Pesquisa

Biotransformao de
LEOS E GORDURAS
Utilizao de lipases para obteno de biocombustvel

Maria da Graa Nascimento

Doutora em Qumica Orgnica pela UNICAMP

e professora do DQ-UFSC
graca@qmc.ufsc.br

Pedro Ramos da Costa Neto

Doutorando no DQ-UFSC
Licenciado pelo CEFET/PR
ramos@qmc.ufsc.br

Lilian Maria Mazzuco

Iniciao Cientfica no DQ-UFSC

lilian@newsite.com.br
Departamento de Qumica
Universidade Federal de Santa Catarina - SC
Fotos cedidas pelos autores

Aspectos Gerais
As lipases, E.C.3.1.1.3., fazem parte de um grupo de enzimas hidrolticas, com cerca de 300 resduos de
aminocidos, que catalisam a quebra
de ligaes steres de acil gliceris.
Elas no requerem cofatores, so de
baixo custo, regioespecficas, atuam
em uma larga faixa de pH e, alm de
efetuar reaes de hidrlise, podem
tambm exercer atividade cataltica
(Figura 1).

nesse seguimento ainda no est suficientemente difundido (Bon e Pereira 1999). Segundo alguns trabalhos, que fazem parte da literatura, as
lipases tm sido empregadas em processos de extrao de leos, melhoramento das propriedades fsicas e
nutricionais de gorduras por interesterificao (Macrae 1983, Pecnik e
col.1992, Konishi e col. 1995, Hayes
1996, Glosh e col.1997, Facioli e col.
1998), limpezas de tripas em abatedouros bovinos (Burin e col.1994),
hidrlise e degomagem de leos vegetais na industria (Bon e Pereira
1999).
Biocombustveis

Figura 1. Reaes
catalisadas por lipases

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Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

As lipases so dotadas de uma

especificidade pelo substrato que
supera todas as outras enzimas conhecidas. Isso lhes confere uma aplicao de fronteiras. Elas podem ser
empregadas na produo de frmacos, cosmticos, detergentes, alimentos, perfumaria, diagnsticos mdicos, sntese de compostos opticamente ativos, resoluo de racematos, produo de aromas e fragrncias, modificaes de gorduras e tratamento de couros (Basheer 1995, Bon
e Pereira 1999, Faber 1997).
Considerando-se as transformaes de leos e gorduras em derivados ou matrias-primas industriais, o
potencial de aplicaes de enzimas

Com exceo de hidreltricas e da

energia nuclear, a maior parte de
toda a energia consumida no mundo
vem do petrleo, do carvo e do gs
natural. Como essas fontes so limitadas e devero se esgotar no futuro, a
viso de uma fonte alternativa de
energia de vital importncia.
A produo de biocombustveis
alternativos para o leo diesel, provenientes de leos vegetais brutos,
tem sido tema de diversos estudos.
Historicamente, relata-se que o prprio Rudolf Diesel desenvolveu pesquisas utilizando leos vegetais em
seus motores. Apesar de favorvel
energeticamente, o uso direto desse
produto em motores problemtico
devido sua alta viscosidade (11 a 17
vezes maior que a do leo diesel) e
baixa volatilidade, o que impede a
sua queima completamente, formando depsitos nos bicos injetores dos
motores. Deve-se considerar tambm,
que a decomposio do glicerol produz acrolena (substncia altamente

txica).
Portanto, visando a reduzir a alta
viscosidade dos leos vegetais, diferentes alternativas tm sido consideradas, tais como: diluio; microemulso com metanol ou etanol; decomposio trmica; craqueamento
cataltico; e reao de transesterificao com etanol ou metanol. Entre
essas alternativas, a transesterificao
a melhor escolha. Os steres de
cidos graxos obtidos so conhecidos como biodiesel e apresentam
caractersticas fsicas semelhantes s
do leo diesel, podendo ser utilizados em motores do ciclo diesel sem
nenhuma modificao (Schuchardt e
col. 1998, Costa Neto e col. 2000).
A transesterificao de leos e
gorduras pelo processo qumico,
embora seja simples, rpido e com
alto rendimento, apresenta algumas
desvantagens. A primeira refere-se
ao catalisador (cido ou base), que,
ao final do processo, permanece misturado com o principal subproduto
da reao, que a glicerina, dificultando sua separao e purificao.
Utilizando um processo enzimtico,
essas dificuldades podem ser minimizadas e existir a possibilidade de
obter-se tanto biodiesel como glicerina, com maior grau de pureza e
possibilidade de reutilizao do biocatalisador. Uma segunda desvantagem do processo qumico est relacionada com o tipo de lcool utilizado,
que, de modo geral, utiliza-se metanol. Nesse caso, a alcolise enzimtica com etanol hidratado apresenta
grandes vantagens em relao ao
metanol, tais como custo e toxidade.
Alm disso, o etanol um produto
obtido atravs de biomassas e, dessa
maneira, o processo se torna totalmente independente do petrleo (tabela 1).
Embora os processos de transesterificao enzimtica para obteno
de biodiesel ainda no sejam comercialmente desenvolvidos, novos resultados tm sido reportados em artigos e patentes (Schuchardt, et. al.
1998). O aspecto comum desses estudos consiste na otimizao das condies de reao (solvente, temperatura, pH, tipo de microorganismo que
gera a enzima, etc.), a fim de estabelecer as caractersticas para aplica-

Tabela 1. Principais vantagens e desvantagens

enzimtico para a produo de biodiesel
Processos Vantagens
Qumico
Simplicidade
Alto rendimento
Curto tempo de reao

Enzimtico

Facilidade de separao do
catalisador (suporte)
Obteno de produtos com
maior grau de pureza
Possibilidade de utilizar etanol
hidratado na reao

dos processos qumico e

Desvantagens
Dificuldade de separao
do catalisador
Impossibilidade de
reutilizao do catalisador
Dificuldade de utilizao
de etanol hidratado
Obteno de produtos com
menor grau de pureza
Longo tempo de reao
Custo das enzimas
Baixo rendimento

Tabela 2. Rendimentos (%) dos steres obtidos atravs da reao de

transesterificao enzimtica do leo de girassol
Lipases
C/Solvente lcoois
P. fluorescens Mucor mirhei Candida sp
25
79
53
MeOH
82
99
79
EtOH (96%)
80
81
29
n-PrOH
3
MeOH
S/Solvente EtOH (anidro)
70
EtOH (96%)
82
n-ButOH
76
Tabela 3. Rendimentos (%) dos steres obtidos atravs da reao de
transesterificao enzimtica de triglicerdeos com lcoois primrio e
secundrio
Lipases
C. antarctica P.cepacia
lcoois
M. miehei
Sebo
25,7
MeOH
94,8
13,9
/
EtOH (95%)
98,3
13,7
/
EtOH (anidro)
68,0
/
61,2
l-PrOH
24,3
44,1
83,8
2-BuOH
19,6
41,0
Soja
/
MeOH
75,4
14,5
EtOH
97,4
Colza
77,3
MeOH
es industriais. Contudo, tanto o
rendimento como o tempo de reao
ainda so desfavorveis se comparados com o sistema de reao por
catlise bsica. A seguir so apresentados alguns desses estudos.
A alcolise de leo de girassol, na
presena ou ausncia de solvente
(ter de petrleo) foi investigada por
Mittelbach (1990), que utilizou trs
lipases obtidas de diferentes fontes.
Os melhores rendimentos foram obtidos com a lipase de Pseudomonas

sp e etanol hidratado. Por outro lado,

na ausncia de solvente, o rendimento foi menor e o tempo de reao
maior (tabela 2).
Nelson e col. (1996) investigaram a reao de transesterificao
de alguns leos vegetais e sebo
bovino, utilizando lcoois primrios, secundrios e diversas lipases.
Os melhores resultados foram
obtidos na alcolise do sebo com
metanol e de etanol com a lipase
de Mucor miehei. Os rendimentos
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

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obtidos com etanol

hidratado foram
superiores ao do
anidro. Utilizando-se
lcoois secundrios, a
lipase de Candida
antartica foi a mais
eficiente nesse estudo FIGURA 2. leo de soja aquecido a 180-200 oC, em diferentes tempos (0-81h), para
(tabela 3).
estu-dos de reaes de transesterificao com lipases
A atividade hidroltica representa uma
caracterstica bsica das lipases e rendimento total de steres de 98,4%. dos foram usados em reaes de
normalmente se associa com a habi- A estabilidade da lipase usada nas trs esterificao do cido lurico, olico,
lidade sinttica. Wu e col. (1996) etapas da metanlise foi verificada linolico e esterico com n-pentanol,
investigaram essas caractersticas uti- pela repetio de sua aplicao em etanol e metanol, alm da etanlise
lizando nove lipases. De acordo com novos substratos, que em cinquenta do leo de soja. Em geral, os produos resultados obtidos, a atividade ciclos de reutilizaes apresentaram tos (steres) foram obtidos com bons
hidroltica da lipase pode ter pouco rendimentos superiores a 95%.
rendimentos (> 90%) quando a CCL
valor na predio da atividade sintfoi imobilizada em gel de gar.
tica. Ao contrrio, a lipase pode no
Uso de CCL em Sntese
Os resultados obtidos para a reaexibir atividade sinttica, mas pode
o de esterificao enzimtica do
apresentar alta atividade hidroltica.
A preparao de suportes com cido lurico foram comparados com
Em outro estudo, Wu e col. lipase de Candida rugosa (CCL, Sigma os da enzima livre por meio do tempo
(1999) empregaram a metodologia 905 u/mg slido) para posterior utili- de reao. A reutilizao dos suporde superfcie de resposta para otimi- zao em reaes de transesterifica- tes carvo de coco e gel de gar
zar parmetros de reao de transes- o de leo de soja novo, e degradado tambm foram avaliados para essa
terificao de banha usada em restau- termicamente visando obteno de reao.
rantes com etanol hidratado, utilizan- biodiesel por via enzimtica, tem sido A Figura 4 mostra os rendimentos do
do as lipases de P. cepacia e C. realizada no Laboratrio de Biocatli- laurato de n-pentila obtidos pela utiantarctica. O melhor rendimento da se da UFSC, por Nascimento e col. lizao da CCL livre e imobilizada nos
reao (96%) foi obtido quando utili- 1999. (Figura 2).
diferentes suportes. O melhor resulzaram-se simultaneamente, as duas
Os suportes avaliados para esse tado foi obtido com a CCL imobilizalipases.
fim foram os carves ativos de casca da em gel de gar, aps 24 horas.
A otimizao da reao de de coco, pinus e bauxita ativada, to- Utilizando-se a CCL livre (mtodo de
transesterificao de leo de soja e dos granulados e com reas superfici- Klibanov), obtm-se o ster em rencolza com metanol, utilizando-se li- ais de 854, 1.038 e 100 m2/g, respec- dimento quantitativo, aps 165 hopase de Candida antartica imobili- tivamente. Com a mesma finalidade, ras. Com os demais suportes, os renzada em cermica foi estudada por outro suporte que vem sendo estuda- dimentos dos produtos foram relatiShimada e col. (1999). Nessa reao, do o de gel de gar. (Figura 3).
vamente baixos (< 40%) e o tempo de
necessita-se de trs equivalentes de
Os biocatalisadores assim prepara- reao muito longo (> 400 horas). A
metanol para um de leo; foi
reutilizao desses suportes
observado que o equivalenmostra que o gel de gar pode
te molar de metanol, superiser reutilizado pelo menos trs
or a 1,5, provocou a inativavezes sem perda da atividade
o da enzima. Portanto, a
cataltica da enzima. Porm,
reao foi conduzida com a
quando a CCL foi imobilizada
adio do lcool em etapas.
em carvo de coco, houve
Na primeira, a reao foi
diminuio no rendimento de
conduzida com um equivaster, que foi de 40%, 18% e
lente de MeOH, por 10 ho11%. (Figura 5).
ras. Aps a converso de
Os resultados preliminares
95% do metanol colocado
obtidos para a reao de traninicialmente, foi acrescentasesterificao do leo de soja
do mais um equivalente e
comercial com etanol, usando
deixado em reao por 14 Figura 3. Suportes com CCL imobilizada (bauxita
a CCL imobilizada nos referihoras. O terceiro equivalen- ativada, carvo ativo de pinus, de casca de coco e dos suportes, tem apresentado
te foi finalmente adicionado de gel de gar)
comportamento similar ao das
e a reao continuou por
reaes de esterificao.
mais 24 horas, obtendo-se
As reaes tm sido conduzi30

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Figura 4. Influncia do tempo no

rendimento da reao de esterificao
do cido lurico com n-pentanol em
hexano, com a CCL livre e imobilizada
em carvo de coco, pinus, bauxita e
em gel de gar, a 35 oC, (massa de CCL
em cada suporte, 27 mg/g)
Os transsteres derivados do etanol foram obtidos com rendimento
quantitativo, aps 36 h de reao a 35
o
C com a CCL imobilizada em gel de
gar. Utilizando-se a CCL livre nas
mesmas condies experimentais, o
rendimento foi inferior a 50 %. Usando-se a lipase imobilizada em carvo
de coco, nas mesmas condies experimentais descritas anteriormente,
no foi verificada formao do produto.
Consideraes Finais
A busca de novas alternativas para
produo de energia deve ser considerada e avaliada. Assim, a investigao do uso de lipases imobilizadas
para produo de biodiesel de
relevante importncia, considerando-se o crescimento da utilizao
desse biocombustvel em mbito
mundial, no somente pelo aspecto
de meio ambiente, mas, principalmente, por se tratar de uma fonte de
energia renovvel.
Agradecimentos
Os autores agradecem a UFSC,
CAPES, CEFET/PR, UNICAMP, FBCPR e NOVO NORDISK.
REFERNCIAS
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