RADICAIS LIVRES: CONCEITOS E MECANISMO DE LESO

Artigo de Reviso

Radicais livres: conceitos, doenas relacionadas, sistema de defesa e estresse oxidativo

A.L.A. FERREIRA, L.S. MATSUBARA
Departamento de Clnica Mdica da Faculdade de Medicina de Botucatu, Botucatu, SP.

UNITERMOS: Radicais livres. ons ferro. Leses oxidativas. Estresse oxidativo. Defesa antioxidante. KEY WORDS: Oxygen species. Ions iron. Oxidative damage. Pulmonary injury.

oxignio fazem intercmbio com os dois eltrons de outro elemento oxignio, formando um composto estvel com 12 eltrons na ltima camada (L). Assim: K 1s 2 L 2s2 2p4

Nas ltimas dcadas, foram realizadas inmeras pesquisas para esclarecer o papel dos radicais livres em processos fisiopatolgicos como envelhecimento, cncer, aterosclerose, inflamao, etc. Ao abrirmos um peridico, com freqncia, encontramos temas relacionados a radicais livres, que, por seu carter multidisciplinar, tm atrado a ateno de pesquisadores de vrias reas. No entanto, os artigos desta linha de pesquisa, muitas vezes, causam desinteresse no leitor no-especializado, porque esto mergulhados num mundo bioqumico de difcil entendimento. O objetivo do presente artigo fornecer conceitos importantes a esses leitores, com a finalidade de desmistificar o tema. O QUE RADICAL LIVRE? As camadas eletrnicas de um elemento qumico so denominadas K, L, M e N, e seus subnveis, s, p, d, f. De maneira simples, o termo radical livre referese a tomo ou molcula altamente reativo, que contm nmero mpar de eltrons em sua ltima camada eletrnica1,2. este no-emparelhamento de eltrons da ltima camada que confere alta reatividade a esses tomos ou molculas. Vamos acompanhar a formao de um radical . livre, o superxido (O2- ), que derivado do oxignio molecular (O2). O O2 composto por dois elementos oxignio (O), cujo nmero atmico 8, sendo sua distribuio de letrons a seguinte: K 1s2 L 2s2 2p4

L 2s2 2p4 K 1s 2

conveniente recordar que reaes de reduo implicam em ganho de eltrons, e as de oxidao, em perda. Portanto, quando no metabolismo normal ocorrer uma reduo do oxignio molecular (O2), este ganhar um eltron, formando o radical superxido . (O2- ), considerado instvel por possuir nmero mpar (13) de eltrons na ltima camada L. Assim, a configurao eletrnica do radical superxido a seguinte: K 1s 2 L 2s2 2p5 L 2s2 2p4 K 1s 2

Para formar o oxignio molecular (O2), os dois eltrons solitrios do subnvel p de um elemento
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Compreendendo as etapas da formao de O 2- , podemos verificar que os radicais livres so formados em um cenrio de reaes de xido-reduo, isto , ou cedem o eltron solitrio, oxidando-se, ou recebem outro, reduzindo-se. Portanto, os radicais livres ou provocam ou resultam dessas reaes de xido-reduo. Na verdade, radical livre no o termo ideal para designar os agentes reativos patognicos, pois alguns deles no apresentam eltrons desemparelhados em sua ltima camada. Como em sua maioria so derivados do metabolismo do O 2, no decorrer deste texto utilizaremos o termo espcies reativas do metabolismo do oxignio (ERMO) para referirmonos a eles. ERMO so encontradas em todos os sistemas biolgicos. Em condies fisiolgicas do metabolismo celular aerbio, o O2 sofre reduo tetravalente, com aceitao de quatro eltrons, resultando na forma61

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onde foi produzido confirma sua alta reatividade. Assim, se o hidroxila for produzido prximo ao DNA e a este DNA estiver fixado um metal, podero ocorrer modificaes de bases purnicas e pirimidnicas, levando inativao ou mutao do DNA. Alm disso, o hidroxila pode inativar vrias protenas (enzimas e membrana celular), ao oxidar seus grupos sulfidrilas (-SH) a pontes dissulfeto (-SS). Tambm pode iniciar a oxidao dos cidos graxos polinsaturados das membranas celulares (lipoperoxidao)4. Perxido de hidrognio (H2O2) Apesar de no ser um radical livre, pela ausncia de eltrons desemparelhados na ltima camada, o H2O2 um metablito do oxignio extremamente deletrio, porque participa da reao que produz o . OH (fig. 1). O H2O2 tem vida longa, capaz de atravessar camadas lipdicas, pode reagir com a membrana eritrocitria e com protenas ligadas ao Fe++5. Assim, altamente txico para as clulas; esta toxicidade pode ser aumentada de dez para mil vezes quando em presena de ferro 6, como ocorre, por exemplo, na hemocromatose transfusional. Oxignio singlet (1O2) forma excitada de oxignio molecular e no possui eltrons desemparelhados em sua ltima camada. O 1O2 tem importncia em certos eventos biolgicos, mas poucas doenas foram relacionadas sua presena1. Embora as ERMO possam ser mediadoras de doenas, sua formao nem sempre deletria, como na defesa contra a infeco, quando a bactria estimula os neutrfilos a produzirem espcies reativas com a finalidade de destruir o microorganismo7,8. Contudo, podero ocorrer vrios eventos nosolgicos, se houver estmulo exagerado na produo dessas espcies, e a ele estiver associada uma falha da defesa antioxidante (ver quadro na pgina seguinte). IMPORTNCIA DO ON FERRO NA FORMAO DAS ERMO O estudo sobre os mecanismos de leso oxidativa tem, progressivamente, confirmado a ao cataltica dos metais nas reaes que levam a estas leses. O papel dos metais na formao in vitro das ERMO confirmado pelas reaes de Fenton e de HaberWeiss1,9,10. Embora o cobre possa tambm catalisar a reao de Haber-Weiss, o ferro o metal pesado mais abundante no organismo e est biologicamente mais capacitado para catalisar as reaes de oxidao de biomolculas11. Como pode ser observado a seguir,
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Fig. 1 Reduo tetravalente do oxignio molecular (O 2) na mitocndria at a formao de gua (H2O). Vrias espcies reativas de O2 so formadas no processo. (Adaptado de Cohen MV3.)

o de H2O (fig. 1). Durante esse processo so formados intermedirios reativos, como os radicais supe. . rxido (O2- ), hidroperoxila (HO2 ) e hidroxila (OH), e o perxido de hidrognio (H2O2). Normalmente, a reduo completa do O2 ocorre na mitocndria, e a reatividade das ERMO neutralizada com a entrada dos quatro eltrons3. Radical superxido (O2- )

Pode ser escrito como O2- ou O2- e formado aps a primeira reduo do O2. O radical superxido ocorre em quase todas as clulas aerbicas e produzido durante a ativao mxima de neutrfilos, moncitos, macrfagos e eosinfilos1,4. Apesar de ser considerado pouco reativo em solues aquosas, tem sido observada leso biolgica secundria a sistemas geradores de . O2- (seja enzimtico, fagoctico ou qumico) 1. Radical hidroperoxila (HO2 ) Representa a forma protonada do radical superxido, ou seja, possui o prton hidrognio. Existem evidncias de que o hidroperoxila mais reativo que o superxido, por sua maior facilidade em iniciar a destruio de membranas biolgicas1. Radical hidroxila (OH ) considerada a ERMO mais reativa em sistemas biolgicos. A combinao extremamente rpida do . OH com metais ou outros radicais no prprio stio 62

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Quadro Eventos relacionados a espcies reativas de O2* Envelhecimento Mutaes Cncer Aterosclerose Leso por toxicidade de O2 em pulmo e retina Leso ps-isquemia e reperfuso de crebro, corao, pele, intestino, pncreas, fgado, msculo, rins e pulmes Leso ps-concusso cerebral e ps-hipertenso intracraniana Sndrome demencial Disfuno renal ps-transplante Artrite reumatide Hemocromatose transfusiomal Doenas auto-imunes Toxicidade decorrente da exposio a xenobiticos
*Adaptado de Halliwell B & Gutteridge JMC1; Halliwell B 2; Cohen MV3.

Leses teciduais associadas a sangramentos tambm podem liberar hemoglobina (Hb) e ferro, favorecendo reaes oxirredutoras, como nos tumores e na artrite reumatide, quando o ferro liberado da Hb aps microssangramentos1. LIPOPEROXIDAO Todos os componentes celulares so suscetveis ao das ERMO, porm a membrana um dos mais atingidos em decorrncia da peroxidao lipdica, que acarreta alteraes na estrutura e na permeabilidade das membranas celulares 13. Conseqentemente, h perda da seletividade na troca inica e liberao do contedo de organelas, como as enzimas hidrolticas dos lisossomas, e formao de produtos citotxicos (como o malonaldedo), culminando com a morte celular 14. A lipoperoxidao tambm pode estar associada aos mecanismos de envelhecimento, de cncer e exacerbao da toxicidade de xenobiticos 15. Assim como na formao das ERMO, nem sempre os processos de lipoperoxidao so prejudiciais, pois seus produtos so importantes na reao em cascata a partir do cido aracdnico (formao de prostaglandinas) e, portanto, na resposta inflamatria1. Todavia, o excesso de tais produtos pode ser lesivo16. A lipoperoxidao uma reao em cadeia, representada pelas etapas de iniciao, propagao e terminao. Estas etapas esto apresentadas nas reaes seguintes, onde L representa o lipdio17:
LH

nas reaes de Fenton e de Haber-Weiss so formados diferentes tipos de ERMO: Reao de Fenton: Fe ++ 2O2Fe ++

+ O2 + 2H + + H 2O 2

<-> Fe+++ > O2 > Fe+++

+ O2 -

+ H2 O 2

+ OH- + OH

sugerido que no traumatismo cranienceflico ocorram ERMO por mecanismo tipo Fenton. A liberao do ferro intracelular, a baixa capacidade liqurica de ligao ferro-protena e a deficincia de enzimas antioxidantes no sistema nervoso central ampliam os riscos de leso induzida pelo trauma2. O papel do ferro neste tipo de agresso demonstrado pela diminuio da degenerao cerebral ps-trauma em animais experimentais que recebem quelante de ferro. possvel que a quelao do ferro liberado aps o trauma iniba a formao de ERMO catalisadas por este metal1. Reao de Haber-Weiss: Fe Fe
+++ ++

. L

+ OH (ou LO ) > L + H2O (ou LOH) Iniciao + O2 + LOO

. .

LH

> LOO

Propagao Propagao Terminao Terminao

. O 2-

. . LOO + L . . LOO + LOO

> L + LOOH > LOOL > LOOL + O2

<-> Fe > Fe > O2

++ +++

+ O2 + +

. O 2-

+ H 2O 2 + H 2O 2

. OH- + OH OH- + OH-

Experimentos in vivo sugerem que a sndrome da reperfuso ps-isquemia, em coraes de ratos submetidos sobrecarga de Fe+++ , possa estar relacionada produo de ERMO via reao de HaberWeiss. Nesta situao, aps a reperfuso, ocorre decrscimo da contratilidade miocrdica sem que se observe leso tissular importante. Foi sugerido que o excesso de Fe +++ , catalisando a reao de Haber-Weiss, promova o acmulo de ERMO, den. tre elas o OH . O excesso de Fe +++ e, conseqente. mente, de OH estimula a lipoperoxidao de membranas, responsvel pela diminuio da contratilidade miocrdica12 .
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A reao acima inicia-se com o seqestro do hidrognio do cido graxo polinsaturado (LH) da membra. na celular. Tal seqestro pode ser realizado pelo OH . ou pelo LO (radical alcoxila), com conseqente for. mao do L (radical lipdico). Na primeira equao . de propagao, o L reage rapidamente com o O2, . resultando em LOO (radical peroxila), que, por sua vez, seqestra novo hidrognio do cido graxo polin. saturado, formando novamente o L na segunda equao de propagao. O trmino da lipopero. . xidao ocorre quando os radicais (L e LOO ) produzidos nas etapas anteriores propagam-se at destruirem-se a si prprios. A lipoperoxidao pode ser catalisada por ons ferro, por converso de hidroperxidos lipdicos (LOOH) em radicais altamente reativos (alcoxila, . . LO e peroxila, LOO ), que, por sua vez, iniciam 63

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Existem vrias evidncias da atividade protetora dos componentes do sistema antioxidante. As leses de reperfuso ps-isquemia de corao, rim, fgado e intestino so prevenidas por SOD, catalase ou allopurinol, sendo este ltimo um bloqueador da . produo de O2- , pela via da xantina-oxidase15. Glutationa reduzida (GSH) A glutationa reduzida (GSH, L- -glutamil-L-cisteinil-glicina) est presente na maioria das clulas e o tiol (-SH) mais abundante no meio intracelular 22. Sua capacidade redutora determinada pelo grupamento -SH, presente na cistena. A GSH pode ser considerada um dos agentes mais importantes do sistema de defesa antioxidante da clula, protegendo-a contra a leso resultante da exposio a agentes como ons ferro 23, oxignio hiperbrico, ozona, radiao e luz ultravioleta 24. Alm disto, diminui a suscetibilidade leso renal decorrente da isquemia e reperfuso15; atua como transportadora e reservatrio da cistena e participa da detoxificao de agentes qumicos e da eliminao de produtos da lipoperoxidao. Ainda, requerida para a sntese de DNA, de protenas e de algumas prostaglandinas24. O poder antioxidante da GSH foi demonstrado pelo aumento da sobrevida de 90% de ratos submetidos hiperoxia e tratados com instilao de eritrcitos na traquia. Este resultado foi atribudo GSH intra-eritrocitria, que protege contra o pulmo de choque induzido pelo estresse oxidativo resultante da hiperoxia25. Quando comparado ao grupo controle, o nvel de GSH est aumentado em pacientes com diabetes melito tipo II tratados com sufoniluria; possvel que isto se relacione com a disponibilidade de grupamentos -SH presentes no medicamento26. Glutationa-redutase (GSH-Rd) Aps exposio da GSH ao agente oxidante, ocorre sua oxidao a GSSG 21 (fig. 2). A recuperao da GSH feita pela enzima GSH-Rd, uma etapa essencial para manter ntegro o sistema de proteo celular 27. Habitualmente, a reserva intracelular de GSH-Rd alta e somente uma grave deficincia desta enzima resultar em sinais clnicos 28. A GSH-Rd uma flavoprotena dependente da nicotinamida-adenina-dinucleotdeo-fosfato reduzida (NADPH) e, portanto, tambm dependente da integridade da via das pentoses 16 . Sob condies de diminuio do fornecimento de NADPH, como no jejum e na deficincia de glicose6-fosfato desidrogenase (G6PD), h prejuzo da funo da GSH-Rd 15 .
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Fig. 2 Mecanismo de leso e proteo eritrocitrias na sobrecarga de ferro. A hemlise poder ocorrer se a capacidade de defesa antioxidante for superada pela capacidade oxidativa do agente. (Adaptado de Gilbert HF & Mc Lean VM27; Winterbourn CC40; Rice-Evans C et al.41.)

nova cadeia de reaes, denominada ramificao. Essas reaes, que podem ser rpidas ou lentas, dependem da valncia do ferro18, a saber: LOOH + Fe++ rpida> LO + OH + Fe+++ . LOOH + Fe+++ lenta> LOO + H+ + Fe++ O radical hidroxila (OH ) freqentemente reconhecido como a espcie iniciadora e a mais importante da lipoperoxidao10. Entretanto, estudos recentes indicam que o ferro tambm desempenha papel determinante na iniciao deste processo, sendo necessria uma relao equimolar Fe+++ : Fe++ no meio, para que ocorra a lipoperoxidao19,20. SISTEMAS DE DEFESA ANTIOXIDANTE Em sistemas aerbicos, essencial o equilbrio entre agentes xido-redutores (como as ERMO) e o sistema de defesa antioxidante (fig. 2). Como vimos, esses agentes so gerados endogenamente como conseqncia direta do metabolismo do O2 e tambm em situaes no-fisiolgicas, como a exposio da clula a xenobiticos que provocam a reduo incompleta de O216. Para proteger-se, a clula possui um sistema de defesa que pode atuar em duas linhas. Uma delas atua como detoxificadora do agente antes que ele cause leso. Esta linha constituda por glutationa reduzida (GSH), superxido-dismutase (SOD), catalase, glutationa-peroxidase (GSH-Px) e vitamina E. A outra linha de defesa tem a funo de reparar a leso ocorrida, sendo constituda pelo cido ascrbico, pela glutationa-redutase (GSH-Rd) e pela GSHPx, entre outros. Com exceo da vitamina E (tocoferol), que um antioxidante estrutural da membrana, a maior parte dos agentes antioxidantes est no meio intracelular16, 21. 64

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Glutationa-peroxidase (GSH-Px) A GSH-Px catalisa a reduo do perxido de hidrognio (H2O2) e perxidos orgnicos para seus correspondentes alcois s custas da converso da GSH a GSSG15 (fig. 2). Embora a GSH-Px tenha ao fundamentalmente citoslica, in vitro ela capaz de reduzir hidroperxidos de membrana 21. Em modelo de hemocromatose experimental foi demonstrada reduo de 36% na atividade da GSHPx em fgado de ratos29. Catalase A catalase uma hemeprotena citoplasmtica que catalisa a reduo do H2O2 a H2O e O2 (fig. 2). encontrada no sangue, medula ssea, mucosas, rim e fgado30. Sua atividade dependente de NADPH 5. A suplementao de catalase exgena previne a oxidao da GSH mediada pelo H2O2, em eritrcitos humanos normais5, e tambm inibe as leses oxidativas do DNA de timo de carneiros submetidos sobrecarga de Fe+++31. Em modelo de estresse oxidativo decorrente de agresso trmica, os eritrcitos exibem diminuio da atividade da catalase durante o processo hemoltico termodependente8. Superxido-dismutase (SOD) A SOD corresponde a uma famlia de enzimas com diferentes grupos prostticos em sua composio. Nos sistemas eucariontes existem duas formas de SOD. A forma SOD-cobre-zinco est presente principalmente no citosol, enquanto que SOD-mangans est localizada primariamente na mitocndria. Esta enzima tambm tem papel antioxidante, j que catalisa a dismutao do radical superxido em H2O2 e O2, na presena do prton H +16,32 (fig. 2). Durante o processo hemoltico decorrente de agresso trmica, os glbulos vermelhos humanos8 e bovinos33 exibem queda da atividade SOD. A adio desta enzima tambm protege o DNA de leses provocadas pela sobrecarga de Fe +++31. Alm dos antioxidantes citados, a vitamina E confere proteo membrana celular por atuar como quelante dos oxidantes produzidos durante a lipoperoxidao. um importante antioxidante lipoflico, mas esta funo poder estar limitada em situaes de sobrecarga de ferro. O -caroteno interage com as ERMO especialmente quando ocorrem baixas tenses de O2, enquanto que a vitamina E se mostra mais eficiente quando h altas tenses de O2 no meio. A vitamina C, ou ascorbato, um antioxidante hidrossolvel que pode neutralizar diretamente as ERMO; porm, pode funcionar como pr-oxidante quando em dose elevada, ou quando exposta a metal, levando lipoperoxidao16,21.
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Ao lado dos antioxidantes vitamnicos disponveis em medicamentos, destacam-se tambm os derivados tiis, entre eles a N-acetilcistena e mercaptopropionilglicina (MGP). Tais derivados so antioxidantes sintticos que contm o grupo -SH em sua composio. A capacidade antioxidante da N-acetilcistena foi demonstrada pela melhora da complacncia pulmonar, mas no da sobrevida, de pacientes com sndrome da angstia respiratria do adulto (SARA) que receberam a droga endovenosa34,35. E pelo aumento da taxa de sobrevivncia de retalhos de pele de ratos submetidos isquemia do pedculo vascular aps administrao endovenosa de MGP36. ESTRESSE OXIDATIVO Na inativao de um agente oxidante ocorre produo de GSSG e depleo de GSH (fig. 2). Em situaes em que o sistema de xido-reduo est ntegro, haver recuperao da GSH. Entretanto, sob condies de excesso de agentes oxidantes e/ou deficincia do sistema protetor, haver desequilbrio entre o consumo de GSH e a produo de GSSG, o que caracteriza o estresse oxidativo15,27,37. Assim, a magnitude do estresse oxidativo pode ser monitorada pela razo GSSG/GSH. Em pulmes de ratos submetidos hiperoxia por 48 horas, esta razo est significantemente aumentada, quando comparada a de grupo controle no exposto38. O excesso de GSSG resulta em ambiente mais oxidante, que favorece a formao de pontes dissulfeto (-SS-) nas protenas portadoras de grupamento tiol (-SH). As pontes dissulfeto oxidam estas protenas, com prejuzo de suas funes. Esta oxidao reversvel s custas da ao de compostos antioxidantes, como a GSH27. Utilizando-se o eritrcito como clula-alvo, descreveremos, a seguir, o fenmeno de estresse oxidativo. A membrana do glbulo vermelho contm grande nmero de grupos -SH, e os agentes oxidantes podem converter estes grupos tiis (R-SH) em componentes dissulfeto (R-SSG), levando desnaturao das protenas da membrana 27. Neste processo, pode ocorrer leso intracelular, com oxidao da hemoglobina (Hb) Meta-Hb, que precipita e forma os corpsculos de Heinz39,40. O componente lipdico da membrana eritrocitria est tambm sujeito agresso oxidativa. Os produtos desta lipoperoxidao podem induzir o estresse oxidativo intracelular41. A associao dos fenmenos lipoperoxidao, formao de corpsculos de Heinz e oxidao dos grupos -SH podero promover a leso da membrana do glbulo vermelho. Se a eficincia do sistema antioxi65

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dante for superada pela magnitude destes fenmenos, ocorrer o estresse oxidativo, que culminar em hemlise. A fig. 2 esquematiza a relao destes processos, considerando o ferro como o agente agressor oxidante e o eritrcito como clula-alvo. No entanto, possvel generalizar este padro de agresso e defesa celular antioxidante para grande parte dos tecidos do organismo. DOENAS ASSOCIADAS ERMO Existem evidncias de que as ERMO possam estar envolvidas em mais de 50 doenas ou eventos nosolgicos. Alm das j citadas, as doenas pulmonares associadas s ERMO so: enfisema, displasia broncopulmonar, pneumoconiose, toxicidade por bleomicina, paraquat, butilidroxitolueno, fibras minerais e fumo, asma e SARA42,43. Nesta ltima sndrome, a origem das ERMO parece estar relacionada ativao neutroflica pelo complemento 44. Est bem documentado que, aps a chegada dos neutrfilos no interstcio pulmonar, a ativao destas clulas gera radical superxido, que lesa diretamente a membrana das clulas intersticiais e do endotlio. Como conseqncia, ocorre leso tissular progressiva, pois o neutrfilo ativado tambm libera enzimas proteolticas que degradam a elastina do arcabouo pulmonar45. A gravidade da SARA secundria hiperoxia depende do grau e do tempo da exposio ao O2. Assim, mamferos inalando 100% O2, com presso parcial arterial de O2 em torno de 500mmHg, apresentam leso pulmonar caracterizada por edema, atelectasia, depsitos de fibrina com formao de membrana hialina exsudao celular, enrijecimento arteriolar e hiperplasia e hipertrofia alveolares. H fortes indcios de que a formao do edema pulmonar seja resultante da produo exagerada de perxido de hidrognio, radical hidroxil e superxido pelo neutrfilo43. O envelhecimento tambm um evento que pode estar relacionado com as ERMO. A teoria dos radicais de oxignio, desenvolvida por Harman (1956), propunha que o envelhecimento poderia ser secundrio ao estresse oxidativo, que levaria a reaes de oxidao lipdica, protica, e com o DNA, que desencadeariam alteraes lentas e progressivas dos tecidos e do cdigo gentico. A pergunta chave atual se este estresse oxidativo tem um peso to importante, a ponto de explicar o fenmeno do envelhecimento. No h at o momento evidncias consistentes que respondam esta pergunta46. Os estudos dos ltimos anos demonstram um comportamento heterogneo do sistema de defesa antioxidante em relao ao envelhecimento. Ou seja, ao contrrio do esperado, no se observa, necessariamente, deficincia do sis66

tema conforme a espcie envelhece 47-52. Um estudo clnico realizado por nosso grupo comparou jovens de 30 anos e idosos de 69 anos em mdia, ambos sadios. Os resultados mostram que os idosos apresentam nveis menores de GSH e diminuio da atividade de GSH-Rd e GSH-Px eritrocitrios em relao aos jovens. No mesmo estudo, foi analisado outro grupo de idosos portadores de diabetes melito tipo II tratados com sulfoniluria, medicamento oral composto por grupos -SH em sua estrutura. Este grupo apresentou maior nvel GSH e maior atividade de GSHRd e GSH-Px, em relao ao grupo de idosos sadios. Estas observaes sugerem que a doena ou o tratamento podem estimular o sistema antioxidante eritrocitrio em idosos26. Outro estudo que relacionou envelhecimento com o sistema de defesa em eritrcitos mostrou que no h consumo de vitamina A e E com o aumento da idade de indivduos saudveis53. Entretanto, pode haver diminuio do nvel muscular de vitamina E aps exerccio fsico em idosos54. Outras doenas freqentes na velhice e j consagradas como conseqentes ao estresse oxidativo so a doena de Parkinson, o acidente vascular cerebral, a doena de Alzheimer, a esclerose mltipla e catarata. Aqui cabem novas perguntas: o envelhecimento pode ser considerado causa ou conseqncia destas doenas? Ou o envelhecimento poderia ser apenas um evento acompanhante destas doenas? 46. A origem da aterosclerose incerta, porm a teoria corrente que o incio da leso seja no endotlio por mecanismo hemodinmico. Nesta leso h afluxo de macrfagos; quando ativados, liberam radicais superxido, perxido de hidrognio e enzimas hidrolticas. Estes produtos, alm de lesar clulas vizinhas, estimulam a proliferao de msculo liso subendotelial. A leso pode ser exacerbada pela fumaa do cigarro que, por ser rica em ferro, catalisa a oxidao de lipoprotenas de baixa densidade (LDL). Tal oxidao estimula a internalizao de colesterol nos macrfagos, os quais, conseqentemente, se convertem em clulas espumosas, contribuindo para a formao da placa de ateroma1. DETECO LABORATORIAL DAS LESES OXIDATIVAS A deteco direta das ERMO em sistemas biolgicos dificultada por suas concentraes extremamente baixas (da ordem de 10-11M) e por suas altas velocidades de reao, chegando ao ponto de as taxas de produo serem iguais s taxas de reao com biomolculas7. Os subprodutos das ERMO podem ser aferidos diretamente por tcnica de ressonncia paramagntica de eltrons, porm o custo e outras limitaes desta avaliao dificultam seu uso rotineiro.
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Os mtodos mais utilizados para aferio indireta das ERMO e, conseqentemente, das leses oxidativas so os espectrofotomtricos e cromatomtricos, que medem a atividade enzimtica (SOD, catalase, GSH-Px e GSH-Rd) e/ou a concentrao de tripeptdeos (GSH, GSSG) e aldedos (MDA). Estas medidas podem ser realizadas em tecidos, sangue e outros fluidos. A lipoperoxidao de membranas habitualmente monitorada pelo mtodo do MDA (malonaldedo) e o estresse oxidativo, por dosagens de GSSG e/ou pelo clculo da razo GSSG/GSH. Para finalizar, devemos salientar que as ERMO podem ser causa ou conseqncia de doenas humanas associadas ao estresse oxidativo. Por isso, antioxidantes naturais e sintticos tm sido recomendados para o alvio dos sinais e sintomas destas doenas e, mesmo, para bloquear sua evoluo. No entanto, muito deve ser investigado acerca do benefcio dos antioxidantes exgenos. imperativo determinar o momento exato, a dose, a via de administrao e qual o antioxidante ideal para cada doena. At o momento no existem estudos que respondam com segurana estas indagaes. Portanto, a utilizao indiscriminada de medicamentos que contenham antioxidantes exgenos deve ser criteriosamente avaliada na teraputica de doenas associadas ao estresse oxidativo. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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