Esterilizao pelo calor: autoclavagem

Publicado em 18/11/2005 A utilizao de calor em ambiente hmido um dos mtodos mais eficazes de destruio de microrganismos. A morte das clulas microbianas por aco do calor hmido resulta da desnaturao das protenas e da destabilizao da membrana citoplasmtica. Ocorre quando as clulas so sujeitas a temperaturas superiores temperatura mxima de crescimento dos microrganismos em causa.

A esterilizao por calor hmido efectuada em autoclave (figura 1), que consiste numa cmara com vapor de gua saturado presso de 1 atm acima da presso atmosfrica, a que corresponde, em locais ao nvel do mar, uma temperatura de ebulio da gua de 121C. No laboratrio de Microbiologia, usual sujeitar o material a esterilizar a 121C (1 atm; presso relativa) durante 15 minutos, de modo a assegurar a morte de todas as formas de vida bacterianas, incluindo a dos endsporos bacterianos, mais resistentes ao calor que as clulas vegetativas. Contudo, o tempo necessrio para se esterilizar convenientemente os materiais, a esta temperatura, depende da natureza do material a esterilizar e/ou do seu volume.

Fig. 1 - Esterilizao por calor hmido em autoclave O calor hmido sob presso utilizado na esterilizao de meios de cultura que no contenham componentes termolbeis e na esterilizao de material de plstico e de vidro a utilizar nos trabalhos experimentais de Microbiologia. tambm usado na descontaminao de roupas e instrumentos mdicos e cirrgicos, assim como de diversos materiais, reutilizveis ou descartveis, contaminados com culturas de clulas viveis, antes de serem lavados ou colocados no lixo.

Fig. 2 - Placas depois de autoclavadas

Em meio aquoso, as clulas vegetativas da maior parte das bactrias no termoflicas, fungos e protozorios morrem quando sujeitas a temperaturas entre 60 e 70C durante 10 a 30 minutos, dependendo do organismo em causa. Muitos vrus so destruidos por exposio a 60C durante 30 minutos. No entanto, a destruio dos esporos de fungos miceliais (bolores) s possvel por exposio a temperaturas entre 70 e 80C, durante aproximadamente minutos. 30

Fig. 3 - Fotografias de microscopia do aspecto de endsporos produzidos por fungos miceliais. Os endsporos bacterianos produzidos por exemplo por bactrias dos gneros Bacillus e Clostridium, so muito resistentes ao calor. Para os destruir, necessrio sujeit-los a 121C durante 1 a 12 minutos, dependendo da espcie em causa. A grande resistncia dos endsporos bacterianos morte trmica (ou a outros agentes letais), determina as condies a que necessitamos de sujeitar os materiais na autoclave para assegurar a sua esterilizao (i.e., 121C durante, pelo menos, 15 minutos).

Fig. 4 Fotografia de microscopia do aspecto de endsporos de origem bacteriana.

Esterilizao por filtrao

Fig. 5 - Sistemas de filtrao usados para a esterilizao por filtrao. A filtrao envolve a remoo de clulas de microrganismos de solues lquidas ou de gases atravs do atravessamento de membranas filtrantes. Estas podem ser de vrios materiais (mais vulgarmente, acetato de celulose ou de policarbonato) e tm dimetros de poro muito pequenos (usualmente 0,2 m) onde as clulas microbianas ficam retidas. Esta tcnica muito utilizada em laboratrios de Microbiologia para esterilizar meios de cultura com componentes que possam sofrer alterao por aco do calor (p.ex. vitaminas, antibiticos, acares, aminocidos) e na indstria farmacutica para esterilizao de solues de vitaminas, de agentes quimioteraputicos, soro etc.. Contudo, a maior parte dos vrus so suficientemente pequenos para atravessarem os poros destas membranas filtrantes, pelo que esta tcnica no assegura a esterilidade total das solues ou gases filtrados.

Fig. 6 - Sistemas de filtrao usados para a esterilizao por filtrao. Para alm de ser utilizada para esterilizar solues, a filtrao atravs de membranas filtrantes pode tambm ser utilizada para concentrar clulas microbianas a partir de volumes grandes de amostras lquidas, como acontece na anlise bacteriolgica de guas. O ar que circula em cmaras de fluxo laminar de segurana biolgica (Fotografia abaixo) ou em salas limpas frequentemente sujeito a filtrao atravs de filtros de elevada eficincia (High Efficiency Particle Air HEPA- Filter) que permitem a reteno de pelo menos 99,999% das clulas e esporos microbianos ou outras partculas presentes no ar.

Fig. 7 - Aspecto exterior de uma cmara de fluxo laminar onde feita a esterilizao do ar por filtrao de modo a deixar o seu ambiente interior estril.
Fonte: http://www.e-escola.pt/topico.asp?id=365