Regulao da Expresso Gnica

Centro Universitrio Estadual da Zona Oeste UEZO/ RJ Prof.: Arnaldo Aluna: Leticia Araujo Lima 1121331031 Tecnologia em produo de frmacos 3 perodo

Regulao da expresso gnica em Procariotos Stios de Controle da Transcrio de DNA

Os genes so controlados por sinais extracelulares que so comunicados aos genes pelas protenas reguladoras de dois tipos: Reguladores positivos (tambm conhecido por ativadores) e reguladores negativos (tambm conhecido por repressores). Esses reguladores so protenas de ligao ao DNA que reconhecem stios especficos nos genes sob seu controle ou em genes mais prximos. Para a atuao desses reguladores, primeiro a RNA-polimerase liga-se ao promotor, formando um complexo fechado, onde as fitas de DNA permanecem unidas. Logo aps, o complexo polimerasepromotor sofre transcrio para complexo aberto, em que o DNA do stio de incio da transcrio desenrolado e a polimerase posicionada para iniciar a transcrio. Segue-se, ento o escape do promotor, a qual a polimerase deixa o promotor e comea a transcrever o gene. Muitos promotores so regulados por ativadores que auxiliam na ligao da RNA-polimerase ao DNA e por repressores que bloqueiam essa ligao. Na ausncia das protenas reguladoras, a RNA-polimerase liga-se fracamente a diversos promotores, devido um ou mais promotores est ausente ou apresentar imperfeies. A polimerase consegue se ligar e realizar uma transcrio espontnea para complexo aberto inicia a transcrio. Essa transcrio gera um baixo nvel de expresso constitutiva, chamado nvel basal.

Para controlar a expresso de um promotor desse tipo, um repressor precisa apenas se ligar a um stio que se sobreponha regio de ligao da polimerase. Assim, o repressor bloqueia a ligao da polimerase ao promotor, impedindo a transcrio.

Para ativar a transcrio a partir desse promotor, um ativador auxilia a ligao da polimerase. Para isso o ativador utiliza uma superfcie para ligar-se a um stio do DNA prximo ao promotor e, com uma outra superfcie, ele interage simultaneamente om o RNA polimerase, trazendo a enzima para o promotor. Esse mecanismo frequentemente chamado de recrutamento, um exemplo de ligao cooperativa de protenas do DNA.

Ativadores que atuam por Alosteria Alguns promotores so controlados completamente diferente, assim a RNA-polimerase liga-se , sem auxlio, e forma um complexo fechado estvel. Esse complexo no sofre transio espontnea para complexo aberto. A presena de um ativador necessria para estimular a transio de complexo fechado para aberto nesse promotor, porque a transio a etapa limitante da velocidade.

Os ativadores que estimulam esse tipo de promotor

agem promovendo uma laterao

conformacional na RNA-polimerase ou no DNA. Ou seja, eles interagem com mo complexo fechado estvel, induzindo uma alterao de conformao que resulta na transio para complexo aberto. Esse mecanismo um exemplo de alosteria.

O stio alostrico, atua como um interruptor funcional que controla o domnio de ligao do DNA de dois modos: funcional ou no funcional. Ele interage com pequenas molculas chamadas efetores alostrico. Um efetor alostrico liga-se ao stio alostrico da protena regulatria de tal modo que muda a estrutura do domnio de ligao ao DNA. Algumas protenas ativadoras ou repressoras devem se ligar a seus efetores alostricos antes que possam se ligar ao DNA. Outras podem se ligar ao DNA apenas na ausncia de seus efetores alostricos. Os repressores podem inibir a transcrio ligando-se a um stio que encobre o promotor, bloqueando a ligao da RNA-polimerase. Os repressores tambm podem atuar de outros modos, por exemplo, pela ligao a um stio ao lado do promotor e interagindo com a ligao entre polimerase e promotor, inibindo a iniciao. O final da transcrio bem controlado no qual as sequncias tpicas dos transcritos de RNA (sinais de trmino) indicam o local para a finalizao da sntese dessa molcula. Na bactria E. coli existem no mnimo duas classes de sequncias de sinalizao do trmino da transcrio, uma utiliza a protena (rho) e a outra no (rho-independente).

Operon Lac

Atravs dos genes envolvidos no metabolismo da lactose em E. coli- o operon lac. Esses genes lac lacZ, lacY e LacA esto dispostos no genoma da E. coli e formam o operon lac. O promotor lac, que est na extremidade 5' de lac Z, comanda a transcrio dos trs genes com um mRNA nico, este mRna traduzido, originando os trs produtos proticos. O gene lacZ codifica a enzima galactosidase, que cliva o acar em glicose e galactose, . O gene lacY codifica a lactose-permease, uma protena que se insere na membrana celular e transporta a lactose para dentro da clula. O gene lacA codifica a tiogalactosdeo-transacetilase, que inativa os galactosdeos txicos que tambm so transportados para dentro da clula pelo lacY. Esses genes se expressam em nveis elevados apenas quando a lactose est disponvel e a glicose, que a fonte preferencial, no est presente. Existem duas protenas reguladoras envolvidas: uma um ativador CAP e a outra um repressor chamado repressor Lac. Este repressor codificado pelo gene lacI, que est localizado prximo aos outros genes lac, mas transcrito a partir de seu prprio promotor. O nome CAP vem de Protena Ativadora de Catabolito, mas esse ativador tambm conhecido por CRP (Protena Receptora de cAMP). O gene que codifica a CAP localiza-se em uma outra regio do cromossomo bacteriano que no est relacionada aos genes lac. O CAP e o repressor Lac so protena de ligao ao DNA e cada um se liga a um stio especfico no promotor lac ou prximo a ele.

Cada protena reguladora responde a um sinal e comunica aos genes lac. O CAP monitora o efeito da glicose, j o Lac promove o sinal da lactose. O repressor Lac s pode se ligar ao DNA e reprimir a transcrio na ausncia de lactose. Em presena desse acar, o repressor est inativo e os genes no esto reprimidos. O CAP pode se ligar ao DNA e ativar os genes lac apenas na ausncia de glicose. Logo o efeito combinado desses dois reguladores garante que os genes sejam expressos em nveis significativos somente quando a lactose estiver presente e a glicose ausente.

Regulao por recombinao stio-especfica.

Existem duas classes de recombinao gentica, a recombinao stio-especfica conservativa (CSSR) e a recombinao por transposio. Elas compartilham caractersticas mecansticas fundamentais. As protenas conhecidas como recombinases reconhecem, na molcula de DNA, as sequncias especficas nas quais ocorrer recombinao gentica. A recombinase aproxima esses stios especficos, formando um complexo protena-DNA como uma ponte que une os dois stios do DNA, conhecido como complexo sinptico. Recombinase catalisa a clivagem e a religao das molculas de DNA, invertendo um segmento de DNA ou deslocando um segmento para um novo stio. notrio que essas recombinaes genticas so responsveis por muitos rearranjos importante no DNA. A recombinao stio-especfica conservativa(CSSR) responsvel por muitas reaes nas quais um segmento definido de DNA rearranjado. Uma caracterstica essencial dessas reaes que o segmento de DNA que ser deslocado contm elementos de sequncia curtos, denominados stios de recombinao, onde ocorre a troca de DNA. As clulas e os vrus utilizam a CSSR para uma grande variedade de funes biolgicas. Muitos fagos inserem seus DNAs no cromossomo hospedeiro durante a infeco utilizando esse mecanismo

de recombinao. Em outros casos, essa recombinao stio-especfica utilizada para alterar a expresso gnica ou para auxiliar na manuteno da integridade estrutural de molculas de DNA circulares durante os ciclos de replicao do DNA, recombinao homloga e diviso celular.

A CSSR pode gerar trs tipos diferentes de rearranjos de DNA: A insero de um segmento de DNA em um stio especfico A remoo de um segmento de DNA A inverso de um segmento de DNA O resultado dessa recombinao depende da organizao dos stios de reconhecimento da molcula de DNA que participa do processo. Cada stio est organizado como um parde sequncias de reconhecimento da recombinase, essas sequncias de reconhecimento flanqueiam uma pequena sequncia assimtrica central, conhecida como regio de sobrecruzamento, onde ocorrem a clivagem e a religao do DNA. As orientaes de dois stios presentes em uma nica molcula de DNA sero relacionadas entre si como uma repetio invertida (que inverter o segmento de DNA entre dois stios) ou como uma repetio direta ( que remover o segmento de DNA entre esses dois stios. Assim, a insero ocorre quando os stios de recombinao de duas molculas diferentes so aproximados para a troca de DNA.

A Transposio a recombinao entre sequncias especficas e stios no-especficos no DNA. Os processos biolgicos promovidos po essas reaes de recombinao incluem a insero de genomas virais no DNA da clula hospedeira durante a infeco, a inverso de segmentos de DNA, alterando sua estrutura gnica e o deslocamento de elementos de transposio de um stio cromossmico para outro. Em muitos organismos a transposio a principal causa de mutaes espontneas, e praticamente metade do genoma humano consiste em sequncias derivadas de elementos de transposio. A transposio uma forma particular de recombinao gentica que desloca determinados elementos genticos de um local do DNA para outro. Esses elementos genticos mveis so chamados de elementos de transio ou transposons. O deslocamento ocorre pela recombinao entre as sequncias de DNA posicionadas nas extremidades do elemento de transposio e uma sequncia do DNA da clula hospedeira. Os mecanismos de recombinao gentica responsveis pela transposio tambm so utilizados para outras funes, alm da mobilizao de transposons. Vrios vrus usam um sistema de recombinao aproximadamente igual transposio, durante a infeco, para inserir seus genomas no genoma da clula hospedeira. Assim, alguns rearranjos de DNA utilizados para alterar os padres de expresso gnica ocorrem utilizando um mecanismo muito semelhante ao da transposio. Regulao da expresso gnica em Eucariotos Stios de Controle da Transcrio de DNA

Nas clulas eucariotas a expresso de um gene pode ser regulada em todas as etapas das bactrias e mais algumas. Dentre essas a mais marcante o processamento. Os nucleossomos e seus modificadores influem no acesso aos genes. O genoma dos eucariotos est compactado em protenas chamadas histonas, formando os nucleossomos. Essa condio reduz a expresso de muitos genes, na ausncia das protenas reguladoras. As clulas eucariticas tambm contm um certo nmero de enzimas que rearranjam ou modificam quimicamente as histonas; essas modificaes alteram os nucleossomos de modos a afetar a facilidade de ligao maquinaria de transio. A regio do gene a qual a maquinaria de transio se liga denominado promotor, que so elementos que sinalizam o stio onde a transcrio deve iniciar-se e, possivelmente, controlam o nvel de expresso do gene associado . Os stios individuais de ligao so chamados stios de ligao com o regulador e o segmento de DNA que inclui todo o conjunto de stios de ligao de um determinado gene denominado sequncia reguladoras. A expanso dessas sequncias, ou seja o

aumento no nmero de stios de ligao a reguladores, em um gene tpico mais expressivas nos organismos pluricelulares. Essa situao reflete a integrao mais elaborada de sinais encontrada nesses organismos, ou seja a tendncia de mais sinais serem necessrios para determinado gene no tempo e lugar corretos. ativar um

Em organismos multicelulares, as sequncias reguladoras podem estar distribudas a milhares de nucleotdeos do promotor e podem ser constitudas por dezenas de stios de ligao de reguladores, esses stios esto agrupados em unidades chamadas reforadores. Esses reforadores no so especficos e potenciam a transcrio de qualquer promotor que estiver na sua vizinhana. A eficincia da expresso de um gene em um tecido especfico depende da adequada combinao e integrao dos amplificadores, dos promotores e das sequencias adjacentes. Os reforadores alternativos ligam-se a diferente s grupos de reguladores e controlam a expresso do mesmo gene em diferentes momentos e locais, em resposta a diferentes sinais. Devido possurem sequncias reguladoras mais extensas, alguns reguladores se ligam a stios muito distantes dos genes por ele encontrados. Com isso os reguladores atuam, devido o DNA intermedirio formar alas para acomodar a interao entre as protenas. Por causa dessa distncia, quando um ativador est ligado a um reforador pode haver vrios genes em uma zona de alcance, mas um dado reforador, regula apenas um nico gene. Outras sequncias reguladoras, chamadas de isoladores ou elementos de limitao, esto localizadas entre os reforadores e alguns promotores. Esses isoladores bloqueiam a ativao do promotor por ativadores ligados ai reforador.

O genoma dos eucariotos pode apresentam os pseudogenes que so replicas de genes ativos mas no produzem um produto reconhecvel, geralmente ocorrem devido a mutaes acumuladas no gene. A expresso depende dos sinais ambientais que podem ter vrias formas e tambm podem ser protenas liberadas por uma clula e recebidas por outra. Os sinais podem ser detectados por uma clula e comunicados para um gene por vrios modos. O efeito do sinal indireto, assim o sinal induz uma quinase, que fosforila o NtrC, esse tipo de sinalizao indireta um exemplo de uma via transduo de sinal.

Metilao do DNA

Introduo: A metilao consiste na adio de grupamentos metila a base citosina DNA. A metilao catalizada por enzimas, sendo fundamental na regulao do silenciar dos genes, regulao das funes das protenas, metabolismos de RNA alm de estar presente no metabolismo da bactria. A modificao qumica dos nucleotdeos importante para a regulao de genes em eucariontes principalmente em mamferos. Uma determinada quantidade dos pares de bases G-C( guanina e citosina) so modificados pela adio de um grupo metila a citosina. A metilao da citosina sempre ocorre em duplas de pareamento de bases como por exemplo: 5' mC p G3' 3'G p Cm 5' Onde mC representa a metilcitosina e p indica a ligao fosfodister entre as bases de um filamento de DNA. Essa estrutura pode ser abreviada simplesmente dando a composio de um filamento mCpG.

Em relao ao genoma humano, sabe-se que duas protenas que reprimem a transcrio se ligam ao DNA metilado, uma delas se chama MeCP2 e causa mudana na cromatina , entretanto possvel que os dinucleotdeos metilados CpG liguem mais protenas especficas desconhecidas e que essas protenas formem um complexo que evita a transcrio de genes vizinhos. No genoma humano um dos exemplares do gene expresso e outro ficas silenciado. Como o caso dos genes humano H19 e Igf2, estes esto localizados prximos, ambos no cromossomo 11. Uma determinada clula possui o exemplar H19 expresso(o do cromossomo da me), enquanto o outro exemplar(do cromossomo paterno) fica desligado; com Igf2 ocorre ao contrrio, o exemplar paterno fica ligado e o materno desligado. Duas sequncias reguladoras so essenciais para expresso diferencial desses genes, um reforador e um isolador. O reforador pode ativar qualquer um dos dois genes. Mas ele s ativa o H19 , por causa da funo do isolador e seu estado de metilao. O reforador no consegue ativar o gene Igf2 no cromossomo materno porque, nesse cromossomo, o isolador se liga a uma protena que impede que os ativadores no reforador ativem o gene Igf2. No cromossomo paterno, o elemento isolador e promotor de H19 esto metilados. Assim, a maquinaria de transcrio no pode se ligar ao isolador, consequenteente, o reforador agora ativa o gene Igf2 e o gene H19 continua reprimido no cromossomo paterno, pela ligao de MeCP2 ao isolador de H19

Em relao aos mamferos, alguns genes so mantidos silenciados pela metilao das sequncias de DNA vizinhas. Grandes regies do genoma dos mamferos so marcadas dessa forma e a metilao de DNA observada em regies que tambm so heterocromticas. As sequncias metiladas so reconhecidas frequentemente por protenas de ligao ao DNA (como MeCP2), que recrutam desacetilases e metilases de histonas, responsveis pela modificao da cromatina nas proximidades. Assim, a metilao do DNA pode marcar as regies onde a heterocromatina ser subsequentemente formada.

A metilao do DNA fundamental em um fenmeno chamado memorizao. Onde uma clula diploide possui dois exemplares da maioria dos genes, um no cromossomo herdado do pai e o outro no cromossomo materno correspondente. Na maioria dos casos, os dois alelos se expressam em nveis comparveis, uma vez que possuem as mesmas sequncias reguladoras e esto localizados e regies correspondentes em dois cromossomos muito semelhantes.

Ps-transcricional

O processo da transcrio resulta na produo de pr-RNAm. Essa molcula sofrer vrias modificaes para formar o mRNA que, aps ser exportado para o citoplasma, ser interpretado para a traduo. Esses passos so essenciais para que o gene se expresse, assim qualquer mecanismo que interfira nesse processo, estar regulando a expresso do gene. Quando a expresso de um dado gene regulada em etapas posteriores transcrio, o processo denominado regulao ps-transcricional. A retirada de ntrons e a emenda dos xons essencial para o processamento do RNA em eucariotos. Esse processo permite a eliminao das seqncias correspondentes aos ntrons do prmRNA e a emenda dos xons. Muitos genes de eucariotos apresentam um elevado nmero de ntrons, todos eles devem ser retirados durante o processamento do pr-RNAm. Assim, no decorrer do processo, os diversos xons devero ser emendados. As clulas utilizam o processamento do RNA como uma importante forma de regulao da expresso gnica. Tal mecanismo denominado emenda alternativa de xons e consiste em selecionar os xons que sero emendados para compor o mRNA final. Dessa forma, um mesmo pr-RNAm pode dar origem a duas ou mais formas alternativas de mRNA, em funo dos xons utilizados na montagem de cada uma. Logo, cada um desses mRNA variantes dar origem a uma diferente forma da protena, na qual estaro presentes ou ausentes em funo dos xons que compem os respectivos mRNA. Esse fenmeno conhecido por splicing.

Durante o processamento, determinados transcritos podem receber a insero,

deleo ou

modificao de nucleotdeos em sua sequncia. Tal processo denominado edio do RNA.

O processo de transcrio de um dado gene resulta no acmulo do mRNA correspondente no citoplasma da clula. Assim, essas molculas estaro disponveis para a traduo. Entretanto, mRNA possuem vida til, pois se os mRNA ficassem disponveis no citoplasma por tempo indefinido, sua traduo continuaria ocorrendo tambm indefinidamente, mesmo que a transcrio do gene j no mais ocorresse. Isso seria um problema para a clula que necessita de determinadas protenas apenas em momentos especficos. Se os mRNA no fossem degradados, tais molculas se acumulariam no citoplasma e, com a continuao do processo de transcrio dos milhares de genes durante a vida da clula, a quantidade de mRNA no citoplasma atingiria nveis altssimos, inviabilizando o funcionamento celular. Esse perodo de durao no citoplasma tambm denominado estabilidade do mRNA. Assim, genes diferentes que possuam taxas de transcrio semelhantes, gerar maior acmulo dos transcritos no citoplasma celular. Genes distintos apresentam diferentes estabilidades para seus mRNA. Assim, os transcritos produzidos por um mesmo gene podem apresentar diferentes estabilidades em funo do tecido onde so produzidos. Praticamente todos os mRNA recebem uma estrutura denominada capacete em sua extremidade 5 e uma cauda poliA na extremidade 3. Ambas esto envolvidas na estabilidade do mRNA. Ao chegarem no citoplasma, as molculas de mRNA passam a estar expostas ao das enzimas de degradao. O principal processo de degradao do RNAm iniciado pela remoo da cauda poliA e denominado desadenilao. As enzimas responsveis pelos processos de desadenilao so chamadas desadenilases. Em seguida ao processo de desadenilao, ocorre a remoo do capacete presente na extremidade 5 do mRNA, realizada por um conjunto de protenas e fatores. Aps a retirada das estruturas de proteo (capacete e cauda poliA), o transcrito rapidamente degradado por enzimas denominadas exonucleases

Em uma clula tpica, uma molcula de RNA apenas estvel se especificamente estiver protegida da degradao. A degradao tem particular importncia na regulao da expresso em clulas

eucariticas, onde mRNA tem que viajar longas distncias antes de ser traduzido. RNA em eucariotos estabilizada por certas modificaes ps-transcricional, particularmente o cap 5 'e poliadenylated cauda. Regulao da expresso gnica em Procariotos X Eucariotos

Nos eucariontes os promotores, regio ao qual o DNA se liga a uma RNA polimerase para dar incio transcrio, existem em maior nmero. Tambm ocorre a migrao, onde a transcrio ocorre no ncleo e traduo no citoplasma, essa separao permite uma melhor regulao da expresso gnica. A pr-RNAm sofre uma srie de modificaes ou maturaes, que a aquisio de revestimento (Cao) na extremidade 5' e de cauda poli-A na extremidade 3', alm de ocorrer o splicing. Os procariotos por possuirem molculas simples de DNA, facilita o incio do processo. Possui uma regio promotora especfica e o transcrito primrio sofre pouco ou nenhum processamento aps a sua sntese. Vrios gene eucariticos possuem mais stios de ligao de reguladores e so controlados por um nmero maior de protenas reguladoras do que os genes bacterianos tpicos. Umas outra diferena entre os eucariotos e os procariotos o nmero de protenas reguladoras que controlam um determinado gene. Isso reflete-se no nmero e na disposio dos stios de ligao de reguladores associados a um gene normal. Como nas bactrias, os reguladores individuais ligam-se a sequncias curtas, mas, nos eucariotos, esses stios de ligao frequentemente so mais numerosos e posicionado muito mais distantes do stio de iniciao da transcrio do que nas bactrias.

Referncias bibliogrficas Nome do Livro: Biologia Molecular do gene Edio: 5 Editora: Artmed Autor: Watson- Baker- Bell- Gann- Levine- Losick http://pt.scribd.com/doc/51738022/Mecanismos-Pos-Transcricionais-Biologia