + D

A = amiloride (10-4 M) D = dinitrofenol (0,1%)

Experimento I

H: Todos
Existeos
TAsolutos TP

- + Exp: Mesma concentração nos dois

compartimentos. Ausência de gradiente
RNa2SO4 RNa2SO4 eletroquímico
115 mM 115 mM
Resp: Ψ ΨI––ΨΨE=≠00mV
mV
I E
Icc=≠00mA
Icc mA

Externo (E) Interno (I) ΨI – ΨE = 159 mV

Robs:
Icc = 0,49 mA

Conclusão: Robs = Resp ⇒ H pode estar correta ⇒ contra-prova

Contra-prova?

Identificação do(s) íon(s) transportado(s) ativamente

 Cátion E→ I
ΨI – ΨE > 0
E← I Ânion

Listagem dos candidatos

Cátions ?

Ânions ?
Externo (E) Interno (I) ΨI - ΨE (mV) Icc (mA)

Estudo de ânions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 159 0,49
RNaCl (115) RNaCl (115) 90 0.46
RNa2SO4 (115) RNaCl (115) 172 0.62
RNaCl (115) RNa2SO4 (115) 65 0,36

Estudo de cátions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 159 0,49
RK2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 85 0,01
RNa2SO4 (6) RNa2SO4 (115) 110 0,15
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (6) 159 0,49
RK2SO4 (6) RNa2SO4 (115) 85 0,01
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (6) 110 0,30
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (115) 70 0,30

Estudo de drogas
RNa2SO4 (115) + A RNa2SO4 (115) 0 0
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) + D 0 0

A = amiloride (10-4 M) D = dinitrofenol (0,1%)

 Externo Interno ∆ Ψ i-e (mV) Icc (mA)

Estudo de ânions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 159 0.49
RNaCl (115) RNaCl (115) 90 0.46
RNa2SO4 (115) RNaCl (115) 172 0.62
RNaCl (115) RNa2SO4 (115) 65 0.36

Estudo de cátions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 159 0.49
RNa2SO4 (6) RNa2SO4 (115) 85 0.35
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (6) 159 0.49
RK2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 47 0.01
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (115) 39 0.10
RK2SO4 (6) RNa2SO4 (115) 47 0.01
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (6) 113 0.24

Estudo de drogas
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 159 0.49
RNa2SO4 (115) + A RNa2SO4 (115) 47 0.01
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) + A 159 0.49
RNa2SO4 (115) + D RNa2SO4 (115) 159 0.49
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) + D 0 0

A= 0,5 ml de amiloride (10 -4M) D=0,5 ml de dinitrofenol (0,1%)

Externo (E) Interno (I) ΨI - ΨE (mV) Icc (mA)

Estudo de ânions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 159 0,49
RNaCl (115) RNaCl (115) 90 0.46
RNa2SO4 (115) RNaCl (115) 172 0.62
RNaCl (115) RNa2SO4 (115) 65 0,36

Estudo de cátions
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 159 0,49
RK2SO4 (115) RNa2SO4 (115) 85 0,01
RNa2SO4 (6) RNa2SO4 (115) 110 0,15
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (6) 159 0,49
RK2SO4 (6) RNa2SO4 (115) 85 0,01
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (6) 110 0,30
RNa2SO4 (115) RK2SO4 (115) 70 0,30

Estudo de drogas
RNa2SO4 (115) + A RNa2SO4 (115) 0 0
RNa2SO4 (115) RNa2SO4 (115) + D 0 0

A = amiloride (10-4 M) D = dinitrofenol (0,1%)

 Cronograma das atividades
25/05 10:00-12:00 hs Metodologia caixa preta para os ânions
Turma Q1 : A
Turma Q2 : AGF
Turma Q3 : JMR

26/05 14:00-16:00 hs Discussão resultados ânions

Turma Q1 : A
Turma Q2 : AGF
Turma Q3 : JMR

26/05 16:00-18:00 hs Análise das permeabilidades relativas

das barreiras externa e interna ao Na+
Turma Q1 : A e ao K+
Turma Q2 : AGF
Turma Q3 : JMR
 RELATÓRIO
Pode ser feito em duplas

Deve constar:
• Título
• Objetivo
• Metodologia da “caixa preta” (formulação da hipótese,
racional para o experimento proposto, conclusão, etc.)
• Elaboração de 4 gráficos:
•(ΨI– ΨE) x log[Na]E;
•(ΨI– ΨE) x log[K]I;
•JNa x [Na]E;
•1/JNa x 1/[Na]E
• Expressão da ΨI– ΨE

Entrega 2ª feira 31/05/2010 (secretária 7ª andar)

[Na+]e +
log [Na ]e 1/[Na+]e Icc (mA) ∆Ψi-e J (mmol/cm2.s) 1/J (cm2.s/mmol)
(mM) (mV)

3 0.27 68

6 0.35 85

18 0.43 113

30 0.47 126

60 0.48 143

115 0.49 159

[K+]i (mM) log [K+]I ∆Ψi-e (mV)

3 130

6 113

18 85

30 72

60 55

115 39