Princípios e aplicações da Reação em Cadeia de Polimerase em diagnósticos laboratoriais:

uma revisão
Principles and applications of Polymerase Chain Reaction in medical
diagnostic fields: a review

Marcela Agne Alves Valones; Rafael Lima Guimarães; Lucas André Cavalcanti Brandão; Paulo Roberto
Eleutério de Souza; Alessandra de Albuquerque Tavares Carvalho; Sergio Crovela.
Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE, Brasil; Universidade Federal Rural de Pernambuco,
Recife, PE, Brasil.

O desenvolvimento da biologia molecular foi uma das grandes conquistas na

ciência biológica no século XX. A descoberta da PCR trouxe enormes benefícios e
desenvolvimentos científicos assim como o sequenciamento genético, expressões genéticas
em sistemas recombinantes, o estudo de análises da genética molecular, incluindo a rápida
determinação tanto da paternidade quanto o diagnóstico de doenças infecciosas. A PCR
permite a síntese in vitro de ácidos nucléicos através dos quais um segmento de DNA
específico pode ser replicado em uma forma semiconservativa.
Recentemente, a inovação tecnológica do PCR, conhecida como PCR em Tempo
Real, tem se tornado cada vez mais importante em diagnósticos clínicos e pesquisas
laboratoriais devido a sua capacidade para gerar resultados quantitativos. Esta técnica
permite o acompanhamento da reação e apresentação de resultados de uma forma mais
rápida e precisa do que a PCR convencional, que apenas mostra resultados qualitativos.
O objetivo do presente estudo é descrever os princípios e aplicações das técnicas de
PCR convencional e PCR em Tempo Real. Também busca avaliar e discutir as indicações,
usos e vantagens dessas técnicas, bem como seus avanços em áreas médicas diversas.
A PCR permite a síntese de fragmentos específicos do DNA usando a enzima DNA
polimerase, que participa da replicação do material genético celular. Esta enzima sintetiza
uma seqüência complementar do DNA, como um pequeno fragmento (primer), é ligado a
uma das fitas de DNA no local específico escolhido para iniciar a síntese. Primers limitam
a seqüência a ser replicada e o resultado é a amplificação de uma seqüência de DNA. Outra
aplicação útil da PCR é a clonagem de um fragmento de DNA, que permite o estudo da
expressão gênica e tem um considerável potencial em medicina forense.
A PCR em Tempo Real permite a quantificação precisa de ácidos nucléicos DNA e
RNA com maior reprodutibilidade. Esta técnica fornece um método sensível para a
quantificação exacta de cada espécie, o que poderia ser muito relevante para o diagnóstico
de patógenos e doenças genéticas. As vantagens da PCR em Tempo Real incluem a
facilidade de quantificação, maior sensibilidade, reprodutibilidade e precisão, uma análise
rápida, melhor controle de qualidade no processo e menor risco de contaminação.
Recentes avanços na biologia molecular tornaram possível a detecção e
caracterização de ácidos nucléicos virais. O recente desenvolvimento da PCR em Tempo
Real facilitou a detecção e amplificação dos produtos da PCR. Este método é útil na
quantificação de uma maior escala de sequências de ácidos nucleicos virais do que a
maioria dos métodos quantitativos, além disso, a detecção qualitativa também é possível.
A PCR em Tempo Real é extremamente útil no estudo de vírus que causam doenças
infecciosas, aumentando a freqüência de detecção viral. O método contribui para estudos
epidemiológicos, devido à sua capacidade de quantificar os ácidos nucléicos em uma única
reação. As novas substâncias químicas têm permitido uma melhor discriminação dos vários
genótipos virais, tendo fornecido alternativas ao método de detecção viral com base em
ensaios de morbidade e mortalidade.
Nos últimos dez anos têm sido feitos avanços no diagnóstico molecular de fungos
através da tecnologia da PCR, que ao contrário dos métodos convencionais, as amostras
podem ser testadas diretamente através da PCR e isoladas sem a necessidade de culturas,
podendo ser usada para detectar vestígios de DNA de amostras de fungos antes dos
sintomas aparecerem, permitindo a implementação de métodos de controle precoce da
doença.
Diagnóstico parasitológico pode ser auxiliado por métodos moleculares. Muitos
parasitas não são cultiváveis em laboratório e o diagnóstico baseia-se principalmente a
sorologia e microscopia relativamente menos sensível. Microscopia continua a ser um
apoio para o diagnóstico da malária, mas devido à sua maior sensibilidade, o PCR pode
diagnosticar esta doença, mesmo em situações difíceis.
A PCR convencional tem sido usada por mais de uma década na pesquisa clínica de
microbiologia para a identificação de patógenos microbianos. No entanto, para uma série
de razões, esta técnica tem sido limitada para a detecção de microorganismos que requerem
um crescimento lento ou não podem ser cultivados.
Vários métodos têm sido utilizados em odontologia para melhor compreender e
diagnosticar os agentes infecciosos que levam a infecções maxilo-facial, obtendo assim
uma avaliação de pacientes com risco de ter cárie, doença periodontal e outros problemas
bucais. Estes métodos incluem culturas, microscopia, imunofluorescência e sondas de
DNA. Mais recentemente, a PCR foi introduzida. Muitos tipos diferentes de amostras
clínicas têm sido utilizados para análises de PCR, incluindo sangue, suor, sêmen, fios de
cabelo e saliva. A saliva é uma fonte potencial de material genético para exames de
diagnóstico de doenças bucais e sistêmicas.
Com base nesta pesquisa, conclui-se que métodos associados à biologia molecular
tem utilidade evidente em diversos campos da ciência médica. A descoberta da PCR
apresenta um avanço tecnológico que é relevante para a detecção de microorganismos,
aumentando a sensibilidade, precisão e exatidão do diagnóstico. Na virologia, a detecção
molecular de ácidos nucleicos virais faz uma completa caracterização viral,
proporcionando assim um maior conhecimento sobre o comportamento do vírus e
selecionados processos infecciosos.
Quanto à micologia e parasitologia, a PCR favorece a identificação precoce de
microorganismos, aumentando assim os estudos epidemiológicos, bem como o diagnóstico
de fungos e parasitas, que é essencial para o reconhecimento de patógenos. Testes
moleculares auxiliam no processo de tomada de decisão com relação a doenças fúngicas e
parasitológica, avaliando os efeitos desses microrganismos.
Em microbiologia, a genotipagem permite o estudo de bactérias como o
Mycobacterium tuberculosis. Isto é de grande valor para a saúde pública, favorecendo o
reconhecimento precoce e tratamento otimizado.
A publicação da técnica de PCR foi um revolucionário divisor de águas para a
ciência. Tornou-se uma ferramenta padrão de diagnóstico e pesquisa em odontologia,
permitindo o diagnóstico precoce das doenças como a cárie, doença periodontal, infecções
endodônticas e câncer.

Bibliografia: VALONES, M. A. A.; GUIMARÃES, R. L.; BRANDÃO, L. A. C.; SOUZA,

P. R. E. de; CARVALHO, A. de A. T.; CROVELA, S. Principles and applications of
Polymerase Chain Reaction in medical diagnostic fields: a review. Brazilian Journal of
Microbiology 40:1-11. 2009.