PROVA 01 RESUMO VIROLOGIA GERAL COMPARADA

Tcnicas em Virologia
Amostras clnicas: sangue, fezes, raspagem de mucosas
* Armazenamento em freezer -80 C
* Aps pegar material: eliminar contaminao acteriana
- por filtrao!
- por centrifugao"
#solamento $iral de infec%es em animais
* Cultura celular
- C&ls prim'rias de firolastos!
- (in)agens estaelecidas de camundongos *+,+-!
- (in)agens estaelecidas )umanas *.e(a-"
*/feito citop'tico: possiilita a$eriguar infeco das c&ls por $rus
- As c&ls mudam de forma!
- 0ormao de sinccio *grandes estruturas arredondadas-"
* 1laca $iral: placa parecida com a de 23 poos! dilui%es das 4tds amostrais de $rus"
- 5nde )ou$er $rus: formao de 6)alos7 apontando onde )' partculas $irais!
- 8acina com $rus atenuado: a cada diluio, maior $ariailidade gen&tica 99 mais c)ances de
sore$i$er um $rus mais suscept$el"
#solamento $iral de infec%es em plantas
* #noculao mec:nica ou por $etores
#dentificao $iral
* ;orfologia *e<" microscpio eletr=nico-!
- #dentificao de famlias
- 8rus de animais: morfologias muitos diferentes de $rus >?A e @?A!
- 8rus de plantas: comumente mais alongados"
* Aorologia *e<" /(#AA, western blot, teste r'pido-!
- >iagnstico
- Busca por anticorpos na amostra *placa de /(#AA preparada com o antgeno-:
deteco indireta!
- Busca por antgenos: deteco direta"
- Anticorpos
- 1oliclonal:
C- inDeta partcula $iral em animal *geralmente coel)o-!
E- diferentes anticorpos para um mesmo al$o"
- ;onoclonal:
C- #nDeta partcula $iral em animal *geralmente camundongo-!
E- retira ao 99 fuso dessas c&ls com c&ls de mieloma!
+- Contagem de )iridomasF G( 99 6dilui%es7 *na placa: s usa poos contendo um )iridoma-"
5s": ;orfologia H Aorologia
- ;icroscpio de fluorescIncia!
- Immunogold"
* ;olecular *e<" 1C@, ;icroarranDos-"
- >iagnstico
- 1AJ/: peso dos segmentos $irais!
- AAC1: genotipagem *single strand conformation polymorphism-!
- Agrupa as diferenas de estrutura!
C- 1C@: desnaturao dos produtos!
E- /letroforese: as fitas tIm o mesmo taman)o, mas tIm estruturas diferentes *$isualizado pela
diferena de altura das andas-"
- .CA: captura )rida
C- >esnaturao dos produtos e )iridizao com a sonda de @?A!
E- Captura do )rido com anticorpos!
+- >eteco do )rido por 4uimioluminescIncia"
- >ot-lot: auto-radiografia
- ;icroarranDo: colorao diferenciada!
- ?JA: next generation sequence
- 4ue tipo de patgeno tem na amostra"
Taonomia !e "#r$s
>iferentemente de outros organismos, a classificao no & pelo modelo (ineu *D' 4ue
$rus no se reproduz, como definir o 4ue & uma esp&cieK-!
* 1or risco iolgico:
Ca%egoria A B C
De&ini'(o ;aior risco de morte!
alta disseminao
@azoa$elmente f'cil
de disseminar! ai<a
mortalidade!
diagnstico
a$anado
0'ceis de produzir e
disseminar! potencial
para altos ndices de
mortalidade
Eem)los /ola, Ant)ra< .epatite A, 8irus do
?ilo
#nfluenza, @ai$a,
0ere Amarela
* .ierar4uia:
*ierar+$ia 5rdem 0amlia Aufamlia JInero /sp&cie
S$&io 8irales 8iridae 8irinae - -
- 1ra definir esp&cie: depende do gInero *se4uenciamento-!
- 1ara representar o gInero: Espcie tipo
- ?ome da esp&cie confirmado: it'lico
?omenclaturas
* >e acordo com a estrutura e morfologia
C- Lcido ?ucleico
- 0ita simples ou fita dupla!
- (inear ou circular!
- Aegmentado ou no-segmentado!
- >?A ou @?A"
- ss@?A: polaridade positi$a 99 m@?A 99 infecta f'cil
- ss@?A: polaridade negati$a 99 anticomplementar ao @?A 99 @?Apol no en$elope! se
perdI-lo, dei<a de ser infeccioso"
E- Capsdeo: capa de ptn 4ue protege o 'c" nucleico
- Caps=mero: unidades morfolgicas
- #cosa&dricos, )elicoidais ou comple<os
+- /n$elope: memrana lipdica 4ue en$ol$e nucleocapsdeo
- 1odem conter glicoptns ancoradas *espculas-!
- Boa parte da c&l infectada 99 rotamento atra$&s da ;1"
,a<onomia
* Aistema de Baltimore: modo de classificao 4ue ordena os $rus com ase na caracterstica
do genoma $iral e na forma como ele & transcrito a m@?A"
* Classifica%es:
- ds>?A
,am#lia Poxviridae Herpesvirida
e
Papillomavirida
e
Adenoviridae
En"elo)e H H - -
Segm- .c-
n$cleico
C, linear:
C+0-+MN
O
C, linear: CEN-
EP0 O
C, circular: M-8
O
C, linear: E3-PN
O
Eem)lo 8arola .erpes .18 >oenas resp"
- ss>?A
,am#lia Parvoviridae
En"elo)e -
Segm- .c-
n$cleico
C, linear: P-3 O
Eem)lo .uman 1ar$o$irus
BC2
- ds@?A
,am#lia Reoviridae
En"elo)e -
Segm- .c-
n$cleico
C0-CE, linear: C2-+E
O
Eem)lo @ota$irus
- ss@?A positi$o
,am#lia Picornaviridae laviviridae !aliciviridae
En"elo)e - H -
Segm- .c-
n$cleico
C, linear: M-2 O C, linear: C0-CE O C, linear: +-8 O
Eem)lo 0ere aftosa 0ere amarela >iarreia sunos
- ss@?A negati$o
,am#lia "rthomyxoviridae Paramyxoviridae #unyaviridae iloviridae
En"elo)e H H H H
Segm- .c-
n$cleico
3-8, linear: C0-CN O C, linear: C+-C8
O
+, linear: CC-C2 O C, linear: C2 O
Eem)lo #nfluenza A Ca<uma .anta$irus /ola
- ds>?A-@,
,am#lia Hepadnaviridae
En"elo)e H
Segm- .c-
n$cleico
C, linear: +-P O
Eem)lo .epatite B
- ss@?A-@,
,am#lia Retroviridae
En"elo)e H
Segm- .c-
n$cleico
K
Eem)lo A#>A
Re)lica'(o !e "#r$s !e R/A e !e D/A
5s": ?o%es sore replicao do genoma $iral
- 8rus de fita simples *ss@?A H, ss@?A -, ss>?A-: precisam de fita complementar ao genoma,
4ue ser$ir' de molde para sntese do material gen&tico!
- 8rus de fita dupla *ds@?A, ds>?A-: utilizam cada uma das duas fitas para gerar suas
respecti$as cpias complementares"
- ;ol&cula de >?A sintetizada a partir de >?A!
- ;ol&cula de @?A sintetizada a partir de @?A"
- 8rus @,: utilizao de intermedi'rios
- ss@?A-@,: replicam o genoma a partir de um intermedi'rio de >?A!
- ds>?A-@,: replicam o genoma a partir de um intermedi'rio de @?A"
8rus de @?A
* ,ipos
- ss@?A H
- Como o genoma possui uma se4uIncia idIntica a do m@?A, e podem ser utilizados
prontamente para a sntese de ptns!
- Comum a sntese de no$as cpias positi$as do genoma 99 fita negati$a como molde
para a sntese de fitas positi$as"
- ss@?A -
- 1or possurem genoma como se4uIncia complementar ao m@?A, ser$em diretamente
como molde para a produo de fitas H
- ss@?A-@,
- Jenoma H! usa transcriptase re$ersa *>?A pol @?A dep"- pra produzir uma fita
simples de >?A senso negati$o 4ue ser$e de molde Q sntese da fita positi$a de >?A 99
integrada ao genoma do )ospedeiro e utilizada para sntese de m@?A $iral"
- ds@?A
- Rma fita & positi$a, outra negati$a! fita negati$a usada como molde para sntese de
m@?A, no citosol, com au<lio de uma @?A pol @?A dep"
- ?o nScleo! au<lio de enzimas celulares"
* 5rganizao gen=mica para replicao
- 1rotenas $irais na e<tremidade NT
- CA1 NT: tpico de m@?A eucaritico, & uma ptn 4ue protege o m@?A na e<tremidade NT
contra ao de rionucleases, ao mesmo tempo 4ue atrai riossomos 99 cpia do m@?A!
- 81g: ptn ligada ao genoma $iral, agindo como primer durante sntese de @?A"
*@elacionado com @p@d-
- 1rotenas $irais na e<tremidade +T
- Cauda de poli-A: tpico de m@?A eucaritico, & uma estrutura composta com muitos
resduos de adenina 99 ligao de ptns especficas, para proteger contra a degradao
enzim'tica" *@elacionado com @p@d-
- t@?A-liOe: se4uIncias de @?A com estrutura terci'ria parecida ao t@?A, 4ue adiciona
aas na e<tremidade +T para encapsulamento e aumento da estailidade do @?A, al&m de ser
potenciador da traduo"
* /strat&gia de traduo de protenas $irais
- Considerando 4ue o m@?A de eucariotos so monocistr=nicos *codificam apenas um
polipeptdeo-, mas o $iral & policistr=nico, foi necess'rio algumas estrat&gias para resol$er
esse impasse:
- @?A sugen=mico *sg@?A-: @?A de taman)o menor 4ue o @?A gen=mico, en$ol$idos
na produo de ptns capsidiais *promotor pra @p@d- 99 mesma se4uIncia +T! incio NT
diferente"
- 1oliprotena: toda informao gen&tica contida no genoma $iral pode estar codificada
em apenas uma 5@0, a partir da 4ual um Snico m@?A & produzido 99 $'rias ptns $irais
concatenadas, 4ue posteriormente sero cli$adas em se4uIncias peptdicas indi$iduais"
- Cominao de sg@?A com poliprotena
- Aegmentao de genoma: cada 5@0 & codificada por um segmento de @?A gen=mico
diferente, os 4uais so traduzidos separadamente" *e<" Influen$a A-
* 5utras protenas $irais
- /strutural: ?ucleocapsdeo, !ore protein, 1rotena de memrana *Jlicoprotena-
- ?o-estrutural: @?A 1ol, 1rotease *poliprotena-, ;etiltransferase, .elicase, Co-enzima,
#niidor de ApoptoseF@?AiFCitocina
8rus de >?A
* ,ipos
- ss>?A
- 1ossuem fita positi$a ou negati$a! para a sntese de m@?A, )' produo de uma fita
complementar ao genoma, gerando uma dupla fita 4ue ser$e como molde para a transcrio!
- ,ranscrio no nScleo, com au<lio de >?A pol >?A dep"
- ds>?A
- 5@0s em amas as fitas de >?A 99 moldes diretos para sntese de m@?A!
- Ae transcre$er no nScleo: usam @?A pol ## celular pra sntese de m@?A!
- Ae transcre$er no citosol: @?A pol >?A dep"
- ds>?A-@,
- Antese de m@?A no nScleo, usando @?A pol ##!
- ,ranscrio re$ersa ocorre aps a replicao do genoma $iral"
* 5rganizao gen=mica para replicao: >p>d
- 5rigem da >?A pol
- (imita%es ao usar >?A pol
- >d>1 sempre re4uere 1rimer!
- ;uitas protenas assessoras so necess'rias: primase, )elicase, topoisomerase, ligase
- Ciclos de replicao
- Parvoviridae: .uman par$o$irus BC2
- ss->?A! linear! no-en$elopado, >p>d celular
- ?o sintetiza primer 99 replicao por %elf Priming *genoma se dora-
- Adenoviridae: Human adenovirus !
- ds->?A! linear! no-en$elopado! >p>d $iral
- ?o sintetiza primer 99 Protein Priming *sntese de primer de ptn pr&-terminal!
>B1 se liga para deslocar a segunda fita formando um loop, e incluindo uma segunda origem,
e assim sucessi$amente-
- Herpesviridae: Human herpesvirus &
- ds->?A! linear! en$elopado! >p>d $iral
- ?o sintetiza primer 99 circularizao gen=mica
- Poxviridae: 'accinia v(rus, 'ariola virus
- ds->?A! circular! en$elopado! >p>d $iral
- ?o sintetiza primer"