INTRODUO Na natureza, constatamos

necessria aos reagentes para que ocorra a transformao qumica, como mostra a Figura 1.
Figura 1: Efeito do uso de catalisadores na

transformaes qumicas ocorrendo o tempo todo ao nosso redor. Enquanto algumas acontecem dessas transformaes (como a

velocidade da reao qumica.

rapidamente

exploso da dinamite), outras so mais demoradas formao como, por exemplo, a do petrleo. Podemos

destacar ainda as transformaes que se desenvolvem numa velocidade

moderada, como a deteriorao dos alimentos por bactrias. Por sua vez, a velocidade das reaes de degradao de alimentos de origem vegetal (como frutas e verduras) pode ser mais ou menos rpida, dependendo de fatores existentes no meio como, por exemplo, atividade de gua, temperatura e Essa energia chamada de energia de ativao, ou seja, a energia mnima necessria para que os

composio do alimento. A Cintica Qumica uma cincia que estuda a velocidade das reaes qumicas e os fatores que as influenciam. Dentre os diversos fatores que interferem na velocidade de uma reao (temperatura, concentrao de reagentes, superfcie de contato, entre outros), podemos destacar a presena de catalisadores. Catalisadores so

reagentes possam se transformar em produtos. Caso a reao ocorra sem a presena de um catalisador, a energia de ativao maior, diminuindo assim a velocidade da reao. Ao atingir a energia de ativao, formado o complexo ativado, que uma estrutura intermediria entre os reagentes e os produtos, com ligaes intermedirias entre as dos reagentes e as dos produtos. O complexo ativado apresenta uma energia mais alta para a molcula ou o elemento original. Esse aumento de energia, chamado de entalpia de ativao H, representa exatamente a

substncias que aumentam a velocidade das reaes qumicas e no so

consumidos durante o processo, sendo regenerados diminuindo no a final. barreira Eles de atuam energia

energia necessria para quebrar as ligaes na molcula e formar o complexo ativado, que se decompe posteriormente nos produtos. Sendo catalisadores celulares poderosos, as enzimas so protenas especializadas em acelerar reaes biolgicas e geralmente atuam especificamente em um dado substrato. O substrato liga-se enzima num stio especial desta, chamado stio ativo, onde ocorre a reao enzimtica. Essa a regio da enzima que possui certos aminocidos que se ligam ao substrato por ligaes no covalentes (Motta, 2006). Caractersticas da urase:

Algumas

enzimas

requerem

um

componente no proteico para sua atividade denominado cofator. O

cofator enzimtico da urease o on metlico Ni2+ (Ciurlie cols, 1999), portanto, a presena de ons de nquel ativa o stio da urease e essencial tanto para a atividade funcional como para a integridade estrutural dessa enzima. Alm de ter sido a primeira enzima isolada na forma cristalina, em 1926, a urease uma substncia extensamente estudada, devido sua aplicabilidade na agricultura e na medicina. Atualmente a urease utilizada em procedimentos de diagnsticos clnicos, na determinao de uria em fludos biolgicos como urina e sangue. A hidrlise da uria, empregando essa enzima como

A urease uma enzima que, em meio aquoso, catalisa a hidrlise da uria em amnia e dixido de carbono (Figura 2) e ocorre em algumas sementes, tais como soja, melo, melancia, entre outras.
Figura 2: Reao de decomposio da uria e carter bsico da amnia em meio aquoso.

biocatalisador, na temperatura de 20C, at 1014 vezes mais rpida que a hidrlise realizada em meio cido a uma temperatura de 60 C (Souza e

Fatibello-Filho, 2006). A urina humana constituda de 2 a 5% em uria. Essa a forma utilizada pelo metabolismo eliminar os do organismo para

resduos

nitrogenados

indesejveis produzidos a partir das protenas. utilizada Atualmente, como a uria na

suplemento

alimentao de animais, na agricultura (como fertilizante), na fabricao de

plsticos, na indstria farmacutica, entre outros (Peruzzo e Canto, 1999).

inmeros grupos ionizveis e existem em diferentes estados de ionizao. Por isso, a atividade cataltica restrita a

Influncia do meio sobre a atividade enzimtica

uma pequena faixa de pH.

A estrutura e a forma do stio ativo das enzimas so decorrentes da estrutura tridimensional da enzima e podem ser afetadas por quaisquer agentes capazes de provocar mudanas conformacionais na estrutura proteica. Isso torna a atividade enzimtica dependente do meio em que se encontra, notadamente do pH e da temperatura.

Efeito do pH sobre a atividade enzimtica

Geralmente as enzimas so ativas em uma estreita faixa de pH e, na maioria

Figura 3: Curva do efeito do pH na atividade

dos casos, h um pH timo definido. A Figura 3 apresenta a curva do efeito do pH na atividade enzimtica. Podemos verificar que o pH timo da enzima definido pelo mximo da curva. Um estudo sobre purificao de urease obtida verificou de sementes que essa de melancia possui

enzimtica.

importante destacar, contudo, que a estabilidade da enzima ao pH timo depende inclusive de muitos fatores como temperatura, de fora ons inica, metlicos,

concentrao

enzima

concentrao de substratos ou cofatores da enzima, contaminantes (metais

atividade tima em pH 8,0 (Mohamed e cols, 1999). O efeito do pH sobre a atividade enzimtica se deve s variaes no estado de ionizao dos componentes do sistema e medida que o pH varia. Como as enzimas so protenas, contm

pesados e fluoreto, acima de 2,0 mg/dL, so inibidores da urease), entre outros (Bioclin, 2006).

Efeito da temperatura sobre reaes enzimticas

do meio em anlise, pH e fora inica, por exemplo (Morris, 1972). No estudo sobre urase extrada de sementes de melancia, Mohamed e colaboradores (1999) acompanharam o comportamento dessa enzima submetida temperatura de 40C durante 30 minutos em pH 7,5 e verificaram que no houve perda significativa da

O efeito da temperatura sobre a cintica de reao enzimtica resultado de dois eventos simultneos. O primeiro evento caracterizado pelo aumento na

velocidade da reao catalisada em resposta ao aumento da temperatura do sistema. A elevao da temperatura provoca o aumento da energia cintica das

atividade enzimtica. A mesma enzima, submetida a 80 C por 5 minutos teve perda total da atividade cataltica. O experimento

molculas componentes do sistema. Esse efeito observado em um intervalo de temperatura compatvel com a estrutura espacial da enzima. No segundo evento, temperaturas mais altas levam desnaturao enzimtica por alterarem as ligaes queconservam a estrutura tridimensional da enzima. Aps o rompimento das ligaes de hidrognio, que so termolbeis,

proposto utiliza materiais de fcil acessibilidade e ilustra a reao de decomposio da uria em urina

humana, catalisada por urease obtida de sementes de melancia. Contudo, a utilizao de urina deve ser tratada com devida ateno pelo(a) professor(a), pois se trata de um substrato que apresenta diferenciados valores de pHs e concentrao de sais. A reao pode ser lenta caso o meio reacional interfira no stio ativo enzimtico, devido ionizao de aminocidos na molcula que provoquem mudana da

desencadeia-se uma srie de alteraes na estrutura enzimtica, levando a uma nova conformao ou a um estado conformacional indefinido. A maioria das protenas (incluindo as enzimas) passvel de desnaturao irreversvel a temperaturas acima de 40C ou 50C, porm a temperatura tima de uma enzima um termo sem significado at que seja registrado o tempo de sua exposio a essa

conformao da enzima. OBJETIVOS - estudar a natureza da enzima urase; - reconhecer as principais caractersticas da enzima urase;

temperatura, assim como a composio

- conhecer a maneira atravs da qual possvel determinar qualitativamente a atividade enzimtica. PARTE EXPERIMENTAL a) Para identificao, (quatro) tubos de ensaio. b) Adicionar aproximadamente 100 mL de gua e cerca de 40 sementes de melancia em um liquidificador e triturar por 15 segundos. Filtrar a mistura e recolher a parte lquida. Dividir a frao lquida em duas partes iguais e levar uma delas a fervura a 100C por 1 minuto (inativao enzimtica). Deixar em repouso para atingir a temperatura ambiente. c) Para a obteno do extrato de repolho roxo, triturar no liquidificador 3 folhas de repolho roxo picadas com enumerar 4

repolho roxo, 2,0 mL de urina recmcoletada e acrescentar 1,0 mL da frao lquida resultante da triturao de sementes de melancia em gua (sem fervura). Agitar e observar a cada 10 minutos. e) Tubo 2 No tubo de ensaio nmero 2, adicionar 1,0 mL de extrato de repolho roxo, 2,0 mL de urina recmcoletada e acrescentar 1,0 mL do lquido resultante da triturao de sementes de melancia (fervido). Agitar e observar a cada 10 minutos. f) Repetir os procedimentos (acima) para os tubos 3 e 4, substituindo a urina pela soluo de uria a 1%. QUESTES PROPOSTAS 1. Apresente suas observaes sobre o aspecto visual das solues observadas nos tubos de ensaio. 2. Se durante a decomposio da uria formado, alm da amnia, dixido de carbono, sendo este um dos

aproximadamente 100 mL de lcool etlico comercial. Filtrar a mistura e utilizar o extrato alcolico como

indicador cido-base. A extrao das antocianinas (pigmentos da classe dos flavonoides, responsveis pelas cores azuis, violeta, vermelho e rosa de flores e frutas e indicadores cido-base

responsveis pela acidez das chuvas, qual a razo do meio ficar bsico? Proponha fenmeno. 3. De acordo com o experimento e as observaes feitas, como voc poderia definir uma enzima? Pesquise a uma explicao para o

naturais) pode inclusive ser realizada por imerso da folha de repolho roxo em etanol, seguido de repouso por 24 ou 48 horas (Terci e Rossi, 2002; Couto e cols., 1998). d) Tubo 1 No tubo de ensaio nmero 1, adicionar 1,0 mL de extrato de

definio de enzima e compare-a com sua resposta.

REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS MOTTA, V.T. Bioqumica Bsica Enzimas, 2006. Disponvel em

BIOCLIN. Disponvel

Uria

Cintica,

2006. em

<www.bioclin.com.br/iuso/ureiacinetica .pdf>. (Acesso em 22/04/2013). MORRIS J. G. Fsico-Qumica para Bilogos. Trad. M. N. Cipolli. So Paulo: Polgono, 1972.

<http://www.laboratorioautolab.com/inf omed/fulltext/3enzimas.pdf>. em 22/04/2013). CIURLI, S.; BENINI, S.; TERCI, D. B. L. e ROSSI, A. V. Indicadores naturais de pH: usar papel ou soluo? Qumica Nova, v. 25, n. 4, p. 684-688, 2002. (Acesso

RYPNIEWSKI, W. R.; WILSON, K. S.; MELETTI, S. e MANGANI, S. Structural properties of the nickel ions in urease: novel insights into the catalytic and inhibition mechanisms. Coordination Chemistry Reviews, v. 190-192, p. 331-355, 1999. SOUZA, F. S. e FATIBELLO-FILHO, O. Obteno, caracterizao e

purificao da enzima urease de feijo guandu (Cajanus cajan L. Milsp). Congresso de Iniciao Cientfica, 14, 2006, So Carlos. Anais de Eventos da UFSCar, v. 2, p.731, 2006. PERUZZO, T. M. e CANTO, E. L. Coleo base: Qumica. So Paulo: Moderna, 1999. MOHAMED, T. M.; MOHAMED, M. A.; MOHAMED, S.A. e FAHMY, A. S. Purification of urease from water melon seeds for clinical diagnostic kits.

Bioresource Technology, v. 68, p. 215223, 1999.