Pesquisa

Produo de Esferas
de QUITOSANA
Meio para interao com metais em fase aquosa

Rejane Celi Goy, MSc

PPG Interunidades em Cincia e Engenharia de
Materiais - Universidade de So Paulo - USP
So Carlos, SP.
rejanegy@terra.com.br

Odilio B. G. Assis, Dr.

Embrapa Instrumentao Agropecuria
So Carlos, SP.
odilio@cnpdia.embrapa.br

Srgio P. Campana-Filho, Dr.

Instituto de Qumica de So Carlos - IQSC
Universidade de So Paulo - USP
So Carlos, SP.
scampana@iqsc.usp.br
Ilustraes cedidas pelos autores

Introduo
A quitina um polissacardeo
extremamente abundante na natureza, perdendo somente para celulose
em disponibilidade. Pode ser encontrada em diversos organismos como
em insetos e crustceos, sendo o principal constituinte das cascas de camaro e das carapaas de caranguejo. A
quitosana tambm um polissacardeo
que ocorre naturalmente em alguns
fungos, mas que geralmente obtido
pela desacetilao da quitina, uma
reao que pode ser executada em
diferentes condies empregando diferentes alcalis. Entretanto, a execuo da reao de desacetilao de
quitina em temperaturas elevadas e
empregando solues concentradas
de NaOH o mtodo mais usual para
a obteno de quitosana (Campana &
Desbrires, 2000).
A quitosana pode ser definida
como um copolmero de 2amino-2
desoxiDglicopiranose e 2
acetamido2deoxiDglicopiranose,
de composio varivel em funo do
grau residual de acetilao, cujas unidades tambm esto unidas por ligaes (14) (Figura 1). O termo
quitosana usado para identificar
copolimeros contendo mais de 50% a

Figura 1: Representao esquemtica da estrutura primria idealizada de

quitosana, sendo n = grau de polimerizao.

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60% de unidades desacetiladas, enquanto quitina corresponde a produtos muito mais acetilados. Como conseqncia de seus diferentes contedos de unidades acetiladas, quitina e
quitosana possuem diferentes graus
de solubilidade, sendo que quitina
insolvel na maioria dos solventes,
enquanto a quitosana solvel em
solues aquosas de cidos orgnicos
e inorgnicos.
As caractersticas e propriedades
de quitosanas comerciais variam de
acordo com os fatores do processo de
manufatura. Tais propriedades incluem grau de pureza, solubilidade, viscosidade, grau de desacetilao, massa molecular e a capacidade de
interagir com diferentes substncias. A
habilidade de adsorver metais, por
exemplo, depende do processo de
hidrlise dos grupos acetamido. Assim, a desacetilacao homognea de
quitina resulta em quitosana com maior capacidade de adsoro do que
aquela preparada por processo heterogneo, ainda que os polmeros tenham o mesmo grau de acetilao (Li,
1992).
De fato, uma das mais importantes propriedades da quitosana a de
agir como quelante (Li, 1992), pois
esta pode se ligar seletivamente a
substncias como o colesterol, gorduras, protenas, clulas tumorais, e tambm a ons metlicos, o que tem
originado sua explorao em diversas
aplicaes nos ltimos vinte e cinco
anos (Mathur, 1990; Roberts, 1992;
Kurita, 1986). A capacidade da
quitosana em interagir fortemente com
ons metlicos dissolvidos em meios
aquosos consideravelmente superi-

or apresentada pela quitina. Contudo, sua aplicao em processos de

descontaminao fica limitada a
efluentes de baixa acidez (pH > 6-7),
considerando que a quitosana solvel em meios de acidez moderada a
forte, o que impede, ou pelo menos
dificulta, sua utilizao na forma de
filtros, membranas ou colunas (Roberts,
1992; Li, 1992; Kurita, 1986). As alternativas viveis para estender as possibilidades de emprego de quitosana
como quelante de ons metlicos a
uma faixa mais ampla de pH so: i) a
introduo de substituintes acila portadores de cadeias relativamente longas
(Guibal, 1997); ii) a introduo de
substituintes quelantes , como grupos
aldedos (Peter, 1995) e iii) o estabelecimento de um certo nmero de
entrecruzamentos ou ligaes
covalentes intercadeias (Kurita, 1986;
Guibal,1997; Koyama, 1986; Goy et
al., 2002).

Algumas aplicaes de
quitosana
A produo industrial e o uso de
quitina e seus derivados, principalmente a quitosana, encontra-se em
constante crescimento. Os principais
fatores para este interesse podem ser
atribudos a: i) abundncia de matriaprima; ii) possibilidade de utilizao
de rejeitos fartos e de baixo custo
oriundos da indstria pesqueira e iii)
volume de pesquisas confirmando e
ampliando continuamente o potencial
de aplicao desses materiais. A Tabela 1 exemplifica de forma sucinta algumas reas nas quais a quitosana tem
sido aplicada, sendo a medicina e
biotecnologia os campos mais investigados.

Esferas de quitosana e
entrecruzamento
Quitosanas no formato de esferas
e microesferas tm sido produzidas e
amplamente empregadas em diversas reas de biotecnologia, principalmente como veculos de transporte e
liberao de drogas ou substncias no
organismo (Genta, 1998; Josu, 2000).
Trabalho recente (Chiou & Li, 2003)
tambm relata o seu uso como meio
de interao e remoo de tintas pre-

quitosana em soluo cida, facilitando assim a interao eletrosttica com

as cargas negativas dos corantes e
pigmentos presentes nas tintas. Como
em pH baixo a quitosana pode se
dissolver, o entrecruzamento das suas
cadeias tem sido sugerido para tornar
o polmero mais estvel e para facilitar
a sua recuperao. Diversos reagentes
entrecruzantes bifuncionais podem ser
aplicados, contudo, o glutaraldedo o
mais empregado.
Nesse sentido, Koyama e colaboradores, 1986, compararam o comportamento de quitosanas solveis e
Figura 2: Gotejamento manual da
quitosanas homogeneamente
soluo de quitosana com seringa de
entrecruzadas com glutaraldedo no
insulina.
que diz respeito adsoro de ons
sentes em efluentes industriais. O for- cobre numa ampla faixa de pH. Obmato esfrico preferencialmente servaram que o entrecruzamento das
desejado por apresentar a vantagem cadeias de quitosana diminuiu a
de uma melhor caracterizao superfi- cristalinidade do polmero, contribuincial, permitindo o estabelecimento de do para aumentar a capacidade de
parmetros geomtricos teis para adsoro de ons cobre. Constataram
reprodutibilidade do processo e para tambm que a razo molar grupos
comparaes, alm de aspectos como aldedo (do glutaraldedo) / grupos
otimizao de empacotamento em amino (da quitosana) empregada na
reatores e dispositivos de filtrao.
reao de entrecruzamento exerce
Indstrias txteis, de papel, cou- forte influncia sobre a capacidade de
ro, plsticos, etc, invariavelmente ge- adsoro do material resultante. Enquanto a quitosana original adsorveu
cerca de 74% de ons Cu2+, este valor
elevou-se para 96% quando foi utilizada a quitosana entrecruzada empregando razo aldedo/amino=0,7/1.
Porm, foi observado que a utilizao
de excesso de glutaraldedo resultava
em diminuio da capacidade de
adsoro diminua. O aumento inicial
na capacidade de adsoro foi atribudo ao aumento da hidrofilicidade do
Figura 3: Esferas em processo de neutraliza- material e a maior acessibilidade aos
o de pH.
grupos quelantes resultante da destruio parcial da estrutura cristalina da
ram quantidades de efluentes que pre- quitosana causada pelo seu
cisam de tratamento adequado e a entrecruzamento. Por outro lado, a
quitosana presta-se a essa aplicao subseqente diminuio da capacidapor sua alta capacidade de adsoro. de de adsoro foi atribuda ao aumenOs agentes usualmente utilizados em to da hidrofobicidade do material e
escala industrial para a adsoro de devido a formao das bases de Schiff.
tintas apresentam capacidades de re- Assim, pode ser concludo que o grau
moo que podem variar de 50g/Kg a de entrecruzamento deve ser
at 600kg/Kg. Contudo, a capacidade otimizado para garantir a insolubilidade
de adsoro pode ser elevada para do polmero sem entretanto diminuir
valores prximos de 1000g/kg-1100g/ sua capacidade de interao. Alem
kg quando quitosana empregada disso, o grau de entrecruzamento deve
como composto coadjuvante (Chiou, se adequar a aplicao, levando-se em
2003). Essa capacidade deve-se a considerao a massa molar da
protonao dos grupos amino da quitosana e a acidez do meio em que
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estar interagindo.

placa de Petri e seco temperatura

ambiente.

Obteno de quitosana a
partir da quitina

Purificao da quitosana

Neste estudo, quitina comercial

extrada de cascas de caranguejo
(Sigma; lote no 84H7175, C-7170), foi
empregada para a preparao de
quitosana. Para a execuo da reao
de desacetilao de quitina, adotou-se
a seqncia estabelecida por Horton
& Lineback, 1965, sendo a quitina
triturada e ento suspensa em soluo
aquosa de NaOH (40%), sob agitao
mecnica constante a temperatura de
115 2oC. A reao prosseguiu nessas
condies por 6 horas. O meio reacional
foi ento filtrado e o precipitado abludo
com gua destilada at a neutralidade,
sendo em seguida lavado com metanol.
O precipitado foi transferido para uma

Embora no seja um procedimento estritamente necessrio nas aplicaes industriais, a quitosana pode passar por um processo de purificao
para a remoo de sais remanescentes
da desacetilao (principalmente
acetato de sdio), impurezas e materiais insolveis (principalmente quitina
insuficientemente desacetilada). Assim, a purificao disponibiliza mais
grupos polares, aumentando a capacidade de interao (Assis, et al., 2004).
Como procedimento de purificao
adotou-se a seqncia proposta por
Signini & Campana-Filho, 2001, ou
seja, dissolveu-se 1,0g de quitosana
lentamente em 300mL de cido actico

Tabela 1: Algumas aplicaes da quitosana (Sanford, 1988, Laranjeira, 1995; Jameela,

1995; Gupta, 2000; Assis et al., 2003).
Aplicaes

Exemplos

Tratamento de gua

Na remoo de ons metlicos atravs da quelao; como agente floculante para a

eliminao de substncias como protenas, corantes e herbicidas; clarificao e
filtrao a partir de membranas a base quitosana.

Polpa e papel

No tratamento de superfcies celulsicas com a finalidade de aumentar a dureza

sem alterao do brilho; na obteno de papel isolante resistente ao
envelhecimento; no uso em papel fotogrfico para elevar as propriedades
antiestticas.

Medicina e biotecnologia

Em formulaes contendo quitosana contra o colesterol; no combate de clulas

cancergenas, como no tratamento da leucemia; na preparao de lentes de
contato; na produo de membranas para dilise; como agente anticoagulante
sangneo; na produo de curativos inteligentes e na fabricao de microesferas
para liberao controlada de drogas.

Cosmticos

Na remoo de sobras de goma em xampu; em cremes de limpeza e demais

compostos de tratamentos de pele e cabelo.

Agricultura e
processamento de
alimentos

No tratamento na superfcie da semente para a inibio de fungos; na remoo de

corantes em sucos ctricos; na remoo de slidos, b-caroteno e substncias
cidas de sucos de ma e de cenoura; na clarificao de vinhos e em coberturas
comestveis protetoras para frutos.

Tabela 2: Viscosidades intrnsecas ([]), constantes de Huggins (kH), massas molares

mdias viscosimtricas ( M v ) e graus mdios de acetilao ( GA ) da quitosana.

Figura 4: Esferas de quitosana: (a) sem entrecruzamento e (b) aps entrecruzamento

com glutaraldedo (sem escala).
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(0,5M), mantendo a suspenso resultante sob agitao contnua por aproximadamente 24 horas a temperatura
ambiente. Aps este perodo a soluo foi seqencialmente filtrada sob
presso positiva atravs de uma srie
de membranas com tamanhos de poros decrescentes (8,0m, 5,0m,
0,8m e 0,45m) para remoo de
fraes insolveis e gis. O material
filtrado foi neutralizado com NH4OH
concentrado provocando a precipitao da quitosana. O precipitado foi
separado do sobrenadante por filtrao e ento lavado exaustivamente
com gua destilada, seguido de imerso
em metanol e secagem a temperatura
ambiente.

Preparao das esferas

Trs metodologias podem ser
empregadas para a obteno de esferas de quitosana com dimenses controladas: i) Por coagulao, na qual a
quitosana dissolvida em meio cido
e gotejada sobre um banho alcalino
coagulante para formao das esferas;
o entrecruzamento executado aps
a obteno e neutralizao das esferas;
ii) Por inverso de fases, sendo as
microesferas obtidas in situ pela dissoluo da quitosana em meio cido
contendo
o
agente
de
entrecruzamento e disperso da fase
aquosa em uma fase oleosa de maneira a obter materiais insolveis e, iii)
Pela tcnica de spray-drying, na qual a
quitosana purificada dissolvida em
meio cido e a esta adicionado o
agente entrecruzante. A soluo ento
sugada por uma bomba peristltica e
as microesferas so formadas pela ao
de ar comprimido que interrompe o
fluxo e promove a formao das esferas.
A tcnica mais simples , sem
dvida, a de coagulao em meio
alcalino pelo gotejamento do
polissacardeo dissolvido em cido e
que foi aqui adotada. Assim, cerca de
1,5g de quitosana purificada foram
dissolvidas em 37,5mL de soluo de
cido actico 5% (m/v). A soluo
obtida, extremamente viscosa, foi gotejada manualmente com o auxlio de
uma seringa sobre soluo de hidrxido
de sdio concentrado (2,5M), o que
provoca a imediata coagulao do gel

em formato esfrico, Figura

Aps o entrecruzamento
2. A altura do gotejamento,
observa-se a formao de
as caractersticas da seringa e
pequenas estruturas granuda viscosidade (concentralares uniformemente distrio) so parmetros fundabudas na superfcie, origimentais que devem ser obnalmente no rugosa. Consservados
para
a
tata-se, contudo, que o
reprodutibilidade do procesentrecruzamento no gera
so.
poros na superfcie, preserAs esferas coaguladas fovando praticamente as diram mantidas na soluo almenses originais das esfecalina por 16 horas, filtradas e
ras antes do reticulamento.
lavadas abundantemente
A condio que mais se dicom gua destilada at o
ferencia a da liofilizao
equilbrio do pH da gua de
(Figuras 5 (e) e (f)), em que
lavagem (Figura 3). Aps esta
a esferas apresentam maior
etapa as esferas foram divididimetro (2x103m ou
das em trs fraes para a
2m) e superfcie altamenobteno de dados comparate porosa, caracterizando
tivos: (a) parte das esferas foi
uma estrutura do tipo essubmetida reao de
ponja.
entrecruzamento com
A ocorrncia de poros
glutaraldedo, (b) parte foi
na superfcie das esferas no
seca a temperatura ambien uma caracterstica indesete sem entrecruzamento e
jvel, pelo contrrio. De
(c) uma frao, no
fato, esta caracterstica pode
entrecruzada, congelada em Figura 5: Fotomicrografias das esferas de quitosana obtidas por se tornar um fator determinitrognio lquido e liofilizada. MEV: (a) esfera seca a temperatura ambiente; (b) idem a (a), nante na interao do polisO entrecruzamento con- caractersticas da superfcie; (c) esfera entrecruzada com glut- sacardeo com o meio, consistiu na reao de quitosana araldedo; (d) idem a (c), aspecto superficial; (e) esfera liofiliza- siderando que quanto maior
com soluo aquosa conten- da e superfcie resultante (f).
a rea superficial melhor
do o agente entrecruzante
ser
sua
interao
e conseqentemente a capacidade
durante uma noite. A concentrao do o final seria necessrio a utilizao
glutaraldedo foi fixada em 2,5% e a de demais tcnicas complementares de adsorver metais.
razo entre glutaraldedo e quitosana como a cromatografia de permeao
Testes de interao com Cu2+
foi de aproximadamente 15mL/g. Aps em gel e mtodos de espalhamento
em meio aquoso
o tempo de reao as esferas foram de luz, para obter evidncias definitiexaustivamente lavadas com gua vas.
Relativamente s esferas, o
Para avaliar a interao dessas
destilada, sendo a gua de lavagem
testada com reagente de Feder (Morita entrecruzamento com glutaraldedo esferas com ons Cu2+ foram realizados
& Assumpo,1995) at que o modifica o aspecto visual do material, testes simples nos quais 50 mg de
sobrenadante aparecesse isento do introduzindo alterao da cor, tenden- esferas (isoladamente em cada condido a amarelo, Figura 4.
o) foram mantidas em soluo aquoaldedo.
O carter hidrofbico da quitosana sa de CuCl2 (50 mg) sob agitao
entrecruzada plenamente compro- constante por trs dias, pH5,3 e temCaractersticas das esferas
vado por testes de solubilidade, assim peratura mdia de 25oC. Aps este
As principais caractersticas da como alteraes, no apenas na colo- perodo o sobrenadante foi removido
quitosana obtida pela desacetilao da rao, mas na morfologia podem ser e analisado quanto ao contedo de
quitina comercial esto apresentadas melhor observadas por microscopia ons cobre por espectroscopia de abna Tabela 2. Os dados caracterizam eletrnica. A Figura 5 apresenta as soro atmica, sendo os resultados
um material com alto grau de micrografias das esferas nas condies apresentados na Tabela 3.
desacetilao (em torno de 90%) e avaliadas.
Como pode ser constatado pelos
Pelas micrografias pode ser ob- dados acima, a presena de poros nas
mdia massa molar.
Os valores das constantes de servado que no caso das esferas secas esferas parece ser um fator fundaHuggins encontrados demonstram que temperatura ambiente e sem mental para promover a adsoro dos
as solues so de boa qualidade, entrecruzamento (Figura 5 (a) e (b)) ons de cobre. De fato, as esferas
embora esses valores no sejam no h a ocorrncia de poros em sua liofilizadas, que possuem superfcies
indicativos definitivos que no possu- superfcie e as esferas possuem di- porosas conforme constatado por
am agregados. Para uma comprova- metro de aproximadamente 800m. microscopia eletrnica de varredura,
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Tabela 3: Quantidades de moles de ons Cu2+ remanescentes nas solues e a

porcentagem de remoo desses ons por esferas de quitosana no entrecruzadas,
entrecruzadas e liofilizadas.

Amostra

Moles de Cu2+ remanescentes

na soluo

Remoo de
ons Cu2+ (% )

Esfera no-entrecruzada

6,69 x 10-5

43

Esfera entrecruzada

9,02 x 10-5

23

Esfera liofilizada

1,03x10

-6

apresentaram capacidade de remoo

de ons cobre muito superior quelas
exibidas pelas esferas de quitosana,
entrecruzadas ou no. Assim, tal fato
atribudo a maior acessibilidade dos
ons cobre aos stios quelantes (grupos
amino) da quitosana. Por outro lado, a
menor capacidade de interao exibida pelas esferas entrecruzadas de
quitosana deve ser atribuda ao estabelecimento de ligaes entrecruzadas,
as quais se formam por reao dos
grupos amino de quitosana com molculas de glutaraldedo. Assim, o consumo de grupos amino na reao de
entrecruzamento responsvel pela
menor capacidade de quelao das
esferas entrecruzadas, pois uma menor quantidade de stios quelantes fica
disponvel para a interao com os
ons cobre presentes na soluo.
Cabe salientar, entretanto, que
esses resultados se referem a uma
condio fsico-qumico especifica, i.
e., os experimentos de interao foram realizados em pH=5,3 e, considerando que o grau de intumescimento
dos materiais base de quitosana
funo do pH, assim como a especiao
dos ons cobre tambm depende da
acidez do meio, outras condies devem ser investigadas para permitir
uma comparao mais abrangente
entre esses materiais.
Embora as esferas entrecruzadas
adsorveram uma menor quantidade
de ons, cabe salientar que as anlises
aqui apresentadas foram conduzidas
em pH da gua destilada, no qual
nenhum dos materiais solvel. Para
pHs mais cidos os resultados evidentemente sero diferentes, em decorrncia da insolubilidade do material
entrecruzado.

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