Qumica e Sociedade

Toxicidade de Metais em Solues Aquosas:

Um Bioensaio para Sala de Aula

Soraya Moreno Palcio, Marcia Borin da Cunha, Fernando Rodolfo Espinoza-Quiones e

Daniele Alves Nogueira
Este artigo tem como objetivo propor a utilizao de um bioensaio simples e de baixo custo para abordar
os efeitos de metais em solues aquosas em diferentes concentraes. O bioensaio realizado utilizandose bulbos de cebola (Allium cepa) para monitorar os efeitos do cobre, expondo-os diretamente em gua
contaminada com ons Cu2+. O procedimento consiste em observar o crescimento das razes da cebola por
um determinado perodo e analisar a inibio desse crescimento em funo da presena de concentraes
crescentes de um metal. Os resultados obtidos no laboratrio escolar possibilitam verificar o efeito fito-txico
do aumento da concentrao do metal ao organismo-teste e correlacionar com a contaminao ambiental e
suas consequncias sade humana.

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metais, toxicidade, bioensaio

Recebido em 22/06/2011, aceito em 25/01/2013

s questes ambientais e suas anlises, muitas vezes,

determinados organismos, quando estes esto presentes em
so deixadas em segundo plano no desenvolvimento
solues aquosas. O experimento proposto um bioensaio,
da qumica nas escolas de ensino mdio, mesmo
utilizando a cebola como organismo-teste, e a proposta
com todo apelo que se tem feito em relao necessidade
consiste em monitorar os efeitos no crescimento das razes,
da formao de jovens mais conscientes e por uma qumica
cultivando-se os bulbos de cebola diretamente em solues
integrada ao meio em que vivemos. Um dos possveis motiaquosas contaminadas por metais.
vos para a falta de tratamento de
As possibilidades didticas
temas ambientais nas aulas de
desse experimento no se esUm dos possveis motivos para a falta de
qumica pode estar atrelado ao
gotam na sua realizao, pois a
tratamento de temas ambientais nas aulas
escasso material nessa rea para
partir dele podem ser propostas
de qumica pode estar atrelado ao escasso
o desenvolvimento de atividades
outras atividades como: pesquisa
material nessa rea para o desenvolvimento
relevantes e criativas. Muitas
bibliogrfica sobre a presena de
de atividades relevantes e criativas. Muitas
vezes, as discusses em qumica
metais em guas de abastecimento
vezes, as discusses em qumica ambiental
ambiental resumem-se leitura
pblico, pesquisa de campo em
resumem-se leitura de textos sobre o
de textos sobre o assunto que, emambientes prximos escola,
assunto que, embora sejam importantes,
bora sejam importantes, podem
atividades integradas com outras
podem levar o estudante a achar o assunto
levar o estudante a achar o asdisciplinas como a biologia, fsica,
maante e desestimulante.
sunto maante e desestimulante.
matemtica, histria, entre outras.
Atividades experimentais,
No ensino mdio, esse experide modo geral, desempenham um papel importante para
mento pode ser utilizado na disciplina de qumica no estudo
despertar a curiosidade e estimular questionamentos acerca
de solues e suas concentraes ou em projetos relacionado tema trabalhado. Dessa forma, apresentamos, neste ardos ao tratamento de temas ambientais, tendo em vista que
tigo, uma atividade experimental de fcil execuo e baixo
as questes ambientais so importantes temas transversais
custo, que tem como objetivo principal propor a discusso
e desencadeiam propostas interdisciplinares.
da interferncia de metais potencialmente txicos sobre
Para compreenso da proposta experimental, importante
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lembrar que a toxicidade dos metais depende da dose a que

de 1,00 mg L-1 provocaram inibio do crescimento das
o organismo foi exposto e da forma qumica em que ele se
razes, concluindo-se que no houve interferncia de outros
apresenta. Muitos metais so essenciais para o crescimento
poluentes ou da matria orgnica quando a concentrao do
de todos os tipos de organismos,
metal elevada.
desde as bactrias at mesmo o ser
Assim, neste trabalho, proA utilizao da cebola como organismohumano, mas eles so requeridos
pomos um experimento didtico
teste no recente, esta vem sendo
em baixas concentraes e podem
que pode ser realizado sem cusestudada e utilizada desde 1938, quando
danificar sistemas biolgicos
tos elevados ou procedimentos
Levan introduziu o uso da espcie Allium
quando presentes em concentracomplexos. Nesse experimento,
cepa (cebola comum) como sistema
es maiores. Outros metais, no
utiliza-se um bioensaio com a
de bioensaio para avaliar os efeitos
entanto, no so essenciais, isto
cebola comum (Allium cepa),
citogenticos da colchicina em clulas
, no so requeridos pelos orgapara avaliar o efeito de solues
vivas (Fiskesj, 1985). Desde ento, a
nismos e pequenas concentraes
aquosas contendo concentraes
cebola tornou-se um material de larga
podem causar danos aos orgacrescentes de ons metlicos, inutilizao em testes de laboratrio, devido
nismos. Dessa forma, os metais
serindo, desse modo, a discusso
ao rpido crescimento de suas razes e
so classificados em: elementos
do efeito de metais em organisfacilidade com que so observados seus
essenciais: sdio, potssio, clcio,
mos e no ambiente. Essa proposta
cromossomas em fases de diviso celular.
ferro, zinco, cobre, nquel e magest direcionada para estudantes
nsio; e elementos no essenciais:
do ensino mdio e tem como foco
arsnico, chumbo, cdmio, mercrio, alumnio, titnio,
principal as aulas de qumica.
estanho e tungstnio.
Solues aquosas contendo ons Cu2+ sero utilizadas e a
A utilizao da cebola como organismo-teste no recenavaliao ocorrer pela observao da inibio do crescimente, esta vem sendo estudada e utilizada desde 1938, quando
to das razes da cebola. Pretende-se, dessa forma, estabelecer
Levan introduziu o uso da espcie Allium cepa (cebola
condies para a insero do bioensaio no ensino de qumica
comum) como sistema de bioensaio para avaliar os efeitos
ou em projetos interdisciplinares para discusso dos efeitos
citogenticos da colchicina em clulas vivas (Fiskesj, 1985).
de metais no ambiente e na sade humana.
Desde ento, a cebola tornou-se um material de larga utilizao em testes de laboratrio, devido ao rpido crescimento
Metodologia
de suas razes e facilidade com que so observados seus
cromossomas em fases de diviso celular. O teste com a
Materiais utilizados: sulfato de cobre (CuSO4.5H2O)
cebola tem sido aplicado em diversas reas de conhecimento
obtido em lojas de produtos para tratamento de piscinas;
para avaliar a toxicidade de compostos qumicos de interesse
cinco litros de gua mineral; bulbos de cebola com dimetro
ecolgico e sanitrio. Por exemplo, Fiskesj (1975) cultivou,
de 3,5 a 4,0 cm, secos e sem formao de folhas e/ou razes;
em srie, bulbos de cebola em amostras coletadas ao longo do
16 copos plsticos descartveis de 80 mL (reutilizar material)
rio Bran ao sul da Sucia. Os resultados desse experimento
ou 16 copos de requeijo com tampa; palitos de dente; 1
demonstraram que o crescimento das razes de cebola
recipiente de medida com volume de 1 L; balana com uma
inibido pela presena de substncias txicas quando estas
casa decimal; colheres plsticas (caf) descartveis; seringa
se encontram dissolvidas na gua.
de 10 mL sem agulha; uma rgua escolar.
Testes com a utilizao de cebolas tm sido recomendados
Montagem do experimento: preparar uma soluo
por agncias internacionais de proteo ambiental para veride aproximadamente 100 mg L-1 de Cu pesando 0,4 g de
ficao do nvel de toxicidade de misturas complexas como
CuSO4.5H2O e dissolvida em 1 L de gua mineral. A partir
resduos de uma indstria (Fiskesj, 1985), pois a cebola
dessa soluo, preparar oito solues com concentraes
sensvel mesmo em concentraes consideradas aceitveis aos
de aproximadamente 0,04; 0,06; 0,08; 0,10; 0,20; 0,40;
padres da Organizao Mundial da Sade (OMS).
1,00mg L-1 e uma soluo de controle negativo constituda
Um estudo realizado por Palcio et al. (2005), em gua
de gua mineral pura. Para medir os volumes necessrios
de rio, mostrou que uma concentrao de 0,03 mg L-1 de Cu
para o preparo dessas solues, sugere-se seguir o esquema
dissolvido provoca uma inibio de 40% no crescimento das
apresentado na Tabela 1. Com o auxlio de uma seringa,
razes de cebola. A mesma reduo foi observada na presena
transferir o volume indicado para um copo medidor e comde 1,00 mg L-1 de Zn dissolvido.
pletar o volume at 100 mL com a gua mineral. Misturar
Outro estudo realizado por Espinoza-Quiones et al.
bem com o auxlio de uma colher de plstico descartvel.
(2009) utilizou a cebola como organismo-teste para avaliar
Numerar oito copos plsticos descartveis ou reutilizar
os efeitos do cromo (VI) em gua de rio. Neste, guas conrecipientes de alimentos (tipo copos de requeijo ou similasideradas poluda e no poluda tiveram adio de cromo
res) de 1 a 8. Encher os copos at a borda com as solues 1
(VI) e testada a inibio do crescimento das razes da cea 8, respectivamente. Colocar em cada copo uma cebola, de
bola. Os resultados mostraram que, tanto na gua poluda
modo que somente a regio radicular fique em contato com
quanto na no poluda, concentraes de cromo (VI) acima
as solues. No caso da utilizao de copos descartveis,
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Tabela 2: Comprimento das razes (em cm) e inibio do crescimento (%) aps cinco dias.

Tabela 1: Relao da diluio das solues.

Soluo

Concentrao de Cu
(mg L-1)

Volume de soluo
(100 mg L-1 de Cu)

0,04

0,4

0,06

0,6

0,08

0,8

0,10

1,0

0,20

7
8

Concentrao
de Cu (mg L-1)

Comprimento
da raiz (cm)

5,0

0,04

3,2

36

0,06

2,8

44

0,08

2,0

60

0,10

1,5

70

2,0

0,20

1,3

74

0,40

4,0

0,40

0,5

90

1,00

10,0

1,00

0,3

94

utilizar palitos de dentes como suporte para os bulbos da

cebola (Figuras 1a e 1b) e, em caso de copos de requeijo,
colocar o bulbo da cebola sobre um orifcio feito na tampa
(Figura 1c).

Soluo

Inibio do
crescimento (%)

A inibio no crescimento das razes aumenta conforme

aumenta a concentrao de cobre na soluo. Houve uma
inibio de 36% com a menor concentrao utilizada (0,04
mg L-1) e de 94% com a maior concentrao (1,00 mg L-1).
A inibio em baixas concentraes demonstra a alta sensibilidade do organismo-teste (cebola) frente ao efeito txico
desse elemento. O decrscimo no comprimento mdio das
razes pode ser mais bem visualizado na forma de grfico
como apresentado na Figura 2, e a aparncia dos bulbos aps
a exposio ao Cu pode ser vista na Figura 3.

Figura 1: Montagem do experimento: a) vista geral utilizando

copos plsticos descartveis; b) detalhe do suporte; e c) vista
geral utilizando copos de requeijo.

Esse bioensaio realizado normalmente com cinco dias

de exposio dos bulbos soluo contaminada, mas para
adapt-lo ao calendrio de aulas, sugere-se que os bulbos
sejam deixados em contato por sete dias para aguardar o
crescimento das razes. O local de montagem do experimento
deve ter iluminao natural e ficar longe de reas com calor
excessivo. Caso seja necessrio, utilizar gua mineral para
repor o volume perdido por evaporao ou absoro de gua
pela cebola. Aps os sete dias, retirar as cebolas das solues
e, com uma rgua, medir o comprimento mdio das razes. A
inibio do crescimento da raiz mostra o efeito da toxicidade
do metal. Com os valores medidos, construir uma tabela
relacionando a concentrao da soluo com o crescimento
da raiz, conforme Tabela 2.
Sugerimos que esse experimento seja realizado com pelo
menos uma rplica, de modo que se minimize a possibilidade
de interferncia ou erro em alguma soluo ou m formao
no crescimento das razes da cebola.

Figura 2: Decaimento do comprimento das razes em funo da

exposio s diferentes concentraes de Cu.

Resultados e discusso
Aps o perodo de sete dias, foram medidos os comprimentos das razes. Os resultados mostraram uma inibio
no crescimento da raiz a partir de uma concentrao aproximada de 0,04 mg L-1 de Cu na soluo, como apresentado
na Tabela 2.
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Figura 3. Aparncia das razes aps a exposio s diferentes

concentraes de Cu.

A partir da observao da inibio do crescimento das

razes da cebola, sugerimos que o professor conduza discusses com os estudantes relativas aos fatores que influenciam

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na concentrao de substncias em soluo. No caso desse

Costa et al., 2008), recomendvel que o efeito txico de
experimento, o fator ser um metal (Cu) que se encontra
uma amostra seja avaliado para mais de uma espcie repredissolvido em gua e que inibe gradativamente o crescisentativa da biota aqutica, de preferncia pertencentes a
mento vegetal em funo do aumento da sua concentrao.
diferentes nveis trficos da cadeia alimentar (produtores,
A proposta envolve questionar os estudantes sobre o efeito
consumidores primrios e secundrios) como, por exemplo,
da concentrao em determinados sistemas, como o caso
algas, crustceos, peixes e bactrias, isso devido s diferenas
do observado no experimento, enfatizando a importncia da
de sensibilidade apresentadas por organismos de diferentes
relao dose/resposta, pois mesmo o cobre sendo um elemenespcies frente s substncias qumicas (Costa et al., 2008).
to essencial, o aumento da dose provoca efeitos deletrios
Apesar de no ser a espcie mais adequada para avaliar
no organismo-teste.
a toxicidade de metais em guas, o bioensaio com cebola
No caso do experimento proposto, as concentraes
justifica-se pela simplicidade, facilidade na aquisio dos
totais de metais podem ser diretamente correlacionadas
materiais, baixo custo de execuo e principalmente por
com os efeitos txicos obtidos, porm em ambientes aqufornecer resultados satisfatrios do ponto de vista didtico,
ticos, como rios e lagos, a toxicidade dos metais depende
evidenciando o efeito deletrio de ons metlicos, espcie
da forma qumica que assumem. H evidncias de que
estudada, quando presentes em concentraes altas. Alm
reaes de complexao reduzem
disso, o efeito fito-txico do coa concentrao dos ons metlicos
bre torna-se bastante importante
A OMS considera 1,5 mg L-1 como a
livres e podem diminuir significaquanto esse elemento encontra-se
concentrao mxima aceitvel para o
tivamente sua toxicidade. No ampresente em guas de irrigao
cobre (Cu2+) em guas para o consumo
biente aqutico, os metais podem
ou quando o solo encontra-se
humano (WHO, 1971). Para a legislao
se complexar com as substncias
contaminado por ele.
brasileira, de acordo com a Portaria do
hmicas que representam 80% da
Outra sugesto de abordagem
Ministrio da Sade n 2914, de 12 de
matria orgnica dissolvida nas
para
o assunto a realizao
dezembro de 2011 (Brasil, 2011), o limite
guas naturais e influenciam numede
um
novo experimento para
2+
-1
estabelecido para o Cu de 2 mg L . No
rosos processos biogeoqumicos
estabelecer
uma comparao do
entanto, esses valores so bem superiores
(Corami et al., 2007; Lamelas
cobre
(verificado
nesse experi concentrao que pode ser considerada
e Slaveykova, 2007). Esse fato
mento) com outros metais como
txica, obtida pelo bioensaio com razes
pode gerar desdobramentos no
o chumbo e o zinco, usando o
de cebola, pois a inibio no crescimento
experimento sugerido, no qual o
mesmo organismo-teste ou, aindas razes aparece numa concentrao de
professor pode adicionar metais
da, sugerir pesquisa bibliogrfica
0,04 mg L-1.
gua de rio com diversas concenpara conhecer os efeitos desses
traes de matria orgnica como,
elementos nos seres humanos,
por exemplo, guas coletadas em nascentes e pontos onde
quando ingeridos diretamente ou por meio da cadeia
haja despejos de esgoto, dejetos de animais ou despejos de
alimentar.
indstrias alimentcias como frigorficos e laticnios. Dessa
forma, pode-se observar a diminuio da toxicidade quando
Descarte e tratamento de resduos
comparada soluo preparada com gua mineral e discutir
as reaes qumicas que podem levar a essa diminuio.
O resduo gerado no experimento a prpria soluo de
Outra discusso que pode ser levantada com a realizao
sulfato de cobre utilizada que foi preparada em diferentes
desse experimento a comparao dos resultados obtidos
concentraes. Sugerimos que, aps sua utilizao, as solucom os valores permitidos pela legislao vigente para guas
es geradas sejam filtradas para retirar possveis resduos
de abastecimento pblico. A OMS considera 1,5 mg L-1
que surgiram durante a formao das razes da cebola para
2+
como a concentrao mxima aceitvel para o cobre (Cu )
que possam ser utilizadas novamente. Uma alternativa a
em guas para o consumo humano (WHO, 1971). Para a
realizao do processo de evaporao da soluo para relegislao brasileira, de acordo com a Portaria do Ministrio
cuperao do sulfato de cobre que, recuperado, poder ser
da Sade n 2914, de 12 de dezembro de 2011 (Brasil, 2011),
utilizado posteriormente em outras atividades. As cebolas,
o limite estabelecido para o Cu2+ de 2 mg L-1. No entanto,
aps o experimento, no devem ser utilizadas para fins aliesses valores so bem superiores concentrao que pode
mentcios. Entretanto, a concentrao de cobre presente na
ser considerada txica, obtida pelo bioensaio com razes de
cebola baixa e sendo este um micronutriente para plantas,
cebola, pois a inibio no crescimento das razes aparece
estas podem ser cortadas e enterradas no jardim.
-1
numa concentrao de 0,04 mg L . Esses resultados podem
levar erroneamente a dvidas sobre a confiabilidade acerca
Consideraes finais
da legislao pertinente, devendo-se deixar claro que a
cebola no mais uma espcie considerada adequada nas
O bioensaio com a cebola proporciona um bom exerccio
pesquisas cientficas por sua sensibilidade extrema aos mepara construo da conscincia ambiental em relao ao
tais. De acordo com Gherardi-Goldstein et al., (1990 apud
cuidado e preservao dos ambientes aquticos e dos riscos
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da contaminao ambiental sade humana. Alm disso, o

experimento proposto adequado ao tratamento de propostas
interdisciplinares e no desenvolvimento de projetos com
cunho ambiental que sejam desenvolvidos na escola.
Quanto ao tempo de realizao do experimento, importante ressaltar que o bioensaio um experimento de
observao que demanda dispor de um tempo para o preparo
de solues e montagem do experimento, em geral dois
perodos de aula. Posteriormente, o experimento fica em
repouso durante sete dias, sendo relevante nesse perodo que
o professor organize visitas com os estudantes no laboratrio ou local onde se encontra o experimento para que estes
possam observar as etapas do processo, fazer anotaes,
fotografar etc. Lembramos que essas observaes devem
ser feitas mantendo o experimento em repouso, evitando
interferncias, a fim de obter um melhor resultado final.
Todas as etapas de registro dos dados podem ser exploradas

Referncias
BRASIL. Ministrio da Sade. Portaria n 2914 de 12 de
dezembro de 2011. Dispe sobre os procedimentos de controle
e de vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu
padro de potabilidade. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, n.
518, p. 266, 25 mar. 2004, seo 1.
CORAMI, F.; CAPODAGLIO, G.; TURETTA, C.; BRAGADIN, M.; CALACE, N. e PETRONIO, B.M. Complexation of
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COSTA, C.R.; OLIVI, P.; BOTTA, C.M.R. e ESPINDOLA,
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de avaliao. Qumica Nova, v. 31, n. 7, p. 1820-1830, 2008.
ESPINOZA-QUIONES, F.R.; SZYMANSKI, N.; PALCIO,
S.M.; MDENES, A.N.; RIZZUTO, M.A.; SILVA JR., F.G.;
OLIVEIRA, A.P.; ORO, A.P. e MARTIN, E.N. Inhibition effect
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23-31, 1975.

pelo professor como elementos para formao de habilidades

dos estudantes.
Soraya Moreno Palcio (soraya_palacio@yahoo.com.br), mestre em Qumica e

doutora em Cincias pela UEM, pesquisadora CNPq, professora adjunta do

curso de Qumica e do Programa de Ps-Graduao em Engenharia Qumica
da Universidade Estadual do Oeste do Paran (Unioeste). Toledo, PR BR.
Marcia Borin da Cunha (marciaborin@uol.com.br), mestre em Educao pela
UFSM, doutora em Educao pela FEUSP, coordenadora do Ncleo de Ensino
de Cincias na Unioeste (NECTO), coordenadora PIBID-Qumica da Unioeste,
professora adjunta do curso de Qumica e do Programa de Ps-Graduao
em Educao da Unioeste. Toledo, PR BR. Fernando Rodolfo EspinozaQuiones (f.espinoza@terra.com.br), doutor em Fsica pela USP, ps-doutor
em Fsica Nuclear Aplicada pela UEL, pesquisador CNPq, coordenador do
Programa de Ps-Graduao em Engenharia Qumica da Unioeste, professor
associado do curso de Engenharia Qumica e do Programa de Ps-Graduao
em Engenharia Qumica da Unioeste. Toledo, PR BR. Daniele Alves Nogueira
(d_a_nogueira@hotmail.com) mestranda do Programa de Ps-Graduao em
Engenharia Qumica da Unioeste. Toledo, PR BR.

______. Allium test on river water from Bran and Saxn

before and after closure of a chemical factory. Ambio v. 14, p.
99-103, 1985.
LAMELAS, C. e SLAVEYKOVA, V. I.; Comparison of Cd(II),
Cu(II), and Pb(II) biouptake by green algae in the presence of
humic acid. Environmental Science and Technology, v. 41, p.
4172-4178, 2007.
PALCIO, S.M.; ESPINOZA-QUIONES, F.R.; GALANTES, R.M.; ZENATTI, D.C.; SEOLATTO, A.A.; LORENZ,
E.K.; ZACARKIM, C.E.; ROSSI, N.; RIZZUTTO, M.A. e
TABACNIKS, M.H. Correlation between Heavy Metal Ions
(Copper, Zinc, Lead) Concentrations and Root Length of Allium
cepa L. in Polluted River Water. Brazilian Archives of Biology
and Technology, v. 48, p. 191-196, 2005.
WHO. International Standard for Drinking Water, Third edition, World Health Organization, Geneva, 1971.

Para saber mais

COSTA, C.R.; OLIVI, P.; BOTTA, C.M.R. e ESPINDOLA,
E.L.G. A toxicidade em ambientes aquticos: discusso e mtodos
de avaliao. Qumica Nova, v. 31, n. 7, p. 1820-1830, 2008.

Abstract: Toxicity of Metals in Aqueous Solutions: A Bioassay for the Classroom. The present article aims to propose the use of a bioassay simple and inexpensive to address the effects of metals in aqueous solutions at different concentrations. The bioassay is performed using bulbs of onion (Allium cepa) to
monitor the effects of copper, exposing the bulbs directly in water contaminated with Cu2 +. The procedure consists in observing the growth of the roots of the
onions in a specific period and analyzing this growth inhibition due to the presence of increasing concentrations of a metal. The results obtained in laboratory
school makes possible to verify the phyto-toxic metal effect of increasing the concentration of the test organism and its correlation with the environmental
contamination and its effects on human health.
Keywords: Metals, toxicity, bioassay.

Encontro sobre Educao em Cincias atravs a Aprendizagem Baseada na Resoluo de Problemas

Universidade do Minho, Braga, Portugal, sbado, 12-10-2013
Realizar-se- se no prximo dia 12 de outubro, na Universidade do
Minho (Braga, Portugal), o Encontro sobre Educao em Cincias
atravs da Aprendizagem das Cincias Baseada na Resoluo de
Problemas (ABRP).
Os seus destinatrios so: investigadores da rea da Educao em
Cincias; futuros professores e professores de Cincias Fsicas e
Naturais, de todos os nveis de ensino; professores de outras disciQUMICA NOVA NA ESCOLA

plinas que fazem interface com as Cincias; outros interessados na

temtica do Encontro.
O Encontro prev conferncias orais, convidadas, e apresentao de
comunicaes em poster. Os textos das propostas de comunicao
em poster devero ser submetidos entre 01 e 30 de junho, segundo
as normas disponveis no website do Encontro.
Mais informaes: http://webs.ie.uminho.pt/encontro-abrp

Toxicidade de Metais em Solues Aquosas

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