Cromatografia

Definio
Tipos

Cromatografia em Camada Delgada

Aplicaes
Tcnica Geral
Vantagens
Desvantagens

Toxicidade e Primeiros Socorros

Descarte de Resduos
EPIs e EPCs
Referncias

cromatografia

um

mtodo

fsico-qumico

de

separao dos componentes de uma mistura. Essa

tcnica se destaca devido sua facilidade em efetuar a

separao, identificao e quantificao das espcies

qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras

tcnicas instrumentais de anlise.

realizada atravs da distribuio destes componentes

entre duas fases, que esto em contato ntimo. Uma das

fases permanece estacionria enquanto a outra se move

atravs dela.

Durante a passagem da fase mvel sobre a fase

estacionria, os componentes da mistura so distribudos
entre as duas fases, de tal forma que cada um dos

componentes

seletivamente

retido

pela

fase

estacionria, resultando em migraes diferenciais destes

componentes, ou seja, os componentes da amostra tm

diferentes

velocidades

estacionria.

ao

passarem

pela

fase

A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na

separao dos componentes de uma mistura slidolquido onde a fase mvel (lquida) migra sobre uma

camada delgada de ADSORVENTE retido em uma

superfcie plana (fase estacionria slida). O processo

de separao est fundamentado, principalmente no

fenmeno de ADSORO.

um p insolvel, dividido de forma

muito fina, inerte e capaz de adsorver
as toxinas ou outras substncias em sua
superfcie extensa.

Na adsoro as molculas de um lquido (fase mvel)

unem-se superfcie do adsorvente (fase estacionria

slida). As foras que unem a molcula superfcie so
as interaes moleculares.

grau

de

adsoro

depende

da

temperatura,

da presso, da rea da superfcie e da fora das

interaes moleculares.

A intensidade das interaes varia na seguinte ordem

aproximada:

Formao de sal

Ligao de
Hidrognio

Coordenao

Dipolo
dipolo

Van der
Waals

importante ressaltar que Absoro diferente de

Adsoro. Na Absoro, uma substancia se infiltra na
outra, enquanto que a Adsoro apenas superficial.

Absoro

Adsoro

Estabelecer a identidade de dois compostos;

Determinar o nmero de componentes de uma mistura;

Determinar o solvente apropriado para uma separao por

cromatografia em coluna;

Monitorar uma separao realizada por cromatografia em

coluna atravs da identificao de fraes coletadas;

Checar a eficincia de uma separao;

Monitorar o andamento de uma reao.

Preparao das placas cromatogrficas e ativao:

Espalhamento e placas pr-fabricadas.
Adsorvente usado: Slica gel

Fonte: http://www.chinasilicagel.com/3-drying-indicator/5-1b.jpg

Fonte: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422005000300030

 Existem vrias formas bastante simples de preparar a

placa. Uma delas consiste em preparar a suspenso

do adsorvente no solvente adequado (na maioria das
vezes o dispersante utilizado a gua) e, mantendo-se
a placa de vidro na posio horizontal transferir a

suspenso para a superfcie da placa, espalhando-se

de maneira uniforme manualmente (com um basto

de vidro) ou com o auxlio de um espalhador. A

dificuldade encontrada nesse processo a obteno
de superfcies uniformes.
Aps a deposio, deixa-se a placa secar ao ar.

 A etapa final a transferncia da placa para

uma estufa por um determinado tempo para

que ocorra a sua ativao; o tempo e a
temperatura dependem do adsorvente usado

e da atividade desejada.
A slica, por exemplo, ativada a 105 -110 C

por 30 a 60 minutos. A espessura da camada

de slica a ser depositada de 0,25 mm para

placas analticas e de 1,0 mm para placas

preparativas.

 As placas devem ser: inertes aos reagentes e solventes,

resistentes temperatura e uniformes.

Tambm existem placas cromatogrficas pr-

fabricadas dos adsorventes mais utilizados que esto

disponveis no mercado h algum tempo. Apesar de
terem custo bem mais elevado, dispensam a fase de

preparao e so bem mais uniformes e homogneas,

o que melhora a separao, nessas placas a camada
de adsorvente est depositada sobre uma lmina de

material plstico, alumnio ou vidro.

Fonte: Qumica Orgnica

Experimental Tcnicas de
Pequena Escala

Preparao de uma placa de cromatografia em camada fina

SLICA (SiO2)
A slica empregada na separao de compostos

lipoflicos como aldedos, cetonas, fenis, cidos

graxos,

aminocidos,

alcalides,

terpenides

esterides, usando o mecanismo de adsoro.

ALUMINA (Al2O3)
A alumina geralmente empregada na separao de

compostos lipoflicos e, pelo fato de poder ser

preparada

com

caractersticas

cida,

neutra

alcalina, bastante til na separao de substncias

que apresentam variaes dessas caractersticas.

Aplicao das amostras nas placas cromatogrficas:

Solventes usados: Etanol e Diclorometano

A amostra dissolvida em um solvente voltil para a

aplicao na placa, pois tais solventes podem ser

facilmente

eliminados

aps

aplicao,

evaporao do solvente ajuda a manter as manchas

formadas menores, e quanto menores as manchas

melhor poder ser a separao.
importante ressaltar que a soluo no deve ser

muito diluda, pois exige um grande volume de

amostra, aumentando assim as manchas na placa.

 A evaporao do solvente importante pois se

no evaporado corretamente pode ocorrer

tambm a cromatografia por partio onde a

fase estacionria um slido recoberto com

uma fina camada de lquido, no caso o
solvente que no evaporou

Aplicao na placa de CCD com uma pipeta capilar

Seleo da fase mvel (Eluente): Solventes usados: 1,2

dicloroetano e cido actico
A fase mvel o solvente ou uma mistura de solventes

que usada para eluir uma mistura e promover a

separao dos seus componentes.

A eluio a separao dos componentes de uma

mistura causada por um fluxo de eluente.

A escolha do solvente depende dos materiais a serem

separados. Um solvente que faz com que todo o

material aplicado se mova totalmente com a frente
do solvente muito polar, j um que no movimenta o
material atravs da placa no suficientemente polar.

 s vezes, um nico solvente capaz de

separar todos os componentes da mistura,

porm melhores resultados so obtidos com

misturas

de

solventes,

pois

obtm-se

uma polaridade mdia em relao

polaridade dos componentes da mistura.
Com a expanso do solvente as manchas

formam anis concntricos. Pela aparncia

dos anis pode-se fazer uma avaliao da

aplicabilidade do solvente.

Fonte: Qumica Orgnica Experimental Tcnicas de Pequena Escala

Mtodos dos anis concntricos para testar solvente

Tabela 1: Solventes (eluentes) para a cromatografia

Aumento da
Polaridade e
poder de
solvente
em relao
grupos
funcionais
polares

Preparao da cuba cromatogrfica:

A cuba cromatogrfica o recipiente com tampa

removvel onde a placa fica contida e realizada a

separao.
O nvel do solvente colocado na cuba dever ficar

abaixo dos pontos de aplicao das amostras. Durante a

ascenso do solvente o sistema fica fechado para que a

atmosfera esteja saturada pelo vapor do solvente, isso
importante pois se aberto o sistema o solvente ir se
evaporar para saturar a atmosfera e equilibrar o sistema
liquido-gasoso,
resultados.

podendo

produzir

variaes

nos

Um papel de filtro colocado nas paredes da cuba para

facilitar a saturao, que indispensvel para boa

migrao das substncias.

A placa cromatogrfica dever ser retirada da cuba

somente quando o solvente atingir um limite prdeterminado na parte superior da placa (cerca de 2 cm).

Desenvolvimento do cromatograma:
A placa transferida para uma cuba cromatogrfica

contendo o solvente, que ascende pela placa.

Durante este processo, chamado desenvolvimento do

cromatograma, os vrios componentes da mistura so

separados.
A separao baseada em muitos equilbrios dos

solutos entre as fases mvel e estacionria e resulta das

diferenas de velocidade, nas quais os componentes

individuais da mistura migram pela placa.

Fonte: Qumica Orgnica Experimental

Tcnicas de Pequena Escala

Cmara de desenvolvimento com uma placa de

cromatografia em camada fina

Revelao dos cromatogramas:

Quando

os

compostos

serem

separados

so

coloridos, a separao pode ser acompanhada

visualmente,

porm

mais

frequente

que

os

compostos sejam incolores. Neste caso, deve-se usar

reagentes para torna-los visveis.
Procedimentos usados: vapores de iodo e Lmpadas

de raio UV.

 Fsicos: podem ser visualizados atravs de luz ultravioleta,

por se tornarem fluorescentes quando excitados por essas

radiaes. Quando as substncias no so fluorescentes,

podem-se

utilizar

adsorventes

impregnados

com

reagentes fluorescentes.

Biolgicos e Enzimticos: Utiliza-se reaes enzimticas

ou bacterianas para tornar a mancha visvel.

Tipos de reveladores biolgicos:

Antibiticos
Enzimas
Substratos

Procedimentos Qumicos: Aplicao de um reativo qumico

para formar um derivado colorido ou fluorescente.
Tipos de reveladores qumicos:

Alcalides: Dragendorff, iodoplatinato

Flavonides: NP-PEG

Anti-oxidantes: -caroteno
Saponinas, terpenos e esterides: anisaldedosulfrico
Antraquinonase cumarinas: vapor de amnia

Fenlicos, saponinase terpenides: soluo de CeSO4

Compostos fenlicos: FeCl3

Revelador universal: vapores de iodo

Tcnicas para as revelaes utilizadas:

Raio UV: baseia-se na utilizao de

substncias fluorescentes misturadas slica quando

da preparao das placas, possibilitando a
revelao dos compostos em cmaras de luz
ultravioleta.
Vapores de Iodo: vale-se do fato de que o iodo

complexa-se com compostos insaturados, de modo

que placas que os contenham, ao serem

colocadas em uma cmara contendo cristais

de iodo, apresentaro pontos amarronzados.

Um composto percorre sempre a mesma distncia em relao ao

deslocamento

da

frente

de

solvente.

razo

entre

esses

deslocamentos o valor de Rf.

Rf =

distncia percorrida pela substncia

distncia percorrida pela frente do solvente

Quando as condies so especificadas, Rf constante para um

composto e corresponde uma propriedade fsica do mesmo, os
valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6.

E ele pode ser usado para auxiliar a identificao de uma substncia.

Porm no um mtodo com uma boa exatido, por isso a
identificao do composto deve ser confirmada por outra tcnica.
Portanto, as comparaes feitas do Rf obtido com o Rf de padres
considerado um mtodo qualitativo.

Rf(componente 1) = 22 = 0,35
65

Rf(componente 2) = 50 = 0,77
65

Fcil execuo;
Maior rapidez;
Menor trajeto da fase mvel ;
Boa resoluo;
Manchas em geral menos difusas;
Baixo custo;
Versatilidade.

 Difcil reprodutibilidade: muito difcil a

confeco de duas placas idnticas, com a
mesma quantidade de amostra, etc;

Difcil determinao exata do Rf.

Cafena

Primeiros Socorros

Inflamabilidade: No inflamvel
Contato com a pele: No apresenta riscos.

Lavar com gua em

abundncia

Contato com os olhos: No apresenta riscos. Lavar com gua em

abundncia
Ingesto: O consumo excessivo pode causar
casos de insnia, enxaqueca, tremuras,
palpitaes. Estimulante do SNC.
Inalao: No apresenta riscos.

Paracetamol
Inflamabilidade: No inflamvel
Ingesto: Alto potencial hepatotxico, no devendo ser utilizadas mais que
4000 mg dirias (8 comprimidos de 500mg).
Crianas com menos de 37 kg tem a dose limite diria em 80 mg/kg.
Em indivduos adultos pode ocorrer toxicidade em doses nicas de 10 - 15 g
(20 a 30 comprimidos de 500mg) (150 - 250 mg/kg) e uma dose de 20 a 25 g
(40 a 50 comprimidos de 500mg) pode levar a fatalidade.

cido acetilsaliclico
Inflamabilidade: No inflamvel
Contato com a pele: um composto muito presente em remdios para a
eliminao de verrugas e no tratamento de acne (em baixas
concentraes 0,5%), porm o contato prolongado com a exposio
luz solar, pode causar manchas e queimaduras.
Ingesto :
Toxicidade suave a moderada: 150-300mg/Kg
Toxicidade severa: 300-500mg/Kg
Potencialmente letal: >500mg/Kg
Estimulao do centro respiratrio
H sintomas no sistema nervoso central (zumbido no ouvido incluindo
perda de audio, convulses e coma), a hipoprotrombinemia e edema
pulmonar no-cardiognico .
rgos alvo: o fgado, rins, pulmes e o VIII nervo craniano.
Inalao: Concentrao atmosfrica mxima permitida de 5mg/m3

Acetato de etila

Primeiros Socorros

Inflamabilidade: Inflamvel
Contato com a pele: causar dermatite, remova a vtima para um chuveiro e retire
desengordurante de tecido orgnico
todas as roupas contaminadas, lavar as
partes atingidas do corpo com sabo e
gua corrente durante 15 minutos, pelo
menos.
No
colocar
qualquer
medicamento
ou
produto
qumico,
encaminhe a vtima ao dermatologista.
Contato com os olhos: causa irritao
conjuntival e opacidade da crnea;

lave os olhos imediatamente com grande

quantidade de gua fresca e limpa pelo
menos por 15 minutos. Leve a vtima a um
oftalmologista.

Ingesto: dor de cabea, sonolncia e

inconscincia e tambm pode causar
acidose devido hidrolisao

se a vtima estiver consciente, dar gua

para beber e aps induzir o vmito. Obter
socorro mdico imediatamente.

Inalao: os vapores podem causar irritao

para o sistema respiratrio em altas
concentraes e pode causar dor de
cabea, nuseas, diminuio dos reflexos,
irritao pulmonar e efeitos txicos.
Exposio em concentrao acima de 6000
ppm pode causar dor de cabea e
diminuio dos reflexos.

remova a vtima da rea contaminada, se

necessrio inicie respirao artificial e
obtenha socorro.

cido actico
Inflamabilidade: Inflamvel

Primeiros Socorros
Usar gua, p qumico ou dixido de
carbono.

Lave
imediatamente
em
gua
corrente por, pelo menos, 15 minutos.
Contato com a pele: Causa srios problemas
Remova a roupa contaminada e os
de pele. Os sintomas incluem vermelhido,
sapatos. Lave as roupas e os sapatos
dor e queimaduras.
antes de reutiliz-los. Procure ajuda
mdica.

Contato com os olhos: A soluo pode

causar srios ferimentos seguidos de perda
de viso. A exposio ao vapor pode causar
intensa lacrimao e irritao nos olhos.

Lave imediatamente com gua

corrente por, pelo menos, 15 minutos,
abrindo e fechando as plpebras.
Procure ajuda mdica imediatamente.

Ingesto: A ingesto pode causar graves

ferimentos e levar morte. Os sintomas so
dor de garganta, vmito e diarreia. A
ingesto de 1 ml resulta em perfurao do
esfago.

NO INDUZA O VMITO! Se possvel,

d grandes quantidades de gua ou
leite. Nunca d algo pela boca para
uma pessoa inconsciente. Procure um
mdico imediatamente.

Inalao: Pode causar irritao nas mucosas

do nariz, garganta, pulmo e dificuldade na Levar a pessoa para um lugar arejado
respirao.

Diclorometano
Inflamabilidade: Vapores inflamveis.
Contato com a pele: Pode causar uma
irritao da pele.

Primeiros Socorros
Usar CO2, espuma, p qumico ou
gua
Lavar abundantemente com gua. Tirar
a roupa contaminada.

Contato com os olhos: Pode causar uma

irritao dos olhos.

Enxaguar abundantemente com gua,

mantendo a plpebra aberta (durante
pelo menos 10 minutos). Consultar
imediatamente um oftalmologista.

Ingesto: Pode ser perigoso se for

engolido

Ateno em caso de vmitos. Perigo

de aspirao! Manter livres as vias
respiratrias. Beber muita gua.
Administrao posterior de: Carvo
ativado (20 - 40 g, numa suspenso a
10%). Chamar um mdico.

Inalao: Facilmente absorvido pelas vias

respiratria e drmica. um depressor do
sistema nervoso central e irritante de
mucosas. Produz monxido de carbono
no organismo, o que impossibilita o
transporte do oxignio para os tecidos,
provocando hipxia. Possui potencial
mutagnico.

Exposio ao ar fresco. Eventualmente,

respirao artificial ou ventilao com
aparelhagem apropriada. Manter livres
as vias respiratrias. Chamar um
mdico caso o sinistrado se queixar de
dores ou de mal-estar geral.

Etanol

Primeiros Socorros

Inflamabilidade: Inflamvel

Usar p qumico seco, dixido de

carbono gua ou espuma de lcool.

Contato com a pele: Causa dermatoses e

irritaes moderadas.

Lave imediatamente com gua

corrente e sabo. Remova a roupa
contaminada e os sapatos. Procure
ajuda mdica. Lave as roupas e os
sapatos antes de reutiliz-los.

Contato com os olhos: Causa severa irritao nos

olhos. Pode causar conjuntivite e problemas na
crnea.

Lave imediatamente com gua

corrente por, pelo menos, 15 minutos,
abrindo e fechando ocasionalmente as
plpebras. Procure ajuda mdica
imediatamente.

Ingesto: mostra-se relacionada dose, mas a

tolerncia varia amplamente entre os indivduos.
Nveis sangneos maiores do que 100 mg/dl
definem, em termos legais, o estado de
intoxicao e esto tipicamente associados com
ataxia; com 200 mg/dl, os pacientes esto
sonolentos e confusos. Com nveis acima de 400
mg/dl geralmente h depresso respiratria,
podendo levar morte. Pode causar problemas no
fgado, rim e corao.

INDUZA O VMITO! D de 2 a 4 copos

de gua ou leite se a pessoa estiver
consciente. Nunca d algo pela boca
para uma pessoa inconsciente.

Inalao: Causa irritao no trato respiratrio. Em

altas concentraes, causa problemas no sistema
nervoso central, dor de cabea, inconscincia e
coma. Pode causar efeitos narcticos.

Remover o indivduo ao ar livre. Se no

estiver respirando, fazer respirao
artificial. Se respirar com dificuldade, d
oxignio. Procure ajuda mdica.

Metanol

Primeiros Socorros

Inflamabilidade: Inflamvel Importante: a chama quando o metanol

est queimando limpa e clara, praticamente invisvel a luz do dia!

- Incndios pequenos: p, dixido de

carbono, hlon, gua pulverizada, espuma
comum
- Incndios grandes: gua pulverizada,
espuma do tipo AFFF(R) (com formao de
pelcula aquosa resistente ao lcool) com
sistema de proporo de espuma de 3% ou
6%

Contato com a pele: absorvido atravs da pele e o contato com o

lquido provoca desengorduramento e dermatite.

Lavar com gua em abundncia e retirar

vestes contaminadas

Contato com os olhos: irritao da crnea e raramente opacificao no

contato com os olhos na forma lquida do metanol.

Lavar com gua em abundncia e observar

a plpebra superior e inferior se h alguma
irritao. Em qualquer complicao, procurar
o oftalmologista

Ingesto: Uma dose de 30-100 mL pode ser fatal para o homem.

Distrbios digestivos: nuseas, vmitos, diarreia e dor abdominal. Distrbios
neuropsquicos: dor de cabea, vertigens, embriaguez, astenia,
sonolncia, coma, dilatao das pupilas, diminuio da acuidade visual
e cegueira, devido degenerao das terminaes da retina e do nervo
ptico. Hemorragia cerebral, leses do crebro e cerebelo.
Distrbios hemodinmicos: hipotenso e insuficincia cardaca. A morte
pode ser em conseqncia de insuficincia respiratria ou cardaca.

dosagens acima de 40 ml/dl indica uso de

antdoto especfico: etanol (lcool etlico) EV
ou VO. Nveis acima de 50mcg/dl e a
presena de acidose metablica indicam
uso de etanol + hemodilise, para melhor
prognstico do caso.

Inalao: a inalao de concentraes elevadas de vapores de metanol

(acima de 2.000 ppm) provoca irritao das membranas mucosas do
trato respiratrio e sinais e sintomas de efeitos sistmicos: Distrbios
neurolgicos: dor de cabea, fadiga, insnia, vertigens, tremores, rudo
nos ouvidos, viso turva, viso dupla e cegueira. Distrbios locais: irritao
e coceira na pele, dermatite e eczema. Distrbios digestivos: nuseas,
vmito e clica. A exposio a concentraes de 25.000 ppm
imediatamente perigosa para a vida e a sade

Levar a vtima a um espao ventilado. Se

necessrio, reanime a pessoa ou ajude-a a
respirar.

Recipientes adequados e rotulados

pelas tcnicas
Posterior descarte por empresa
especializada

Jaleco de algodo de manga comprida e comprimento at o

joelho, calas compridas, sapato fechado, cabelos presos

Livros

COLLINS, CarolCarolH. H. etetal, introdual, introduo a mo mtodos

cromatogrtodos cromatogrficos, 6ficos, 6eded, ed. , Unicamp,Campinas,1995.

NETTO, J. Z., CAZETTA, J. O. Cromatografia Plana, FunepFunep, Jaboticabal, 2005 ,

THE MERCK INDEX, 13th, ed. MerckMerck& CO., Inc., Usa, 2001.& 2001.

BRAGA, G.L. Introduo a Mtodos Cromatogrficos. 6 Edio

COLLINS, C.H.; BRAGA,G.L.; BONATO,P.S. Fundamentos de Cromatografia. So

Paulo: da Unicamp, 2006. 456p.

Sites:

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http://amam.forumeiros.com/t93-metanol-ch3oh-e-nitrometano

http://www.methanex.com/products/documents/MSDS_EUportugues.pdf

http://www.qca.ibilce.unesp.br/prevencao/produtos/etanol.html

http://www.ff.up.pt/toxicologia/monografias/ano0607/aspirina/toxicidade.html

http://www.qca.ibilce.unesp.br/prevencao/produtos/acido_acetico.html

http://www.slideshare.net/b.cortez/cromatografiaprincpios-cg