Dia aberto dedicado s plantas aromticas e medicinais na Universidade de vora

Estratgias de Valorizao de Plantas

Aromticas e Medicinais
Cynara cardunculus

Ftima Duarte
14 de Dezembro 2011

CEBAL (Centro de Biotecnologia Agrcola e Agro-Alimentar do Baixo Alentejo e Litoral)

Privada, sem fins lucrativos, localizada em Beja

Incio das actividades de I&D em Junho de 2008

REAS DE INVESTIGAO
BIOTECNOLOGIA
AGRO-ALIMENTAR

ENGENHARIA
AGRO-ALIMENTAR

BIOTECNOLOGIA
AGRO-FLORESTAL

ENGENHARIA
QUMICA

GRUPOS DE INVESTIGAO

COMPOSTOS
BIOACTIVOS

VALORIZAO DE
AGRO-ALIMENTOS

GENMICA
AGRONMICA

IP:Ftima Duarte

IP:Xavier Malcata

IP: Snia Gonalves

IP: Lusa Neves

Psdoc: a contratar
PhD:Patrcia Ramos
ngela Guerra
Laura Felcio
Olinda Guerreiro

Psdoc: Eliana Jernimo

Psdoc: Teresa Ribeiro

PhD:Tnia Almeida
PhD: Tiago Capote
PhD: Ana Ferro
Sara Valente

Psdoc: Conceio Fernandes

Teresa Brs

I&D

ENGENHARIA DE
PROCESSOS

Valor
COLABORAO TRANSVERSAL ENTRE OS VRIOS GRUPOS DE INVESTIGAO
VALORIZAO DE BIOMASSA AGRO-FLORESTAL E AGRO-ALIMENTAR Acrescentado

Ameixa

Valorizao
Biomassa

Prunus domestica

Esteva

Resduos e
sub-produtos agrcolas e
agro-industriais

Cistus ladanifer

Cardo

Bagao da
Azeitona

Cynara cardunculus

Cortia
Olea europaea

Quercus suber

Outras culturas
e/ou resduos

BI0ECOS Valorizao Integrada da Biomassa

Extraction

NF/RO

Biological
Activity
Screening

Reverse
Genetics
(EcoTilling)

Formulation

Cardoon
extract

Funding:

AGRO-FOOD
PHARMACEUTICAL
INDUSTRY
APPLICATIONS

Evaluation of
Antitumoral
Potential

Anti-Tumorigenic
Potential
NF/RO

Inhibitors
remotion

Bioetanol
Production

Cynara cardunculus

Planta herbcea perene, pertencente famlia das Asteraceae compositae, originria
da regio do Mediterrneo

Duas variedades botnicas:
cultivada - Cynara cardunculus var. altilis
selvagem ou silvestre - Cynara cardunculus var. sylvestris

Ampla utilizao do cardo na indstria farmacutica, devido s quantidades

considerveis de diferentes fitoqumicos:
Triterpenides
Fenis
(Petrovic et al., 2008)

Actividade biolgica da fraco fenlica de extractos de

Cynara cardunculus

Anti-oxidante

Anti-fibrtica

Anti-inflamatria

Anti-microbiana

Anti-hepatotxica

Anti-tumoral

(Fernndez et al., 2006)

Caracterizao do potencial biolgico de extractos de CC

Folhas

Folha cultivada fresca (FCF)

Captulo
Caules
Razes
Adaptado de
http://www.soc-botanicalartists.org/

Quantificao dos compostos fenlicos totais

cultivada e selvagem

em extractos metanlicos de Cynara cardunculus variedade

Velez et al. submitted 2011

Caracterizao do potencial biolgico de extractos de CC

Actividade anti-oxidante

Cellular growth during 16 hours of S. cerevisiae

in YPD medium (filled circles), YPD medium with 0.1 mM H2O2 (filled squares), YPD
medium with 0.1 mM H2O2 + 25 g GAE mL-1 of GWL (filled triangles), GWS (inverted filled triangles), GWC (filled diamond), GCR (open circles) and 25 g mL-1 BHA (open
squares). Each value represents the meanS.D. of three determinations.

Velez et al. Submitted 2011

Caracterizao do potencial biolgico de extractos de CC

Actividade biolgica da fraco fenlica de extractos de

Cynara cardunculus
 Folhas de cardo cultivado parecem ser particularmente ricas em
compostos fenlicos
 Extractos de folha de cardo cultivado apresentam um bom
potencial anti-oxidante

Caracterizao do potencial anti-tumorignico de extractos de

cardo, em clulas de cancro da mama (MDA-MB-231)

Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Efeito anti-proliferativo

Extracto de folhas cultivadas de Cc (GCL)

Dose response curve representative of the effect of green cultivated leaves (GCL) extracts on
human breast cancer MDA-MB-231 cell viability. Extracts concentration range from 0.1 to 20 g GAE mL .
-1

Velez et al. Submitted 2011

Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Estudo do ciclo celular

A) Control

B) FCL extract IC50

Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

A) Control

B) FCL extract IC50

Anlise do Ciclo Celular

Cell cycle
phase

% of control
cells

% of treated cells
with FCL IC50
value

G1

52,8

35,0

28,1

22,3

G2

19,6

40,4

Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Cell monolayer

Wound

Migration (7-24h)

D=(L/2) - W1

Invaso Celular
Monolayer wound healing assay

Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Invaso Celular
Monolayer wound healing assay
Control
Control

Cc green cultivated
FCL leaves
extract 70 (GCL)
g/ml extract 70g/ml

D=(L/2) - W1

Time 0

Time 10 h

Time 0

Time 24 h

Time
Time24
48hh

Time 24 h

Time 10 h

Time 48 h

Proliferao
Regulao do
Ciclo celular

Apoptose
Angiognese

Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Cc green cultivated leaves (GCL) extract

AKT1 protein immunodetection by western blot in MDA-MB-231 cells.

Cells were incubated for 48 h with 0.74g

GAE ml-1 of GCL extract. A commercial inhibitor of the PI3K pathway, LY294002, was used as an internal control. Immunoblot for -actin served as control.
Guerra et al. 2010

Concluses

Potencial anti-tumoral do extracto da folha de Cynara

cardunculus (var. cultivada)
 Folhas de cardo cultivado parecem ser particularmente ricas em compostos fenlicos
 Extractos de folha de cardo cultivado apresentam um bom potencial anti-oxidante
 Capacidade

anti-proliferativa bastante pronunciada, em clulas cancro da mama

fentipo triplo negativo

 Inibio da progresso normal do ciclo celular, em clulas tratadas com extracto de
folha de cardo cultivado
 Reduo da capacidade migratria
 Diminuio da expresso proteica do AKT

Potencial anti-tumoral do extracto da folha de Cynara

cardunculus (var. cultivada)
Caracterizao e
identificao
qumica das
componentes
extractavis

Potencial biolgico de
extractos brutos,
Estratgia defraces enriquecidas
abordagem e/ou compostos
puros

Avaliao do
potencial
anti-tumoral

integrada para
a valorizao
econonmica
Modelo in vitro
das PAMsCancro
da mama fentipo
triplo negativo

Potencial anti-tumoral do extracto da folha de Cynara

cardunculus (var. cultivada)
Caracterizao e
identificao
qumica das
componentes
extractavis
Avaliao do
potencial
anti-tumoral

Potencial biolgico de
extractos brutos,
fraces enriquecidas
Biological
e/ou compostos
and
puros
economic
potential
valorizatio
Modelo in vitro
n
Cancro da mama fentipo
triplo negativo

Dia aberto dedicado s plantas aromticas e medicinais na Universidade de vora

Estratgias de Valorizao de Plantas

Aromticas e Medicinais

Cistus ladanifer

COMPOSTOS
BIOACTIVOS

Alimentao Animal

Produo de Bioetanol

VALORIZAO
AGRO-ALIMENTOS

ENGENHARIA
DE PROCESSOS

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

SFA
cidos gordos saturados

MUFA
cidos gordos
monoinsaturados

Gordura de
Ruminantes

PUFA
cidos gordos
polinsaturados

cidos gordos trans

risco de doenas cardiovasculares

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Bioidrogenao Ruminal

18:3 cis-9, cis-12, cis-15

Principais C18 da dieta

cido linolnico
isomerizao

18:2 cis-9, cis-12

cido linoleico

18:3 cis-9, trans-11, cis-15

isomerizao

hidrogenao

18:2 cis-9, trans-11

cido rumnico

18:2 trans-11, cis-15

hidrogenao

18:1 cis-9

18:1 trans-11

cido oleico

cido vacnico
hidrogenao

hidrogenao

18:1 cis-15
18:1 trans-15

hidrogenao

18:0
cido esterico

adaptado de Harfoot e Hazelwood, 1997

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

SFA
cidos gordos saturados

MUFA

Gordura de
Ruminantes

cidos gordos
monoinsaturados

cidos gordos trans

ismeros conjugados do cido linoleico

CLA

PUFA
cidos gordos
polinsaturados

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Ismeros conjugados do cido linoleico (Conjugated linoleic acid CLA)

Efeitos benficos:
Anti-carcinognico

18:2 cis-9, cis-12

18:3 cis-9, cis-12, cis-15

cido linoleico

cido linolnico

isomerizao

Anti-adipognico
18:2 cis-9, trans-11

Anti-diabetgenico
Tecidos

Anti-inflamatrio

hidrogenao

18:1 trans-11

Origem:

9-dessaturase

cido vacnico
hidrogenao

Sntese ruminal
Sntese endgena

18:0
cido esterico
Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Rumn

Anti-aterognico

cido rumnico

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Forragem/Pastagem
Santos-Silva et al., 2002, Bessa et al., 2005, Bessa et al., 2008

Suplementao com leos vegetais ricos em cidos gordos polinsaturado

Santos-Silva et al., 2004, Bessa et al., 2005, Bessa et al., 2007, Jernimo et al., 2009, Jernimo et al., 2010

CLA

Taninos condensados podem modular a bioidrogenao ruminal

Khiaosa-Ard et al., 2009, Vasta et al., 2009, Vasta et al., 2010

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Ensaio Experimental
Unidade de Investigao em Produo Animal,
Instituto Nacional de Recursos Biolgicos

Animais
Borregos machos da raa Merino Branco

Dietas experimentais
Dieta base: 90% de luzerna desidratada + 10% de smea de trigo
Mistura de leos vegetais: leo de girassol e de linho (1:2)
Dieta base - C
9 % de Taninos Condensados

+ 6% de leo CO
Dieta base
+ 25% de Cistus ladanifer CL
+ 25% de Cistus ladanifer + 6% de leo CLO

Durao do ensaio 6 semanas

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Desempenho produtivo

 No foi afectado
Mdia

EPM

Ganho mdio dirio (g)

285

17,1

Consumo mdio dirio (g MS)

1584

105,4

ndice de Converso

5,58

0,416

Peso vivo ao abate (kg)

36,7

2,00

in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721
Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Bioidrogenao Ruminal

cidos gordos - Contedo abomasal

18:1 cis-9, trans-11

18:0
18:0

0.8

70

60

0.4

a
a

0.2

0.0
C

CO

CL
Dietas

CLO

% total C18

0.6
% total C 18

18:1
trans-11
18:1 trans-11

b
b

50
40
20

15
10
5
0

CO

CL

CLO

Dietas

in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721
Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Bioidrogenao Ruminal

cidos gordos - Contedo abomasal

18:3 cis-9, cis-12, cis-15

cido linolnico

18:2 cis-9, cis-12

cido linoleico

18:3 cis-9, trans-11, cis-15

18:2 cis-9, trans-11
18:2 trans-11, cis-15

18:1 trans-11

X
18:0
in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721
Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

cidos gordos Gordura Intramuscular

% do total de cidos gordos

18:1 trans-11
7
6
5
4
3
2
2.0
1.5

18:2 cis-9, trans-11

c

1.0

b
a

0.5
0.0
C

CO

CL

CLO

Dietas
in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721
Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Anlise sensorial
Teste triangular

Distinguiram

No distinguiram

N. de provadores

30

20

10

0
C vs CL

CO vs CLO

in Jernimo et al., 2011. Meat Science, Submetido.

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Capacidade antioxidante da carne

mg MDA/ kg de carne
(aps induo da oxidao lipdica)

Conservao durante 0, 3 e 7 dias a 2 C

12
10
8
6
4
2
0
0

Dias de Conservao
C

CO

CL

CLO
in Jernimo et al., 2011. Meat Science, Submetido.

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Concluso
Incluso de esteva em dietas suplementadas com leos vegetais ricos em cidos gordos
polinsaturados

melhorar o valor nutricional da fraco lipdica da carne de

ruminantes e aumentar o seu potencial antioxidante

sem comprometer as propriedades sensrias da carne e o

desempenho produtivo dos animais
Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Cistus ladanifer

Modelao da
Bioidrogenao Ruminal

Capacidade antioxidante
da carne

Valor nutricional da
fraco lipdica da carne

Compostos secundrios das

plantas

Quais e Como??

Cistus
ladanifer

Caracterizao
da
Planta

Qumica e
actividade antioxidante

Extraco
Compostos
Secundrios

Potencial
Biolgico da Planta e
Compostos Secundrios

Ensaios in vitro
e in vivo

Caracterizao qumica e da actividade antioxidante

de Cistus ladanifer de diferentes idades ao longo do ano
Monte do Vento, Mrtola

1 ano

3 anos
Maro 2011 Fevereiro 2012

> 10 anos

Caracterizao de Cistus ladanifer de diferentes idades ao longo do ano

Fenis Totais

Fenois totais (mg/g MS)

120
100

1 ano
3 anos
> 10 anos

80
60
40
20
0
3

7
Ms

10

11

Ms

Idade

Ms*Idade

<0,001

0,010

<0,001

Caracterizao de Cistus ladanifer de diferentes idades ao longo do ano

Actividade Antioxidante

IC50 (mg GAE/ml)

2.4
2.2
2.0
1.8
1.6
1.4
3

7
Ms

10

11
Ms

Idade

Ms*Idade

0,012

0,469

0,814

Concluso Final

Compostos Secundrios

Agradecimentos

Financiamento:

Compostos Bioactivos
Bioactivos::
- Ftima Duarte
- Olinda Guerreiro
- ngela Guerra
- Zlia Velez
- Patrcia Ramos
- Laura Felcio

Valorizao de Agro
Agro--Alimentos:
Alimentos:
- F. Xavier Malcata
- Eliana Jernimo

Genmica Agronmica:
- Snia Gonalves
- Ana Ferro
- Sara Valente

Obrigado pela vossa ateno