74

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA JULIO DE MESQUITA FILHO
FACULDADE DE CINCIAS AGRONMICAS

CMPUS DE BOTUCATU

CARACTERIZAO ANATMICA FOLIAR DE CLONES DE
SERINGUEIRA (Hevea spp.) VISANDO RESISTNCIA AO
Microcyclus ulei

ROSANA SAMBUGARO

Dissertao apresentada Faculdade de
Cincias Agronmicas da Unesp - Cmpus de
Botucatu, para obteno do ttulo de Mestre em
Agronomia - rea de Concentrao em
Proteo de Plantas.

BOTUCATU-SP
Fevereiro - 2003

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA JULIO DE MESQUITA FILHO
FACULDADE DE CINCIAS AGRONMICAS
CMPUS DE BOTUCATU

CARACTERIZAO ANATMICA FOLIAR DE CLONES DE
SERINGUEIRA (Hevea spp.) VISANDO RESISTNCIA AO
Microcyclus ulei

ROSANA SAMBUGARO
Engenheira Florestal

Orientador: Prof. Dr. Edson Luiz Furtado

Dissertao apresentada Faculdade de
Cincias Agronmicas da Unesp - Cmpus de
Botucatu, para obteno do ttulo de Mestre em
Agronomia - rea de Concentrao em
Proteo de Plantas.

BOTUCATU-SP
Fevereiro - 2003
1
A DEUS
Pela presena em todos
os momentos da minha vida.

Aos meus pais
ELZA e CLAUDIN SAMBUGARO, pelo incentivo, apoio e
dedicao total na minha formao profissional e pessoal.

A minha irm CRISTIANE por todo apoio
e compreenso.

DEDICO
II
AGRADECIMENTOS

Ao Prof. Dr. Edson Luiz Furtado, pela amizade, orientao e ensinamentos transmitidos
durante todo trabalho.

Ao Prof. Dr. Roberto Antonio Rodella, do Departamento de Botnica do Instituto de
Biocincias da Unesp-Botucatu, pela amizade, pacincia e orientao, desde do incio
finalizao, deste trabalho.

Ao amigo Engenheiro Agrnomo MSc Carlos Raimundo Reis Mattos, das Plantaes
Michelin da Bahia, pela amizade, incentivo e apoio na realizao deste trabalho.

s Plantaes Michelin da Bahia Ltda., por ter cedido os clones, os isolados e o espao
fsico para a realizao das inoculaes do fungo. Aos tcnicos da empresa, em especial Saulo
Emlio, pela amizade e apoio irrestrito na execuo das inoculaes.

Ao Departamento e ao Programa de Ps-Graduao de Botnica da Unesp-Botucatu, pela
concesso de equipamentos e materiais. Ao tcnico Kleber pela pacincia e auxlio no
laboratrio de anatomia.

amiga Vanessa de Ftima Jerba pelo companheirismo, disposio e ensinamentos das
tcnicas anatmicas, que foram fundamentais na conduo deste trabalho.

Aos Professores e Funcionrios do Departamento de Produo Vegetal, pelos ensinamentos
e colaborao.

Ao Ronaldo Sambugaro pelo auxlio na diagramao das figuras.

Aos amigos Ana Paula Lombardi, Mrcia Michelle Queiroz, Mrcia Cezar, Csar Bueno,
Viviane Biazon, Alniuza e Christiane Aparecido, pelo companheirismo.

III
Aos amigos ps-graduandos do curso de Botnica. amiga Letcia, do curso de graduao
em biologia, por compartilhar os bons momentos no laboratrio de anatomia.

A todos que direta ou indiretamente colaboraram para realizao deste trabalho.

O MEU MUITO OBRIGADO

IV
SUMRIO
Pgina
Lista de Tabelas........................................................................................................... V
Lista de Figuras............................................................................................................ VII
1 RESUMO.................................................................................................................. 1
2 SUMMARY.............................................................................................................. 2
3 INTRODUO........................................................................................................ 3
4 REVISO BIBLIOGRFICA................................................................................. 5
4.1 O Hospedeiro......................................................................................................... 5
4.2 A Doena............................................................................................................... 6
4.3 O Patgeno............................................................................................................ 7
4.4 Ciclo da Doena..................................................................................................... 8
4.5 Fatores ligados Resistncia................................................................................. 9
5 MATERIAIS E MTODOS..................................................................................... 14
5.1 Inoculao do patgeno......................................................................................... 14
5.2 Anlise anatmica dos fololos sadios e infectados............................................... 16
6 RESULTADOS E DISCUSSO.............................................................................. 18
6.1 Anlise anatmica dos fololos sadios................................................................... 18
6.2 Anlise anatmica dos fololos infectados............................................................ 46
6.3 Consideraes finais.............................................................................................. 52
7 CONCLUSES........................................................................................................ 55
8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..................................................................... 56

V
LISTA DE TABELAS
Pgina
1. Parentais dos quatro clones de seringueira (Hevea spp.): PB 235, PB 314, MDF
180 e Fx 2784........................................................................................................

16
2. Valores mdios dos caracteres anatmicos quantitativos da regio internervural
(RIN) e da nervura central (NC), do fololo mediano, para a diferenciao entre
trs estgios foliares (B
2
, C, D) dos clones (PB 235, PB 314, MDF 180, Fx
2784) de seringueira..............................................................................................

28
3. Correlao entre os nove caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), dos trs estgios foliares, dos
quatro clones de seringueira (Hevea spp.) e os dois primeiros componentes
principais (Y
1
e Y
2
)................................................................................................

29
4. Intervalos de limite inferior (Li) e superior (Ls) dos caracteres anatmicos
quantitativos com maior poder discriminatrio para Y
1
e Y
2
de cada estgio
foliar (B
2
, C e D), independentemente do clone....................................................

33
(RIN) e da nervura central (NC), do fololo mediano, no estgio foliar B
2
, dos
clones (PB 235, PB 314, MDF 180 e Fx 2784) de
seringueira..............................................................................................................

36
6. Correlao entre os oito caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), do estgio foliar B
2
, dos quatro
clones de seringueira (Hevea spp.) e os dois primeiros componentes principais
(Y
1
e Y
2
)................................................................................................................

37
(RIN) e da nervura central (NC), do fololo mediano, no estgio foliar C, dos
seringueira..............................................................................................................

39
VI
Pgina
8. Correlao entre os oito caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), do estgio foliar C, dos quatro
(Y
1
e Y
2
)................................................................................................................

40
(RIN) e da nervura central (NC), do fololo mediano, no estgio foliar D, dos
seringueira..............................................................................................................

43
10. Correlao entre os nove caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), do estgio foliar D, dos quatro
(Y
1
e Y
2
)................................................................................................................

44

VII
LISTA DE FIGURAS

Pgina
1. Cmara mida com diversos boxes separados, onde so controladas a umidade,
temperatura e luminosidade......................................................................................

15
2. Detalhe de um Box da cmara mida, com uma planta de seringueira inoculada..... 15
4 a 7. Seces transversais da lmina foliar, no estgio B
2
, de quatro clones de
seringueira. 4. Clone PB 235; 5. Clone PB 314; 6. Clone MDF 180; 7. Clone
Fx 2784...

19
8 a 11. Seces transversais da lmina foliar, no estgio C, de quatro clones de
seringueira. 8. Clone PB 235; 9. Clone PB 314; 10. Clone MDF 180; 11.
Clone Fx 2784..................................................................................................

23
12 a 15. Seces transversais da lmina foliar, no estgio D, de quatro clones de
Clone Fx 2784..................................................................................................

24
16 a 19. Seces transversais da nervura central, no estgio B
2
Clone Fx 2784..................................................................................................

25
20 a 23. Seces transversais da nervura central, no estgio C, de quatro clones de
Clone Fx 2784..................................................................................................

26
24 a 27. Seces transversais da nervura central, no estgio D, de quatro clones de
Clone Fx 2784..................................................................................................

27
28. Disperso grfica dos trs estgios foliares (B
2
, C, D) dos quatro clones de
seringueira (PB 314, PB 235, MDF 180, Fx 2784), utilizando os dois primeiros
componentes principais (Y
1
e Y
2
), para o conjunto dos nove caracteres
anatmicos quantitativos da folha.........................................................................

30

VIII
Pgina
29. Dendrograma resultante da Anlise de Agrupamento dos caracteres anatmicos
quantitativos da folha, utilizando-se a Distncia Euclidiana Mdia entre os trs
estgios foliares (B
2
, C e D) dos quatro clones de seringueira estudados (PB
235, PB 314, Fx 2784 e MDF 180).......................................................................

31
30. Estgio foliar B
2
, o qual representa a fase de infeco pelo patgeno..................... 32
31. esquerda: leses de esporulao conidial na face abaxial e adaxial dos fololos,
no estgio C. direita: detalhe das leses na face abaxial do fololo...................

32
32. Detalhe dos estromas na face adaxial do fololo, no estgio D................................ 32
33. Disperso grfica dos quatro clones de seringueira (PB 314, PB 235, MDF 180,
Fx 2784) no estgio foliar B
2
, utilizando os dois primeiros componentes
principais (Y
1
e Y
2
), para o conjunto dos oito caracteres anatmicos
quantitativos da folha.............................................................................................

38
quantitativos da folha, utilizando-se a Distncia Euclidiana Mdia entre os
quatro clones de seringueira estudados (PB 235, PB 314, Fx 2784 e MDF 180),
no estgio foliar B
2
................................................................................................

38
Fx 2784) no estgio foliar C, utilizando os dois primeiros componentes
principais (Y
1
e Y
2
), para o conjunto dos oito caracteres anatmicos
quantitativos da folha.............................................................................................

41
36: Dendrograma resultante da Anlise de Agrupamento dos caracteres anatmicos
no estgio foliar C..................................................................................................

41
Fx 2784) no estgio foliar D, utilizando os dois primeiros componentes
principais (Y
1
e Y
2
), para o conjunto dos nove caracteres anatmicos
quantitativos da folha................................................................................................

45

IX
Pgina
no estgio foliar D.................................................................................................

45
39 a 42. Seces transversais da leso foliar causada aos cinco dias aps a inoculao
do patgeno......................................................................................................

48
43 a 46. Seces transversais da leso foliar causada aos 10 dias aps a inoculao
do patgeno......................................................................................................

49
do patgeno. 47. PB 314 com alterao no parnquima palidico na regio
do estroma; 48. PB 314; 49. MDF 180 com degenerao dos tecidos e
presena de fenis; 50. MDF 180....................................................................

50
do patgeno. 51. PB 314 com alterao no parnquima palidico na regio
do estroma; 52. PB 314; 53. MDF 180 com formao de clulas
estromticas, degenerao dos tecidos e presena de fenis; 54. MDF 180...

51

1 RESUMO

O mal das folhas um dos mais srios problemas patognicos da
seringueira no Brasil, sendo uma constante ameaa para as plantaes do Oriente,
principalmente Tailndia, Indonsia e Malsia, pases responsveis por 90 % da produo
mundial de borracha natural. Esta doena causa desfolhamentos sucessivos s plantas em
materiais suscetveis, reduzindo a produo de ltex e acarretando na mortalidade das plantas
adultas. O objetivo do presente trabalho foi: caracterizar a anatomia foliar em trs estgios
fenolgicos nos clones de seringueira PB 314, PB 235, MDF 180 e Fx 2784; aspectos
anatmicos envolvidos com a patognese do Microcyclus ulei em trs clones (PB 314, PB 235
e Fx 2784) avaliados aos 5, 10, 45 e 90 dias aps inoculao. Foi possvel classificar trs
estgios (B, C e D) de acordo com os aspectos anatmicos. Verificou-se que PB 314
possibilitou o completo desenvolvimento do fungo nas fases assexual e sexual; MDF 180
apresentou alta concentrao de compostos fenlicos no mesofilo, ausncia da ascognese e
maior tempo da esporulao conidial que em PB 314; Fx 2784 apresentou maior espessura da
epiderme da face abaxial, no estgio foliar B, que os outros clones, podendo ser considerada
um fator de resistncia anatmica infeco e colonizao pelo fungo.

_________________________
Key words: Hevea, Microcyclus ulei, anatomic resistance.
2
ANATOMIC CHARACTERIZATION OF LEAVES IN RUBBER TREE CLONES AND
RESISTANCE TO Microcyclus ulei. Botucatu, 2003. Dissertao (Mestrado em
Agronomia/Proteo de Plantas) Faculdade de Cincias Agronmicas, Universidade
Estadual Paulista.
Author: ROSANA SAMBUGARO
Adviser: EDSON LUIZ FURTADO

2 SUMMARY

The South American leaf blight is the most serious disease of rubber
tree: is currently a serious threat to many regions of rubber plantation of the world, particularly
in Indonesia, Tayland and Malaysia, responsible for 90% of natural rubber; and was the most
important single factor in the complete failure of attempts to cultive rubber in the North region
of Brazil. This disease caused successive defoliation in susceptible materials reducing the
latex production and the plants death after third defoliation. The aim of this work was: a)To
characterize the leaflets anatomy in three phenoligic stage in four rubber tree clones: PB 314,
PB 235, MDF 180 and Fx 2784; b)Anatomical aspects involved with pathogenesis of
Microcyclus ulei in three clones (PB 314, MDF 180 and Fx 2784) evaluated on 5, 10, 45 and
90 days after inoculation. It was possible classified 3 leaves stages (B, C and D) according to
anatomical aspects. In PB 314 it was possible the complete fungus development in asexual and
sexual stage, MDF 180 showed phenolic compounds concentration in the mesophil and the
fungus ascogenese it was not possible, but the conidial sporulation was longer than PB 314; Fx
2784 has more larger thickness epidermic of abaxial surface in the B stage than the other
clones, contributed with important anatomic factor of resistance to infection and colonization
by fungus.
3
3 INTRODUO

O mal das folhas da seringueira, causado pelo fungo ascomiceto
Microcyclus ulei (P. Henn.) v. Arx, o principal problema dos seringais de cultivo da Amrica
Latina (Gasparotto et al., 1984), no s pela magnitude dos danos causados produo como,
principalmente, pela freqncia com que estes danos ocorrem (Bergamin Filho & Amorim,
1996). No Brasil est presente em todos os Estados onde cultivada, com danos significativos
na Regio Norte, no sudeste da Bahia e em alguns municpios dos estados de Mato Grosso
(Gasparotto & Ferreira, 1989), So Paulo e Paran (Silveira & Furtado, 1995) e Esprito Santo
(Gasparotto et al., 1997).
Por ser um patgeno altamente ameaador, devido a sua rpida
disseminao, alta capacidade de causar danos, alta adaptao e difcil controle, a utilizao de
clones resistentes e produtivos a medida mais eficiente de controle da doena. De acordo
com Gonalves et al. (2001), a abertura de novas fronteiras para a cultura da seringueira
aumenta ainda mais as preocupaes relativas ao limitado nmero de clones plantados sujeitos
vulnerabilidade, necessitando da ampliao do programa de melhoramento gentico. Porm,
existem poucos estudos visando a obteno de resistncia, como os realizados pelo Instituto
Agronmico de Campinas para a Regio do Vale do Ribeira, Estado de So Paulo (Gonalves
et al., 2000) e os realizados pelas Plantaes Michelin em parceria com o CIRAD (Centro de
Cooperao Internacional de Pesquisas Agronmicas para o Desenvolvimento).
4
Em relao fase estromtica do fungo, a literatura revela que h
escassez de estudos. Esta fase alm de constituir fonte de inculo primria e de proteo do
fungo em estaes desfavorveis, ela tambm produzida durante a fase epidmica da doena,
apresentando assim grande importncia. Bergamin Filho (1982) afirma que a reduo do
inculo inicial, ou seja, da fase estromtica do fungo, a nica soluo econmica disponvel
para os produtores no controle da doena.
Alguns estudos anatmicos (Blazquez & Owen, 1963; Sanier et al.,
1992; Garcia, 1995; Garcia et al., 1995; Garcia et al., 1999) mostraram que clones resistentes e
suscetveis comportaram-se de maneira diferente aps a penetrao do fungo; os clones
resistentes produzem rapidamente um material amarelo intracelular que parece impedir o
progresso da infeco e, conseqentemente, a formao da fase sexual, fato esse que no
ocorre em clones suscetveis.
Devido a esses diferentes comportamentos de clones em resposta
infeco pelo fungo e aos poucos trabalhos encontrados na literatura, h a necessidade de
estudar mais detalhadamente os aspectos anatmicos ligados resistncia de clones de
seringueira ao Microcyclus ulei, podendo-se ampliar os conhecimentos para serem
incorporados aos futuros programas de melhoramento gentico.
O presente trabalho teve como objetivo caracterizar comparativamente,
em diferentes pocas de coleta, a anatomia dos fololos sadios e infectados (desde a fase
conidial at a estromtica) dos clones de seringueira (Hevea spp.) PB 235, PB 314, MDF 180
e Fx 2784 ao mal-das-folhas (Microcyclus ulei), visando identificar possveis caractersticas
anatmicas relacionadas com a resistncia a esse patgeno.

5
4 REVISO BIBLIOGRFICA

4.1 O Hospedeiro

A seringueira tem como habitat natural a Regio Amaznica, onde
existem dez espcies no Brasil das onze conhecidas (Gasparotto et al., 1997). Botanicamente,
a seringueira uma dicotilednea monica do gnero Hevea pertencente famlia
Euphorbiaceae, sendo todas as espcies lenhosas e arbreas. Possui flores unissexuais e suas
folhas so longamente pecioladas e compostas trifolioladas.
As plantas adultas deste gnero apresentam um perodo de senescncia
e queda das folhas, geralmente, no incio da estao seca. O conhecimento do hbito
fenolgico, como a maneira e o perodo de reenfolhamento dos seringais, a fase mais
importante para a fitopatologia, pois nesse perodo que a seringueira apresenta fololos com
colorao antocinica intensa, nos quais ocorre a grande maioria dos ataques das doenas
foliares (Gasparotto et al., 1997).
De acordo com Hall et al. (1978), o ciclo da ontogenia foliar
compreende quatro fases, relacionadas com o nvel de atividade do meristema apical e com as
fases de desenvolvimento foliar:
Estdio A gema apical anteriormente em repouso, em atividade de diviso celular e
morfognese (formao de primrdios foliares e de gemas axiliares). Esse estdio dura, em
mdia nove dias.
6
Estdio B fase de alongamento. A atividade mittica no meristema apical propriamente dita
reduz a partir da fase inicial do alongamento. Esse estdio dura, em mdia, dez dias e
apresenta dois subestdios:
B
1
fololos na posio vertical com o pice voltado para cima, fortemente carregados com
antocianina.
B
2
pices dos fololos voltados para baixo, colorao antocinica menos intensa. Esta a
fase de maior velocidade de alongamento do eixo caulinar.
Estdio C fololos pendentes, flcidos e de cor verde. A durao de cerca de oito dias.
Estdio D fase de dormncia da gema apical com folhas totalmente amadurecidas. Esta fase
dura geralmente treze dias sob condies normais de crescimento ativo.
A descrio anatmica foliar da famlia Euphorbiaceae caracterizada
por Metcalfe & Chalk (1957), revelando a ocorrncia de uma epiderme contendo clulas com
paredes anticlinais retas ou sinuosas e, epiderme da face abaxial muitas vezes, com papilas em
algumas espcies. Os estmatos, geralmente, ocorrem na face abaxial, raramente na adaxial.
No mesofilo aparece uma camada de clulas palidicas debaixo da epiderme da face adaxial,
e vrias camadas constituindo o tecido parenquimtico lacunoso. Os feixes vasculares so
colaterais acompanhados por um anel descontinuo de fibras com intensa lignificao.

4.2 A Doena

O mal-das-folhas da seringueira (Hevea spp.), ou queima sul-
americana das folhas ou ainda South American Leaf Blight (SALB) nos pases de lngua
inglesa, considerada uma das principais causas de fracassos de seringais de cultivo no Brasil
(Gasparotto et al., 1984; Silveira & Furtado, 1995) e em outros pases da Amrica do Sul e
Central (Gasparotto et al., 1997). Causada pelo fungo Microcyclus ulei (P. Henn.) v. Arx, essa
doena se manifesta em folhas novas, sob a forma de pequenas manchas necrticas, circulares,
com pontuaes pretas no centro, constitudas pelos rgos de frutificao do fungo
(Bergamin & Cardoso, 1980). Especialmente nas superfcies abaxiais, essas leses apresentam
tonalidades e aspecto verde-oliva-feltroso, ou cinza-esverdeado-feltroso, ou escuro-feltroso
resultantes da esporulao conidial da primeira fase assexuada ou anamrfica do M. ulei
(Gasparotto et al., 1997), causando a queda prematura dos fololos (Santos, 1992).
7
Em condies favorveis ocorrncia do mal-das-folhas, como a
umidade do ar superior a 95% por 10 h consecutivas, durante um perodo de, pelo menos, 12
noites por ms, e regies sujeitas a perodos prolongados de orvalho, neblina ou chuvas leves,
como reas de baixadas (Camargo et al., 1967), as leses crescem e a planta pode perder
totalmente a folhagem. Nessas condies e em clones altamente suscetveis, infeces e
reinfeces do patgeno em fololos jovens podem causar desfolhamentos sucessivos,
ocasionando o secamento de terminais de hastes e de galhos e, conseqentemente, morte
descendente de plantas (Gasparotto et al., 1997).
Nos viveiros e jardins clonais, a elevada incidncia da doena causa
atraso no crescimento, reduo do nmero de plantas em condies de serem enxertadas e
diminuio de aproveitamento de borbulhas para enxertia em pocas apropriadas (Gasparotto
et al., 1990).
No Brasil, o mal-das-folhas ocorre em todos os Estados onde a
seringueira cultivada, com danos significativos na Regio Norte, no sudeste da Bahia e em
alguns municpios do Estado do Mato Grosso (Gasparotto & Ferreira, 1989), Esprito Santo
(Gasparotto et al., 1997), e no Estado de So Paulo, no municpio de Jacupiranga, com
coordenadas de 24
o
48 S (Trindade & Furtado, 1997).

4.3 O Patgeno

O fungo Microcyclus ulei pertence ao filo Ascomycota e famlia
Dothideaceae. Apresenta ciclo biolgico completo na seringueira (Brignani Neto et al., 1991)
e produz dois tipos de esporos infectivos durante a fase epidmica da doena, conforme a
reproduo: conidisporos (reproduo assexuada ou fase anamrfica) e ascsporos
(reproduo sexuada ou fase telimrfica), de acordo com Silveira & Furtado (1995) e
Bergamin Filho & Amorim (1996). Os conidisporos, por serem numerosos, so os principais
disseminadores do patgeno e responsveis pela severidade da doena (Bergamin Filho &
Cardoso, 1980). Os ascsporos, responsveis pelo inculo primrio e pela via anti-horria de
infeco, considerada de grande importncia nas epidemias (Bergamin Filho & Amorim,
1996), so produzidos em quantidades menores e descarregados progressivamente (Bergamin
Filho & Cardoso, 1980; Silveira & Furtado, 1995), permanecendo viveis no interior de

_________________________
* FURTADO, E.L. (Faculdade de Cincias Agronmicas, UNESP Campus de Botucatu).
Comunicao pessoal, 2003.
8
estruturas nas folhas retidas na copa por muitos dias (*Furtado). De acordo com Chee (1980),
os dois tipos de esporos tm grande importncia, mas desempenham diferentes papis na
epidemiologia da doena.
Segundo Gasparotto & Ferreira (1989) e Gasparotto et al. (1997), a
fase anamrfica ou assexuada representada pela formao de conidiforos simples, eretos ou
geniculados, medindo at 140 x 4-7 m. Os condios variam de retos a sinuosos ou em forma
de saca-rolha ou de vagem de amendoim e podem ser uni (15-43 x 5-9 m) ou bicelulares (23-
63 x 5-10 m). A fase telimrfica ou sexuada produzida em ascostromas na superfcie dos
fololos. Segundo Furtado (1996), os ascos so bitunicados, clavados com oito ascsporos, os
quais so hialinos, irregularmente elipsoidais a fusides, bicelulares, com suave constrio nos
septos que divide os ascsporos em duas clulas desiguais, medindo 12-20 x 2-5 m.

4.4 Ciclo da Doena

Para Bergamin Filho & Amorim (1996), o fitopatossistema tropical,
diferentemente do temperado, apresenta duas vias de infeco do patgeno, horria e anti-
horria. A primeira responsvel pelo aumento de novas leses, comum a todos os
fitopatossistemas, e a segunda pelo crescimento das leses existentes, ou seja, stios doentes
podem gerar novos stios doentes atravs da infeco dos stios adjacentes queles
previamente doentes. Os autores, ainda descrevem que Microcyclus ulei parece apresentar,
alm da via anti-horria de infeco, dois tipos de via-horria (sexual e assexual). Isso permite
uma maior flexibilidade de comportamento, ignorando muitas restries climticas e
possibilitando severas epidemias.
O fungo desenvolve sua fase conidiana, a partir do ascsporo ou
condio, nos fololos novos, num perodo que varia de 5 a 16 dias (Junqueira et al., 1988). Essa
infeco conidial considerada a fase explosiva da epidemia pela quantidade de condios e,
conseqentemente, pela facilidade de disseminao dos mesmos atravs do vento ou chuva,
infectando outros fololos novos da mesma planta ou de plantas diferentes (Gasparotto et al.,
1997).

9
A fase ascgena (sexuada), mais demorada, desenvolve-se nos fololos
maduros ou velhos que permanecem na planta, num perodo de um a quatro ou cinco meses
(Chee, 1976; Medeiros, 1976) e tem papel importante na sobrevivncia do patgeno de um
ano para outro. Portanto, os ascsporos so importantes no incio, como fonte de inculo
primrio, e no prolongamento do ataque (Brignani Neto et al., 1991). Esses fololos maduros,
com estromas negros que abrigam os ascsporos, caem no cho e quando molhados por chuva
ou orvalho aumenta a tenso interna dos ascostromas que contm os ascos, resultando na
ejeo de ascsporos, os quais so disseminados pelo vento (Gasparotto et al., 1997),
infectando novamente os fololos novos.
Chee (1976b) revelou que os ascsporos apresentam-se abundantes
durante a madrugada em dias secos e durante todo o dia em perodos chuvosos, enquanto que
os condios apresentam picos de concentraes em torno de meio-dia nos dois perodos (seco e
chuvoso); a alta insolao diria tambm influencia na concentrao de ascsporos,
diminuindo-a. Rocha & Vasconcellos Filho (1978) confirmam que a maior quantidade de
ascsporos liberados no ar ocorre durante a noite e no perodo da manh.
De acordo com Gasparotto et al. (1997), pode-se estimar o ciclo de
vida do patgeno em quatro a cinco meses; comea com as infeces dos fololos novos,
aparecendo os sintomas cerca de quatro a dez dias depois das infeces e mais dois meses para
a total formao de estromas.

4.5 Fatores ligados Resistncia

As plantas apresentam vrios tipos de resistncias, podendo ter
natureza estrutural e/ou bioqumica, presentes antes ou depois da infeco, sendo
respectivamente, pr-formadas ou ps-formadas (Agrios, 1997).
Chee (1976a) demonstrou que a resistncia de clones de seringueira
mais bem quantificada pelo tamanho da leso do que pela esporulao do patgeno em si. De
acordo com Bergamin Filho & Amorim (1996), o crescimento da leso parece ser o ponto
principal no controle das doenas foliares importantes nos trpicos e subtrpicos, porque o
patgeno tem a capacidade de conquistar as reas ao redor da leso inicial, exigindo menos
das condies climticas, no ficando na dependncia de novas infeces para continuar a

10
produzir esporos. Portanto, os patgenos do fitopatossistema tropical tm sua estratgia na via
anti-horria (para M. ulei a ascognese) e essa considerada sempre uma auto-infeco,
tornando a resistncia vertical de pouca importncia. Uma reduo dessa via tem um efeito
muito maior que uma reduo na quantidade de esporos produzidos (via horria de infeco).
Outro fator de grande importncia relatado pelos autores em climas tropicais e subtropicais a
continuidade do inculo entre as estaes de cultivo, nessa fase o potencial de inculo
mantm-se alto.
As pesquisas sobre substncias produzidas pela seringueira, que
desempenham funo na resistncia da planta ao M. ulei, comearam em meados dos anos 60
(Gasparotto et al., 1997).
Blasquez & Owen (1963) foram os primeiros a demonstrar a presena
de taninos prximos a leses no desenvolvidas em folhas de clones resistentes.
Outro composto fenlico considerado no mecanismo de defesa a
lignina. Friend et al., Moerschbacher et al. e Reimers & Leach, citados por Garcia et al.
(1995b), constataram que a lignina pode estar associada com a reao de hipersensibilidade;
ela pode agir como uma barreira mecnica entre hospedeiro e patgeno, protegendo as paredes
das plantas da hidrlise fngica e limitando a troca de gua e nutrientes. Observaes
histolgicas realizadas pelo autor mostraram que esporulao do fungo foi envolvida por
barreiras de ligninas e que estruturas estromticas contendo os ascsporos foram produzidas
ao redor de tecidos necrticos, sobre os tecidos clorticos, ou seja, ao redor das necroses.
Garcia et al. (1999) sugerem que os clones possuem capacidades
diferentes de lignificar suas leses, apresentando grau de resistncia. Clones com resistncia
parcial apresentam maior acmulo de lignina ao redor das leses grandes que os clones
totalmente resistentes. A lignina, provavelmente, mostra um menor papel em reao de defesa
em clones totalmente resistentes porque estes apresentam uma produo dominante de
fitoalexina na reao de hipersensibilidade. Ao contrrio, a lignificao intensiva pode ser
responsvel pela presena do fungo dentro da zona necrtica em clones parcialmente
resistentes. Neste caso, conclui-se que o ciclo do fungo, com o estabelecimento da forma
sexual ao redor dessa zona 15 dias depois da infeco nos clones mais suscetveis, retardada
ou parada em clones que apresentam forte lignificao (Garcia et al., 1995b). Ainda, a
ausncia do acmulo de lignina e escopoletina est, freqentemente, associada com os

11
sintomas mais severos da doena, sugerindo uma participao destes compostos na resistncia
(Garcia et al., 1999).
Segundo Gasparotto et al. (1997), estudos realizados sugerem que os
fenis e particularmente os flavonides kaempferol e/ou quercetina podem estar envolvidos
em mecanismos de resistncia ao M. ulei. Estes, ou inibem a germinao dos patgenos ou
modificam a atividade do cido indol actico oxidase (AIA oxidase), atuando, assim, sobre a
regulao das auxinas. Os fenis agem sobre a germinao dos esporos e crescimento das
hifas.
A produo de fenis aps infeco por um patgeno bem
documentada em plantas herbceas (Uritani; Tal & Robeson e Rouxel, citados por Garcia et
al., 1995b), mas menos em plantas lenhosas (Gottstein & Gross, citados por Garcia et al.,
1995). Os efeitos fungitxicos dos fenis e o grande nmero em clones resistentes indicam um
papel ativo no mecanismo de defesa das plantas (Garcia et al., 1995).
Para Blasquez & Owen (1963) e Hashim et al. (1978), a cutcula no
representa uma barreira na penetrao de M. ulei, mesmo em folhas velhas como em folhas
jovens de clones resistentes. Sanier et al. (1992) concluram que a resistncia parece no ser
uma barreira anatmica, mas sim, devido a fatores bioqumicos. Segundo os mesmos autores,
os fenis contribuem para resistncia de fungos fitopatognicos em diversos caminhos, como:
inibidor na germinao conidial, quando os fenis esto presentes antes da infeco;
participando da reao de hipersensibilidade, quando os fenis oxidados, de colorao
marrom, aparecem durante a reao; precursores de lignina, contribuindo para a resistncia das
paredes das clulas. Conforme Sanier et al. (1992), muitas fitoalexinas so fenlicas, e quando
os compostos fenlicos no apresentam papel ativo na resistncia, eles possivelmente so
usados como marcadores de resistncia ou de suscetibilidade.
H um nmero interessante de indicaes surgidas a respeito de muitos
compostos fenlicos e diferentes propores dos vrios grupos de fenis presentes nas folhas,
mas, na verdade, determinado composto fenlico freqentemente mais abundante em clones
suscetveis e outros, mais abundante em clones resistentes (Sanier et al., 1992), ou seja, o
importante so as diferenas quantitativas dos compostos fenlicos e no a natureza dos
compostos fenlicos constituintes dos vrios clones ou espcies de Hevea.

12
O primeiro relato de uma reao de defesa ativa em seringueira foi
descrito por Tan & Low, citados por GARCIA et al. (1995a), os quais estabeleceram uma
fitoalexina azul fluorescente, em luz ultravioleta (UV), na reao de resistncia para
Colletotrichum gloeosporioides. Essa fitoalexina, derivada da cumarina, foi, mais tarde,
identificada como escopoletina (Giesemann et al., 1986). Trabalhos relatados por Garcia et al.
(1995a) mostram que a presena da escopoletina tem sido freqentemente detectada em
plantas como resposta ao ataque por vrus (Andreae & Andreae), bactrias (Sequeira) e fungos
(Minamikawa et al., Tan & Low, Tal & Robeson e El Modafar et al.). Esta fitoalexina est
relacionada com o mecanismo de reao de hipersensibilidade incompatvel, descrito por
Lieberei et al. (1989). A reao representada por pequenas leses necrticas que, quando
observadas com luz UV apresenta um halo fluorescente azul ao redor das leses (Gasparotto et
al., 1997).
Duas fases de acmulo de escopoletina foram observadas por Garcia et
al. (1995) durante o processo de infeco por M. ulei.
A primeira (de 0 a 24 h), foi caracterstica para os clones mais
resistentes (por exemplo, Fx 2261 e Fx 4098) e corresponde ao desenvolvimento inicial do
fungo (germinao e diferenciao do apressrio), levando, aps 24 h da inoculao,
penetrao dos tecidos da epiderme. Reaes da clula durante este perodo foi caracterizada
pelo colapso da camada epidrmica em clones com resistncia total e de camadas
subepidrmicas em clones com resistncia parcial.
A segunda fase (24 - 72 h) caracterizou-se pelo perodo de crescimento
micelial em tecidos foliares de clones parcialmente resistentes e em clones totalmente
resistentes, sendo a acumulao de escopoletina grande e rpida neste perodo. Isso no ocorre
em leses de M. ulei de clones suscetveis de Hevea, porque a produo de escopoletina por
folhas infectadas severamente inibida pela liberao do cido ciandrico (HCN) em grande
quantidade durante o processo de patognese. Um dos fatores responsveis por isso a alta
atividade da enzima linamarase (-glicosidase) que atua como co-fator na sntese de HCN,
desfavorecendo a reao de hipersensibilidade (Lieberei, 1981). Em clones resistentes, o HCN
liberado lentamente, em pequenas quantidades, sem inibir as reaes de defesa da planta
contra M. ulei (Gasparotto et al., 1997). Para Lieberei (1986), a pequena liberao de HCN

13
pode ser devido ao curto perodo de tempo de fixao de HCN em tecidos pela formao de
hidroxinitrilos ou aminonitrilos e devido a maior eficincia de clones resistentes nas reaes
enzimticas de desintoxicao do HCN.
Muitas plantas liberam HCN aps dano mecnico ou qumico em suas
clulas ou ao longo de uma infeco fngica (Myers & Fry, citados por Gasparotto et al.,
1997), como mecanismo de defesa. Em Hevea, HCN um fator que impede o mecanismo de
defesa da planta (Gasparotto et al., 1997), alm disso, M. ulei tolerante ao HCN, inclusive,
cresce melhor em atmosfera que contm HCN (Lieberei et al., 1983).
Apesar dos aspectos positivos relatados sobre os compostos fenlicos,
os resultados apresentados por Sanier et al. (1992) parecem mostrar que compostos fenlicos
no desempenham papel principal na resistncia de folhas jovens de Hevea, mas devem estar
envolvidos na induo do mecanismo de resistncia. Hashim (1986) observou que a
resistncia fica localizada na zona induzida e pode, por isso, ser causada pelo colapso da
clula do hospedeiro ou pela produo de fitoalexina.
Rivano et al., citado por Berger (1992), afirmam que os numerosos
fracassos na seleo gentica de clones de seringueira resistentes a M. ulei so devidos
seleo de indivduos com resistncia vertical, sendo, por isso, indispensvel identificar o
mximo possvel de componentes ligados resistncia, o que poderia conferir planta um
nvel de resistncia horizontal satisfatrio.

14
5 MATERIAL E MTODOS

O trabalho foi conduzido em laboratrio, cmara mida e casa de
vegetao da Plantaes Michelin da Bahia Ltda. e do Departamento de Produo Vegetal da
Faculdade de Cincias Agronmicas de Botucatu, UNESP. O estudo anatmico foi realizado
no Departamento de Botnica do Instituto de Biocincias de Botucatu, UNESP.
O isolado utilizado nas inoculaes, PMB 26, pertence coleo da
Plantaes Michelin da Bahia, Ituber-BA, o qual foi cultivado em meio de crescimento
especfico (Junqueira et al., 1984) e em meio MC 4 para esporulao (Mattos, 1999). A regio
da Bahia escolhida para obteno do isolado uma das que mais sofre no Brasil com o
problema designado por mal-das-folhas (Microcyclus ulei), o qual causa grandes prejuzos
econmicos para esta cultura.

5.1 Inoculao do patgeno

A inoculao do fungo (Microcyclus ulei) foi realizada em cmara
mida (Figura 1 e 2) com a ajuda de um atomizador. A suspenso de inculo foi pulverizada
na face inferior dos fololos jovens, correspondentes ao estgio B
2
descrito por Hall et al.
(1978), com temperatura variando de 23 a 26 C e umidade superior a 95%. Aps as
inoculaes as plantas permaneceram 24 horas no escuro, e a partir da, at 12 dias, sob
regime de 12 horas de escuro e 12 horas de luz a 2000-3000 lux. Aps esse perodo, as plantas
15
foram transferidas para um viveiro com sombrite a 50% (Figura 3), onde ocorre o
desenvolvimento da fase estromtica.

Figuras 1 e 2. Cmara mida com diversos boxes separados, onde so controladas a umidade,
temperatura e luminosidade. Em 2, detalhe de um Box da cmara mida, com
uma planta de seringueira inoculada.

Figura 3. Viveiro com sombrite a 50 %, onde se desenvolve a fase estromtica do fungo.

16
Foi utilizada uma suspenso de 2 x 10
5
condios / mL, proveniente de
leses recm esporuladas, obtidas de clones sensveis inoculados com isolado esporulado em
meio de cultura MC 4, segundo Mattos (1999), acrescida de Tween 80 a 0,05 %.
Os materiais foliares utilizados foram provenientes dos clones de
seringueira (Hevea spp.): PB 314, MDF 180 e Fx 2784, das Plantaes Michelin da Bahia e o
clone PB 235 de Botucatu. Os parentais dos clones utilizados encontram-se na Tabela 1.

Tabela 1. Parentais dos quatro clones de seringueira (Hevea spp.): PB 235, PB 314, MDF 180
e Fx 2784
Clones Parentais
1
Origem
PB 235 PB 5/51 x PB 69 Malsia
PB 314 RRIM 600 x PB 235 Malsia
MDF 180 Clone primrio Peru
Fx 2784 F 4542 x AVROS 363 Brasil
1
PB: Prang Besar; RRIM: Rubber Research Institute of Malaysia; F: Ford; AVROS: Algemene Vereniging
Rubber Planters Oostkust Sumatra.

5.2 Anlise anatmica

Para a anlise anatmica foram coletados, dos clones PB 235, PB 314,
MDF 180 e Fx 2784, os fololos centrais de folhas sadias caracterizadas pelos estdios B
2
, C e
D, de acordo com a classificao proposta por Hall et al. (1978). Foram tomadas amostras do
tero mdio da lmina foliar e fixadas em FAA 50 (formaldedo + cido actico glacial +
lcool 50 %), durante 48 horas, sendo posteriormente conservadas em lcool 70 % (Johansen,
1940).
As amostras foliares da regio internervural e da nervura central foram
infiltradas em resina glicol-metacrilato, seguindo-se a tcnica de Gerrits (1991), sendo, em
seguida, cortadas transversalmente em micrtomo rotatrio automtico, com 8 m de
17
espessura, coradas com azul de toluidina pH 4,7 e montadas em resina sinttica (OBrien et
al., 1964).
As folhas infectadas pelo patgeno foram analisadas aos 5, 10, 45, e 90
dias aps a inoculao pelo fungo (Microcyclus ulei), sendo as amostras das regies lesionadas
coletadas do fololo central, para observar o acompanhamento da ascognese do fungo,
procurando-se identificar as diferenas de resistncia para esta fase do seu ciclo de
desenvolvimento, etapa ainda no descrita na literatura consultada. Essas amostras foliares
tambm foram fixadas em FAA 50, durante 48 horas, sendo, em seguida, conservadas em
lcool 70 % (Johansen, 1940). Os demais procedimentos foram idnticos aos realizados com
as folhas sadias.
Os cortes mais representativos foram fotomicrografados e as
caractersticas da estrutura anatmica dos fololos sadios e infectados foram observadas e
descritas, com base no trabalho realizado por Metcalfe (1957).
Foram realizadas mensuraes, com auxlio de mesa digitalizadora
acoplada a programa computacional especfico, dos diversos tecidos (epidrmico,
parenquimtico e vascular) presentes na estrutura foliar da regio internervural e da nervura
central de plantas sadias, determinando-se a espessura e a rea abrangida por estes tecidos,
uma vez que a quantificao da estrutura foliar possibilita a obteno de resultados mais
evidentes, para a comparao dos diferentes estgios foliares nos clones de seringueira
estudados. A anatomia quantitativa foi efetuada com trs repeties para cada clone de
seringueira avaliado. A anlise estatstica multivariada tambm foi realizada separadamente
para cada estgio foliar nos quatro clones de seringueira testados, PB 235, PB 314, MDF 180 e
Fx 2784.
Os dados obtidos foram submetidos aos testes estatsticos
multivariados de Anlise de Agrupamento e de Anlise de Componentes Principais (Sneath &
Sokal, 1973), procurando-se verificar a capacidade discriminatria das variveis anatmicas
quantitativas, obtidas pelas mensuraes dos diferentes tecidos foliares.

18
6 RESULTADOS E DISCUSSO

6.1 Anlise Anatmica dos fololos sadios

Os trs estgios foliares (B
2
, C e D) de seringueira (Hevea spp.), propostos por Hall et
al. (1978), nos quatro clones estudados, apresentam diferenas anatmicas. As estruturas e
diferenas anatmicas esto ilustradas nas Figuras 4 a 27.
As Figuras 4 a 7 representam o estgio B
2
, em seces transversais da regio
internervural, dos clones PB 235, PB 314, MDF 180, Fx 2784. Observa-se nesse estgio,
tecidos meristemticos primrios, caracterizados pela presena de clulas compactadas, sem
espaos intercelulares, com ncleo de grande tamanho e citoplasma denso. Portanto, verifica-
se a presena de protoderme, a qual originar a epiderme das faces adaxial e abaxial;
meristema fundamental, dando origem ao parnquima palidico, lacunoso e esclernquima;
procmbio, originando o feixe vascular primrio. Esse estgio, ainda, est representado, em
seces transversais da nervura central, nas Figuras 16 a 19, as quais mostram o feixe
vascular, correspondendo aos elementos xilemticos e floemticos em incio de diferenciao,
com as paredes celulares dos elementos xilemticos no lignificadas ou em incio de
lignificao e ausncia da bainha esclernquimtica ao redor do feixe vascular.

19
Figuras 4 a 7. Seces transversais da lmina foliar, no estgio B
2
, de quatro clones de seringueira. 4. Clone PB 235; 5. Clone PB
314; 6. Clone MDF 180; 7. Clone Fx 2784. Pt: protoderme. Mf: Meristema fundamental. Pr: Procmbio. Barra =
22,5 m.
20
Nas Figuras 8 a 11 est representado o estgio C, tambm em seces transversais da
regio internervural. Nesse estgio, os quatro clones apresentam tecidos adultos: epiderme das
faces adaxial e abaxial com uma camada de clulas (uniestratificada), parnquima palidico
uniestratificado, parnquima lacunoso com trs a cinco camadas de clulas com diferentes
sentidos de orientao, sendo a camada prxima da epiderme da face abaxial orientada no
sentido vertical e as camadas subjacentes com disposio horizontal; feixe vascular, com
elementos xilemticos e floemticos, ainda no totalmente diferenciado, com as paredes dos
elementos xilemticos em incio de lignificao; e bainha do feixe vascular no lignificada ou
em incio de lignificao. O estgio C, em seces transversais da regio da nervura central,
est representado nas Figuras 20 a 23, mostrando, com maior detalhe, o feixe vascular,
elementos xilemticos e floemticos, ainda em diferenciao, com as paredes celulares
lignificadas nos elementos xilemticos e a bainha em incio de lignificao ao redor do feixe
vascular.
O estgio D representado, em seces transversais da regio internervural, nas Figuras
12 a 15, distingui-se do estgio anterior por apresentar o feixe vascular, elementos xilemticos
e floemticos, mais diferenciado e a bainha descontnua totalmente lignificada. Os demais
caracteres anatmicos como a epiderme das faces adaxial e abaxial, os parnquimas palidico
e lacunoso so semelhantes ao estgio C. As Figuras 24 a 27 representam esse estgio, em
seces transversais da nervura central, mostrando em detalhes o feixe vascular, elementos
xilemticos e floemticos, totalmente diferenciado com as paredes celulares dos elementos
xilemticos completamente lignificadas e a bainha ao redor do feixe vascular com lignificao
total.
A Tabela 2 apresenta os valores mdios dos nove caracteres quantitativos que foram
utilizados na diferenciao dos trs estgios foliares de quatro clones de seringueira e
empregados para a realizao da anlise estatstica multivariada.
Na Tabela 3 esto mostrados os coeficientes de correlao entre os nove caracteres
quantitativos e os dois primeiros componentes principais (Y
1
e Y
2
), sendo indicada a
intensidade da contribuio desses caracteres para a discriminao dos estgios, a qual est
relacionada com a ocorrncia de maiores valores absolutos em Y
1
e Y
2
. Em conjunto, estes
componentes foram responsveis por 83,79 % da informao acumulada pelos caracteres
estudados ressaltando que eles so eficientes indicadores de dissimilaridade.
21
Verifica-se na Tabela 3 que, para o primeiro componente principal (Y
1
), as variveis
que mais contriburam para a discriminao dos estgios foliares foram: rea de esclernquima
da nervura central e espessura da epiderme das faces abaxial e adaxial da regio internervural.
A informao retida no conjunto dos nove caracteres quantitativos, referente a este primeiro
componente, foi de 67,60 %. Para o segundo componente principal (Y
2
), as variveis que mais
contriburam foram: rea de xilema e rea total da nervura central. A informao retida para
este segundo componente foi de 16,19 %.
A disperso grfica referente Anlise de Componentes Principais (Figura 28) e o
dendrograma resultante da Anlise de Agrupamento (Figura 29) mostram que os caracteres
quantitativos com maior poder discriminatrio so os responsveis pelos agrupamentos
formados entre os estgios foliares dos quatro clones de seringueira, constituindo trs grupos
principais.
Pelo dendrograma formado na Anlise de Agrupamento (Figura 29)
verifica-se que os trs grupos formados apresentam valor prximo de 0,20 da escala de
distncia entre os estgios foliares. O primeiro grupo formado pelo estgio foliar B
2
e os
quatro clones de seringueira estudados, sendo que esse estgio se separou dos demais por
apresentar tecidos meristemticos. O segundo grupo formado pelo estgio foliar C,
juntamente como os clones de seringueira testados; nesse estgio os tecidos so adultos, com
ausncia ou incio de lignificao nas paredes do xilema e bainha lignificada. O terceiro grupo
formado pelo estgio foliar D e os clones de seringueira analisados; esse estgio se diferenciou
do anterior por apresentar total lignificao do xilema e bainha do feixe lignificada. Assim
sendo, os estgios foliares B
2
, C e D de seringueira, propostos por Hall et al. (1978),
independentemente do clone, podem ser diferenciados com base nos caracteres anatmicos
quantitativos, principalmente, por aqueles que esto relacionados com rea de esclernquima
da nervura central, espessura da epiderme das faces abaxial e adaxial da regio internervural,
rea de xilema e tamanho da nervura central. A Tabela 4 mostra os intervalos de valores para
esses caracteres anatmicos em cada estgio, para o conjunto dos quatro clones de seringueira.
A diferenciao dos estgios foliares de seringueira atravs da
anatomia complementa a classificao proposta por Hall et al. (1978), no qual os autores
classificam o desenvolvimento foliar em quatro estgios baseados em caracteres relacionados
ontogenia foliar, sendo apresentados na forma de diagrama, o qual pode deixar dvidas na
22
hora da classificao. Os estgios foliares so importantes para o ciclo das relaes patgeno-
hospedeiro, pois estes correspondem s fases de desenvolvimento do patgeno, suscetibilidade
e resistncia dos fololos infeco. No caso de Microcyclus ulei, agente causal do mal das
folhas, observa-se que o estgio B
2
, para os clones suscetveis, representa a fase de infeco
pelo patgeno (Figura 30), ou seja, o estgio foliar de maior suscetibilidade. O estgio C
representa a fase de maior esporulao conidial (Figura 31), e o estgio D representa a
ocorrncia da fase estromtica (fase sexuada) do patgeno (Figura 32), considerada principal
fonte de inculo primria. O conhecimento desses estgios e o comportamento do fungo sobre
eles, nos diferentes clones, so de fundamental importncia, tanto para a realizao de
pesquisas em condies controladas de infeco como para o controle da doena no campo em
condies naturais de epidemia.

23

Figuras 8 a 11. Seces transversais da lmina foliar, no estgio C, de quatro clones de seringueira. 8. Clone PB 235; 9. Clone PB
314; 10. Clone MDF 180; 11. Clone Fx 2784. Ed: Epiderme adaxial. PP: Parnquima Palidio. PL: Parnquima
Lacunoso. Fv: Feixe vascular. Eb: Epiderme abaxial. Barra = 22,5 m.

24
Figuras 12 a 15. Seces transversais da lmina foliar, no estgio D, de quatro clones de seringueira. 12. Clone PB 235; 13. Clone PB
314; 14. Clone MDF 180; 15. Clone Fx 2784. Ed: Epiderme adaxial. PP: Parnquima Palidio. PL: Parnquima
lacunoso. Fv: Feixe vascular. B: Bainha lignificada do feixe. Eb: Epiderme abaxial. Barra = 22,5 m.
25

Figuras 16 a 19. Seces transversais da nervura central, no estgio B
2
Clone Fx 2784. Pf: Parnquima fundamental. F: Floema. X: Xilema. :
paredes celulares do xilema no lignificadas. Barra = 90 m.

26

Figuras 20 a 23. Seces transversais da nervura central, no estgio C, de quatro clones de
Clone Fx 2784. Pf: Parnquima fundamental. F: Floema. X: Xilema. :
Paredes celulares do xilema lignificadas. Barra = 90 m.

27

Figuras 24 a 27. Seces transversais da nervura central, no estgio D, de quatro clones de
Clone Fx 2784. Pf: Parnquima fundamental. F: Floema. X: Xilema, com
paredes lignificadas. B: Bainha do feixe lignificada. Barra = 90 m.

28
TABELA 2. Valores mdios dos caracteres anatmicos quantitativos da regio internervural (RIN) e da nervura central (NC), do
fololo mediano, para a diferenciao entre trs estgios foliares (B
2
, C, D) dos clones (PB 235, PB 314, MDF 180,
Fx 2784) de seringueira.

PB 235 PB 314 MDF 180 Fx 2784 CARACTERES
B
2
C D B
2
C D B
2
C D B
2
C D
Espessura epiderme face adaxial da RIN (m)
16,66 11,40 12,77 18,00 10,51 10,00 19,70 10,77 11,88 19,61 11,42 9,28
Espessura parnquima palidico da RIN (m)
30,70 52,38 67,92 36,33 48,59 42,61 46,38 47,78 50,89 30,43 46,60 45,90
Espessura parnquima lacunoso da RIN (m)
52,11 62,11 87,36 50,58 52,39 54,54 72,05 63,32 74,39 64,76 65,38 63,17
Espessura epiderme face abaxial da RIN (m)
12,08 10,44 8,99 13,12 7,95 8,06 13,42 8,43 8,46 13,77 7,18 7,22
rea total da NC (mm
2
) 0,59 0,69 0,93 0,72 0,78 0,73 0,87 0,74 0,83 0,76 0,94 0,82
rea de floema da NC (mm
2
) 0,13 0,15 0,20 0,14 0,14 0,14 0,17 0,14 0,16 0,15 0,17 0,15
rea de xilema da NC (mm
2
) 0,10 0,15 0,22 0,11 0,18 0,17 0,18 0,19 0,20 0,13 0,25 0,22
rea de parnquima fundamental da NC (mm
2
) 0,36 0,40 0,41 0,47 0,45 0,31 0,53 0,42 0,39 0,49 0,52 0,33
rea esclernquima da NC (mm
2
) 0,00 0,00 0,11 0,00 0,00 0,11 0,00 0,00 0,08 0,00 0,00 0,11
29
TABELA 3. Correlao entre os nove caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), dos trs estgios foliares, dos
quatro clones de seringueira (Hevea spp.) e os dois primeiros componentes
principais (Y
1
e Y
2
).

CARACTERES Y
1
Y
2
Espessura epiderme face adaxial da RIN (m) -0,6563 (3) 0,4427 (7)
Espessura parnquima palidico da RIN (m) 0,5878 (6) -0,5394 (4)
Espessura parnquima lacunoso da RIN (m) 0,4491 (7) -0,2955 (8)
Espessura epiderme face abaxial da RIN (m) -0,6910 (2) 0,5465 (3)
rea total da NC (mm
2
) 0,3974 (9) -0,6078 (2)
2
) 0,4087 (8) -0,4482 (6)
2
) 0,6170 (5) -0,7222 (1)
2
) -0,6249 (4) -0,4539 (5)
rea de esclernquima da NC (mm
2
) 0,9701 (1) 0,2292 (9)
Informao Retida (%) 67,60 16,19
Informao Acumulada (%) 67,60 83,79
Nmeros entre parnteses: ordenao dos caracteres quanto ao seu poder discriminatrio, com base na
porcentagem da informao retida e acumulada em Y
1
e Y
2
.

30

Y1
Y2

Figura 28. Disperso grfica dos trs estgios foliares (B
2
, C, D) dos quatro clones de
seringueira (PB 314, PB 235, MDF 180, Fx 2784), utilizando os dois primeiros
componentes principais (Y
1
e Y
2
), para o conjunto dos nove caracteres
anatmicos quantitativos da folha. = Fx 2784; = PB 314; = PB 235; ? =
MDF 180.

B
2
D
C
31

Figura 29. Dendrograma resultante da Anlise de Agrupamento dos caracteres anatmicos
quantitativos da folha, utilizando-se a Distncia Euclidiana Mdia entre os trs
estgios foliares (B
2
, C e D) dos quatro clones de seringueira estudados (PB 235,
PB 314, Fx 2784 e MDF 180).

0,48 0,40 0,32 0,24 0,16 0,08 0,00
B
2
PB 235
B
2
PB 314
B
2
Fx 2784
B
2
MDF 180
C PB 235
C PB 314
C MDF 180
C Fx 2784
D PB 235
D PB 314
D Fx 2784
D MDF 180
32
Figura 30. Estgio foliar B
2
, o qual representa a fase de infeco pelo patgeno.

Figura 31. esquerda: leses de esporulao conidial na face abaxial e adaxial dos fololos,
no estgio C. direita: detalhe das leses na face abaxial do fololo.

Figura 32: Detalhe dos estromas na face adaxial do fololo, no estgio D.
33
Tabela 4: Intervalos de limite inferior (Li) e superior (Ls) dos caracteres anatmicos
quantitativos com maior poder discriminatrio para Y
1
e Y
2
, de cada estgio foliar
(B
2
, C e D), independentemente do clone.

B
2
C D Caracteres
Li Ls

Li Ls

Li Ls

2
) Y
1
0,00 0,00 0,00 0,00 0,07 0,15
Espessura epiderme face abaxial da RIN (m) Y
1

10,80 15,10 6,62 11,23 6,36 10,78
Espessura epiderme face adaxial da RIN (m) Y
1

12,85 21,59 9,28 13,28 8,23 16,38
2
) Y
2
0,07 0,20 0,13 0,28 0,14 0,33
rea total da NC (mm
2
) Y
2
0,41 0,99 0,62 1,10 0,66 1,10
NC: Nervura Central; RIN: Regio Internervural.

Para uma maior distino entre os estgios sugere-se, ainda, a
caracterizao morfolgica dos fololos em cada estgio, o que viria complementar esse estudo
anatmico e as descries de Hall et al. (1978).
A Anlise estatstica multivariada tambm foi realizada separadamente
para cada estgio foliar nos quatro clones de seringueira testados, PB 235, PB 314, MDF 180 e
Fx 2784, visando diferenciao dos caracteres anatmicos dentro de um mesmo estgio nos
diferentes clones, salientando aqueles com importncia ou implicao na resistncia ao M.
ulei. As Tabelas 5, 7 e 9 apresentam os valores mdios dos caracteres anatmicos quantitativos
dos estgios foliares B
2
, C e D, respectivamente.
Nas Tabelas 6, 8 e 10 esto representados os coeficientes de correlao
entre os caracteres quantitativos e os dois primeiros componentes principais (Y
1
e Y
2
) dos
estgios foliares B
2
, C e D respectivamente, sendo indicada a intensidade da contribuio
desses caracteres para a discriminao dos clones, a qual est relacionada com a ocorrncia de
maiores valores absolutos em Y
1
e Y
2
. No estgio B
2
, estes componentes, em conjunto, foram
34
responsveis por 93,83 % (Tabela 6) da informao acumulada pelos caracteres anatmicos;
no estgio C, os componentes foram responsveis por 94,91 % (Tabela 8); e no D por 92,95 %
(Tabela 10).
Verifica-se na Tabela 6 que, para o primeiro componente principal
(Y
1
), as variveis que mais contriburam para a discriminao dos clones, dentro do estgio
B
2
, foram: reas de floema, xilema e total da nervura central. A informao retida no conjunto
dos oito caracteres, referente a este primeiro componente, foi de 85,18 %. Para o segundo
componente principal (Y
2
), as variveis que mais contriburam foram: espessuras da epiderme
da face abaxial e do parnquima palidico da regio internervural. A informao retida para
este segundo componente foi de 8,66 %.
A disperso grfica da Anlise de Componentes Principais (Figura 33)
e o dendrograma da Anlise de Agrupamento (Figura 34), dos quatro clones estudados para o
estgio foliar B
2
, formam dois grupos principais.
O dendrograma da Anlise de Agrupamento (Figura 34) revela que os
dois grupos formados apresentam valor prximo de 0,14 da escala de distncia entre os clones
de seringueira. O primeiro grupo constitudo pelo clone PB 235, juntamente com o subgrupo
dos clones PB 314 e Fx 2784 e o segundo grupo formado formado pelo clone MDF 180.
Apesar da separao do clone MDF 180 dos demais pelo componente
Y
1
(Figura 33), nesse estgio (B
2
) comum ocorrer infeco dos clones pelo patgeno, com
exceo do Fx 2784, o qual parece apresentar algum tipo de resistncia nesse estgio. Este
clone apresentou uma maior espessura da epiderme abaxial da regio internervural, o que o
separou dos demais pelo segundo componente principal Y
2
(Figura 33). Assim, pode-se
sugerir que esse caracter pode ser um fator relacionado resistncia ao mal das folhas, uma
vez que, o agente causal inicia sua penetrao diretamente pela epiderme da face abaxial.
Contrariamente, Sanier et al. (1992), afirma que a resistncia parece no estar associada a uma
barreira anatmica, e sim a fatores bioqumicos. No entanto, os mesmos autores admitem que
compostos fenlicos no desempenham papel principal na resistncia de folhas jovens.
Verifica-se na Tabela 8 que, para o primeiro componente principal
(Y
1
), as variveis que mais contriburam para a discriminao dos clones, dentro do estgio C,
foram: reas de xilema, total e de parnquima fundamental da nervura central. A informao
retida no conjunto dos oito caracteres, referente a este primeiro componente, foi de 80,91 %.
35
Para o segundo componente principal (Y
2
), as variveis que mais contriburam foram:
espessuras da epiderme da face adaxial e do parnquima lacunoso da regio internervural. A
informao retida para este segundo componente foi de 14,00 %.
e o dendrograma da Anlise de Agrupamento (Figura 36), dos quatro clones estudados para o
estgio foliar C, tambm formaram dois grupos principais.
O dendrograma da Anlise de Agrupamento (Figura 36) mostra que os
dois grupos formaram-se prximo do valor 0,11 da escala de distncia entre os clones de
seringueira. O primeiro grupo formado pelo clone PB 235, juntamente com o subgrupo dos
clones MDF 180 e PB 314 e o segundo grupo formado pelo clone Fx 2784. Pelo primeiro
1
), o clone Fx 2784 se separou dos demais (Figura 35) por apresentar
menor espessura de parnquima palidico e de epiderme da face abaxial da regio
internervural. No estgio foliar C, esses fatores no tm grande importncia para a resistncia
dos clones, pois nesta fase prevalece a esporulao conidial do fungo nos clones estudados,
com restrio do Fx 2784 que j bloqueou o fungo durante o processo inicial de infeco.
Alm disso, nesse estgio foliar (Tabela 7), todos os clones apresentaram espessura da
epiderme abaxial da regio internervural menor em relao ao estgio B
2
(Tabela 5), sendo
que o clone Fx 2784 se destacou por apresentar esse caracter, nesse estgio, ainda, menor que
os demais clones, enquanto que no estgio B
2
ocorreu o inverso. Portanto, no foi possvel
evidenciar algum fator de resistncia anatmico da folha nesse estgio.

36
TABELA 5. Valores mdios dos caracteres anatmicos quantitativos da regio internervural
(RIN) e da nervura central (NC), do fololo mediano, no estgio foliar B
2
, dos
clones (PB 235, PB 314, MDF 180 e Fx 2784) de seringueira.

CARACTERES PB 235 PB 314 MDF 180 Fx 2784
Espessura epiderme face adaxial da RIN (m) 16,66 18,00 19,70 19,61
Espessura parnquima palidico da RIN (m) 30,70 36,33 46,38 30,43
Espessura parnquima lacunoso da RIN (m) 52,11 50,58 72,05 64,76
Espessura epiderme face abaxial da RIN (m) 12,08 13,12 13,42 13,77
rea total da NC (mm
2
) 0,59 0,72 0,87 0,76
2
) 0,13 0,14 0,17 0,15
2
) 0,10 0,11 0,18 0,13
2
) 0,36 0,47 0,53 0,49
37
TABELA 6. Correlao entre os oito caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), do estgio foliar B
2
, dos quatro
(Y
1
e Y
2
).

CARACTERES Y
1
Y
2
Espessura epiderme face adaxial da RIN (m) 0,8735 (6) 0,4780 (3)
Espessura parnquima palidico da RIN (m) 0,8378 (7) -0,5322 (2)
Espessura parnquima lacunoso da RIN (m) 0,9070 (4) 0,2289 (4)
Espessura epiderme face abaxial da RIN (m) 0,7079 (8) 0,6168 (1)
rea total da NC (mm
2
) 0,9741 (3) 0,1202 (6)
2
) 0,9971 (1) -0,0209 (8)
2
) 0,9808 (2) -0,0515 (7)
2
) 0,8883 (5) 0,2175 (5)
1
e Y
2
.

38

Y1
Y2

Figura 33. Disperso grfica dos quatro clones de seringueira (PB 314, PB 235, MDF 180, Fx
2784) no estgio foliar B
2
, utilizando os dois primeiros componentes principais (Y
1

e Y
2
), para o conjunto dos oito caracteres anatmicos quantitativos da folha. =
Fx 2784; = PB 314; = PB 235; ? = MDF 180.

Figura 34. Dendrograma resultante da Anlise de Agrupamento dos caracteres anatmicos
quantitativos da folha, utilizando-se a Distncia Euclidiana Mdia entre os quatro
clones de seringueira estudados (PB 235, PB 314, Fx 2784 e MDF 180), no
estgio foliar B
2
.

0,25 0,22 0,20 0,17 0,15 0,12 0,10
PB 235
PB 314
Fx 2784
MDF 180
39
(RIN) e da nervura central (NC), do fololo mediano, no estgio foliar C, dos

rea total da NC (mm
2
) 0,69 0,78 0,74 0,94
2
) 0,15 0,14 0,14 0,17
2
) 0,15 0,18 0,19 0,25
2
) 0,40 0,45 0,42 0,52
40
TABELA 8. Correlao entre os oito caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), do estgio foliar C, dos quatro
(Y
1
e Y
2
).

CARACTERES Y
1
Y
2
Espessura epiderme face adaxial da RIN (m) -0,2044 (8) 0,9466 (1)
Espessura parnquima palidico da RIN (m) 0,8579 (5) 0,3439 (5)
Espessura parnquima lacunoso da RIN (m) -0,3142 (7) 0,8456 (2)
Espessura epiderme face abaxial da RIN (m) 0,8896 (4) 0,4397 (4)
rea total da NC (mm
2
) -0,9889 (2) 0,0603 (8)
2
) -0,7835 (6) 0,4700 (3)
2
) -0,9921 (1) 0,0754 (6)
2
) -0,9664 (3) -0,0713 (7)
1
e Y
2
.

41

Y1
Y2

2784) no estgio foliar C, utilizando os dois primeiros componentes principais
(Y
1
e Y
2
), para o conjunto dos oito caracteres anatmicos quantitativos da
folha. = Fx 2784; = PB 314; = PB 235; ? = MDF 180.

0,20 0,17 0,15 0,12 0,10 0,07 0,05
PB 235
PB 314
MDF 180
Fx 2784
42
Na Tabela 10, verifica-se que, para o primeiro componente principal
(Y
1
), as variveis que mais contriburam para a discriminao dos clones, dentro do estgio D,
foram: espessuras dos parnquimas lacunoso e palidico da regio internervural, reas de
parnquima fundamental, floema e total da nervura central. A informao retida no conjunto
dos nove caracteres, referente a este primeiro componente, foi de 77,45 %. Para o segundo
2
), a varivel que mais contribuiu foi a rea de esclernquima da
nervura central. A informao retida para este segundo componente foi de 15,50 %.
e o dendrograma da Anlise de Agrupamento (Figura 38), dos clones estudados para o estgio
foliar D, formam trs grupos principais.
O dendrograma da Anlise de Agrupamento (Figura 38) mostra que os
trs grupos foram constitudos prximos do valor 0,14 da escala de distncia entre os clones de
seringueira estudados. O primeiro grupo formado pelo clone PB 235; o segundo grupo
formado pelos clones Fx 2784 e PB 314; e o terceiro grupo formado pelo clone MDF 180.
Nesse estgio (D) ocorre a fase sexuada do patgeno nos clones considerados suscetveis e
apesar da separao de trs grupos pela anlise (Figura 37 e 38), no foi possvel evidenciar o
envolvimento de nenhum dos caracteres anatmicos estudados com resistncia nessa fase. O
estgio foliar D apresenta-se como resistente penetrao do fungo (Gasparotto et al., 1997)
em todos os clones, at mesmo nos suscetveis. Uma explicao para tal fato pode ser a
presena de tecidos ainda meristemticos no estgio i nfectivo, chamado B
2
, enquanto em D,
h a presena de tecidos foliares adultos, com paredes celulares lignificadas por exemplo.

43
(RIN) e da nervura central (NC), do fololo mediano, no estgio foliar D, dos

rea total da NC (mm
2
) 0,93 0,73 0,83 0,82
2
) 0,20 0,14 0,16 0,15
2
) 0,22 0,17 0,20 0,22
2
) 0,41 0,31 0,39 0,33
2
) 0,11 0,11 0,08 0,11
44
TABELA 10. Correlao entre os nove caracteres anatmicos quantitativos da regio
internervural (RIN) e da nervura central (NC), do estgio foliar D, dos quatro
clones de seringueira (Hevea spp.) e os dois primeiros componentes
principais (Y
1
e Y
2
).

CARACTERES Y
1
Y
2
Espessura epiderme face adaxial da RIN (m) 0,9110 (6) -0,3687 (4)
Espessura parnquima palidico da RIN (m) 0,9761 (2) 0,1534 (8)
Espessura parnquima lacunoso da RIN (m) 0,9954 (1) -0,0149 (9)
Espessura epiderme face abaxial da RIN (m) 0,7864 (7) -0,4067 (3)
rea total da NC (mm
2
) 0,9480 (5) 0,2605 (6)
2
) 0,9519 (4) 0,2937 (5)
2
) 0,5102 (8) 0,5947 (2)
2
) 0,9638 (3) -0,2036 (7)
2
) -0,1896 (9) 0,9020 (1)
1
e Y
2
.

45

Y1
Y2

2784) no estgio foliar D, utilizando os dois primeiros componentes principais
(Y
1
e Y
2
), para o conjunto dos nove caracteres anatmicos quantitativos da
folha. = Fx 2784; = PB 314; = PB 235; ? = MDF 180.

0,10 0,12 0,14 0,16 0,18 0,20 0,22
PB 235
PB 314
Fx 2784
MDF 180
46
6.2 Anlise Anatmica dos fololos infectados

As folhas infectadas pelo patgeno e analisadas anatomicamente aos 5,
10, 45, e 90 dias aps a infeco pelo fungo (Microcyclus ulei) esto representadas nas Figuras
39 a 54.
As Figuras 39 a 42 representam uma leso foliar da regio
internervural causada aos cinco dias aps a inoculao pelo patgeno, em seces transversais,
dos clones PB 314 e MDF 180. O clone Fx 2784 no est representado em decorrncia da no
infeco pelo patgeno. O clone PB 314 est representado nas Figuras 39 e 40 e o clone MDF
180, nas Figuras 41 e 42. Pode-se verificar nessa fase uma produo de condios na face
abaxial do fololo, com maior intensidade no PB 314, mas em ambos os clones o tecido do
mesofilo continua ntegro. Verifica-se, nos dois clones, que o fololo encontra-se no estgio
denominado C, por apresentar a ocorrncia de tecidos adultos na regio internervural, com o
feixe vascular no diferenciado e a bainha do feixe no lignificada.
Nas Figuras 43 a 46 est representada a leso foliar aos 10 dias aps
inoculao, em seces transversais da regio internervural, nos dois clones que apresentaram
o avano da infeco. Nessa fase ainda observa-se a presena de condios na face abaxial e
pouca esporulao na face adaxial da folha, conforme tambm observou Junqueira (1985). O
clone PB 314 (Figuras 43 e 44) apresentou necrose foliar em decorrncia da degenerao dos
tecidos do mesofilo, enquanto o MDF 180 (Figuras 45 e 46) permaneceu com seus tecidos
ntegros, com esporulao conidial bastante reduzida na face abaxial, mostrando uma maior
tolerncia dos tecidos colonizao pelo patgeno. Neste perodo, os clones ainda encontram-
se no estgio foliar C.
Aos 45 dias aps inoculao pelo fungo (Figuras 47 a 50) na regio
internervural do clone PB 314 (Figuras 47 e 48) verifica-se ausncia de esporulao conidial e
incio da formao do tecido estromtico com alterao do parnquima palidico nessa
regio, enquanto que no clone MDF 180 (Figura 49 e 50), ainda ocorre a presena de condios
na face abaxial e, at mesmo na face adaxial, inicia-se a degenerao do mesofilo e ocorre
grande produo de fenis, os quais so observados nos tecidos do mesofilo pela colorao
esverdeada devido reao do corante azul de toluidina pH 4,7. Neste perodo os clones
encontram-se no estgio foliar D. Segundo Sanier et al. (1992), os fenis contribuem para
47
resistncia de fungos fitopatognicos em diversos caminhos como: inibidor na germinao
conidial; participando da reao de hipersensibilidade; e precursores de lignina. De acordo
com Garcia et al. (1995) os fenis indicam um papel ativo no mecanismo de defesa das plantas
devido aos seus efeitos fungitxicos e ao grande quantidade presente em clones resistentes. No
caso do MDF 180 esses compostos podem auxiliar na inibio da formao dos estromas.
Nas Figuras 51 a 54 est representada a leso foliar aos 90 dias aps
inoculao pelo patgeno, em seces transversais da regio internervural. Nessa fase,
verifica-se a presena dos estromas ainda imaturos conforme Brignani Neto et al. (1991) na
face adaxial do fololo, no clone PB 314, sobre tecidos no degenerados (Figuras 51 e 52); de
acordo com Garcia et al. (1995b), estruturas estromticas so produzidas ao redor de tecidos
necrticos, sobre os tecidos clorticos. As clulas do tecido estromtico apresentam-se bem
definidas, com formato arredondado, semelhante quelas do parnquima fundamental da
nervura central. No clone MDF 180 (Figura 53 e 54), apesar de no ocorrer a presena de
estromas, observa-se clulas estromticas mal formadas distribudas pela superfcie da face
adaxial, alm disso ocorre presena acentuada de fenis nos tecidos do mesofilo e, ao mesmo
tempo, esses tecidos permanecem em degenerao. Neste perodo os clones encontram-se no
estgio foliar D.

48
Figuras 39 a 42. Seces transversais da leso foliar causada aos cinco dias aps a inoculao do patgeno. 39. PB 314 (Barra =
45 m); 40. PB 314 (Barra = 22,5 m); 41. MDF 180 (Barra = 45 m); 42. MDF 180 (Barra = 22,5 m). Ed:
Epiderme adaxial. PP: Parnquima Palidio. PL: Parnquima Lacunoso. Eb: Epiderme abaxial. C: Conidiforos
e condios.
49
Figuras 43 a 46. Seces transversais da leso foliar causada aos 10 dias aps a i noculao do patgeno. 43. PB 314 com
degenerao dos tecidos (Barra = 45 m); 44. PB 314 (Barra = 22,5 m); 45. MDF 180 (Barra = 45 m); 46.
MDF 180 (Barra = 22,5 m). Ed: Epiderme adaxial. PP: Parnquima Palidio. PL: Parnquima Lacunoso.
Eb: Epiderme abaxial. C: Conidiforos e condios.
50
Figuras 47 a 50. Seces transversais da leso foliar causada aos 45 dias aps a inoculao do patgeno. 47. PB 314 com alterao no
parnquima palidico (? ) na regio da formao do estroma (Barra = 45 m); 48. PB 314 (Barra = 22,5 m); 49.
MDF 180 com degenerao dos tecidos e presena de fenis com colorao esverdeada (Barra = 45 m); 50. MDF
180 (Barra = 22,5 m). Et: Formao estroma. Ed: Epiderme adaxial. PP: Parnquima Palidio. PL: Parnquima
Lacunoso. B: Bainha do feixe. Eb: Epiderme abaxial. C: Conidiforos e condios.
51
Figuras 51 a 54. Seces transversais da leso foliar causada aos 90 dias aps a inoculao do patgeno. 51. PB 314 com alterao no
parnquima palidico (? ) na regio do estroma (Barra = 45 m); 52. PB 314 (Barra = 22,5 m); 53. MDF 180 com
formao de clulas estromticas, degenerao dos tecidos e presena de fenis com colorao esverdeada (Barra = 45
m) 20x; 54. MDF 180 (Barra = 22,5 m). Et: Estroma imaturo. Ed: Epiderme adaxial. PP: Parnquima Palidio. PL:
Parnquima Lacunoso. Eb: Epiderme abaxial. CE: Clulas Estromticas mal formadas.

52
6.3 Consideraes finais

A presena de fenis e a degradao do tecido foliar podem ser
consideradas uma resposta de resistncia do clone MDF 180 ao fungo, pois de acordo com
Griffey & Leach (1965), as necroses so consideradas mecanismos de defesa pela criao de
uma barreira ao fluxo de gua e nutrientes para o patgeno.
As plantas apresentam mecanismos de resistncia, sendo mais ou
menos eficientes quando comparadas, conferindo resistncia ou suscetibilidade s mesmas.
Existem vrios tipos de resistncia, que podem ter natureza estrutural e/ou bioqumica, pr ou
ps-formada infeco (Agrios, 1997).
Os fatores de resistncia pr-formados mais comuns so: a cutcula,
apesar de Blasquez & Owen (1963) e Hashim et al. (1978), no consider-la uma barreira na
penetrao de M. ulei, tanto em folhas velhas como em folhas jovens de clones resistentes; as
paredes celulares espessas, que impedem a colonizao; e a presena de tricomas, para alguns
fungos tambm importante para a resistncia. Os fatores de resistncia estruturais ps-
formados mais encontrados na literatura so papilas, halos, agregao citoplasmtica, camada
de absciso, tiloses e a lignificao, sendo esta ltima mais importante. Segundo Garcia et al.
(1995b), a lignificao intensiva pode ser responsvel pela presena do fungo dentro da zona
necrtica em clones parcialmente resistentes, concluindo que o ciclo do fungo, com o
estabelecimento da forma sexual ao redor dessa zona de infeco nos clones mais suscetveis,
retardado ou parado em clones que apresentam forte lignificao. Em clones totalmente
resistentes, a lignina mostra um papel menos importante na reao de defesa, porque estes
apresentam uma produo dominante de fitoalexina na reao de hipersensibilidade. Isso pode
explicar os resultados obtidos nesse trabalho com os clones MDF 180 e Fx 2784,
respectivamente.
Paralelamente a estes fatores anatmicos de resistncia existem os
fatores bioqumicos pr e ps-formados, sendo os mais evidenciados os fenis e as
fitoalexinas. Os fenis tm grande nfase na resistncia de clones de seringueira ao
Microcyclus ulei. Segundo Gasparotto et al. (1997), os fenis ou inibem a germinao dos
patgenos ou modificam a atividade do cido indol actico oxidase (AIA oxidase), atuando,
assim, sobre a regulao das auxinas, agindo ainda sobre a germinao dos esporos e

53
crescimento das hifas. Para Sanier et al. (1992), quando compostos fenlicos no apresentam
papel ativo na resistncia, eles possivelmente so usados como marcadores de resistncia ou
de suscetibilidade.
Os clones estudados responderam de maneira diferente quando
inoculados com o fungo.
O clone PB 314 apresentou todas as fases do ciclo do patgeno: houve
a infeco, ainda no estgio foliar B
2
e a subseqente colonizao dos tecidos, a esporulao
conidial no estgio foliar C, representando a fase assexuada e, posteriormente, a formao de
estromas imaturos na face adaxial da folha (estgio D), indicando que os ascos maduros
devem ocorrer a partir do quinto ms. Segundo Brignani Neto et al. (1991), essa relao
patgeno-hospedeiro pode variar entre clones. Portanto, o fungo completa seu ciclo no PB
314, representando a suscetibilidade desse clone nas fases assexuada ou conidial e sexuada ou
ascgena. A fase de liberao de ascsporos no foi representada nesse trabalho devido a essa
fase ocorrer ao redor de 135 dias aps a inoculao. O PB 314, sendo assim, no parece
apresentar nenhum fator eficiente de resistncia, pr ou ps-formado, passivo ou ativo. Por ser
um clone asitico, de origem malaia, considerado suscetvel, no sendo indicado para regies
onde ocorrem surtos epidmicos da doena. Na sia, o melhoramento gentico da seringueira
visou somente produo de borracha e no resistncia doena, pois esta ainda no ocorre
nessa regio. A sia considerada a maior produtora mundial de borracha, embora o Brasil
seja o bero das espcies do gnero (Gonalves et al., 2002).
O MDF 180, clone primrio de origem peruana, apresentou um
comportamento nico, at agora desconhecido na literatura, o qual impede uma das fases do
ciclo do fungo, a sexuada ou estromtica. Esse estudo confirmou as observaes de campo, a
respeito desse clone, na Plantaes Michelin da Bahia. A produo acentuada de fenis a
partir de 45 dias aps inoculao do fungo parece estar totalmente relacionada com o
impedimento da fase sexuada, pois se observa a presena de clulas estromticas mal
formadas que no evoluem para estromas. Esse clone pode ser considerado de grande
importncia para a heveicultura, pois impede a principal fonte de inculo primria,

_________________________
* MATTOS, C.R.R. (Plantaes Michelin da Bahia Ltda., Ituber-BA). Comunicao pessoal, 2002.
54
responsvel pelo reinicio de epidemias do mal das folhas aps o reenfolhamento das plantas e
o aumento da variabilidade do fungo, j que no ocorre a fase sexuada do mesmo. Esse ltimo
aspecto tem muito valor para a conservao da resistncia do hospedeiro.
O Fx 2784 apresentou uma reao de resistncia ainda maior,
impedindo a infeco pelo fungo nas folhas jovens (estgio B
2
). A maior espessura da
epiderme abaxial nesse estgio pode ser considerada um componente de resistncia. Assim
como, pode estar associada a uma reao de hipersensibilidade.
O conhecimento dos fatores que impedem a formao da fase sexuada
do fungo tem grande valia em futuros programas de melhoramento. Segundo Rivano et al.,
citado por Berger (1992), indispensvel identificar o mximo possvel de componentes
ligados resistncia, o que poderia conferir planta um nvel de resistncia horizontal
satisfatrio. Esse tipo de resistncia interessante no caso de Microcyclus ulei, pois de acordo
com Gasparotto & Ferreira (1989), esse fungo apresenta alta variabilidade e, segundo Furtado
& Menten (1995), apresentam 23 raas diferentes. Mattos* relatou que essas raas tm
capacidade distinta de esporulao entre os clones.
A utilizao de cortes histolgicos apresentou-se como tcnica
eficiente para a caracterizao dos estgios foliares de seringueira. Hall et al. (1978)
definiram os estgios foliares da seringueira em A, B (B
1
e B
2
), C e D, de acordo com a
ontogenia foliar, representando-os na forma de diagrama e descrevendo-os atravs de
caractersticas subjetivas. As mensuraes dos fatores anatmicos, estudados nesse trabalho,
permitem distinguir os estgios B
2
, C e D, que podem ser denominados apenas de B, C e D, de
uma maneira quantitativa, o que complementa as descries de Hall et al. (1978), facilitando
a utilizao dos mesmos sem deixar dvidas. Essa tcnica permitiu tambm caracterizar as
diferentes fases do ciclo do fungo e suas possveis alteraes no hospedeiro.

55
7 CONCLUSES

Os caracteres anatmicos permitiram diferenciar trs estgios foliares da seringueira
denominados B, C e D.
A espessura da epiderme da face abaxial da folha pode ser considerada um fator de
resistncia infeco e colonizao do fungo no clone Fx 2784.
Quanto resistncia, o clone PB 314 apresentou uma reao de suscetibilidade, o MDF
180 reao moderadamente resistente e o Fx 2784 resistncia completa.
O clone MDF 180 no formou tecidos estromticos e, conseqentemente, no
apresentou esporulao ascgena do fungo.

56
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