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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR

INSTITUTO DE CINCIAS EXATAS E NATURAIS


FACULDADE DE QUMICA

PABLO LUIS BAIA FIGUEIREDO

COMPOSIO QUMICA DOS VOLTEIS DE ESPCIES DE Piper


(P. divaricatum, P. marginatum sensu lato) E Hyptis (H. crenata, H. suaveolens)
OBTIDOS POR VRIOS PROCESSOS DE EXTRAO

BELM - PAR
2014

PABLO LUIS BAIA FIGUEIREDO

COMPOSIO QUMICA DOS VOLTEIS DE ESPCIES DE Piper


(P. divaricatum, P. marginatum sensu lato) E Hyptis (H. crenata, H. suaveolens)
OBTIDOS POR VRIOS PROCESSOS DE EXTRAO

Trabalho
de
Concluso
de
Curso
apresentado para obteno do ttulo de
Licenciado em Qumica, Faculdade de
Qumica, Instituto de Cincias Exatas e
Naturais da Universidade Federal do Par.
Orientadora: Dr. Eloisa Helena de Aguiar
Andrade.

BELM - PAR
2014

PABLO LUIS BAIA FIGUEIREDO

COMPOSIO QUMICA DOS VOLTEIS DE ESPCIES DE Piper


(P. divaricatum, P. marginatum sensu lato) E Hyptis (H. crenata, H. suaveolens)
OBTIDOS POR VRIOS PROCESSOS DE EXTRAO

Trabalho
de
Concluso
de
Curso
apresentado para obteno do ttulo de
Licenciado em Qumica, Faculdade de
Qumica, Instituto de Cincias Exatas e
Naturais da Universidade Federal do Par.
Orientadora: Dr. Eloisa Helena de Aguiar
Andrade.

Data da Apresentao: 22 de Janeiro de 2014


Conceito: EXCELENTE
BANCA EXAMINADORA
_______________________________________________
Prof. Dr. Eloisa Helena de Aguiar Andrade
Faculdade de Qumica/UFPA - Orientadora
__________________________________________
Prof. Dr. Joyce Kelly do Rosrio da Silva
Faculdade de Biotecnologia/UFPA - Membro
__________________________________________
Prof. Dr. Giselle Maria Skelding Pinheiro Guilhon
Faculdade de Qumica/UFPA - Membro

minha av, Dora Figueiredo.


minha me, Simone Baia.

AGRADECIMENTOS
Deus, pela oportunidade que tive para evoluir intelectualmente por meio de
ingresso em uma universidade.
minha av, Dora Figueiredo, pelo carinho, amor e afeto que recebi desde
meu nascimento e pelo apoio psicolgico que recebi nos momentos mais difceis de
minha caminhada.
minha me, Simone Baia, pelo apoio, carinho e afeto.
Universidade Federal do Par, pelo apoio estrutural, que recebi desde meu
ingresso at meus ltimos momento como discente de graduao.
Aos programas PIBIC/CNPq, PIBIC/FAPESPA e PIBIC/UFPA pelo apoio
financeiro na concesso da bolsa de estudo durante meu curso.
Prof.. Dr.. Eloisa Helena de Aguiar Andrade, pela pacincia, confiana,
sugestes, disponibilidade e acessibilidade sempre que precisei.
A Prof.. Dr.. Joyce Kelly do Rosrio da Silva e as alunas de mestrado do
programa de ps-graduao em Biotecnologia Shirlley Ferreira e Lia Meireles, pela
orientao sugesto e companhia no laboratrio.
minha colega de iniciao cientfica, de turma e muitas vezes irm mais
velha Valdelini Pereira da Silva pelo apoio e companhia nesta caminhada.
minha colega de laboratrio Rafaela Oliveira Pinheiro pela orientao,
ajuda, pacincia e bom humor constante.
Aos meus colegas de turma do Curso de Licenciatura em Qumica 05510 e ao
grupo SF4 pela descontrao, ajuda, companhia, risadas e carinho.
minha namorada, colega e parceira Vilmara dos Santos Moura pelo carinho,
apoio, incentivo e companhia.
Por fim, a todos que contriburam direta ou indiretamente na construo deste
trabalho e na minha jornada acadmica.

RESUMO
O uso dos leos essenciais como agentes medicinais conhecido desde a
remota antiguidade. Destacando-se as famlias Piperaceae e Lamiaceae pelas suas
importncias econmicas e medicinais, uma vez que algumas espcies fazem parte
do mercado mundial, como a pimenta-do-reino, utilizadas na medicina popular e
como fontes de leos essenciais. Os volteis de Piper divaricatum, P. marginatum,
Hyptis crenata e H. suaveolens foram obtidos por hidrodestilao (HD), arraste a
vapor (AV), Destilao-Extrao-Simultnea (DES) e analisados por CG-EM. Dentre
as espcies de Piper estudadas o melhor rendimento em leo foi obtido de P.
divaricatum (2,15%), cuja composio qumica (eugenol, metileugenol e acetado de
eugenol) no mostrou dependncia ao mtodo de extrao empregado (HD e DES),
alm da atividade biolgica de seu leo essencial frente Artemia salina. Os
constituintes (safrol, 3,4-metilenodixipropiofenona, -terpineol) de P. marginatum
mostraram variaes qualitativas e quantitativas entre as tcnicas empregadas. Nas
Lamiaceaes a espcie H. crenata apresentou rendimento em leo (2,33%) superior a
H. suaveolens (0,3%), onde o melhor rendimento foi obtido por HD. A similaridade na
composio qumica de H. crenata ocorreu entre as tcnicas por AV e DES
(majoritrios: -pineno, -2-careno e 1,8-cineol), enquanto na HD no apresentou
nenhum constituinte com concentrao significativa (principais: -terpineol, 10-epi-eudesmol, valerianol), onde a melhor capacidade antioxidativa foi obtida do leo
extrado por AV. Quanto aos constituintes qumicos de H. suaveolens observou-se
uma leve variao quantitativa (-Elemeno, -cariofileno e biciclogermacreno).

Palavras-chave: Piperaceae, Piper, Lamiaceae, Hyptis, constituintes volteis

LISTA DE ILUSTRAES
Figura 01.

Extrator de destilao e extrao simultnea............................... 16

Figura 02.

Foto da espcie Artemia salina....................................................

19

Figura 03.

Sequestro do DPPH* por um antioxidante...................................

20

Figura 04.

Foto das espcies de Piper divaricatum, Piper marginatum


sensu lato, Hyptis crenata e Hyptis suaveolens.......................... 21

Figura 05.

Sistema de extrao de leo essencial por hidrodestilao........

Figura 06.

Sistema de extrao de leo essencial por arraste a vapor


dgua........................................................................................... 23

Figura 07

Sistema de extrao de concentrado de volteis por destilao


e extrao simultnea.................................................................. 24

Figura 08.

Rendimento em leo essencial das partes areas das espcies


de Piper e Hyptis.......................................................................... 27

Figura 09.

Rendimento de leo essencial em vrios rgos de Piper


divaricatum................................................................................... 28

Figura 10.

Estruturas qumicas dos componentes majoritrios obtidos nos


diferentes rgos de Piper divaricatum........................................ 31

Figura 11.

Composio qumica dos volteis obtidos das partes areas de


Piper divaricatum por HD e DES.................................................. 32

Figura 12.

Composio qumica dos leos essenciais obtidos de vrios


rgos de Piper divaricatum......................................................... 32

Figura 13.

Composio qumica de Piper marginatum por HD e


DES.............................................................................................. 35

Figura 14.

Estruturas qumicas dos componentes majoritrios obtidos das


partes areas de Piper marginatum............................................. 36

Figura 15.

Variao qumica de Hyptis crenata por HD, AV, DES................

Figura 16.

Estruturas qumicas dos compostos majoritrios obtidos de


Hyptis crenata.............................................................................. 40

22

39

Figura 17.
Figura 18.

Composio qumica de Hyptis suaveolens obtidos por HD e


AV................................................................................................. 43
Estruturas qumicas dos compostos majoritrios obtidos de
Hyptis suaveolens........................................................................ 44

LISTA DE TABELAS
p.

Tabela 01.

Composio qumica dos volteis dos vrios rgos de


Piper divaricatum por HD e DES.............................................

29

Tabela 02.

Composio qumica dos volteis (>1,0%) de Piper


marginatum por HD e DES ....................................................

34

Tabela 03.

Composio qumica dos volteis de Hyptis crenata por HD,


AV e DES.........................................................................

37

Tabela 04.

Composio qumica dos volteis de Hyptis suaveolens por


HD e DES................................................................................

41

Tabela 05.

Resultado do teste de toxidade preliminar do leo essencial


das folhas de Piper divaricatum..............................................

45

Tabela 06.

Resultado do teste de toxidade preliminar do leo essencial


dos galhos secundrios de Piper divaricatum........................

45

Tabela 07.

Resultados dos testes da capacidade antioxidativa do OE


de Hytis crenata extrado por HD e AV....................................

46

LISTA DE ABREVIATURAS E SMBOLOS


AV

Arraste a vapor dgua

BHA

Butil hidroxianisol

BHT

Butil hidroxitolueno

B. L. U.

Base livre de umidade

CG

Cromatografia em fase gasosa

CG-EM

Cromatografia em fase gasosa acoplada espectrometria de massas

CLAE-UV

Cromatografia Liquida de Alta Eficiencia acoplada ultravioleta

CL50

Concentrao letal para causar morte 50% da populao

DES

Destilao e extrao simultnea

DPPH

1,1-difenil-2-picrildrazila

EM

Espectrometria de massas

EtOH

Etanol

Folha(s)

GP

Galho Primrio

GS

Galho secundrio

HD

Hidrodestilao

IR

ndice de reteno

Massa

OE

leo essencial

pH

Potencial hidrogeninico

Raiz

UFPA

Universidade Federal do Par

UV

Ultravioleta

SUMRIO
p.
1 INTRODUO................................................................................................12
2 OBJETIVOS
2.1 GERAL.............................................................................................................13
2.2 ESPECFICOS.................................................................................................14
3 REVISO BIBLIOGRFICA
3.1 OS LEOS ESSENCIAIS................................................................................14
3.2 MTODOS DE EXTRAO DE VOLTEIS...................................................14
3.3 A FAMLIA PIPERACEAE E O GNERO PIPER............................................16
3.4 A FAMLIA LAMIACEAE E GNERO HYPTIS ..............................................16
3.5 PIPER DIVARICATUM....................................................................................17
3.6 PIPER MARGINATUM SENSU LATO.............................................................17
3.7 HYPTIS CRENATA..........................................................................................17
3.8 HYPTIS SUAVEOLENS..................................................................................18
3.9 TOXIDADE PRELIMINAR COM LARVAS DE ARTEMIA SALINA.................18
3.10CAPACIDADE ANTIOXIDATIVA DE LEOS ESSENCIAIS........................19
4 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
4.1 COLETA, IDENTIFICAO E SECAGEM DO MATERIAL BOTNICO.........21
4.2 EXTRAO DOS COMPONENTES VOLTEIS............................................22
4.2.1 Extrao dos leos essenciais...............................................................22
4.2.2 Clculo do rendimento dos leos essenciais.......................................23
4.2.3 Extrao do concentrado voltil.............................................................23
4.2.4 Anlise da composio qumica.............................................................24
4.3 TESTES BIOLGICOS...................................................................................25
4.3.1 Teste da toxidade preliminar...................................................................25
4.3.2 Teste da capacidade antioxidativa.........................................................25
5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 RENDIMENTO DOS LEOS ESSENCIAIS....................................................27
5.2 COMPOSIO QUMICA ..............................................................................29
5.2.1 Composio qumica dos vrios rgos de Piper divaricatum...........29
5.2.2 Composio qumica de Piper marginatum por HD e DES..................34
5.2.3 Composio qumica de Hyptis crenata por HD, AV e DES.................37

5.2.4 Composio qumica de Hyptis suaveolens por HD e AV...................41


5.3 TESTES BIOLGICOS..................................................................................45
5.3.1 Toxidade preliminar de Piper divaricatum.............................................45
5.3.2 Capacidade antioxidativa de Hyptis crenata.........................................46
6 CONCLUSES...............................................................................................47
REFERNCIAS...............................................................................................48
ANEXOS..........................................................................................................55

12

1 INTRODUO
A magnitude da biodiversidade brasileira no conhecida com preciso tal a
sua complexidade (DIAS, 1996). O Brasil possui a maior cobertura de florestas
tropicais, especialmente concentrada na Regio Amaznica, possuindo a flora mais
rica do mundo, com cerca de 55 mil espcies de plantas superiores,
aproximadamente 22% do total mundial (LEWINSOHN; PRADO, 2000)
Nesse contexto vrias espcies do gnero Piper destacam-se pelo seu
potencial medicinal, importncia econmica (DI STASI et al., 1989; PIO-CORREA
1974; GUIMARES; ICHASO; COSTA, 1978) e diversidade de metablitos
secundrios (BARROS et al., 1996;YUNCKER, 1958; SILVA; MACHADO, 1999).
As plantas da famlia Lamiaceae so utilizadas nas indstrias de ervas
condimentares, como fonte de leo essencial (EL-GAZZAR; WATSON, 1970a,b).
Havendo uma notvel importncia econmica e um potencial farmacolgico dos
leos essenciais de espcies do gnero Hyptis (FALCO; MENEZES, 2003).
Dentre as plantas da famlia Lamiaceae e Piperaceae, Piper divaricatum, P.
marginatum, Hyptis crenata e H. suaveolens destacam-se por apresentarem vrios
estudos da composio qumica dos seus leos essncias e atividades biolgicas de
tais leos (ALMEIDA et al., 2009; REIGADA et al.,2007; MARTINS et al., 2006;
REBELO et al., 2009).
No Brasil a produo de leos essenciais, alm de vivel rentvel (BIZZO;
HOVELL; REZENDE, 2009) e suas composies so fortemente dependentes das
matrias-primas obtidas e dos processos de extrao (OLIVEIRA; OLIVEIRA;
SACRAMENTO, 2007). Este trabalho avaliou os componentes volteis de duas
espcies do gnero Piper (P. marginatum sensu lato e P. divaricatum) e Hyptis (H.
crenata e H. suaveolens) em diferentes processos de extrao, hidrodestilao (HD),
arraste a vapor (AV) e destilao e extrao simultnea (DES), para verificar se a
composio qumica destes volteis dependia ou no dos referidos mtodos de
extrao.

13

2 OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GERAL

Avaliar a influncia do processo de extrao de volteis na composio


qumica de espcies de Piper e Hyptis e atividade biolgica dos leos
essenciais em estudo

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Analisar a composio qumica dos volteis obtidos dos vrios


processos de extrao por cromatografia de fase gasosa (CG)
acoplada espectrometria de massas (EM);

Determinao da citotoxidade preliminar dos leos essenciais frente a


Artemia salina.

Determinar a capacidade antioxidativa de alguns leos essenciais pelo


mtodo do DPPH

14

3 REVISO BIBLIOGRFICA
3.1 OS LEOS ESSENCIAIS
Os leos essenciais so lquidos volteis dotados de aroma forte e quase
sempre agradvel, proveniente do metabolismo secundrio de vegetais (SILVA;
CASALI, 2000). Os leos essenciais exercem a funo de adaptao da planta ao
meio ambiente, atuando na defesa contra o ataque de predadores, atrao de
agentes polinizadores, proteo contra perda de gua, aumento da temperatura e
como inibidores de germinao, constituem um dos mais importantes grupos de
matrias primas para vrias indstrias, como as de perfumaria, alimentos e
farmacutica (SOUZA, 2010).
No incio do sculo XX, os leos essenciais trouxeram um renovvel interesse
em produtos naturais, devido aos indesejveis efeitos colaterais das drogas
sintticas. Atualmente os leos essenciais puros, so amplamente utilizados na
alimentao e na perfumaria, alm do uso farmacutico, uma vez que possuem
componentes qumicos com atividade farmacolgica (PALA; SALIN; CORTEZ,
2010).
As variaes na composio do leo essencial tm sido observadas em
diversos aspectos, como na parte da planta empregada na destilao, variabilidade
gentica intraespecfica, estado de desenvolvimento da planta, poca de colheita,
condies de cultivo, suas coordenadas geogrficas, caractersticas do solo, clima e
outras condies (TAVARES et al., 2005; HAY; SVOBODA, 1993; REIS et al.,
2010).Utilizam-se diferentes mtodos de extrao para isolar tais leos, devendo-se
ressaltar que, dependendo do mtodo, a composio do leo pode variar
significativamente (CASSEL et al., 2009; OLIVEIRA; OLIVEIRA; SACRAMENTO,
2007).
3.2 MTODOS DE EXTRAO DE VOLTEIS
Os processos de obteno de leos essenciais variam conforme a localizao
do leo na planta, alguns dos mtodos de extrao mais utilizados so:
hidrodestilao, extrao por solventes orgnicos, destilao a vapor, extrao por
fluido supercrtico, enflorao, prensagem a frio, dentre outros. A proporo de leos

15

essenciais extrados por destilao a vapor de 93%, enquanto que os 7%


restantes so extrados utilizando os outros mtodos (YUSOFF et al., 2011;
ROBBERS; SPEEDIE; TYLER, 1997; SIMES; SPITZER, 2004).
Na indstria de leos essenciais existem trs tipos de extraes distintas de
arraste por vapor dgua. Essa distino feita pela forma na qual se estabelece o
contato entre a amostra e a gua, na fase lquida ou de vapor; a primeira chamada
de hidrodestilao, onde a amostra fica imersa na gua contida em uma caldeira; na
segunda, chamada de destilao pela gua e vapor, onde uma rede colocada na
parte inferior de uma caldeira mais alta separando a gua da amostra e a terceira;
chamada propriamente de destilao pelo vapor de gua, a amostra mantida em
um recipiente separado e o vapor de gua que flui provm de um gerador prprio
independente (ALVES, 1988; CRAVEIRO et al., 1981, BRUNETON, 1991, COSTA,
1994; SIMES, 1999; FAJARDO; MARTINEZ-SOSA; ESTARRN-ESPINOSA,
1997).
A indstria utiliza preferencialmente, o terceiro mtodo, pois em relao aos
demais mtodos reduzido o contato da amostra com a gua, e a hidrlise dos
steres e a polimerizao de outros constituintes, em particular dos aldedos,
menos acentuada (ALVES, 1988; CRAVEIRO et al., 1981; BRUNETOIN, 1991).
O mtodo de extrao usando o vapor simultneo e destilao com solvente
orgnico a partir de bales de ebulio separados que conduzem a uma superfcie
de condensao comum (Figura 01 pg. 15) chamado de "extrao e destilao
simultnea a vapor (EDS)" a sigla DES de uso comum. O material botnico
colocado com gua no balo de destilao ligado ao ponto A e o solvente orgnico
(menos denso do que a gua) colocado em um balo de destilao anexado em B.
O condensador C inserido no tubo D de tal forma que o condensado retornado
parte inferior da D, a gua de condensao volta para o balo A e a recolha do
solvente em cima da gua volta para o balo B (RON SELF, 2005).

16

Figura 01. Extrator de destilao e extrao simultnea.

Fonte: Ron Self, 2005.

3.3 A FAMLIA PIPERACEAE E O GNERO PIPER


Piperacea uma famlia de ervas, arbustos, pequenas rvores, rvores
aromticas e trepadeiras, representada por quatro gneros: Piper, Peperoma,
Manekia e zippelia, compreendendo aproximadamente 4000 espcies (WANKE et
al., 2007; MONTEIRO; GUIMARES, 2009).
Muitos txons de Piperaceae so ricos em metablitos secundrios bioativos,
incluindo alcalides, amidas, flavonides e terpenos, possuindo assim importncia
econmica e medicinal, como Piper nigrum L. (pimenta-do-reino), P. umbellatum L.
(pariparoba) e P. methysticum L. (kavakava) (YUNCKER, 1958; BARROS et al.,
1996; SILVA; MACHADO, 1999).
O gnero Piper tem aproximadamente 700 espcies, com cerca de 170 no
Brasil (YUNCKER, 1972). Vrias plantas deste gnero so largamente utilizadas na
medicina popular em muitas partes do mundo e tm seus metabolitos secundrios
com diversas atividades biolgicas (PARMA et al., 1997).
3.4 A FAMLIA LAMIACEAE E O GNERO HYPTIS
A famlia Lamiaceae compreende cerca de 250 gneros e 6.970 espcies
(JUDD et al., 1999) distribudas em todo o mundo, sendo o maior centro de
disperso a regio do Mediterrneo (PORTE; GODOY, 2001). As plantas de
Lamiaceae so utilizadas nas indstrias de ervas condimentares, como fonte de leo
essencial (EL-GAZZAR; WATSON, 1970a,b).

17

So exemplos de espcies de Lamiaceae, o alecrim (Rosmarinus sp.), slvia


(Salvia sp.), organo (Origanum sp.), tomilho (Thymus sp.), manjerico (Ocimum
sp.), manjerona (Marjorana sp.), menta (Mentha sp.) e segurelha (Satureja sp.),
(MARIUTTI; BRAGAGNOLO, 2007).
O gnero Hyptis o segundo maior de Lamiaceae e est includo dentre os
que tm maior concentrao de leos essenciais (EL-GAZZAR; WATSON, 1970a,b).
3.5 PIPER DIVARICATUM
Piper divaricatum Meyer um arbusto com at 9,0 m de altura, conhecido
popularmente por pau-de-angola, jaborandi-manso e betre. Tem distribuio
geogrfica na Amrica do Sul. No Brasil, nos estados do Amazonas, Amap, Par,
Cear, Pernambuco, Bahia, Minas Gerais, Esprito Santo, Rio de Janeiro e Mato
Grosso. Sua raiz aromtica, de sabor forte, semelhante ao do gengibre, suas
folhas e razes, quando em infuso, so empregadas internamente contra dores
reumticas e clicas, e, quando cozidas, so utilizadas sob a forma de banhos
antirreumticos (GUIMARES; GIORDANO, 2004).
3.6 PIPER MARGINATUM SENSU LATO
Piper marginatum sensu lato conhecida como caapeba cheirosa e
malvarisco, um arbusto que tem ocorrncia desde o Oeste da ndia at as
Amricas Central e Sul (desde o Equador at o Brasil). Suas folhas tm
aproximadamente 8-15 cm de largura e 10-28 cm de comprimento (ANDRADE;
GUIMARES; MAIA, 2009).
O extrato de suas folhas usado na medicina popular para tratar o fgado e
doenas da vescula e tambm como tnico e antiespasmdico (BERG, 2010). No
estado da Paraba folhas e talos de P. marginatum so utilizados contra picada de
cobra e como sedativos (GUIMARES; GIORDANO, 2004).
3.7 HYPTIS CRENATA
Hyptis crenata Pohl. ex. Benth uma erva anual com cerca de 69-80 cm de
altura, cresce espontaneamente em solos arenosos perto de crregos da ilha do

18

Maraj, Par (MAIA; ZOGHBI; ANDRADE, 2001; ANDRADE et al.,2002).


conhecida popularmente como salva-do-maraj, hortel-brava, salsa-do-maraj e
malva-do-maraj (CORRA, 1984; HASHIMOTO, 1996).
O ch de suas folhas usado popularmente como sudorfico, tnico,
estimulante, para tratar inflamao dos olhos e garganta, constipao e artrite
(BERG, 2010). Alm do ch, suas folhas so utilizadas como repelente de insetos
quando friccionadas sobre a pele (POTT; POTT, 1997).
3.8 HYPTIS SUAVEOLENS
Hyptis suaveolens (L.) Poit. uma erva ereta anual, cerca de 1-2 metros de
altura (SILVA et al., 2003). conhecida popularmente como mentrasto ou ervacidreira, como bamburral (nordeste) e erva canudo (sudeste e sul), onde
considerada invasora de lavoura de milho e de pastagens (MARTINS; POLO; 2009).
encontrada em locais onde os solos foram drasticamente alterados, e est
amplamente distribuda nas regies tropicais e subtropicais (WULFF, 1973)
Suas folhas so utilizadas na medicina popular como bquica, sudorficas,
antiespasmdicas, carminativa e para tratamento de distrbios gastrintestinais
(CORREA, 1981; MARTINS; POLO, 2009). Suas flores e folhas secas, em forma de
cigarro, so utilizadas nas odontalgias, e tambm no tratamento das cefalias,
sendo tambm indicadas contra gripes, febres e problemas respiratrios em geral.
(BASLIO et al., 2006).
3.9 TOXIDADE PRELIMINAR COM LARVAS DE ARTEMIA SALINA
Desde tempos antigos plantas so usadas como medicamento, este uso tem
grande importncia, pois podem prover medicamentos para ampliar o arsenal
teraputico (JARAMILLO, 1989). Contudo, muitas plantas so conhecidas por serem
txicas, por essa razo, pesquisa so necessrias para determinar a ao
farmacolgica e toxidade destas plantas medicinais (PARRA et al.; 2001).
O microcrustceo Artemia salina (Figura 02) pertence ao filo Arthropoda,
classe Crustcea, subclasse Branquiopoda, ordem Anostraca, famlia Artemidae e
gnero Artemia (PIMENTEL et al., 2011). Por se tratar de um animal de fcil
manuteno em condies de laboratrio e de ampla distribuio, Artemia sp. tem

19

sido largamente utilizada em testes de toxicidade. O teste com Artemia sp. consiste
na exposio dos nuplios na fase II ou III durante 24 e/ou 48 horas a concentraes
crescentes da amostra que se pretende testar com anlise do nmero de
organismos mortos ao final do perodo de exposio (VEIGA; VITAL, 2002; CETESB,
1987).
Figura 02. Foto da espcie Artemia salina

Fonte: http://www.hlasek.com/artemiasalina.html

3.10

CAPACIDADE ANTIOXIDATIVA DE LEOS ESSENCIAIS


Os antioxidantes so comumente usados para inibir, prevenir ou retardar a

deteriorao pela oxidao, podendo atuar na reduo dos radicais livres,


antioxidante primrio, ou por um mecanismo que no envolve a reduo direta dos
radicais livres, antioxidante secundrio (POKORNY, 2001).
Devido tendncia atual pela procura cada vez maior de produtos naturais
pelos consumidores, causada pela crescente preocupao com a sade, torna-se
necessrio o estudo do uso de condimentos e ervas aromticas como antioxidantes
naturais em substituio aos convencionais BHA e BHT amplamente utilizados
(MARIUTTI; BRAGAGNOLO, 2007).
Existe uma grande variedade de testes para verificar a potencialidade dos
componentes presentes nos condimentos e ervas aromticas. Os mtodos podem
ser classificados em dois grupos: mtodos que avaliam a habilidade de sequestrar
radicais livres e mtodos que testam a habilidade de inibir a oxidao lipdica
(SCHWARZ et al., 2001). A quantificao do substrato, do agente oxidante, dos
produtos intermedirios ou dos produtos finais da oxidao pode ser usada para
medir a atividade antioxidante (ANTOLOVICH et al., 2002).

20

O mtodo de sequestro do radical DPPH bastante utilizado para avaliar a


evoluo da atividade antioxidante de alimentos, extratos de plantas, leos
essenciais e substncias puras. O radical DPPH (DPPH*) bastante estvel em
soluo alcolica. Sua forma radicalar recebe facilmente um tomo de hidrognio
(ou um eltron) abstrado de um substrato e sua colorao muda de violeta para
amarelo por uma reduo do seu coeficiente de absortividade molar de 9660 a 1640
a 517 nm (Figura 03). A mudana de colorao do DPPH estequiomtrica em
relao ao nmero de eltrons capturados (PRAKASH, 2001).
Figura 03. Sequestro do DPPH* por um antioxidante.

O2N

N-

O2N

NO2 + RH

O2N

H
N

NO 2

R-

O2N

As reaes de um antioxidante ou de uma espcie radicalar (R*) com o


DPPH*, promovem sua reduo. O desenvolvimento da reao bem como sua
eficincia antioxidante pode ser monitorado pelo decrscimo da absorbncia por
espectrofotometria UV-visvel ou pela diminuio da rea do pico por CLAE-UV
(YAMAGUCHI et al., 1998).

21

4 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
4.1

COLETA, IDENTIFICAO E SECAGEM DO MATERIAL BOTNICO


As espcies Piper marginatum sensu lato, Hyptis crenata e Hyptis suaveolens

(Figura 04) foram coletados no Parque Estadual Serra das Andorinhas e dos
Martrios, Municpio de So Geraldo do Araguaia, Par. Piper divaricatum (Figura 04)
foi coletado nas margens do rio Tucunduba no campus profissional da Universidade
Federal do Par, em Belm, Par.
Figura 04. Foto das espcies de Piper divaricatum, Piper marginatum sensu lato,
Hyptis crenata e Hyptis suaveolens.

Fonte: Eloisa Andrade, 2013

A preparao de exsicatas, registro, incorporao no herbrio e identificao


das espcies foi feita segundo tcnica tradicional em botnica, ou seja, prensagem,
anotao de dados fenolgico, etnobotnico, ambiente, tipo de vegetao. A
identificao botnica foi feita por comparao morfolgica com amostras autenticas,
e incorporado no Herbrio Joo Mura Pires do Museu Paraense Emlio Goeldi
(MG 200.151, MG 200.119, MG 200.123), em Belm, Par.
As partes areas das espcies P. marginatum, H. suaveolens, H. crenata e a
planta inteira P. divaricatum foram colocadas sobre bandejas, em estufa com
ventilao a temperatura mdia de 35 C durante cinco dias, aps a secagem o
material foi modo, homogeneizado, pesado e submetido aos processos de
extraes. Para a extrao, o material de P. divaricatum foi separado em folhas,
galhos primrios, galhos secundrios e razes.

22

4.2

EXTRAO DOS COMPONENTES VOLTEIS

4.2.1 Extrao dos leos


leos essenciais
Os leos essenciais das espcies de Piper foram obtidos apenas por
hidrodestilao, j os leos essenciais das espcies Hyptis foram obtidos por
hidrodestilao e arraste a vapor (Figura 05 e 06) utilizando sistema de vidro do tipo
Clevenger modificado, acoplado a sistema de refrigerao para manuteno da
gua
gua de condensao entre 10
10-15 C,
C, durante 3 h. Os leos, aps extrao foram
centrifugados durante 5 min a 3000 rpm, desidratados com Na2SO4 anidro e
novamente centrifugados nas mesmas condies. Os leos foram armazenados em
ampolas de vidro
ro mbar, vedadas com chama e, acondicionados em geladeira a 5
C.
Figura 05. Sistema de extrao de leo essencial por hidrodestilao.

Fonte: Eloisa Andrade, 2013

23

Figura 06. Sistema de extrao de leo essencial por arraste a vapor dgua.

Fonte: Elosa Andrade, 2013.

4.2.2 Clculo do rendimento dos leos essenciais


O rendimento (%) do leo essencial extrado da biomassa vegetal foi obtido
do material bruto seco e livre de umidade (BLU) atravs da relao entre massa,
leo e umidade:

% leo BLU

Vol. do leo obtido mL

massa do material g  

   !"#$ % &#!


'((

* . 100%

A determinao da umidade residual do material vegetal foi realizada em


balana com determinao de umidade com aquecimento infravermelho no
momento da extrao.
4.2.3 Extrao do concentrado voltil
Para obteno dos concentrados volteis, as amostras de P. marginatum, P.
divaricatum e H. crenata foram submetidas a micro hidrodestilao-extrao
simultnea (DES), usando um extrator tipo Nickerson & Likens da Chrompack
(Figura 07), e n-pentano como solvente (2 mL), acoplado a um sistema de
refrigerao para manuteno da gua de condensao entre 5-10 C, durante 2

24

horas.
Figura 07. Sistema de extrao de concentrado de volteis por destilao e
extrao simultnea.

Fonte: Pablo Figueiredo, 2013

4.2.4 Anlise da composio qumica


A composio qumica dos leos essenciais e concentrados volteis foi
analisada por Cromatografia de fase gasosa/Espectrometria de Massas em sistema
Thermo DSQ-II equipado com coluna capilar de slica DB-5MS (30m x 0,25 mm;
0,25 mm de espessura do filme) nas seguintes condies operacionais: programa de
temperatura: 60C-240C (3C/min); temperatura do injetor: 250C; gs de
arraste:hlio (velocidade linear de 32 cm/s, medida a 100C); injeo: tipo "splitless"
(0,1 L de uma soluo 2:1000 de leo essencial em hexano); espectros de massas:
por impacto eletrnico a 70 eV; temperatura da fonte de ons: 200C.
A identificao dos componentes volteis foi baseada no ndice de reteno
linear calculado em relao aos tempos de reteno de uma srie homloga de nalcanos e no padro de fragmentao observados nos espectros de massas, por
comparao com amostras autenticas existentes nas bibliotecas do sistema de
dados e da literatura (ADAMS, 2007).

25

4.3

TESTES BIOLGICOS

4.3.1 Teste da toxidade preliminar


Para o teste da toxidade preliminar ovos do microcrustceo Artemia salina
foram colocados para eclodirem em uma salmoura artificial composta por 1,4 g de
KCl, 46 g de NaCl, 8 g de Na2SO4, 22 g de MgCl2, 2,6 g de CaCl2 dissolvidos em 2
litros de gua com pH ajustado em 9 com Na2CO3 para diminuir o risco de morte de
A. salina devido a diminuio do pH durante a incubao dos ovos (LEWAN;
ANDERSSON; MORALES-GOMERS, 1992).
As larvas eclodiram aps aproximadamente 48 horas, dez larvas foram
colocadas em cada tubo de ensaio em concentraes de 1, 5, 10, 25, 50 e 100

g/mL do leo essencial das folhas e galhos secundrios de P. divaricatum com


dimetil sulfxido como diluente do leo, esta etapa foi realizada em triplicata.
Aps o perodo de 24 horas foi realizada a contagem das larvas mortas e
efetuado o clculo da concentrao necessria para causar a morte de 50% (Cl50)
pelo mtodo estatstico Probitos (FINNEY, 1971).
4.3.2 Teste da capacidade antioxidativa
Cada amostra de leo (5 L) foi misturada com 900 L do tampo Tris-HCl
100 mM (pH = 7,4), 40 L de etanol e 50 L de uma soluo de Tween 20 0,5%
(m/m) e adicionado 1,5 mL de DPPH 0,5 mM em etanol (250 M na mistura
reacional). O Tween 20 foi usado como um emulsificante para mistura leo-gua
(YAMAGUCHI et al., 1998; FRANKEL et al., 1996; SIRENDI, GOHTANI, YAMANO,
1998).
A mistura foi agitada vigorosamente e mantida em ambiente escuro a
temperatura ambiente por 30 min. A leitura da absorbncia foi feita no UV-visvel a
517 nm. A reao controle foi feita substituindo a amostra por 50 L de Trolox 1 mM
em etanol (concentrao final na reao 25 M).
A porcentagem de inibio dos radicais DPPH(IDPPH) para cada amostra foi
calculada de acordo com a equao:

26

Onde:

I DPPH %
11   A /B 4 5 100

A a absorbncias da amostra controle


B a absorbncia do branco no trmino da reao.
Os percentuais de inibio dos leos foram comparados com a inibio
induzida pela soluo de trolox 1 mM. A capacidade antioxidante total expressa em
mg ET/ml de leo foi calculada de acordo com a equao.

mg ET/mL

A  B Trolox 250,29 1000


X
X
X
A  C
1000
1000
10

Onde:
A = Abs do branco
B = Abs da amostra
C = Abs do Trolox
[Trolox] = concentrao da soluo de trolox usada como referncia.
250,29 = peso molecular do trolox

27

5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 RENDIMENTO EM LEO ESSENCIAL
A Figura 08 mostra os rendimentos em leo essencial obtidos das partes
areas das espcies estudadas.
estudada
Dentre as espcies do gnero Piper,, o melhor rendimento em leo essencial
por hidrodestilao foi obtido
btido de P. divaricatum (2,15%). Dentre as Hyptis, o
rendimento de leo essencial de H. suaveolens por hidrodestilao (2,33%) foi
superior ao rendimento por arraste a vapor (1,70%).
(1,7 %). Os rendimentos da espcie H.
crenata foram de 0,30% e 0,23% por hidrodestilao e arraste a vapor
vapor,
respectivamente.
Figura 08. Rendimento em leo essencial das partes areas das espcies de
Piper e Hyptis.
2.5

2.33
2.15
1.8

1.7

1.5
HD

AV

0.3 0.23

0.5
0
divaricatum

marginatum

Piper

crenata

suaveolens
Hyptis

A Figura 09, pg. 27


7 apresenta os rendimentos dos leoss essenciais obtidos
dos vrios rgos de P. divaricatum por hidrodestilao.

28

Figura 09. Rendimento de leo essencial em vrios rgos de Piper divaricatum.

raiz

r
g

o
s

0.27

galho primrio

0.1

galho secundrio

0.88

folha

2.15
0

0.5

1.5

2.5

(%)

Dentre os rgos estudados, nas folhas foi obtido o melhor rendimento


(2,15%), enquanto o menor encontra-se nos galhos primrios (0,1%).

29

5.2 COMPOSIO QUMICA

5.2.1 Composio qumica dos rgos de Piper divaricatum


Na tabela 01 encontram-se os 68 constituintes qumicos, com seus
respectivos ndices de reteno (IR), identificados dos volteis obtidos das folhas
(F), galhos secundrios (GS), galhos primrios (GP) e razes (R) de P. divaricatum
extrados por hidrodestilao (HD) e destilao e extrao simultnea (DES). A
Figura10, pg. 30 apresenta as estruturas qumicas dos constituintes majoritrios
obtidos dos volteis de P. divaricatum.

Tabela 01. Composio qumica dos volteis dos vrios rgos de Piper divaricatum
por HD e DES.
IR

Constituintes

HD
F

DES

GS

GP
0,09
0,06

GS

GP

11,9

9,91
4,2

846

2E-hexanal

0,04

932
969

-pineno
sabineno

0,37
0,2

5,88

0,16

974
1024

-pineno
limoneno

0,1
0,04

4,04
0,6

1025
1031

silvestreno
Z--ocimeno

1044
1086

E--ocimeno
terpinoleno

1186
1298

-terpineol
cido (2E,3Z)-decadienoico

1335
1356

-elemeno
eugenol

0,96
36,2

1,06
33,73

2,54
20,8

0,12
0,32

1,29
27,33

0,82
30,19

0,65
51,16

1373
1389

-ylangeno
-elemeno

0,35
7,14

0,26
8,79

0,34
16,66

0,38
3,33

7,82

0,27
6,39

6,51

1402
1403

-funebreno
metileugenol

18,49

16,43

11,32

0,23
2,58

16,26

13,39

8,78

1417
1430

-cariofileno
-copaeno

3,41
0,31

6,68
0,32

9,98
0,56

3,46

3,4

4,36
0,24

3,22

1432
1437

trans--bergamoteno
-guaieno

0,04

0,17

0,52

0,11
0,21

0,32

0,08

1439
1452

aromadendreno
-humuleno

0,06
0,26

0,07
0,56

0,22
1,11

0,12

0,04
0,37

1457
1458

sesquisabineno
alloaromadendreno

0,08

0,22

0,56

1464
1475

E-9-epi-cariofileno
trans-cadina-1,(6),4-dieno

0,06

0,18

0,43

1,4
0,94

0,04

0,08

6,77
1,02

0,46

0,21
0,09
0,89

0,12
0,69
0,07
0,09

1,88
0,07

0,95
0,08

0,15

0,06
0,55

0,22
2,77

0,12
0,43
0,62

0,07

0,19

30

IR

Constituintes

HD

DES

GS

GP

GS
1,4

1484

germacreno D

2,38

1,95

3,77

2,66

1489
1493

-selineno
trans-muurola 5,4(14)-dieno

0,17
0,12

0,78
0,23

2,23
0,56

0,22

1498
1500

-selineno
biciclogermacreno

1,65

2,52

6,19

1500
1501

pentadecaeno
epizonareno

1502
1505

trans--guaieno
-bisaboleno

1506
1521

Z--bisaboleno
acetado de eugenol

1522
1528

-cadineno
zonareno

1,42
0,4

1529
1532

(E)--bisaboleno
-cupreno

0,26
0,12

1533
1537

trans-cadina-1,4-dieno
-cadineno

1548
1555

elemol
elemicina

0,14

0,17

0,1

1561
1577

E-nerolidol
espatulenol

0,1
0,76

0,15
0,51

0,94
1,46

0,86

1582
1590

xido de cariofileno
globulol

0,26
0,17

0,26
0,27

0,6
1,13

0,48
0,53

1592
1600

viridiflorol
guaiol

0,41
0,45

1602
1607

ledol
5-epi-7-epi--eudesmol

0,23

1618
1620

1,10-di-epi-cubebol
dilapiol

0,07
22,31

1622
1627

10-epi--eudesmol
1-epi-cubebol

0,04

1639
1640

cariofila-4(12),8(13)-dien-5-ol
-epi-murrolol

0,05
0,12

0,1

0,4

0,48

0,07

1644
1652

-murrrolol
-eudesmol

0,05

0,07

0,29

0,45
1,86

0,14

1652
1658

-cadinol
selin-11-en-4-ol

0,34
0,2

0,24
0,61

1,03
2,15

1666
1685

Z-14-hidroxi-cariofileno
-bisabolol

0,22

0,11
0,1

0,37
1,46

16,98
1700

(2Z,6Z)-farnesol
heptadecano
TOTAL (%)

GP
0,46

3,82
2,31

1,77

1,71

27,56

15,86

9,85

3,48
0,59
0,16

0,19

0,47
6,28

22,77

10

1,64

2,12
0,37

0,14
0,06
0,71

0,2

0,33

2,81

0,16
0,51
1,02

0,1

0,12
0,45
0,22
0,16

0,08
0,1

0,2

0,64

1,73
0,1

0,45

0,05

0,07

1,19

0,13
0,3

13,89

0,09

0,09
0,13

95,71

98,31

0,42

1,16
0,36
99,19

98,82

93,55

81,36

98,62

31

Figura 10. Estruturas qumicas dos componentes majoritrios obtidos nos diferentes
rgos de Piper divaricatum

eugenol

metileugenol

acetato de eugenol
OH

dilapiol

-elemeno

-bisabolol

Os constituintes majoritrios dos volteis obtidos por HD e DES dos vrios


rgos de P. divaricatum foram o fenilpropanide eugenol (20,8 a 51,6%), com
exceo do leo essencial obtido da raiz (0,32%), cujo constituinte principal foi o
fenilpropanide dilapiol (22,31%). Metileugenol foi o segundo constituinte principal
obtido (8,78 a 18,49%), com exceo novamente para o leo da raiz (2,58%), que
apresentou o sesquiterpeno oxigenado -bisabolol (13,89%).
Acetato de eugenol obtido por HD apresentou teor de 0,37% (R), 1,64% (GP),
10% (GS) e 22,77% (F) havendo um aumento na concentrao desse constituinte
medida que a planta sai do subsolo at atingir a parte mais area dos rgos, o
mesmo ocorrendo na DES, 9,85% (GP), 15,86% (GS) e 27,56% (F). Na Figura 11,
pg. 31 apresenta-se a composio qumica dos volteis obtidos das partes areas
de P. divaricatum por HD e DES, onde observa-se que a diferena mais significativa
entre as tcnicas foi nos volteis obtidos dos galhos primrios, destacando-se o
constituinte eugenol que foi duas vezes superior na DES (51,16%) que na HD
(20,8%),

assim

como

hidrocarboneto

monoterpnico

-pineno

foi

aproximadamente 100 vezes superior na DES (9,91%) com relao ao obtido na HD


(0,09%).

oposto

acontece

com

concentrao

dos

hidrocarbonetos

sesquiterpnicos -elemeno e -cariofileno, os quais apresentam concentraes

32

muito
o maiores no leo essencial (16,66%
(16,66% e 9,98%) que no concentrado voltil
(6,51% e 3,22%), respectivamente.
Figura 11. Composio qumica dos volteis obtidos das partes areas de
Piper divaricatum por HD e DES
90
80
70

60

-pineno
pineno

50

-elemeno
elemeno

-cariofileno
cariofileno

40

metileugenol
30

eugenol

20

acetado de eugenol

10
0
HD

DES
folha

HD

DES

galho secundrio

HD

DES

galho primrio

Figura 12. Composio qumica dos leos essenciais obtidos de vrios rgos de
Piper divaricatum

40
30

(
% 20

)
folha
10
galho secundrio
0

galho primrio
raiz

Constituintes qumicos

33

Nos dados da Figura 12 pg. 31, observa-se certa semelhana nos perfis
qumicos das folhas e galhos secundrios obtidos por HD, os quais so constitudos
por eugenol (36,25 e 33,73%), metileugenol (18,49% e 16,43%), acetato de eugenol
(22,77% e 10%), respectivamente. Com exceo ao acetado de eugenol que tem
concentrao duas vezes maior nas folhas que nos galhos secundrios, os demais
constituintes apresentam concentraes muito prximas. Contudo, quando se
compara a composio dos volteis das folhas e galhos secundrios com a
composio dos volteis dos galhos primrios observa-se que -elemeno que tem
concentraes de 7,14% e 8,79% nas folhas e galhos secundrios, respectivamente,
passa a ser um dos compostos majoritrios nos galhos primrios (16,66%).
Ao analisar e comparar a composio qumica do leo essencial das razes
com os leos dos demais rgos (folhas, galhos secundrios e primrios), observase que dilapiol (22,31%) e -bisabolol (13,89%), que so os componentes
majoritrios da raiz, tm baixssimas concentraes nos demais rgos (folhas:
0,2%; galhos secundrios: 0,33%; galhos primrios: 2,81%) e (folhas -, galhos
secundrios: 0,1%; galhos primrios: 1,46%), respectivamente.
Barbosa, Da Cmara e Ramos (2012) ao analisarem qualitativamente e
quantitativamente o leo essencial de trs rgos de P. divaricatum (folhas jovens,
frutos e caule) coletado em Itabuna, Bahia mostraram que o fenilpropanide safrol
o constituinte predominante com 98%, 87% e 83% nos trs rgos, respectivamente.
Assim provavelmente o espcime de P. divaricatum diferente do quimiotipo
estudado neste trabalho.
A composio qumica do leo essencial das folhas de P. divaricatum tambm
so reportados por Da Silva et al. (2010), os quais identificaram como componentes
majoritrios os fenilpropanoides metileugenol (63,8%) e eugenol (23,6%) em um
espcime coletado na ilha do Maraj, Par, Brasil, semelhante ao quimiotipo
estudado neste trabalho.
H tambm outro quimiotipo descrito por Almeida et al. (2009), que
descrevem como componentes majoritrios das folhas de P. divaricatum os
monoterpenos linalol (29,0%), -pineno (25,0%) e -pineno (18,8%) em espcimes
coletadas em Guaramiranga, Cear, Brasil.

34

5.2.2 Composio qumica de Piper marginatum por HD e DES


Na Tabela 02 so apresentados os constituintes volteis das partes areas de
Piper marginatum (>1%) obtidos por HD e DES e seus respectivos ndices de
reteno,
Tabela 02. Composio qumica dos volteis (>1,0%) de Piper marginatum por HD e
DES
IR

Constituintes

HD

DES

932

-pineno

0,32

2,45

946
974

canfeno
-pineno

0,42
0,42

3,20
1,42

1020
1026

-cimeno
1,8-cineol

0,85
1,20

2,40

1054
1140

-terpineno
E-miroxido

1,53
2,56

0,52
0,20

1141
1165

cnfora
borneol

1,01
1,14

0,86
0,40

1174
1285

terpinen-4-ol
safrol

1,83
37,62

0,10
28,11

1186
1289

-terpineol
timol

16,54
1,81

1,89

1374
1387

-copaeno
-bourboneno

0,17
0,13

1,31
1,25

1403
1404

metileugenol
piperonato de metila

0,32
0,44

1,45
1,76

1417
1473

-cariofileno
3,4-metilenodixi-propiofenona

2,97
1,76

3,29
10,61

1517
1555

miristicina
elemicina

0,49
0,83

1,89
2,06

1577
1582

espatulenol
xido de cariofileno

3,48
2,49

5,53
2,99

1590
1620

globulol
dilapiol

1,04
0,29

0,44
1,42

1630
1638

muurola-4,10(14)-dien-1-ol
2-hidrxi-3,4-metilenodixi-propiofenona

1,51
0,84

2,28

1649

-eudesmol

1,36

1,39

Os componentes majoritrios obtidos por HD e DES das partes areas de P.


marginatum foram os fenilpropanides safrol (37,6% e 28,11%) e 3,4-metilenodixipropiofenona (1,76% e 10,61%), terpenos oxigenados -terpineol (16,54% e -) e
espatulenol (3,48% e 5,53%), respectivamente.
Na Figura13 pg. 34, observa-se a variabilidade dos constituintes qumicos

35

obtidos nos dois mtodos de extrao. Os teores de safrol e -terpineol so maiores


no leo essencial por HD, o oposto acontece com 3,4-metilenodixipropiofenona e
espatulenol, os quais mostraram maiores concentraes por DES.
Figura 13. Variao dos constituintes volteis obtidos das folhas de Piper
marginatum por HD e DES
40
35
30
25
(
%

20

)
15
10
5

HD

DES

Constituintes volteis

Andrade et al. (2008) propem sete quimiotipos para leos essenciais obtidos
por HD das partes areas de P. marginatum sensu lato, sendo estes: 1) safrol e 3,4metilenodixi-propiofenona; 2) 3,4-metilenodixi-propiofenona e -Menta-1(7),8dieno; 3) 3,4-metilenodixi-propiofenona, miristicina, (E)--ocimeno e -terpineno; 4)

-cariofileno, -copaeno e 3,4-metilenodixi-propiofenona; 5) (E)-isoosmorizol, (E)anetol e isoosmorizol; 6) 2-metoxi-4,5-metilenodioxipropiofenona, ismero metoxi4,5-metilenodioxi-propiofenona

(E)-isoosmorizol,

7)

-cariofileno,

biciclogermacreno e (E)-asarona.
O quimiotipo analisado neste espcime semelhante ao quimiotipo 1 de
Andrade et al. (2008), o qual caracterizado por altas concentraes de safrol
(23,963,9%)

seguido

de

3,4-metilenodioxi-propiofenona

(7,333,2%),

(E)--

ocimeno (1,5 13,5%), miristicina (0,6 8,2%), germacreno D (0,9 6,3%), cariofileno (1,26,0%) e (Z)--ocimeno (1,15,3%).

36

No Trabalho de Andrade et al. (2008) os espcimes que apresentaram este


qumiotipo foram coletadas em Monte Alegre (Par), Xambio (Tocantis) e em
Naraz (Tocantins)
Na Figura 14 so mostradas as estruturas qumicas dos componentes
majoritrios obtidos dos volteis das partes areas de P. marginatum.
Figura 14. Estruturas qumicas dos componentes majoritrios obtidos das partes
areas de Piper marginatum

HO

Safrol

Espatulenol

-terpineol

-cariofileno

3,4-metilenodixi-propiofenona

37

5.2.3 Composio qumica de Hyptis crenata por HD, AV e DES


Na Tabela 03, encontram-se os componentes identificados de H. crenata e
seus respectivos ndices de reteno (IR) nos trs processos de extrao: HD, AV e
DES.
Tabela 03. Composio qumica dos volteis de Hyptis crenata por HD, AV e DES
IR

COMPONENTE

HD

AV

DES

932

-pineno

20,78

28,57

946
974

canfeno
-pineno

3,42
2,31

3,64
1,92

988
1001

mirceno
-2-careno

1,19
7,72

1,32
7,84

1020
1024

-cimeno
limoneno

0,05
0,05

1,28
3,37

1026
1014

1,8-cineol
-terpineno

2,54
0,05

21,87
1,02

1067
1084

cis-oxido de linalol
trans-oxido de linalol

0,08
0,72

0,24

1095
1118

linalol
exo fenchol

0,87
0,56

0,29
0,16

1118
1135

cis--menh-2-en-1-ol
trans-pinocarveol

0,38
0,23

0,09

1141
1145

cnfora
hidrato de canfeno

3,20
0,79

1,97
0,25

2,10
0,33

1160
1165

pinocarvonena
borneol

0,19
4,39

0,07
1,11

0,08
1,29

1174
1179

terpinen-4-ol
-cimen-8-ol

1,61
0,49

0,49

0,54
0,16

1186
1207

-terpineol
trans-piperitol

7,09
0,12

1,70
0,05

2,03

1214
1215

fragranol
trans-carveol

0,10
0,14

1241
1249

metanoato de carvacrol
piperitona

0,05
0,06

1289
1287

timol
acetato de bornila

1,22
0,16

0,13

0,08

1285
1293

safrol
mirtenato de metila

1,07
0,30

0,30

0,13

1298
1283

carvacrol
-terpinen-7-al

0,35
0,10

0,07

1350
1373

-longipineno
-ilangeno

2,02
0,82

1,10
0,49

0,48
0,17

1374

-copaeno

0,61

0,35

0,11

33,54
1,96

0,37
0,20

38

IR

COMPONENTE

HD

AV

DES

0,10
0,50

0,31

0,09

-cariofileno
aromadendreno

4,85
0,60

2,58
2,78

1,08
0,96

1437
1449

-guaieno
-himachaleno

4,81
1,14

0,58

0,19

1452
1458

-humuleno
alloaromadendreno

0,49
1,57

0,24

1475
1479

- gurjuneno
- muuroleno

0,47
0,71

0,22
0,41

0,05
0,12

1481
1481

- himachaleno
-curcumeno

0,69
0,20

0,34
0,23

0,10
0,06

1489
1489

-selineno
viridifloreno

1,25
2,02

0,63

0,19
0,31

1489
1500

-selineno
- himachaleno

0,69
1,36

0,67

0,19

1514
1516

cubebol
dihidro -himachaleno

0,30
0,10

0,12

1522
1521

-cadineno
trans-calameneno

2,15
0,32

0,44
0,71

1544
1545

-calacoreno
selina-3,7(11)-dieno

1,00
0,57

1548
2577

-agarofurano
espatulenol

0,44
1,44

1582
1590

oxido de cariofileno
globulol

0,9
1,22

0,10
0,16

1592
1600

viridiflorol
guaiol

1,38
0,36

0,15
0,06

2600
1620

rosifoliol
dilapiol

0,65
4,06

0,18

0,06
1,33

1622
1640

10-epi--eudesmol
hinesol

13,80
2,41

4,65

2,07

1656

valerianol

1381

-panasinseno

0,10

1403
1409

metileugenol
-gurjuneno

1417
1436

TOTAL (%)

0,04
0,39
0,04
0,19

0,34

0,16

6,96

1,74

1,22

90,02

99,99

96,17

Os constituintes principais na hidrodestilao (HD), no arraste a vapor (AV) e


destilao e extrao simultnea (DES) foram os monoterpenos -pineno (ausente,
20,78% e 28,57%), -2-careno (ausente, 7,71% e 7,84%), 1,8-cineol (2,54%, 21,87%
e 33,54%), -terpineol (7,09%, 1,7% e 2,03%) e os sesquiterpenos oxigenados 10epi--eudesmol (13,8%, 4,65% e 2,07%) e valerianol (6,96%, 1,74%, 1,22%),
respectivamente.

39

Na Figura 15, notvel a semelhana no perfil qumico obtido por AV e DES


(majoritrios: 1,8-cineol, -terpineol e -2-careno). Contudo, estes se diferenciam do
perfil obtido por HD que no apresenta nenhum constituinte com concentrao
significativa (principais: -terpineol, 10-epi--eudesmol, valerianol).
Figura 15. Variao qumica de Hyptis crenata por HD, AV, DES.
80
70
60

(%)

50

valerianol
10-epi--eudesmol

40

-terpineolo
30

1.8-cineol

20

-2-careno
-pineno

10
0
HD

AV

DES

tecnica

No trabalho de Rebelo et al. (2009), descrita a composio qumica do leo


essencial obtido por HD de um espcime de H. crenata coletado no municpio de
salvaterra, ilha do Maraj, Par, onde teve como constituintes principais -pineno
(19,5%), 1,8-cineol (23,2%), -pineno, (13,8%), cnfora (11,6%), limoneno (4,4%) e

-terpineno (2,4%). O perfil qumico, obtido por HD, muito similar ao perfil qumico
de H. crenata obtido por AV e DES.
Bravim (2008) descreve o perfil qumico do leo essencial de H. crenata,
coletado em Salvaterra, Par, obtido por HD com constituintes majoritrios
monoterpenos 94,5%, sendo encontrados em maior concentrao 1,8-cineol (34%),

-pineno (26%) e -pineno (11,4%).


H semelhana no perfil qumico de H. crenata obtido por HD de Rebelo et al.
(2009) e Bravim (2008) ao perfil qumico deste trabalho, porm utilizando tcnicas de
extrao diferente, AV e DES, portanto no sugere que se trate do mesmo

40

quimiotipo, s refora que as formas de como as destilaes so feitas, assim como


o mtodo e o tempo de secagem do material podem influenciar na composio
qumica dos volteis.
Na Figura 16, so mostradas as estruturas qumicas dos constituintes
majoritrios identificados nos volteis da espcie H. crenata.
Figura 16. Estruturas qumicas dos compostos majoritrios obtidos de Hyptis
crenata
OH

10-epi--eudesmol
1,8-Cineol

-pineno

-terpineol

OH

-2-careno

Valerianol

41

5.2.4 Composio qumica de Hyptis suaveolens por HD e AV


Nos leos essenciais de H. suaveolens foram identificados 79 e 61
constituintes, que correspondem 89,93 e 94,1% do contedo total dos leos obtidos
por HD e AV. Na tabela 04 encontram-se os constituintes qumicos identificados nos
leos essenciais obtidos por HD e AV de H. suaveolens e seus respectivos ndices
de reteno (IR).
Tabela 04. Composio qumica dos volteis de Hyptis suaveolens por HD e DES
IR
932
969
1014
1026
1054
1065
1086
1098
1118
1136
1141
1165
1174
1179
1186
1195
1335
1345
1356
1374
1387
1389
1419
1417
1431
1432
1434
1439
1442
1452
1458
1461
1475
1478
1484
1489
1496

COMPONENTES
-pineno
sabineno
-terpeno
1,8 cineol
-terpineno
hidrato de cis-sabineno
terpinoleno
hidrato de trans-sabineno
cis--ment-2-en-1-ol
trans- ment-2-en-1-ol
cnfora
borneol
4-terpinenol
-cimen-8-ol
-terpineol
cis-piperitol
elemeno
-cubebeno
eugenol
-copaeno
-bourboneno
-elemeno
-gurjuneno
-cariofileno
-gurjuneno
trans -bergamoteno
-elemeno
aromadendreno
6,9-guaiadieno
-humuleno
allo aromadendreno
cis-cadina-1(6),4-dieno
trans-cadina-1(6),4-dieno
-muuroleno
germacreno D
-salineno
viridifloreno

HD
0,26
7,91
0,28
4,37
0,53
0,32
0,72
0,39
0,07
0,05
0,09
0,13
0,64
0,08
0,37
0,04
9,19
1,22
0,04
0,47
0,90
2,80
0,04
9,75
0,08
2,97
0,41
0,54
1,26
0,37
0,22
0,10
0,58
7,56
0,84
0,16

AV
0,04
3,33
2,82
0,19
0,23
0,31
0,36

0,14
0,15
0,54
0,53
12,18
0,87
0,08
0,89
1,13
2,70
0,15
14,67
2,72
0,9
0,13
0,77
1,61
0,53
0,32
0,12
0,75
11,19
0,99
0,25

42

IR
1500
1500
1505
1509
1513
1514
1521
1521
1522
1529
1533
1537
1559
1561
1567
1577
1582
1590
1592
1595
1608
1618
1618
1620
1627
1638
1638
1644
1652
1652
1685
1685
1754
1685
1754
1905
1987
2022
2055
2153
2324
2368
2401

COMPONENTES
biciclogermacreno
-muuroleno
-bisaboleno
-bulneseno
-cadineno
cubebol
trans-calameneno
-sesquifelandreno
-cadineno
E--bisaboleno
trans-cadina-1,4-dieno
-cadineno
germacreno B
E-nerolidol
palustrol
espatulenol
xido cariofileno
globulol
viridiflorol
11-cubebanol
epxido de humuleno II
10-diepi-cubenol
junenol
dilapiol
1-epi--cubenol
-epi-cadinol
-epi-murrolol
-muurolol
-cadinol
selin-11-en-4--ol
-bisabolol
trans--germagra-4(15),5,10(14)-1-ol
6,10,14-trimetil-2-pentadecanone
garmacra-4(15),5,10(14)-trien-1--ol
6,10,14-trimetril-2-pentadecanona
isopimara-9(11),15-dieno
xido de manool
abieta-8,12-dieno
abietatrieno
abieta-8(14),13(15)-dieno
8,13-abietadien-18-o
dihidro abietol
abietol
Total (%)

HD
10,5
0,28
0,38
0,19
0,16
0,15
0,76
0,11
0,08
0,13
0,06
0,18
6,71
0,76
0,88
0,38
0,04
0,15
0,72
0,01
0,01
0,10
2,00
0,50
0,10
2,00
0,86
0,14
0,17
0,13
0,17
0,13
1,13
0,41
0,09
0,87
0,12
2,23
0,18
0,13
89,93

AV
11,80
0,31
2,90
0,31
0,55
0,85
0,26
0,12
0,29
0,04
0,13
0,10
0,10

5,91
0,92
0,41
0,19

0,53
0,05

1,44
0,04
0,50
1,32

1,84
0,49
0,09
0,77
0,25

94,1

43

Os componentes majoritrios obtidos por HD e AV foram os hidrocarbonetos


sesquiterpnicos: -cariofileno (9,75% e 14,67%), biciclogermacreno (10,57% e
11,80%) e germacreno D (7,56% e 11,19%) e o monoterpeno sabineno (7,91% e
3,33%), respectivamente. Na Figura 17 pg. 42 observa-se similaridade no perfil
qumico dos volteis obtidos por HD e AV, visto que no h grandes diferenas
qualitativas entre as concentraes dos constituintes majoritrios.

Figura 17. Variao dos constituintes volteis obtidos das folhas de Hyptis
suaveolens por HD e DES
16
14
12
10
(
8

6
4

HD

AV

Constituintes volteis

Silva et al. (2003) ao analisarem a composio qumica do leo essencial


obtido por arraste a vapor de diversas partes de H. suaveolens, folhas, galhos e
inflorescncias, coletado em Viosa, Minas Gerais, obtiveram como componentes
majoritrios nas folhas: 1,8-cineol (2,82%), germacreno D (7,84%), espatulenol
(7,94%), -cariofileno (10,39%), perfil qumico muito semelhante ao perfil descrito
neste trabalho.
Martins et al. (2006) ao analisarem a composio qumica do leo essencial
de H. suaveolens por hidrodestilao sob diferentes condies de cultivo descrevem
como componentes majoritrios: espatulenol, globulol, deidroabietol, -cadinol,
abietol, -cadineno e trans--bergamoteno, componentes presentes nos volteis de

44

H. suaveolens deste trabalho, porm em concentraes mais baixas.


Na Figura 18 encontram-se as estruturas qumicas dos componentes
majoritrios identificados nos leos essenciais de H. suaveolens.
Figura 18. Estruturas qumicas dos compostos majoritrios obtidos de Hyptis
suaveolens.

Sabineno

HO

-elemeno

Germacreno D

Espatulenol

-cariofileno
Biciclogermacreno

45

5.3 TESTES BIOLGICOS


5.3.1 Toxidade preliminar de Piper divaricatum
Nas Tabelas 05 e 06 so mostrados os resultados do teste para cada triplicata
das folhas e galhos secundrios, respectivamente. Os valores da CL50 para os leos
de P. divaricatum foram de 10,4 g.mL-1 e 25,15 g.mL-1 para as folhas e galhos
secundrios, respectivamente.
Tabela 05. Resultado do teste de toxidade
de Piper divaricatum
MDIA
CL50
10,40
R2
0,69

preliminar do leo essncias das folhas


DESV.
2,60
0,15

CV (%)
25,10
21,02

Tabela 06. Resultado do teste de toxidade preliminar do leo essencial dos galhos
secundrios de Piper divaricatum
MDIA
DESV.
CV(%)
CL50
25,15
2,60
10,20
R2
0,56
0,19
33,32
Os leos essenciais das folhas e galhos secundrios de P. divaricatum
mostraram atividade larvicida frente s larvas de A. salina, indicando que possui
relevante atividade biolgica, pois de acordo com Meyer e colaboradores (1982),
amostras de leos e extratos de plantas so consideradas txicas quando os valores
de CL50 se situam abaixo de 1.000 g.mL-1.
O leo essencial das folhas duas vezes mais txico que o leo essencial
dos galhos secundrios, uma vez que tem uma CL50 duas vezes menor, o que leva a
uma menor concentrao de leo para matar a metade das larvas.
Essa diferena pode ser causada pela presena do constituinte acetato de
eugenol, que possui atividade bactericida, antiviral e antifngica (BENITEZ, 2009),
apresentar uma concentrao duas vezes maior no leo essencial das folhas que
nos galhos secundrios. Contudo, importante ressaltar que as substncias
majoritrias encontradas nos leos essenciais nem sempre so os componentes
responsveis pelas propriedades que estes demonstram (BANDONI; CZEPAK,
2008).

46

5.3.2 Capacidade antioxidativa de Hyptis crenata


A curva de inibio do trolox foi plotada utilizando as concentraes de 10,0,
5,0, 2,5 e 1,0 mM com valores de inibio de 84,6, 53,4, 29,8 e 12,2%,
respectivamente. A reao entre trolox e DPPH atingiu o plateau antes dos 30 min. A
correlao dose-resposta foi linear (R2 = 0,98; P = 0,001); a equao da reta obtida
(y = 0,12X 0,99) foi utilizada para expressar os resultados da atividade antioxidante
em M e mg do equivalente trolox por ml de leo (mg ET/mL).
As amostras mostraram capacidade de sequestro do radical DPPH, com uma
cintica de reao consideravelmente lenta com durao mdia de 2 horas. Os
valores de inibio dos leos essenciais de H. crenata foram de 34,9% extrado por
HD, 49,5% extrado por AV. O leo mais ativo foi o extrado AV com atividade de
apenas 4 vezes menor que do Trolox. Os valores da atividade antioxidante das
amostras encontram-se na Tabela 07.
Tabela 07. Resultados dos testes da capacidade antioxidativa do leo essencial de
Hyptis crenata extrado por HD e AV
MTODO MDIA
HD
187,70
AV
269,00

DESV. VARINCIA
5,60
31,10
16,51
272,30

CV(%)
2,90
61,00

provvel que maior capacidade antioxidativa do leo essencial de H.


crenata extrado por AV seja devido seus constituintes majoritrios, -pineno
(20,78%), 1,8-cineol (21,87%) terem comprovada atividade antioxidativa frente ao
mtodo do DPPH descrita por Wang et al. (2008) e Ruberto e Baratta (2000), no
sendo encontrada na literatura relados da atividade antioxidativa de 10-epi-eudesmol.
Todavia, a capacidade antioxidativa do leo essencial de H. crenata extrado
por HD teve uma atividade de 5 vezes menor que a do trolox, havendo uma
expectativa de tal capacidade ser causada por alguns de seus demais constituintes.

47

6 CONCLUSES
As espcies de Piper apresentaram altos teores em leo essencial nas partes
areas, com predominncia da classe fenilpropanodica.
Entre as espcies de Hyptis, onde houve predominncia da classe terpnica,
os melhores rendimentos em leo essencial foram obtidos por Hidrodestilao.
Os rgos de P. divaricatum apresentaram semelhana no perfil qumico das
folhas, galhos secundrio e primrio, os quais podem ser usados juntos na produo
de leo essencial, diferente do perfil qumico das razes.
O leo essencial de P. divaricatum obtido das partes areas apresentou alta
atividade biolgica frente Artemia salina.
A influncia do tipo de extrao de volteis na composio qumica foi
observada para as espcies Piper marginatum e Hyptis crenata, o que pode
influenciar nas atividades biolgicas dos leos. Portanto necessrio um
planejamento prvio cuidadoso sobre o perfil qumico desejado para selecionar a
tcnica de extrao adequada para as espcies P. marginatum e H. crenata.
.

48

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55

ANEXOS
Ioncromatogramas obtidos dos volteis das folhas de P. marginatum
RT: 2,97 - 45,21

Relative Abundance

80

31,51

DES

29,90

60

0
100

5,98

23,58

6,46 8,78
7,26 8,93

13,54

14,56

5,77

80

31,63

26,50

23,27

40
20

NL:
4,66E9
TIC F: MS
PPN201FG
DES

20,04

100

28,71

33,56

22,90
21,35
19,55

34,27
34,82 36,74

40,37 41,40
NL:
7,11E8
TIC F: MS
ppn201fghd
_12112112
1410

HD

60
40

15,54

20
13,23

6,52 10,03

10

14,92

16,52

15

24,98

19,89
20

29,48

25
Time (min)

31,19

33,16 34,16
36,67

30

35

42,75 43,95
40

45

Ioncromatogramas obtidos dos volteis das folhas de P. divaricatum


RT: 3,94 - 44,95

Relative Abundance

NL:
5,18E8
TIC F: MS
PA139FHD

22,68

100

24,60

80

29,31

HD

60
40

25,15

20
9,55

5,98

0
100

12,76

15,56

21,40
20,97

31,34

34,29 35,89
37,62 40,55 42,48
NL:
1,74E9
TIC F: MS
pa139p.div.
fdes

25,37

80

23,60

DE

30,34

24,45

60
22,92
27,93

40
9,61
20

5,97

7,26

12,78

0
5

21,52

10

16,16
15

31,79
34,57 34,96

21,00
20

25
Time (min)

30

35

37,72 40,62
40

56

Ioncromatogramas obtidos dos volteis dos galhos secundrios de P. divaricatum


RT: 2,62 - 44,81

22,77

Relative Abundance

100

DE

80

24,65
29,35

60

5,98

40

25,22

7,28
28,20

20
0
100

NL:
6,24E8
TIC F: MS
pa139gfdes

9,53

5,73

21,42
11,03

15,57

31,36

20,99

34,39 35,91
37,64 41,47
NL:
4,63E8
TIC F: MS
PA139GFH
D

22,63
24,55

80

HD
60

25,17

29,13

40
6,00
20
0

4,48

28,16

7,28
9,55

11,04

10

15,57
15

21,40
20,97
20

31,31
25
Time (min)

30

34,37

35,49 37,17 40,57

35

40

Ioncromatogramas obtidos dos volteis dos galhos primrios de P. divaricatum


RT: 3,38 - 44,94

Relative Abundance

NL:
3,59E8
TIC F: MS
PA139GGH
D

23,95

100

22,45

80

25,15

HD

60

28,20
40

27,58
21,40

20
5,98 7,25 8,93 11,58

0
100

15,56

28,95

32,93 34,41
36,77 37,19

20,97

43,22
NL:
1,03E8
TIC F: MS
pa139ggde
s

22,27

80

DE

60
40

24,25
20
0

5,97
7,25 8,95
4,27
11,01
5

10

15,04 16,29
15

21,39
20

25,02
25
Time (min)

28,90
31,26 32,86 34,34 35,49
30

35

41,45 43,22
40

57

Ioncromatogramas obtidos dos volteis por HD de vrios rgos de P. divaricatum

RT: 3,31 - 43,00

R e la tive A b u n d a n ce

50
0
100
50

35,62

0
100

28,71 30,84
28,15
25,03

Raiz
4,47

34,27

7,75 8,95 11,04 13,88 15,56 18,02 21,39 23,22


23,95
22,45

Galho primrio
5,98 7,25 8,93 11,58

0
100
50

NL:
2,32E8
TIC F: MS
PA139RAIZH
D

33,04

100

36,09 37,46 41,47


NL:
3,59E8
TIC F: MS
pa139gghd

25,15
28,20

21,40
15,56 18,04 20,97
22,63

26,50

28,95

32,93 34,41
35,52

37,62 41,45
NL:
4,63E8
TIC F: MS
pa139gfhd

24,55

Galho secundrio
6,00 7,28
4,48

9,55 11,04

25,17
15,57 18,04

29,13
28,16

21,40

31,31

34,37 35,49
37,87 40,57
NL:
5,18E8
TIC F: MS
pa139fhd

22,68
24,60

Folha
50

29,31

25,15
5,98

0
5

9,55
10

12,76

15,56
15

19,54

21,40
20

25
Time (min)

31,34
30

34,29 35,89
35

37,62 40,85
40

58

Ioncromatograma dos volteis de H. crenata obtidos por HD, AV e DES


RT: 0,60 - 39,60

33,23

100

Relative Abundance

0
100

13,56
9,05
11,58
3,92 5,50 8,75
9,13

33,04

25,08

15,71

50

14,66
19,22

19,57

22,13

34,32

27,96 29,05

23,20

34,86 36,52
NL:
6,95E8
TIC F: MS
ppn176fav

5,98
50
8,23
0
100

11,01

5,73

13,51 15,56

19,19

22,10

25,02 25,80
23,18

33,04
34,19
34,79 37,87

29,00 31,91

NL:
4,88E8
TIC F: MS
ppn176fdes

9,13
5,98

50
8,23
0

5,72
5

15,56
11,04 13,53
10

NL:
5,50E8
TIC F: MS
PPN176FHD

15

19,50 22,08
20
Time (min)

25,00
25

27,88 29,86
30

33,03

34,17 36,49
35