GFP PROTENA VERDE FLUORESCENTE- SNTESE

A protena verde fluorescente, mais conhecida por GFP (abreviatura do ingls green fluorescent protein)
uma protena, composta por cerca de 238 aminocidos, que quando exposta a radiaes na gama do
ultravioleta (200-400 nm) emite uma luz verde fluorescente. Existem outros seres vivos que emitem luzes
de cor verde similar, mas por norma, quando se utiliza o termo GFP pressupe-se que esteja a ser
mencionado a protena produzida pelo cnidrio Aequora victoria devido ao trabalho realizado pelo
cientista japons Osamu Shimomura na dcada de 60. Shimomura foi o primeiro cientista que conseguiu
isolar o gene responsvel pela codificao da GFP, sendo este o primeiro passo para futuras investigaes.
O facto de as protenas serem extremamente nfimas e no poderem ser vistas quer vista desarmada,
quer pela utilizao da maioria dos microscpios, era algo que dificultava a investigao a nvel celular. O
potencial da GFP como gene reprter foi reconhecido no ano de 1987 pelo cientista norte-americano
Douglas Prasher. Este cientista procedeu ento a uma fuso de protenas. Prasher sintetizou o cDNA tanto
do gene cuja expresso se pretende estudar (gene X) como tambm do gene da GFP e recorreu utilizao
de um plasmdeo bacteriano, com a funo de vetor. Seguidamente adicionou a mesma endonuclease de
restrio tanto no vetor como no gene X, de modo a terem extremidades coesivas complementares.
Procedeu-se adio da respetiva enzima ligase do DNA. Repetiu-se o processo com o gene da GFP.
Aquando a transcrio, a cadeia mRNA ir conter a informao do gene da GFP e do gene X e aps esta
fase, a traduo da cadeia de mRNA ser realizada normalmente, tendo como produto final uma protena
de fuso entre a protena X e a GFP. Esta fuso ser til, pois se aquando a investigao microscpica da
clula incidirmos luz ultravioleta poderemos acompanhar toda a dinmica da protena, estudando a sua
funcionalidade in vivo, ou seja a protena encontrar-se- iluminada e fcil de localizar.
Recentemente, outras protenas fluorescentes foram j identificadas, como por exemplo, a protena
fluorescente amarela (YFP) e vermelha (RFP), entre outras. Para alm disso, estas protenas originais foram
tambm modificadas, de modo a melhorar o seu desempenho em sistemas vivos. Um dos resultados deste
tipo de engenharia a protena verde fluorescente melhorada, em ingls enhanced green fluorescent
protein ou EGPF. Devido ao facto de a atividade da GFP poder ser monitorizada in vivo, a expresso dos
genes em estudo pode ser acompanhada ao longo do tempo e desenvolvimento do organismo em causa.
As protenas fluorescentes so utilizadas no s para determinar a localizao e dinmica de protenas,
como tambm para determinar a localizao e dinmica organitos e outros compartimentos celulares e
para avaliar a capacidade de expresso de diversos genes promotores. Assim sendo, pode-se dizer que a
descoberta e investigao da protena verde fluorescente foi uma mais-valia para a evoluo cientfica
contribuindo para um melhor conhecimento de processos biomoleculares.
WEBGRAFIA:
http://pt.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna_verde_fluorescente;
http://en.wikipedia.org/wiki/Green_fluorescent_protein;
http://dwb.unl.edu/Teacher/NSF/C08/C08Links/pps99.cryst.bbk.ac.uk/projects/gmocz/gfp.htm;
http://www.dnaftb.org/34/problem.html