ESCOLA MUNICIPAL GOVERNADOR ISRAEL PINHEIRO - EMIP

CURSO TCNICO DE QUMICA

MEIOS DE CULTURA






Relatrio apresentado como
parte das exigncias da
disciplina Microbiologia, ao
docente Huita Couto, pela
discente Ana Luisa dos Santos
Soares, turma 02.





JOO MONLEVADE
ABRIL/2014











Meios de cultura
gar nutritivo





Ana Luisa dos Santos Soares
Turma 02






Sumrio
1. Introduo .......................................................................................................................... 1
2. Referencial terico ........................................................................................................... 2
3. Preparo do meio de cultura gar Nutritivo ............................................................. 13
3.1 Materiais e reagentes ............................................................................................ 13
3.1.1 Materiais: .......................................................................................................... 13
3.1.2 Reagentes: ....................................................................................................... 13
3.1.3 Equipamentos: ................................................................................................ 13
4. Procedimento Experimental ........................................................................................ 14
5. Resultados e discusses ............................................................................................. 15
6. Concluso ........................................................................................................................ 16
7. Referencias ...................................................................................................................... 17

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1. Introduo
Os microrganismos tal como outros organismos vivos necessitam de obter os
nutrientes apropriados do seu meio ambiente. Assim se queremos cultivar e
manter microrganismos vivos em laboratrio, necessitamos de coloc-los em
meios de cultura, contendo os nutrientes apropriados para o seu crescimento.
Para alm de nutrientes igualmente necessrio que as condies de oxignio
(presena ou ausncia), pH e presso osmtica sejam adequados ao
crescimento desses microrganismos.
Na preparao dos meios e na manuteno das culturas de microrganismos
importante observar as necessrias condies de asspsia, de modo a se
evitarem contaminaes com outros microrganismos.
O crescimento dos microrganismos nos diferentes meios de cultura utilizados
fornece as primeiras informaes para a sua identificao. importante
conhecer o potencial de crescimento de cada meio de cultura e adequar ao
perfil bacteriano esperado para cada material.
Alguns procedimentos so essenciais na hora da preparao de cada meio de
cultura para a obteno de melhores resultados e evitar contaminaes, como
nos diferentes casos: quando distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos
no precisam estar esterilizados; quando distribuir o meio aps a autoclavao,
os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias ou materiais auxiliares
obrigatoriamente devem ser estreis e os meios devem ser autoclavados com
as tampas semi-abertas, para que a esterilizao seja por igual em todo o
contedo dos tubos - tampas fechadas no permitem a entrada do vapor.
Fonte: http://www3.uma.pt/gcosta/docs/microbiology/prat2.pdf



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2. Referencial terico
Os meios de cultura dividem-se primeiramente em meios slidos, aqueles que
contm gar, e meios lquidos, sem gar. Ambos os meios so preparados com
gua destilada, aquecidos at que se dissolvam completamente e
posteriormente esterilizados por autoclavagem a 12 C.
Nos meios slidos o crescimento para por exausto de nutrientes, devendo
realizar-se a transferncia de colnias para novo meio. No entanto estes meios
permitem a individualizao das colnias. Os meios liquidos permitem melhor
difuso de metablitos, mas no o isolamento de colnias.
A cultura de bactrias iniciada num meio estril por transferncia de inoculo
para o meio estril atravs de uma ansa. Essa ansa esterilizada chama
antes e depois desta operao.
Aps a inoculao de um meio com bactrias, necessrio incubar o meio
num ambiente adequado aos requisitos de crescimento dos microrganismos.
O crescimento de bactrias num meio liquido identifica-se por turvao do
meio, formao de uma pelcula na sua superfcie, ou aparecimento de
sedimento, enquanto que num meio slido por aparecimento de colnias. Os
meios lquidos so designados de caldos (broth)
gar nutriente (AN)
gar Sangue no inoculado. Fonte: madsci.org
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Meio relativamente simples, de fcil preparo e barato, muito usado nos
procedimentos do laboratrio de microbiologia.
Utilidade: anlise de gua, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar
das amostras submetidas exames bacteriolgicos e isolamento de
organismos para culturas puras, conservao e manuteno de culturas em
temperatura ambiente, como mtodo opcional para os laboratrios que no
dispem do mtodo da criopreservao (congelamento das cepas em freezer
- 70C) e observao da esporulao de espcies de bacilos Gram positivos.
Interpretao:
Cor original do meio: branco opalescente
Positivo: Crescimento na superfcie do gar;
Negativo: Ausncia de crescimento.

gar sangue (AS)

gar Sangue no inoculado. Fonte: vgomez.blogia.com.
O meio, usando uma base rica, oferece timas condies de crescimento a
maioria dos microrganismos. meio rico e no seletivo, diferencial para a
hemlise, nele crescem a maioria dos Gram negativo e Gram positivo, alm de
fungos filamentosos (bolores) e leveduras, exceto algumas espcies de
hemfilos e outros fastidiosos
Interpretao:
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Cor original do meio: vermelho.
Beta hemlise: presena de halo transparente ao redor das colnias semeadas
(lise total dos eritrcitos).
Alfa hemlise: presena de halo esverdeado ao redor das colnias semeadas
(lise parcial dos eritrcitos).
Gama hemlise (sem hemlise): ausncia de halo ao redor das colnias
(eritrcitos permanecem ntegros).

gar chocolate (CHOC)

gar Chocolate inoculado. Fonte: pig333.com.
Amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora
cresam neste meio quase todos os tipos de microrganismos. base do meio,
adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que
faz com que as hemcias lisem, liberando hemina e hematina, compostos
fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes.
Utilidade: crescimento de microrganismos exigentesHaemophilus
spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp.
Interpretao:
Cor original do meio: castanho escuro (chocolate).
Colnias de tamanho pequeno a mdio, com pigmento amarelo: sugestivo
de Neisseria spp,
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Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp.
Colnias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo
de Haemophilus spp.

gar MacConkey (MC)
gar MacConkey no inoculado.
Fonte: nhscience.lonestar.edu.
O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos
especialmente enterococos e estafilococos. A concentrao de sais de bile
relativamente baixa em comparao com outros meios, por isso no to
seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o gar SS.
Utilidade: isolar bacilos Gram negativos (enterobactrias e no fermentadores)
e verificar a fermentao ou no da lactose.
Interpretao:
Cor original do meio: rosa avermelhado.
Crescimento de bacilos Gram negativos.
Colnias cor de rosa: fermentadoras de lactose.
Colnias incolores: no fermentadoras de lactose.
No h crescimento de cocos Gram positivos.

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gar Salmonella-Shigella (SS)
gar Salmonella-Shigella no inoculado.
Fonte:microbitos.wordpress.com
Possui componente (sais de bile, verde brilhante e citrato de sdio) que inibem
microrganismos Gram positivos. A incorporao de lactose ao meio permite
diferenciar se o microrganismo lactose positiva (bactrias que fermentam a
lactose produzem cido que na presena do indicador vermelho neutro
resultando na formao de colnias de cor rosa), e bactrias que no
fermentam a lactose formam colnias transparentes. Tiossulfato de sdio e o
citrato frrico permitem a deteco de HS evidenciado por formao de
colnias de cor negra no centro.
Utilidade: selecionar e isolar espcies de Salmonella e Shigella, em amostras
de fezes, alimentos e gua.
Interpretao:
Cor original do meio: vermelho alaranjado.
Colnias com centro negro (HS) ou colnias incolores: suspeita de Salmonella.
Colnias incolores: suspeita de Shigella spp.
Colnias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella
spp.
As bactrias no fermentadoras de lactose so incolores.
As bactrias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.
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gar Hektoen enteric (HE)
gar Hektoen enteric no inoculado. Fonte: madsci.org
Os sais biliares e os corantes azuis de bromotimol e fucsina cida inibem o
crescimento da maioria dos microrganismos Gram positivos. Lactose, sacarose
e salicina fornecem carboidratos fermentveis para incentivar o crescimento e
diferenciao de enterobactrias.
Utilidade: isolar e diferenciar os membros da espcieSalmonella e Shigella de
outros Enterobacteriaceae.

Interpretao:
Cor original do meio: azul-esverdeado
Colnias amarelas a salmo: enterobactrias fermentadoras de carboidratos.
Colnias azuis-esverdeadas com ou sem centro preto: suspeita de Salmonella
spp. e Shigella spp.

gar Cystine Lactose Electrolyte Deficient (CLED)

Usado para isolamento e quantificao de microrganismos presentes em
amostras urina. A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas de Proteus.
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Utilidade: isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e
leveduras.
Interpretao:
Cor original do meio: azul claro.
Colnias lactose positiva: cor amarela.
Colnias lactose negativa: cor azul.

gar Thayer-Martin Chocolate (TM)
gar Thayer-Martin Chocolate no inoculado.
Fonte:learn.chm.msu.edu

um meio rico e superior a outros meios de cultivo destinados para o
isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis, pois contm em
sua frmula antibiticos que inibem o crescimento de Neisserias saprfitas e
outras bactrias, quando em amostras colhidas de stios contaminados.
Utilidade: usado para o isolamento seletivo de Neisseria
gonorrhoeae e Neisseria meningitidis, a partir do material de investigao.
Interpretao:
Cor original do meio: marrom-chocolate
Colnias pequenas e opacas: suspeita de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria
meningitidis.
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gar Lwenstein-Jensen (LJ)
gar Lwenstein-Jensen inoculado. Fonte: openi.nlm.nih.gov

A base do meio constituda por ovos integrais, o que permite amplo
crescimento das micobactrias e o crescimento satisfatrio para o teste de
niacina (que positivo para Mycobacterium tuberculosis).
Utilidade: Isolamento primrio das micobactrias.
Interpretao:
Cor original do meio: verde claro
Positivo: Crescimento de colnias amarelas
Negativo: ausncia de crescimento.

gar Saboraud (AS)
gar Saboraud inoculado. Fonte: wikipedia.org

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Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos
leveduriformes e filamentosos.
Utilidade: cultivo e crescimento de espcies de Cndidas e fungos
filamentosos, particularmente associados a infeces superficiais e
caracterizao macroscpica do fungo filamentoso (colnia gigante).
Interpretao:
Cor original do meio: amarelo claro opalescente.
Aps o crescimento, deve-se seguir a identificao do microrganismo que
cresceu.

gar Regan-Lowe (RL)
gar Regan-Lowe inoculado. Fonte: wikipedia.org

Consiste em uma base de carvo vegetal acrescida de sangue (carneiro ou
cavalo) e cefalexina. O carvo e o amido atuam como absorventes, removendo
qualquer substncia inibitria, o sangue tem funo desintoxicante e
enriquecedor e a cefalexina inibe a maioria dos contaminantes da microbiota do
trato respiratrio.
Utilidade: isolamento do gnero Bordetella em amostras clnicas que so
geralmente contaminadas com a microbiota do trato respiratrio.
Interpretao:
Cor original do meio: preto
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Colnias pequenas acinzentadas e brilhantes: suspeita de Bordetella
pertussis e Bordetella parapertussis.
gar verde brilhante (BG)
gar verde brilhante inoculado.
Fonte: microbitos.wordpress.com
O extrato de levedura e duas peptonas fornecem os nutrientes; a lactose e a
sacarose, juntamente com o vermelho de fenol, fornecem um sistema de
diferenciao que exclui os fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E.
coli), enquanto que as salmonelas no produzem cido a partir destes
acares.
Utilidade: isolamento de outras salmonelas que no sejam as S. Typhi,
existentes nas fezes e em outros materiais.

Interpretao:
Cor original do meio: castanho
Colnias brancas a vermelhas rodeadas por zonas vermelhas: suspeita
de Salmonella spp., ou Proteus spp.
Colnias amarelas a esverdeadas rodeadas por zonas amarelo-esverdeadas:
suspeita deEscherichia coli, Klebsiella spp. ou Enterobacter spp.

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gar Mueller-Hinton (MH)
gar Mueller-Hinton inoculado.
Fonte: academic.missouriwestern.edu/
Meio padronizado por Kirby e Bauer e pelo CLSI que oferece condies de
crescimento das principais bactrias.
Utilidade: realizao do teste de avaliao da resistncia aos antimicrobianos
pelos mtodos de difuso em disco e E-test para enterobactrias, no
fermentadores, Staphylococcus,Enterococcus sp.
Interpretao:
Cor original do meio: amarelo palha.
A zona do dimetro particular para cada antibitico e organismo, sendo
comparado com dimetros padronizados pelo CLSI, que determina cada
microrganismo sendo sensvel, intermedirio ou resistente.
Fonte: http://www.biomedicinabrasil.com/2010/09/meios-de-cultura.html

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3. Preparo do meio de cultura gar Nutritivo
3.1 Materiais e reagentes
3.1.1 Materiais:
2 placas de Petri
2 tubos de ensaio
1 erlenmeyer de 1000 mL

3.1.2 Reagentes:
Peptona
Extrato de carne
gar
gua deionizada
3.1.3 Equipamentos:
Balana analtica
Autoclave
Bio-D

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4. Procedimento Experimental
Pesou-se 10g do meio de cultura gar nutritivo, 3g de extrato de carne e 5g de
peptona.
Colocou-se tudo no erlenmeyer e diluiu-se com agua deionizada completando
1000 mL.
Colocou-se um tampo de papel envolto por fita na boca do balo
Armazenou-se na Bio D.
Enrolou-se as placas de petri em papel craft e altoclavou-se.
Aps retirar da autoclave deixou-se esfriar um pouco.
Preparou-se um sistema de esterilizao com trs cadinhos, colocados em
triangulo, com lcool e colocou-se fogo.
No meio do triangulo colocou-se uma placa de petri esterilizada e distribuiu-se
o meio de cultura, tampando rapidamente, repetiu-se o processo
aleatoriamente com cada placa de petri retirada da altoclave.
Deixou-se resfriar e solidificar na temperatura ambiente.
Armazenou-se as placas com meio de cultura na Bio D.
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5. Resultados e discusses
A peptona foi substituda pelo extrato de levedura, pois no laboratrio no havia
o reagente.
Notou-se que o extrato de levedura possui um odor forte, bem parecido com
cheiro de mofo, e fisicamente parecido com o fub; j o extrato de carne era
bem marrom, parecido com a cola usada por sapateiros, e possua um odor
muito forte de matria orgnica em decomposio (podrido); e o agar tinha
aspecto de um fub mais claro, e no possua cheiro notvel.
Aps a diluio a substancia ficou amarelada.

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6. Concluso
Convivemos com os micro-organismos praticamente em todos os ambientes
naturais como o ar, solo, gua, entre outros. Para evitar a contaminao do
meio devemos utilizar tcnicas de assepsia e esterilizao, os quais so
fundamentais ao se realizar uma amostra ou linha de pesquisa, pois devemos
evitar aquilo que possvel, pois sempre haver o inevitvel.
O gar Nutritivo um exemplo de meio de cultura que pode ser usados num
primeiro passo de identificao das mesmas, visto que ele permite o
crescimento de toda bactrias, desde que no seja fastidiosa, tendo o bsico
para o crescimento destes microrganismos.
Conclui-se ento, que os meios de cultura so uma associao equilibrada de
agentes qumicos e fsicos que permitem o cultivo de microrganismos fora de
seu habitat natural.

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7. Referencias
Disponvel em http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfaqwAH/relatorio-meios-
cultura acessado em 12 de abril de 14 s 18h e 15 min.
Disponvel em http://www.passeidireto.com/arquivo/1880776/relatorio-de-
microbiologia acessado em 09 de abril de 14 s 16h e 22 min.
Disponvel em http://oficina.cienciaviva.pt/~pvi1165/relatorio_bacterias.pdf
acessado em 12 de abril de 14 s 15h e 43 min.
Disponvel em http://www.ebah.com.br/content/ABAAABNZMAF/relatorio-aula-
pratica-microbiologia?part=2 acessado em 12 de abril de 14 s 12h e 11 min.
Disponvel em http://www3.uma.pt/gcosta/docs/microbiology/prat2.pdf
acessado em 12 de abril de 14 s 11h e 13 min.
Disponvel em http://www.biomedicinabrasil.com/2010/09/meios-de-
cultura.html acessado em 12 de abril de 14 s 13h e 19 min.