FACULDADE DE CINCIAS ADMINISTRATIVAS E CONTBEIS DE ITABIRA

Exame Parasitolgico de Fezes

Tcnicas: Sedimentao Espontnea e
Centrifugo-sedimentao

Alunas: Anna Luisa Corradi Magalhes Nepomuceno

Gabriela Lhorrana Ribeiro Ferreira
Ivy Nayra Nascimento Gonalves

Curso: Biomedicina

Perodo: 5

Professora: Marcela Auxiliadora Souza Pssa

Itabira
Maro 2013

1 INTRODUO

O mtodo de Hoffman, Pons e Janer consiste em um teste parasitolgico simples, de

fcil execuo e baixo custo. Trata-se de um teste qualitativo para a deteco de ovos ou
larvas de helmintos presentes em amostras fecais. Tais ovos e larvas so encontrados
devido sedimentao espontnea dos mesmos durante a realizao do procedimento,
pois os mesmos possuem densidade maior que a da gua, portanto, se concentram ao
fundo do clice de sedimentao. O sedimento ser o material utilizado na confeco
das lminas que sero avaliadas microscopicamente.

Tal como o mtodo de Hoffman, o mtodo de Ritchie tambm utilizado para

evidenciar larvas e ovos de helmintos e de fcil execuo e baixo custo. A diferena
que o teste proposto por Ritchie em 1948 baseia-se na sedimentao por centrifugao e
tambm lava-se o material com formalina e ter ou acetato de etila. Devido a essa
lavagem, ao final do procedimento, podem-se visualizar quatro fazes distintas na
amostra. A mais superior constituda por ter, a segunda possui detritos slidos, a
terceira constituda por formalina e a ltima pelo material biolgico que ser analisado
ao microscpio na tentativa de encontrar indcios de parasitismo.

2 OBJETIVOS

O principal objetivo proposto para a realizao desta aula prtica aprender a executar
os mtodos de sedimentao espontnea e sedimentao por centrifugao.

No mtodo de centrifugao espontnea pretende-se que o aluno entenda a forma como

deve ser feita a homogeneizao da amostra e filtragem, ficando atento ao tempo de
sedimentao e a forma de descarte do sobrenadante.

No mtodo da sedimentao por centrifugao, alm de coleta e homogeneizao da

amostra o aluno deve ater-se a forma como o processo de centrifugao acontece,
observando a necessidade de novas centrifugaes com gua, alm de perceber a
necessidade do uso da formalina e do ter ou acetato de etila para separao do
sedimento.

3 MATERIAIS

Sedimentao Espontnea ou Mtodo de Lutz ou Horrman, Pons & Janer (HPJ)

Copo plstico descartvel

Balana de Preciso

Palitos de madeira

Gaze Cirrgica

Peneira

Clice de Sedimentao

gua destilada

Bquer de 10 mL, 15 mL e 20 mL.

Pipeta de Pasteur

Lminas e lamnulas limpas

Centrifugo-Sedimentao pela Formalina-ter ou Mtodo de Ritchie

Copo plstico descartvel

Balana de preciso

Palitos de madeira

Gaze cirrgica

Tubo Falcon de 15 mL

gua destilada

Soluo tamponada de Formalina a 10%

ter ou Acetato de Etila

Pipeta de Pasteur

Centrfuga

Swab de algodo

Lminas e lamnulas limpas

4 PROCEDIMENTOS

Primeiramente, foi realizado o Mtodo de Sedimentao Espontnea. Para tanto, pesouse aproximadamente 5 gramas da amostra de fezes em copo plstico descartvel. Em
seguida, acrescentou-se cerca de 10 mL de gua destilada ao copo e homogeneizou-se a
amostra, acrescentando mais gua quando necessrio. Para realizar a filtragem do
material do copo plstico descartvel para o clice de sedimentao, utilizaram-se duas
gazes cirrgicas dobradas ao meio e entrelaadas uma a outra ao contrrio, de forma a
diminuir os poros, e uma peneira.

Os detritos que ficaram retidos na gaze foram lavados com gua destilada e em seguida
completou-se o clice de sedimentao at de seu volume. O clice foi ento deixado
em repouso por cerca de 1 hora. Aps o tempo de repouso o sobrenadante foi vertido e
colocou-se novamente gua destilada at atingir aproximadamente de seu volume.
Para completar o processo, o clice deveria ser deixado em repouso por mais 1 hora, o
sobrenadante seria novamente descartado e, caso necessrio, seria feita outra lavagem.
Aps obteno o sedimento, com o auxlio de uma pipeta de Pasteur, seria colhido uma
gota do mesmo, que seria ento colocado em lmina limpa e seca e coberto com
lamnula, sendo feita em seguida observao ao microscpio. A segunda parte do
processo no foi realizada, portanto no foram confeccionadas lminas para anlise.

Simultaneamente ao tempo em que o clice de sedimentao foi deixado em repouso,

foi realizado o Mtodo da Centrifugo-Sedimentao. Para tal tcnica, foram pesados 2
gramas da amostra de fezes em copo plstico descartvel. A amostra adicionou-se 10
mL de gua destilada e fez-se a homogeneizao do material. Foi feita ento a filtragem
em gaze (duas gazes dobradas, entrelaadas entre si ao contrrio, com o objetivo de
diminuir os poros) e o material foi ento colocado em um tubo Falcon de 15 mL. O
volume de material deveria atingir 10 mL, caso isso no acontecesse, seria necessrio
completar o voluma com gua destilada.

O tubo Falcon foi levado a centrfuga a uma velocidade de 2500 rpm por 1 minuto. O
tubo foi retirado da centrfuga, o sobrenadante foi ento descartado e foi feita a
ressuspeno do material em 10 mL de gua destilada. O tubo foi levado novamente a
centrfuga com a mesma velocidade e mesmo tempo. O procedimento descrito

anteriormente foi realizado 3 vezes, a fim de que o sobrenadante gerado apresentasse-se

claro. Aps a ltima centrifugao com gua destilada, o sobrenadando foi descartado e
o sedimento foi ressuspendido em 2 mL de formalina a 10. O volume foi ento
completado at 10 mL e o tubo foi deixado em repouso por 5 minutos. Aps esse tempo
acrescentou-se 3 mL de acetato de etila (em dois outros caso acrescentou-se ter) e
agitou-se o tubo vigorosamente. O tubo foi levado novamente a centrfugo a uma
velocidade de 2000 rpm por 1 minuto.

Aps o tempo na centrfuga, foram formadas no tubo 4 fases. Para completar o

processo, o tubo seria vertido para descarte das 3 camadas superiores, e com o auxlio
de um Swab seria feita a limpeza do tampo de detritos presente nas paredes do tubo.
Caso as 3 camadas no fossem descartadas simultaneamente devido ao tampo de
detritos, deveria ser usado um palito para separ-lo das paredes do tubo. Aps a
obteno dos sedimentos, com o auxlio de uma pipeta de Pasteur seria coletado parte
do mesmo e colocado em lmina e coberto com lamnula para posterior anlise. Mas
assim como no primeiro mtodo, a segunda parte do processo no foi realizado e no
houve confeco de lminas.

5 DISCUSSO

Os mtodos de Sedimentao Espontnea ou Mtodo de Lutz ou Horrman, Pons &

Janer (HPJ) e Centrifugo-Sedimentao pela Formalina-ter ou Mtodo de Ritchie
foram realizados no laboratrio de qumica orgnica da Fundao Comunitria de
Ensino Superior de Itabira, utilizando como suporte um roteiro de prtica. Com o
objetivo de ensinar os alunos a realizarem tais mtodos evitando a ocorrncia de erros,
as tcnicas foram focadas apenas na execuo dos procedimentos de sedimentao e
centrifugao, sem a necessidade de completar os mtodos com a confeco e anlise de
lminas.

O procedimento de sedimentao espontnea realizado foi dado como incompleto em

razo do tempo limitado para realizao da aula prtica. No foi possvel deixar a
amostra sedimentar pelo tempo adequado (2 horas), fazer uma nova lavagem e aguardar

a sedimentao por mais uma hora. Deve-se ressaltar que a amostra fecal utilizada pelo
grupo estava muito turva, portanto, a lavagem seria necessria.

Sabendo-se que o foco da prtica no era a confeco de lminas e que o procedimento

no foi finalizado, no possvel apresentar um resultado e afirmar se haviam ou no
ovos de parasitos na amostra.

A figura a seguir mostra o clice de sedimentao aps cerca de uma hora em repouso.
Nota-se que a amostra utilizada, devido sua turbidez, necessitaria de nova lavagem para
obteno de sedimentos em condies melhores de anlise.

O procedimento de sedimentao por centrifugao foi realizado como proposto e,

apesar de ter-se utilizado reagentes fora do prazo de validade, a tcnica foi bem
sucedida.

Aps a adio da formalina e do acetato de etila (reagente utilizado pelo grupo no lugar
de ter), foi possvel observar as quatro fases que eram esperadas. A figura a seguir
mostra de forma clara as quatro fases, sendo que a mais superior composta por acetato
de etila, a segunda composta por detritos fecais (material encontrado na amostra fecal
e que causa prejuzos na visualizao da lmina, portanto deve ser separado e
descartado), a terceira fase composta pela formalina e a fase mais inferior, presente no
fundo do tubo Falcon, composta pelo sedimento que seria utilizado para confeccionar as
lminas para anlise microscpica.

Aps obteno da amostra como mostrada anteriormente, o processo poderia ter sido
continuado, vertendo o sobrenadante, limpando os detritos restantes na parede do tubo e
coletando parte do sedimento para confeco de lmina.

6 CONCLUSO

Aps a realizao das duas metodologias descritas no relatrio, pode-se concluir a

importncia da realizao correta de cada uma delas, ressaltando que cada uma melhor
utilizada na busca de determinadas evidncias parasitolgicas. Em caso de ovos de
parasitas que apresentam tamanho e densidade mais elevadas, um simples procedimento
de sedimentao espontnea apresenta o resultado pretendido. Em casos de ovos menos
densos, a sedimentao por centrifugao mais bem empregada, uma vez que a fora
utilizada durante o procedimento aumenta as chances de encontrar as evidncias
necessrias para liberar um resultado correto.

7 BIBLIOGRAFIA
DE CARLI, Geraldo Attilio. Parasitologia Clnica: Seleo de mtodos e tcnicas de
laboratrio para o diagnstico das parasitoses humanas / Geraldo Attilio de Carli 2.ed.
So Paulo: Atheneu, 2007.