A protena verde fluorescente, mais conhecida por GFP (abreviatura do ingls green

fluorescent protein), uma protena produzida pelo cnidrio Aequorea victoria que
emite fluorescncia na zona verde do espectro visvel. O gene que codifica esta protena foi j
isolado e atualmente usado na produo de protenas de fuso, constitudas por um gene de
interesse fundido com o da GFP, de modo a monitorizar, por exemplo, a localizao dessa
protena in vivo. Deste modo, a GFP funciona como um gene reprter mantendo as
informaoes.
Osamu Shimomura, no incio da dcada de 1960, foi a primeira pessoa a isolar a GFP a partir
de Aequorea victoria e identificar que parte desta protena era responsvel pela sua
fluorescncia. Juntamente com Frank Johnson, na Universidade de Washington, este
investigador isolou uma protena bioluminescente clcio-dependente, que
denominou aequorina, nome derivado do cnidrio com que trabalhavam. Esta protena emitia
fluorescncia na zona azul do espectro. Durante o procedimento, uma outra protena foi
identificada, que emitia fluorescncia esverdeada, quando iluminada por luz ultravioleta, sendo-
lhe por isso atribudo o nome de protena verde fluorescente.
Durante os anos seguintes verificou-se que, para emitir fluorescncia, o cnidrio liberta ies de
clcio, que so responsveis pela emisso azul da aequorina. A GFP, por sua vez, absorve a
luz libertada por esta ltima, de modo a produzir a sua luz verde caracterstica. No entanto, O
potencial da GFP como gene reprter s foi reconhecido em 1987 por Douglas Prasher. O
facto de as protenas serem extremamente pequenas e no poderem ser vistas quer vista
desarmada, quer pela utilizao da maioria dos microscpios, era algo que dificultava a
investigao a nvel celular. Prasher pensou ento na possibilidade de ligar uma protena em
estudo GFP, de modo a a poder acompanhar no organismo, como se se tratasse de lhe
atarrachar uma lmpada. Este investigador conseguiu ento localizar o gene da GFP
em Aequorea victoria e express-la numa bactria.
Apesar destes ensaios, o verdadeiro potencial da GFP como uma sonda molecular no foi
aproveitado durante alguns anos, at que as protenas de fuso comearam a ser utilizadas
para monitorizar a expresso de genes em diversos organismos.
Recentemente, outras protenas fluorescentes foram j identificadas, como por exemplo a
protena fluorescente amarela (abreviatura do ingls: YFP) e vermelha (RFP), entre outras.
Para alm disso, estas protenas originais foram tambm modificadas, de modo a melhorar o
seu desempenho em sistemas vivos. Um dos resultados deste tipo de engenharia a protena
verde fluorescente melhorada, em ingls enhanced green florescent protein ou EGPF.
As protenas fluorescentes, entre as quais a GFP, so muito versteis e tm sido utilizadas em
diversos campos da biologia, comomicrobiologia, engenharia gentica e fisiologia, por exemplo.
Este tipo de sonda ubquo, e como tal, extremamente til para estudo de expresso gnica
em culturas de clulas ou de tecidos, assim como em sistemas vivos (animais, plantas,
bactrias...).
A GFP tem sido utilizada com sucesso para monitorizar por exemplo a expresso transiente (ou
temporria) de transgenes, substituindo outros genes reprter como a beta-glucoronidase ou a
seleco com base em antibiticos. Devido ao facto de a actividade da GFP poder ser
monitorizada in vivo, a expresso dos genes em estudo pode ser acompanhada ao longo do
tempo e desenvolvimento do organismo em causa. Por exemplo, as protenas fluorescentes
so comummente utilizadas para determinar a localizao e dinmica de protenas, organitos e
outros compartimentos celulares, assim como para avaliar a capacidade de expresso de
diversos promotores.
Uma enorme variedade de tcnicas est hoje disponvel para a construo de protenas de
fuso com base em protenas fluorescentes e para aumentar a sua expresso em animais e
plantas. Os veculos de eleio param a introduo deste tipo de genes nos organismos
so plasmdeos bacterianos, vectores virais, biolstica, entre outros. O gene de fuso pode
ento ser integrado nos cromossomas do organismo em estudo. No entanto, em estudos de
expresso transiente, o ADN introduzido no integra necessariamente o genoma do
hospedeiro, sendo expresso somente durante um curto perodo de tempo. Esta expresso,
quer seja temporria ou permanente, do gene de interesse em fuso com GFP, ou outro tipo de
protena fluorescente, pode ser facilmente monitorizada pela observao da emisso da
fluorescncia, utilizando um conjunto de filtros compatvel com a protena em causa.

http://www.dnaftb.org/34/problem.html