Curso: Capacitao na Aplicao e Biossegurana Ambiental de Plantas Geneticamente Modificadas

26 a 30 de novembro de 2012 Embrapa Milho e Sorgo

Anlise de Risco de Plantas GM sobre Organismos no-alvo

Carmen Pires*
*carmen.pires@embrapa.br

Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

CTNBio, Resoluo Normativa n 5, de 12 de maro de 2008: Dispe sobre normas para liberao comercial de Organismos Geneticamente Modificados e seus derivados. Art. 6. Para efeitos desta Resoluo Normativa considera-se: I avaliao de risco: combinao de procedimentos ou mtodos, por meio dos quais se avaliam, caso a caso, os potenciais efeitos da liberao comercial do OGM e seus derivados sobre o ambiente e a sade humana e animal.

II organismo: toda entidade biolgica capaz de reproduzir ou transferir material gentico, inclusive vrus e outras classes que venham a ser conhecidas;

CTNBio, Resoluo Normativa n 5, de 12 de maro de 2008: Dispe sobre normas para liberao comercial de Organismos Geneticamente Modificados e seus derivados. Art. 6. Para efeitos desta Resoluo Normativa considera-se: I avaliao de risco: combinao de procedimentos ou mtodos, por meio dos quais se avaliam, caso a caso, os potenciais efeitos da liberao comercial do OGM e seus derivados sobre o ambiente e a sade humana e animal.

II organismo: toda entidade biolgica capaz de reproduzir ou transferir material gentico, inclusive vrus e outras classes que venham a ser conhecidas;

CTNBio, Resoluo Normativa n 5, de 12 de maro de 2008: Dispe sobre normas para liberao comercial de Organismos Geneticamente Modificados e seus derivados.
ANEXO IV AVALIAO DE RISCO AO MEIO AMBIENTE (A)PLANTAS

CTNBio, Resoluo Normativa n 5, de 12 de maro de 2008: Dispe sobre normas para liberao comercial de Organismos Geneticamente Modificados e seus derivados.
ANEXO IV AVALIAO DE RISCO AO MEIO AMBIENTE (A)PLANTAS

3. os possveis efeitos em organismos indicadores relevantes (simbiontes, predadores, polinizadores, parasitas ou competidores do OGM) nos ecossistemas onde se pretende efetuar o seu cultivo, em comparao com o organismo parental do OGM em um sistema de produo convencional;

CTNBio, Resoluo Normativa n 5, de 12 de maro de 2008: Dispe sobre normas para liberao comercial de Organismos Geneticamente Modificados e seus derivados.
ANEXO IV AVALIAO DE RISCO AO MEIO AMBIENTE (A)PLANTAS

3. os possveis efeitos em organismos indicadores relevantes (simbiontes, predadores, polinizadores, parasitas ou competidores do OGM) nos ecossistemas onde se pretende efetuar o seu cultivo, em comparao com o organismo parental do OGM em um sistema de produo convencional;

Quais organismos indicadores?

CTNBio, Resoluo Normativa n 5, de 12 de maro de 2008: Dispe sobre normas para liberao comercial de Organismos Geneticamente Modificados e seus derivados.
ANEXO IV AVALIAO DE RISCO AO MEIO AMBIENTE (A)PLANTAS

3. os possveis efeitos em organismos indicadores relevantes (simbiontes, predadores, polinizadores, parasitas ou competidores do OGM) nos ecossistemas onde se pretende efetuar o seu cultivo, em comparao com o organismo parental do OGM em um sistema de produo convencional;

Quais organismos indicadores? Como selecionar esses organismos?

Caso (caracterstica, cultura, ambiente receptor) Identificao dos possveis efeitos adversos sobre os servios ambientais no ambiente receptor Priorizar Grupos Funcionais Associao com a cultura Significncia funcional no sistema de cultivo

Definio do Caso (levantamentos de informao) Modelo conceitual Formulao do Problema Etapa (Tier) 1

Priorizar Espcies ou grupos Identificao Rotas de Exposio Identificao Rotas Efeitos Adversos

Etapa (Tier) 2

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Construo Hipteses de Risco Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos Selecionar e conduzir Experimentos Deciso baseada em Dados

Fase de anlise Tier 4...n Caracterizao da Exposio Caracterizao do Efeito Adverso Caracterizao do Risco

Hiptese pode ser descartada

Hiptese confirmada

Algodoeiro Bt no Brasil: Grupos funcionais selecionados

Produo Sade Solo Non-crop econ. Valor cultural Valor Conserv. Qualidade ambiente

Doenas humanas

Efeitos Adversos

Grupos Funcionais
Herbvoros - praga Predadores/ Parasitides

X X X X

Polinizadores de culturas
Decompositores de solo

X X

X X X

Espcies ameaadas de Extino

Doenas de plantas

Caso (caracterstica, cultura, ambiente receptor) Identificao dos possveis efeitos adversos sobre os servios ambientais no ambiente receptor Priorizar Grupos Funcionais Associao com a cultura Significncia funcional no sistema de cultivo

Definio do Caso (levantamentos de informao) Modelo conceitual Formulao do Problema Etapa (Tier) 1

Priorizar Espcies ou grupos Identificao Rotas de Exposio Identificao Rotas Efeitos Adversos

Etapa (Tier) 2

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Construo Hipteses de Risco Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos Selecionar e conduzir Experimentos Deciso baseada em Dados

Fase de anlise Tier 4...n Caracterizao da Exposio Caracterizao do Efeito Adverso Caracterizao do Risco

Hiptese pode ser descartada

Hiptese confirmada

O que abordaremos:
- Processo de seleo de organismos no-alvo para as ARA (espcies dentro de grupos funcionais) - Rotas de Exposio

- Efeitos Adversos
- Hipteses de Risco

Caso (caracterstica, cultura, ambiente receptor) Identificao dos possveis efeitos adversos sobre os servios ambientais no ambiente receptor Priorizar Grupos Funcionais Associao com a cultura Significncia funcional no sistema de cultivo

Definio do Caso (levantamentos de informao) Modelo conceitual Formulao do Problema Etapa (Tier) 1

Priorizar Espcies ou grupos Identificao Rotas de Exposio Identificao Rotas Efeitos Adversos

Etapa (Tier) 2

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Construo Hipteses de Risco Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos Selecionar e conduzir Experimentos Deciso baseada em Dados

Fase de anlise Tier 4...n Caracterizao da Exposio Caracterizao do Efeito Adverso Caracterizao do Risco

Hiptese pode ser descartada

Hiptese confirmada

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Etapa (Tier) 1 Associao com a Cultura Significncia Funcional no Sistema de Cultivo

Seleo de espcies: Matriz 1

Priorizar espcies ou grupos de espcies

Critrios para classificar dentro dos grupos funcionais: 1. Associao com a cultura

Distribuio Geogrfica Especializao de Habitat Prevalncia Abundncia Fenologia

da cultura ciclo de vida da espcie ou taxon na cultura

Obs.: critrios especficos para certos grupos funcionais !!

Critrios para classificar dentro dos grupos funcionais: 2. Significncia Funcional

Qual a significncia funcional da espcie ou taxon?

GMO ERA Project

Biodiversidade funcional nos agroecossistemas

Vegetao natural prxima

Na cultura-alvo

Em outras culturas
GMO ERA Project

Significncia Funcional para cada Espcie ou Grupo de Espcies

Grupos Funcionais: Pragas

Herbvoros praga Patgenos praga Ervas daninhas

Polinizadores Agentes de Controle Biolgico

Predadores Parasitas, patgenos e parasitides

GMO ERA Project

Significncia Funcional: critrios de seleo

Potencial na cultura-alvo

Potencial em outras culturas

Potencial em reas naturais Outros papeis ecolgicos

GMO ERA Project

Matriz de Seleo 1
Grupo Funcional: Predadores
Associao com a Cultura
DG Vespa Polistes spp. 3 EH 1 P 3 A 2 Fe 1 C 1

Significncia Funcional
OC 1 VN 2 OF ? Classificao 14

Percevejo Podisus nigrispinus

Joaninha Cycloneda sanguinea Tesourinha Doru luteipes Crisopdeos Chysoperla externa Aranhas Thomisidae

3
3 3 3 3

1
1 1 1 1

2
3 3 2 3

2
3 3 2 3

1
2 1 2 1

2
3 2 3 ?

2
3 3 1 2

2
2 ? 2 2

?
? ? ? ?

15
20 16 16 15

Matriz de Seleo 1
Grupo Funcional: Predadores
Associao com a Cultura
GD Vespa Polistes spp. 3 HS 1 P 3 A 2 TL 1 C 1

Significncia Funcional
OC 1 NA 2 OF ? Classificao 14

Percevejo Podisus nigrispinus

Joaninha Cycloneda sanguinea Tesourinha Doru luteipes Crisopdeos Chysoperla externa Aranhas Thomisidae

3
3 3 3 3

1
1 1 1 1

2
3 3 2 3

2
3 3 2 3

1
2 1 2 1

2
3 2 3 ?

2
3 3 1 2

2
2 ? 2 2

?
? ? ? ?

15
20 16 16 15

Caso (caracterstica, cultura, ambiente receptor) Identificao dos possveis efeitos adversos sobre os servios ambientais no ambiente receptor Priorizar Grupos Funcionais Associao com a cultura Significncia funcional no sistema de cultivo

Definio do Caso (levantamentos de informao) Modelo conceitual Formulao do Problema Etapa (Tier) 1

Priorizar Espcies ou grupos Identificao Rotas de Exposio Identificao Rotas Efeitos Adversos

Etapa (Tier) 2

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Construo Hipteses de Risco Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos Selecionar e conduzir Experimentos Deciso baseada em Dados

Fase de anlise Tier 4...n Caracterizao da Exposio Caracterizao do Efeito Adverso Caracterizao do Risco

Hiptese pode ser descartada

Hiptese confirmada

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Etapa (Tier) 2

Identificao Rotas de Exposio

Identificao Rotas Efeitos Adversos

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso

Construo Hipteses de Risco

Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos

Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Etapa (Tier) 2

Identificao Rotas de Exposio

Identificao Rotas Efeitos Adversos

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso

Construo Hipteses de Risco

Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos

Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Exposio e Efeitos adversos

Essa etapa realizada somente com as espcies que

receberam as prioridades mais altas na Etapa 1.

Essa etapa requer informao sobre o nvel de

expresso do transgene especfico.

GMO ERA Project

Examplo: Algodoeiro Bt no sul dos EUA (Akin et al 2002)

Table 1. Cry1Ac levels (ppm) among plant parts for three locations 2000 and 2001. Plant part Terminal leaf Lower canopy leaf Young square White flower petal White stamen Pink petals Pink stamen Young boll 10-14 d-old boll wall 10-14 d-old boll . internal contents Concentration [ppm] 2.4 + 0.15 cd 3.6 + 0.35 a 1.8 + 0.15 ef 3.1 + 0.23 b 2.7 + 0.13 bc 2.4 + 0.11 cd 2.2 + 0.13 de 2.1 + 0.15 de 2.9 + 0.21 b 1.5 + 0.08 f

Numbers not followed by a common letter are significantly different (p<0.05, Proc GLM; SAS Institute 1998). GMO ERA Project

Examplo: Algodoeiro Bt no sul dos EUA (Akin et al 2002)

Table 2. Cry2Ab levels (ppm) among plant parts for three locations separated by year.

Concentration [ppm]
Plant part Terminal leaf Lower canopy leaf Young square White flower petal White stamen Pink petals Pink stamen Young boll 10-14 d-old boll wall 10-14 d-old boll.internal contents 2000 13.5 + 2.07 f 21.0 + 1.72 bc 15.5 + 1.52 ef 20.1 + 2.77 bcd 26.2 + 0.69 a 17.5 + 0.24 de 18.8 + 2.17 cde 22.9 + 1.43 ab 10.0 + 2.27 g 22.0 + 0.85 bc 2001 5.5 + 0.80 ef 14.4 + 0.34 a 11.2 + 1.52 b 8.4 + 0.60 cd 8.8 + 0.70 bcd 5.4 + 0.48 f 5.6 + 0.46 ef 8.0 + 1.76 cde 9.0 + 0.99 bc 6.4 + 0.32 def

Numbers not followed by a common letter are significantly different (p<0.05, Proc GLM; SAS Institute 1998). GMO ERA Project

Expresso da Toxina
Planta GM Folha Flor Estame Plen Fruto Xilema Floema Raiz Exudados da raiz Autores

Algodoeiro Bt (Cry1Ac)

+++

+++

++

++

Akinet al (2002)
Greenplate et al. (1998) Akin et al (2002)

+
Algodoeiro Bt (Cry 2Ab)

++

++

+++

++ ++

Milho Bt (Cryi AB)

Nguyen (2004)

+++

++

Saxena & Stotzky (2000)

GMO ERA Project

O nvel de expresso do transgene depende:

Variedade da espcie na qual o transgene foi inserido, Tecido da planta, Condies ambientais.

GMO ERA Project

Exposio e efeitos adversos como uma cadeia causal hipottica

O que vocs entendem por Exposio?

GMO ERA Project

Exposio e efeitos adversos como uma cadeia causal hipottica

O que vocs entendem por Exposio?

Exposio = condio de estar sendo submetido a uma ao ou uma influncia (ou: o contato ou a co-ocorrncia de um estressor com um receptor. EPA; USEPA 1998).
Estressor = qualquer entidade fsica, qumica ou biolgica que possa induzir uma resposta adversa. Resposta Adversa ou Efeitos Adversos = trocas que so consideradas indesejveis porque elas alteram o valor estrutural ou caractersticas funcionais dos ecossistemas ou de seus componentes.
GMO ERA Project

Exposio e efeitos adversos como uma cadeia causal hipottica

Anlise de exposio:
a) produtos dos transgene, b) metablitos do transgene, ou c) trocas mediadas pelo transgene na planta GM.

GMO ERA Project

Exemplo: Teia trfica no algodo

Cultura

Cultura + herbvoros
(incluindo polinizadores, microrganismos pragas, biota de solo e vetores)

Cultura + herbvoros + parasitides/parasitas/predadores

(insetos, fungos, bactrias, caros, outros)

Cultura + herbvoros + parasitides/parasitas/predadores + hiperparasitides/predadores

Teias Trficas: Interaes bitrficas e tritrficas

Exemplos: parasitide/ planta polinizador/ planta

predador/ planta
Nctar, plen
polinizador parasitide de larva larva herbvoro

exudados da planta

larva predador

Tecidos das folhas g/g Sabugo e palha g/g Acima do Solo Abaixo no Solo Estames g/g

Plen g/g Floema g/g

Xilema g/g
Razes g/g Exudados das raizes g/g

Exposio e efeitos adversos como uma cadeia causal hipottica

Consumidores em nveis bitrficos

Tecidos das folhas g/g Sabugo e palha g/g Acima do Solo Abaixo no Solo Estames g/g

Plen g/g Floema g/g

Xilema g/g
Razes g/g Exudados das raizes g/g

Consumidores em nveis bitrficos

Exposio e efeitos adversos como uma cadeia causal hipottica

Consumidores em nveis trficos mais elevados Consumidores em nveis bitrficos

Tecidos das folhas g/g Sabugo e palha g/g Acima do Solo Abaixo no Solo Estames g/g

Plen g/g Floema g/g

Xilema g/g
Razes g/g Exudados das raizes g/g

Consumidores em nveis trficos mais elevados

Consumidores em nveis bitrficos

A exposio pode ocorrer:

folhas, caules, brotaes razes, bulbos, rizomas frutos, sementes floema nectrios florais e extra-florais exudados, xilema resduos da planta, folhas senescentes e razes exudados das razes espcies herbvoras que se alimentaram na planta honeydew produzidos pelos hompteras outras excrees dos herbvoros (fezes) consumidores secundrios (predadores, parasitides
e parasitas)
GMO ERA Project

Matriz 1

Matriz 1: Priorizao de organismos no-alvo baseado em princpios ecolgicos. Ponto final: Lista de espcies/organismos classificados de acordo com os riscos potenciais de exposio cultura.

Seleo de espcies ranqueadas com valores mais alto

Matriz 2

Matriz 2: Avaliao do potencial de exposio direta e indireta ao transgene e/ou aos seus metablitos. Ponto final: Lista de espcies classificadas de acordo com o risco de exposio ao trasngene.

Matriz de Seleo 1
Grupo Funcional: Predadores
GD Vespa Polistes spp. 3

Potencial de Exposio
HS 1 P 3 A 2 TL 1 C 1

Significncia Funcional
OC 1 NA 2 OF ? Classificao 14

Percevejo Podisus nigrispinus

Joaninha Cycloneda sanguinea Tesourinha Doru luteipes Crisopdeos Chysoperla externa Aranhas Thomisidae

3
3 3 3 3

1
1 1 1 1

2
3 3 2 3

2
3 3 2 3

1
2 1 2 1

2
3 2 3 ?

2
3 3 1 2

2
2 ? 2 2

?
? ? ? ?

15
20 16 16 15

A. Identificar as rotas de exposio (direta e indireta):

Direta: O inseto se alimenta na planta? possvel a exposio toxina ou j se conhece algum caso comprovado? Listar as diferentes possibilidades. Indireta: A presa/hospedeiro so expostos toxina? possvel a exposio toxina ou j se conhece algum caso? Listar as diferentes possibilidades. A exposio altera o comportamento, alterando o nvel de exposio?

B. Classificar as espcies que so mais possveis de serem expostas toxina:

Use dados que possam indicar a possibilidade de exposio Podemos classificar as espcies em grupos: - possivelmente sero expostas/ possivelmente No sero expostas OU - probabilidade de exposio alta/ mdia/ baixa OU

1 = alta probabilidade de exposio 2 = mdia probabilidade de exposio 3 = baixa probabilidade de exposio

GMO ERA Project

Matriz 2
necessrio conhecermos o nvel de expresso da toxina!
Classificao: 1 = alta probabilidade de exposio 2 = mdia probabilidade de exposio 3 = baixa probabilidade de exposio

Classificaes so frequentemente relativas e depende do conhecimento de especialistas !!!

Incertezas e Precauo
Preencher as lacunas do conhecimento com respostas que podero resultar: alta exposio ou possivelmente ser exposta (isso o pior cenrio possvel de acordo com o Protocolo de Cartagena) Classificar as espcies assumindo e no assumindo o pior cenrio possvel. Se o pior cenrio possvel indica que as espcies podero ser altamente expostas toxina, ento ser importante coletar dados para reduzir essas incertezas.
GMO ERA Project

Matriz de Seleo 2
Espcie Percevejo Podisus nigrispinus Joaninha Cycloneda sanguinea Crisopdeos Chysoperla externa Aranhas Thomisidae 3 3 3 3 3 2 ou 3 2 ou 3 1 1 MD, CE: 2 NE: 1 2 2 1 1 1 2 2 1 2 2 Potencial Mximo de Exposio ME CE NE Sig Classificao Final

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Etapa (Tier) 2

Identificao Rotas de Exposio

Identificao Rotas Efeitos Adversos

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso

Construo Hipteses de Risco

Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos

Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Efeitos adversos resultantes das rotas de exposio

I. Caracterizao de Efeito Adverso

O que um efeito adverso?

I. Caracterizao de Efeito Adverso

O que um efeito adverso?
Mudanas que so consideradas indesejveis porque elas alteram o valor estrutural ou caractersticas funcionais dos ecossistemas ou de seus componentes.

I. Caracterizao de Efeito Adverso

O que um efeito adverso?
Exemplos: - decrscimo no controle biolgico de populaes de insetos-praga. - reduo populao de abelhas polinizadoras. - surgimento de novas pragas. - desenvolvimento de resistncia ao inseticida Bt.
GMO ERA Project

1. Caracterizao do Efeito Adverso

O que caracterizao do efeito adverso?

Caracterizao das consequencias negativas potenciais de cada efeito adverso.

GMO ERA Project

Consequncias do efeito adverso

Magnitude Tempo Escala espacial Reversibilidade

Impacto Ambiental de Organismo Geneticamente Modificado (OGM)

Vai depender (entre outros): Da espcie na qual a nova caracterstica foi introduzida. Da espcie doadora do gene de interesse.

Do produto de expresso do gene.

Dos outros genes presentes no cassete de expresso. Do ambiente no qual o OGM ser introduzido.

Plantas GM podem afetar os Inimigos Naturais:

Diretamente atravs da alimentao sobre partes da planta que expressam a protena, Indiretamente atravs da utilizao de presas que se alimentam sobre plantas GM, Indiretamente reduzindo as populaes de presas (biodiversidade agrcola), Indiretamente atravs da interferncia na comunicao qumica planta-presa-IN.

Metodologia para Anlise de Risco de Plantas GM em Organismos no-alvo

Etapa (Tier) 2

Identificao Rotas de Exposio

Identificao Rotas Efeitos Adversos

Especificao de medidas do efeito adverso (endpoints) Identificao da cadeia causal entre o estressor e o efeito adverso

Construo Hipteses de Risco

Priorizar hipteses para espcies selecionadas ou processos

Etapa (Tier) 3 Planejamento Experimental

Estressor Rota de Exposio Hipottica

Planta Bt Bt -> afdeos alimentando nessa planta Polen Bt

Toxina Bt ingerida pela joaninha

Rota Causal

Rota dos Efeitos Adversos Hiptticos

Mortalidade ou reduo da adaptabilidade devido a ingesto da toxina Bt

Reduo na populao do predador

Seleo do Ponto Final de Avaliao

Efeitos Adversos Ponto Final (Endpoint)

Reduo no controle biolgico natural

Aumento de pragas secundrias ou outras pragas no-alvo da planta Bt.

Estressor Rota de Exposio Hipottica

Planta Bt Bt -> afdeos alimentando nessa planta Polen Bt

Toxina Bt ingerida pela joaninha

Rota Causal

Rota dos Efeitos Adversos Hiptticos

Mortalidade ou reduo da adaptabilidade devido a ingesto da toxina Bt

Reduo na populao do predador

Seleo do Ponto Final de Avaliao

Efeitos Adversos Ponto Final (Endpoint)

Reduo no controle biolgico natural

Aumento de pragas secundrias ou outras pragas no-alvo da planta Bt.

Caracterizao de Efeito Adverso: Definir um Ponto Final de Avaliao (Endpoint)

O que um Ponto Final de Avaliao? definido em Diretrizes para Avaliao de Risco Ecolgico (EUA EPA, 1998) como "uma expresso explcita do valor ambiental a ser protegido, operacionalmente definido como uma entidade ecolgica e seus atributos.

Caracterizao de Efeito Adverso: Definir um Ponto Final de Avaliao (Endpoint)

O que um Ponto Final de Avaliao? definido em Diretrizes para Avaliao de Risco Ecolgico (EUA EPA, 1998) como "uma expresso explcita do valor ambiental a ser protegido, operacionalmente definido como uma entidade ecolgica e seus atributos.

Caracterizao de Efeito Adverso: Definir um Ponto Final de Avaliao (Endpoint)

O que um Ponto Final de Avaliao?
Entidade ecolgica (espcie, grupo funcional, populao, comunidade,) + Atributo (fecundidade, densidade, nmero de espcies, etc )
(US EPA 1998)

Ponto Final de Avaliao =

Populao de Doru luteipes no milho Bt (entidade ecolgica)
+ densidade de adultos na rea, etc (atributo)

Foto: Ivan Cruz

- Densidade populacional de adultos e imaturos no milho Bt

- Mortalidade quando alimentada com lagartas que se alimentaram em milho Bt. Etc...

Ponto Final de Avaliao

Doru luteipes

Estressor Rota de Exposio Hipottica

Planta Bt Bt -> afdeos alimentando nessa planta Polen Bt

Toxina Bt ingerida pela joaninha

Rota Causal

Rota dos Efeitos Adversos Hiptticos

Mortalidade ou reduo da adaptabilidade devido a ingesto da toxina Bt

Reduo na populao do predador

Seleo do Ponto Final de Avaliao

Efeitos Adversos End point

Reduo no controle biolgico natural

Aumento de pragas secundrias ou outras pragas no-alvo da planta Bt.

Ranqueando as Hipteses de Risco

Toxina Bt ingerida pelo pulgo do algodoeiro Aumento da adaptabilidade e preferncia por plantas hospedeiras GM

Reduo dos predadores ou parasitides

Algodoeiro Bt

Reduo dos predadores ou parasitides Toxina Bt ingerida por herbvoro alvo

Aumento de herbvoros no-alvo

Iniciador
Ausncia ou baixa abundncia de competidores herbvoros Novas pragas

Perda de produo

Reduo no uso de pesticidas

Endpoint

Probabilidade: qual a chance de ocorrncia de cada hiptese de risco?

Ranqueando as Hipteses de Risco

Toxina Bt ingerida pelo pulgo do algodoeiro Aumento da adaptabilidade e preferncia por plantas hospedeiras GM

Reduo dos predadores ou parasitides

Algodoeiro Bt

Reduo dos predadores ou parasitides Toxina Bt ingerida por herbvoro alvo

Aumento de herbvoros no-alvo

Iniciador
Ausncia ou baixa abundncia de competidores herbvoros Novas pragas

Perda de produo

Reduo no uso de pesticidas

Endpoint

Viabilidade: as hipteses podem ser testadas?

Testable hypothesis of risk Estratgias para testar um grupo de hipteses de risco

Ligaes causais fracas Ligaes causais chaves Experimentos fcies e difceis Escalonar os testes Endpoints experimentais

Testable Ligaes causais fracashypothesis of risk Ligaes causais chaves

1) Milho Bt resistente a lagartas, parasitide de ovos de lagartas Trichogramma sp. (Hymenoptera: Trichogrammatidae).

2) Milho Bt resistente a lagartas, predador de larvas de instar I de S. frugiperda, Doru luteipes (Scudder, 1876) (Dermaptera: Forficulidae).

Hipteses de Risco Testveis

Experimentos para testar as hipteses:

Se assegure que o parasitide ser exposto a toxina Bt. Considere as caractersticas do ciclo de vida e comportamento de alimentao do parasitde.

Considere a biologia e alimentao do hospediero.

comportamento

de

Considere as taxas de mortalidade das larvas do parasitde. Considere o impacto do parasitide no controle biolgico de pragas: populaes naturais X populaes liberadas.
GMO ERA Project

Testable hypothesis of risk

2. Ranqueando os testes para as Hipteses de Risco

Probabilidade: qual a chance disso ocorrer?

Viabilidade: essa hiptese pode ser testada?

GMO ERA Project

Hipteses de Risco Testveis

Experimentos para testar as hipteses:

Avaliar o contedo de toxina Bt dentro dos ovos dos herbvoros (hospedeiro do parasitide).
Determinar se a toxina Bt afeta os imaturos Trichogramma (desenvolvimento e sobrevivncia) do

Determinar se o comportamento de busca do Trichogramma afetado pela presena da toxina Bt dentro dos ovos do herbvoro. Avaliar o impacto geral da mortalidade ou reduo de adaptabilidade do Trichogramma no controle biolgico.

Probabilidade
GMO ERA Project

Hipteses de Risco Testveis

Experimentos para testar as hipteses:

Avaliar o contedo de toxina Bt dentro dos ovos dos herbvoros (hospedeiro do parasitide).
Determinar se a toxina Bt afeta os imaturos Trichogramma (desenvolvimento e sobrevivncia) do

Determinar se o comportamento de busca do Trichogramma afetado pela presena da toxina Bt dentro dos ovos do herbvoro. Avaliar o impacto geral da mortalidade ou reduo de adaptabilidade do Trichogramma no controle biolgico.

Viabilidade
GMO ERA Project

Anlise de Risco:
Formulao do Problema Caracterizao da Exposio Caracterizao dos Efeitos

Avaliao do Risco

Caracterizao do Risco Estratgias de Manejo de Risco Monitoramento e Avaliao

Modificado de R.Hill (2005) EPA (1998) EU (2002)

Manejo do Risco

avaliao depender do grau de Caracterizao Caracterizao dos Efeitos da Exposio conhecimento existente (sobre o que Caracterizao ser realizado e sobre do Risco os efeitos esperados).
Manejo do Risco
Estratgias de Manejo de Risco Monitoramento e Avaliao

Formulao do Problema A qualidade da

Avaliao do Risco

Modificado de R.Hill (2005) EPA (1998) EU (2002)

Fonte: http://www.isaaa.org/resources/publications/briefs/43/executivesummary/default.asp, Pgina consultada em 11/04/2012.

Plantas Bt liberadas para plantio comercial no Brasil

Cultura Nome comercial Milho Monsanto: Mon810 Yieldgard Protena expressa Cry1Ab Pragas-alvo Spodoptera frugiperda, Heliothis virescens, Helicoverpa zea, Diatraea saccharalis. Spodoptera frugiperda, Heliothis virescens, Helicoverpa zea, Diatraea saccharalis.

Milho

Syngenta: Bt11
Dow/Pioneer e Dupont: Herculex TC1507

Cry1Ab

Milho

Milho

Milho Milho

Spodoptera frugiperda, Heliothis virescens, Helicoverpa zea, Diatraea saccharalis. Helicoverpa zea, Spodoptora Syngenta: MIR frugiperda, Agrotis ipsilon, Vip3A 162 Ostrinia nubialis, Striacosta albicosta. Spodoptera frugiperda, Heliothis Monsanto: Cry1A.105 e virescens, Helicoverpa zea, Mon89034 Cry2Ab2 Diatraea saccharalis Monsanto: Cry3Bb1A Larvas de Diabrotica sp. Mon88017 Cry1F

Cultura Soja

Nome comercial

MON 87701 x MON 89788

Protena expressa Cry1Ac e CP4 EPSPS

Pragas-alvo Lepidopteras e resistncia a herbicida

Algodo

Algodo

Algodo

Algodo

Algodo

Alabama argillacea, Pectinophora Monsanto: Bollgard Cry1Ac e NPTII gossypiella e Heliothis virescens. Resistncia - Evento 531 a herbicida A. argillacea, H. virescens, P. gossypiella e Monsanto: Bollgard II Cry1Ac, Cry2Ab2 Spodoptera frugiperda. Parcial para - evento MON 15985 e NPTII Spodoptera spp. e Helicoverpa zea. Resistncia a herbicida. Alabama argillacea, Heliothis virescens, Monsanto: MON Cry1Ac, NPTII e Helicoverpa zea e Pectinophora gossypiella. 531 x MON 1445 CP4 EPSPS Resistncia a herbicida. Heliothis virescens, Helicoperva zea, Dow AgroSciences: Spodoptera frugiperda, Alabama argillacea, Algodo Widestrike - Cry1Ac, Cry1F e Pectinophora gossypiella, Spodoptera evento 281-24-236 x PAT exigua, Spodoptera eridania, Spodoptera 3006-210-23 frugiperda, Pseudoplusia includens, Trichoplusia ni. Resistncia a herbicida. Alabama argillacea, Helicoverpa zea, Bayer: Algodo Cry1Ab, Cry2Ae Heliothis virenscens, Spodoptera spp, TwinLink - evento e PAT Pectinophora gossypiella e Pseudoplusia T304-40 x GHB119 includens. Resistncia a herbicida.

Wolfenbarger et al 2008

Wolfenbarger et al 2008 1) Estudos de campo conduzidos entre 1992 e 2006, 2) Culturas GM (algodo, milho e batata) que expressam uma ou mais protenas de B. thuringiensis, 3) No total, foram analisados 2.981 observaes de 131 experimentos relatados em 47 estudos de campo publicados, 4) Estudos que mediram o efeito da cultura GM na abundncia de artrpodes no-alvo (predadores, parasitoides, onivoros, detritvoros) em relao a um controle no GM (culturas com aplicao de inseticidas), 5) Estudos que trazem mdias acompanhadas de desvio padro (ou erro padro), 6) Estudos publicados em ingls,

Wolfenbarger et al 2008 Predators were less abundant in Bt cotton compared to unsprayed non-Bt controls. As expected, fewer specialist parasitoids of the target pest occurred in Bt maize fields compared to unsprayed non-Bt controls, but no significant reduction was detected for other parasitoids. Numbers of predators and herbivores were higher in Bt crops compared to sprayed non-Bt controls, and type of insecticide influenced the magnitude of the difference. Omnivores and detritivores were more abundant in insecticide-treated controls and for the latter guild this was associated with reductions of their predators in sprayed non-Bt maize. No differences in abundance were found when both Bt and non-Bt crops were sprayed. Predator-to-prey ratios were unchanged by either Bt crops or the use of insecticides; ratios were higher in Bt maize relative to the sprayed non-Bt control.

Wolfenbarger et al 2008

Conclusions/Significance: Overall, we find no uniform effects of Bt cotton, maize and potato on the functional guilds of non-target arthropods. Use of and type of insecticides influenced the magnitude and direction of effects; insecticde effects were much larger than those of Bt crops.

These meta-analyses underscore the importance of using controls not only to isolate the effects of a Bt crop per se but also to reflect the replacement of existing agricultural practices.

Lovei, et al (2009). Environ. Entomol. 38(2): 293-306.

Lovei, et al (2009). Environ. Entomol. 38(2): 293-306.

- 80 estudos de laboratrio e CV publicados at meados de 2007, - Estudos que tinham: um controle (no toxina ou a planta no GM), toxina purificada e ativada em dieta artificial, a planta GM ou partes dela, ou extratos da planta GM,

- 55 estudos com toxinas Cry, 27 com inibidores de proteinase e 2 com ambas toxinas,
- Variveis: comportamentais (resposta a volteis, preferencia de alimentao, consumo de presa, tempo at o pouso, ect); ciclo de vida (tempo de desenvolvimento, tx sobrevivncia, reproduo, razo sexual, atividade enzimtica).

Lovei, et al (2009). Environ. Entomol. 38(2): 293-306.

This synthesis identifes a continued bias toward studies on a few predator species, especially the green lacewing, Chrysoperla carnea Stephens, which may be more sensitive to GM insecticidal plants (16.8% of the quantied parameter responses were signicantly negative) than predators in general (10.9% significantly negative effects without C. carnea). Parasitoids were more susceptible than predators to the effects of both Cry toxins and proteinase inhibitors, with fewer positive effects (18.0%, significant and nonsignificant positive effects combined) than negative ones (66.1%, significant and nonsignificant negative effects combined). GM plants can have a positive effect on natural enemies (4.8% of responses were significantly positive), although significant negative (21.2%) effects were more common. Although there are data on 48 natural enemy species, the database is still far from adequate to predict the effect of a Bt toxin or proteinase inhibitor on natural enemies.

Quadro I - Protenas Bt avaliadas em abelhas por meio de testes de toxicidade oral (Lima, MA, 2008)
Espcie testada Apis mellifera Apis mellifera Toxina Concentrao Tipo de alimento Resultados Referncia testada Cry1Ba 0,625mg Plen misturado a Sobrevivncia e massa da Malone et toxina /g dieta complementos glndula hipofaringeana al., 2004 de plen alimentares (operrias) inalteradas Cry1Ab 5ng de toxina/ Plen de milho Bt Sobrevivncia e massa da Babendreier g de plen e soluo de glndula hipofaringeana et al., 2005 seco e 14,4g acar misturada (operrias) inalteradas de toxina/ml toxina de soluo de acar Cry1Ac 0,4; 0,2 e 0,1 Plen de lgodo Mortalidade e atividade da Liu et al., de plen/ml de Bt expressando enzima superxido dismutase 2005 soluo de Cry1Ac (operrias) inalteradas acar Cry1Ab Soluo de acar Mortalidade, taxas de consumo Ramirez1000g do xarope e capacidade de Romero et Cry1Ab/kg aprendizado inalteradas al., 2005 soluo (operrias). Houve reduo na atividade forrageadora durante e depois do tratamento Cry1Ab 0,0014% de Plen de milho Bt Comunidade bacteriana Babendreier massa de e soluo de intestinal de operrias et al., 2007 toxina em acar misturada inalterada soluo toxina Cry1Ab 2,8 ou 6,2ng Plen de milho Bt Atividade forrageadora, Rose et al., de puro e misturado performance da colnia, 2007

Apis mellifera

Apis mellifera

Apis mellifera

Apis mellifera

Quadro I - Protenas Bt avaliadas em abelhas por meio de testes de toxicidade oral (Lima, MA, 2008)
Espcie testada Apis mellifera Toxina Concentra Tipo de alimento Resultados testad o a Cry1Ba 0,625mg Plen misturado a Sobrevivncia e massa da toxina /g complementos glndula hipofaringeana dieta de alimentares (operrias) inalteradas plen Cry1Ab 5ng de Plen de milho Bt Sobrevivncia e massa da toxina/ g de e soluo de glndula hipofaringeana plen seco e acar misturada (operrias) inalteradas 14,4g de toxina toxina/ml de soluo de acar Cry1Ac 0,4; 0,2 e 0,1 Plen de lgodo Mortalidade e atividade da de plen/ml Bt expressando enzima superxido dismutase de soluo Cry1Ac (operrias) inalteradas de acar Cry1Ab Soluo de Mortalidade, taxas de consumo 1000g Cry1Ab/kg acar do xarope e capacidade de soluo aprendizado inalteradas (operrias). Houve reduo na atividade forrageadora durante e depois do tratamento Cry1Ab 0,0014% de Plen de milho Bt Comunidade bacteriana massa de e soluo de intestinal de operrias toxina em acar misturada inalterada soluo toxina Referncia

Malone et al., 2004

Apis mellifera

Babendreier et al., 2005

Apis mellifera

Liu et al., 2005

Apis mellifera

RamirezRomero et al., 2005

Apis mellifera

Babendreier et al., 2007

Quadro I - Protenas Bt avaliadas em abelhas por meio de testes de toxicidade oral (Lima, MA, 2008). (...continuao...)
Apis mellifera Cry1Ab 2,8 ou 6,2ng Plen de milho Bt Atividade forrageadora, Rose et al., 2007 de puro e misturado performance da colnia, toxina/abelh soluo de mortalidade e desenvolvimento a acar de operrias inalterados Cry1Ab 3 e 5000ppb Soluo de acar (parte por bilho) de toxina em soluo Cry1Ac 50g Cry1Ac /larva Dieta larval artificial Dose elevada alterou comportamento alimentar de aprendizagem de operrias RamirezRomero et al., 2008

Apis mellifera

Sobrevivncia e tempo de Lima et al., no prelo desenvolvimento larval inalterados Bombus Cry1Ac 11ng de Plen misturado Consumo de plen, massa das Morandim & occidentali toxina/ g de soluo de acar operrias, tamanho da colnia, Winston, se 2003 dieta de (2 partes de quantidade de cria e produo plen Bombus massa de plen: 1 de rainhas e machos impatiens inalterados parte de massa de acar)

Apis mellifera

Quadro II - Inibidores de protease testados em abelhas por meio de testes de toxicidade oral. (Lima, MA, 2008)
Espcie Inibidor Concentraes testada testado
1

Tipo de alimento Soluo de acar

Resultados

Referncia

Apis mellifera

BBI e SBTI

0,01; 0,1 e 0,1 mg/ml

Aumento da mortalidade, diminuio da capacidade de aprendizado e da atividade de proteases intestinas de operrias

Pham-Delgue et al., 2000

Apis mellifera Apis mellifera

Aprotini 2,5mg/g na SBTI

Plen misturado Diminuio da longevidade Malone et al., 2001 a complementos e voo precoce de operrias alimentares 0,1 e 1% do Dieta artificial Diminuio da Brodsgaard et al., total de sobrevivncia, tempo de 2003 protenas desenvolvimento e massa (massa:massa) corporal das larvas Plen misturado Glndula hipofaringeana de Malone et al., 2004 a complementos operrias tratadas alimentares apresentou maior massa; longevidade e taxa de consumo de alimento de operrias inalteradas Soluo de acar Atividade forrageadora inalterada DechaumeMoncharmont et al., 2005

Apis mellifera

Aprotini 2,5 mg/g de na dieta

Apis mellifera

BBI

100g.ml-1

Quadro II - Inibidores de protease testados em abelhas por meio de testes de toxicidade oral (Lima, MA, 2008). (... Continuao...)
Apis BBI mellifera Apis SBTI mellifera 100g.ml-1 Soluo de acar Atividade forrageadora Dechaumeinalterada Moncharmont et al., 2005 Sagili et al., 2005

1%, 0,5% Soluo de plen Reduo do teor de e 0,1% da e acar protena da glndula dieta hipofaringeana, da atividade proteoltica intestinal e da sobrevivncia de operrias adultas 0,1% e 1% Soluo de (massa:vol acar ume)

Apis SBTI mellifera

Reduo da Babendreier et sobrevivncia e da al., 2007 comunidade bacteriana intestinal de operrias Efeitos na sobrevivncia (operrias adultas) Malone et al., 2000

Bombus BPTI 10; 5; 1; terrestris POT-1 0,1 e POT-2 0,001 mg.g-1

Plen misturado a complementos alimentares

Curso: Capacitao na Aplicao e Biossegurana Ambiental de Plantas Geneticamente Modificadas

26 a 30 de novembro de 2012 Embrapa Milho e Sorgo

Anlise de Risco de Plantas GM sobre Organismos no-alvo Obrigada!!! carmen.pires@embrapa.br

*carmen.pires@embrapa.br

Carmen Pires*

Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento